欧洲花楸细胞悬浮培养生长动力学研究

目的：探讨欧洲花楸悬浮细胞生长规律和动力学参数。方法：测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液pH值变化;利用细胞鲜重和干重值对欧洲花楸悬浮细胞生长曲线进行拟合,用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞增殖情况,并对拟合函数求一阶、二阶导数,求算欧洲花楸悬浮细胞生长速率及生长加速度。结果：欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随培养时间增加而越来越大,培养时间到16 d,pH〉6,不再适宜细胞生长;Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线变化。培养第5d时细胞增长加速度达到最大,在8 d时生长速率达到最大,结论：欧洲花楸悬浮细胞生长函数符合logistic曲线,函数为f（x）=0.369 9/（1＋10.77e-0.329 2x）,细胞在14 d时进入增长平台期,在细胞生长至第5 d时可进行诱导子处理。     

欧洲花楸及其悬浮细胞在植物抗逆性研究中的应用

欧洲花楸原产欧洲,为蔷薇科苹果亚科花楸属落叶乔木,是集药用、食用、园林和生态等价值于一身的珍贵树种,目前在我国部分地区已成功引种。欧洲花楸能够抵抗早霜、晚霜、低温、干旱、酸沉降等多种灾害。当其受到病原菌侵害时产生联苯类化合物作为植保素,其抗逆性特点被越来越多的学者所关注。目前已成功构建了欧洲花楸悬浮细胞培养-诱导子处理的系统研究模式,挖掘欧洲花楸的抗逆性特点及应用优势,使欧洲花楸及其悬浮细胞在植物抗逆性研究中能够得到广泛有效利用。     

欧洲花楸悬浮细胞对生物胁迫的记忆功能初探

植物对其所遭受的环境胁迫存在记忆功能,当再次受到重复的环境胁迫时能更快更好地启动对环境胁迫的应答和适应机制,从而实现长期稳定的繁衍生存.但是这类研究大都体现在农作物以及模式植物拟南芥中,在药用植物中少有研究这种记忆功能对植物生长状态的作用以及对植保素生物合成的影响.该研究采用酵母提取物(YE)作为模拟生物胁迫的诱导子,...     

酵母提取物诱导欧洲花楸悬浮细胞合成次生代谢产物的机制探究

以欧洲花楸悬浮培养细胞（SASC）为材料,检测酵母提取物（YE）处理后SASC生理生化指标的变化,初步探究YE诱导SASC合成次生代谢产物的机制。结果表明： YE诱导SASC合成了5种联苯类化合物,且5种化合物含量随诱导时间的延长呈现不同的变化规律;YE处理抑制细胞的生长;细胞培养液中的pH随着处理时间的延长逐渐降低;细胞中的可溶性蛋白质含量表现为缓慢下降的变化趋势,YE处理组（YE组）可溶性蛋白质含量与对照组（CK组）相比显著增加,最高时相对增量达到了147.76%;CK组和YE组细胞外Ca²⁺都表现为内流,但YE组的内流明显小于CK组。说明YE诱导使细胞处于一种胁迫状态,不利于细胞的生长,迫使细胞合成了联苯类化合物抵御外界胁迫;细胞内可溶性蛋白可能作为酶类参与调控化合物的合成;Ca²⁺信号分子可能介导细胞应对YE胁迫的信号转导。     

3种重金属对欧洲花楸悬浮细胞生物量的影响

目的： 以欧洲花楸悬浮培养细胞（SASC）为材料,研究非生物诱导子-重金属对SASC生物量的影响。方法： 配制不同浓度的氯化镧、硝酸铜、硝酸铅溶液对SASC进行处理,用电子天平进行SASC生物量测定。结果： 低浓度氯化镧刺激细胞生长而高浓度则抑制细胞生长,对细胞生长的影响表现为Hormesis现象,最适刺激质量浓度为0.01 mg·L^-1;低浓度硝酸铜抑制细胞生长,高浓度刺激细胞生长,0.05 mg·L^-1 硝酸铜处理后细胞生物量最低;基本所有浓度的硝酸铅都表现为刺激细胞生长,最适刺激质量浓度为0.5 mg·L^-1。结论： 重金属诱导子影响了SASC的生物量,且其作用程度和方式与氯化镧、硝酸铜、硝酸铅3种诱导子种类及浓度相关。     

新疆紫草2种悬浮细胞生长及紫草素类化合物积累的动力学研究

通过对新疆紫草Arnebia euchroma红白2种色系悬浮细胞的表型、生长曲线、次生代谢产物积累研究,用数学建模模拟新疆悬浮细胞的增殖和紫草素类化合物积累情况,研究新疆紫草悬浮细胞生长和次生代谢生产的动力学参数,发现红色高产系为针对紫草素类次生代谢产物生产的优良细胞株系,白色低产系可能为突变株系.用Logistic模型对生长函数进行拟合并求导数,得到新疆紫草悬浮细胞的生长速率及生长加速度变化曲线,确定了新疆紫草悬浮细胞继代培养最佳时期为继代到新鲜培养基中的第15天,给诱导处理的最佳时期为继代到新鲜培养基中后第13 ～14天.并且通过比较新疆紫草红色系细胞增长速率的变化趋势与紫草素类化合物积累曲线发现,新疆紫草悬浮7细胞红色系生物量快速增长时不利于紫草素的合成与积累.     

罗汉果悬浮培养细胞的生长和罗汉果甜苷积累的动力学研究

目的:研究罗汉果悬浮细胞生长、罗汉果甜苷积累的动力学特征,为培养过程的优化控制提供理论依据。方法:考察1个培养周期内罗汉果悬浮细胞的鲜量重、干质量和罗汉果甜苷的含量,绘制生长曲线和生长速率曲线。结果:罗汉果悬浮细胞培养的生长周期约为21 d,0～6 d为细胞的延滞期,7～21 d为对数期,稳定期较短,第22天进入到衰亡期,在第21天时细胞鲜、干质量达到最大,分别为693.0,416.0 g.L-1,最大生长速率为0.040 g.L-1.d-1。罗汉果总苷和甜苷V从第7天开始快速积累,第21天达到最大值,生长速率分别为0.032 8,0.054 7 g.L-1.d-1。结论:联合研究细胞生长和产物积累,可以明确产物积累的动态变化规律,为培养过程的优化、代谢产物的调控和大规模的工业化生产提供实验依据。     

冬凌草细胞悬浮培养技术研究

目的:建立冬凌草细胞悬浮培养体系。方法:采用冬凌草愈伤组织为原材料,以MS培养基为基础培养基,分别对激素种类及浓度、愈伤组织接种量、继代培养起始密度以及最佳继代时间进行考察,绘制悬浮细胞生长曲线。结果:冬凌草细胞悬浮培养最佳培养基配方为MS、0.5mg·L~(-1)NAA、0.5 mg·L~(-1)2,4-D、0.5 mg·L~(-1)6-BA,愈伤组织接种量为60 g·L~(-1),继代培养起始密度为液体培养基量的四分之一,最佳继代时间为8天。结论:冬凌草细胞悬浮体系的建立,原材料愈伤组织至关重要,只有获得较为疏松长势良好的颗粒状愈伤组织才能用以建立细胞悬浮培养体系,因此在对愈伤组织的继代培养过程中,如何降低愈伤组织褐化率,促进愈伤组织生长有待于进一步探索。     

欧洲花楸病程相关蛋白基因SaPR1-like的克隆及序列分析

目的:探究欧洲花楸类病程相关蛋白1(Sa PR1-like)在响应生物胁迫中的功能。方法:克隆得到了Sa PR1-like基因全长序列,并对该序列进行生物信息学分析;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测Sa PR1-like在欧洲花楸悬浮细胞响应harpin蛋白胁迫后的表达特征。结果:克隆得到的Sa PR1-like基因包含1个完整开放阅读框,编码161个氨基酸。该编码蛋白质亲水性强且稳定,具有跨膜结构和信号肽,属于分泌蛋白。氨基酸序列比对分析发现,Sa PR1-like蛋白C端具有高度保守结构域[富含半胱氨酸的分泌蛋白、抗原5和致病性相关蛋白1肽段(CAPE)],推测其在欧洲花楸响应生物胁迫中发挥作用。harpin蛋白诱导欧洲花楸悬浮细胞24 h后,Sa PR1-like基因表达量显著提高。结论:克隆得到了欧洲花楸Sa PR1-like基因,并证明其在响应生物胁迫时表达和积累,可为进一步阐释欧洲花楸响应生物胁迫机制奠定基础和提供参考。     

白花曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱活性成分合成

目的 研究白花曼陀罗细胞悬浮培养合成生物碱。方法 在MS液体培养基上悬浮培养细胞生产生物碱，以碳源、pH值、接种量等为影响因子进行研究。结果 蔗糖为最佳碳源，细胞接种量以鲜重1.5～2.0g／L、培养液初始pH值5．5～6．0对曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱合成最有利，加入苯丙氨酸能促进生物碱的合成。结论 白花曼陀罗细胞悬浮培养能有效地合成生物碱。     

沙棘对高脂血清培养平滑肌细胞的保护作用

首次从亚细胞水平证实沙棘与维生素E相似,对高脂血清损伤的干滑肌细胞有如下的保护作用:1.降低细胞内脂质过氧化物含量;2.减轻细胞膜的损伤;3.保护细胞健康生长并促其增生。     

沙棘对高脂血清培养平滑肌细胞的保护作用

首次从亚细胞水平证实沙棘与维生素E相似,对高脂血清损伤的干滑肌细胞有如下的保护作用:1.降低细胞内脂质过氧化物含量;2.减轻细胞膜的损伤;3.保护细胞健康生长并促其增生。     

红豆杉细胞提取物对癌细胞的抑制作用研究

目的：了解红豆杉细胞提取物对肝癌细胞系SMMC—7721生长的影响。方法：运用MTT比色法测定癌细胞的存活率和流式细胞仪分析细胞周期。结果：红豆杉细胞二氯甲烷提取物对癌细胞SMMC—7721的抑制作用远大于甲醇提取物，IC50值分别为0．0834mgDCWW．m1^-1和0．8002mgDCW．m1^-1；流式细胞仪分析发现外加红豆杉细胞二氯甲烷提取物后肝癌细胞G2／M期含量增加。结论：红豆杉细胞提取物在体外对肝癌细胞SMMC—7721的生长通过诱导凋亡而具有抑制作用。     

肝细胞体外培养对肝豆汤排铜作用的拆方研究

目的论证肝豆汤的合理性,进一步探讨肝豆汤的排铜机制,明确肝豆汤中的主要药味。方法采用肝细胞体外培养,对肝豆汤进行拆方研究,比较各组经加入含药兔血清后肝细胞模型内铜、锌含量的差异。结果各组细胞模型细胞内铜、锌含量、铜/锌比值的组间存在非常显著性差异(P<0.01);各组组间均数比较相差有显著性差异(P<0.01或P<0.05)的有全方组铜含量、铜/锌比值与其他各组;铜/锌比值参三七组与金钱草组、对照组;全方组锌含量与黄连组、金钱草组、对照组间。结论肝豆汤组方是合理的;肝豆汤的排铜机制难以仅仅用使细胞内锌含量增加的原因来解释;参三七可能是肝豆汤的主要药味之一。     

何首乌对缺氧培养心肌细胞保护作用的实验研究

目的观察何首乌对培养心肌细胞缺氧性损伤的影响。方法将W istar系大鼠乳鼠心肌细胞原代单层培养5 d,建立“缺氧”损伤模型,通过生化检测及组织化学等方法,研究何首乌对缺氧培养心肌细胞的保护作用。结果实验组及对照组心肌细胞PAS反应和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性明显增强而酸性磷酸酶(ACP)活性减弱;实验组及对照组超氧化物歧化酶(SOD)活性较模型对照组增强而丙二醛(MDA)含量明显降低(P<0.01)。结论何首乌对缺氧心肌细胞具有良好的保护作用。     

天山花楸叶中总黄酮超声提取工艺研究

目的 研究天山花楸中总黄酮最佳提取工艺. 方法采用正交实验,分别以比色法测定总黄酮提出率和高效液相色谱(HPLC)图谱中总黄酮相对积分峰面积为指标,考察提取温度、料液比、醇浓度对天山花楸叶中总黄酮提出率的影响.结果 最终确定天山花楸叶中总黄酮的最佳提取条件为:温度60 ℃,醇浓度为60%,料液比1∶10(g∶ml),其中超声功率60 kHz,时间30 min,在相同条件下连续提取两次.结论 该提取工艺合理,总黄酮提取率高,质量易于控制.     

盾叶薯蓣培养细胞的生长及薯蓣皂甙元产生的变化规律

对悬浮培养的盾叶薯蓣细胞的生长及薯蓣皂甙元产生的动态变化进行了研究，比较了不同培养基及激素浓度对愈僵组织生长及皂甙元含量的影响，为细胞连续培养及培养条件的选择提供了科学的依据。     

碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生物量和活性成分积累的影响

 目的研究碳源、氮源和磷源对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖合成的影响。方法利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,通过改变培养基碳源种类、氮源和磷源浓度,研究其对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响。结果添加40g·L^-1蔗糖的细胞干重生长率最大,加入30g·L^-1蔗糖得到的人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高,分别为0.531%,0.145%和3.62%。本实验保持氮源浓度60mmol·L^-1,当培养基中全部为NO₃^-时,细胞干重生长率最低,而人参皂苷Re、Rb1和多糖含量最高,分别为对照组的2.40,1.96和4.41倍。添加5.00mmol·L^-1的KH₂PO₄,细胞干重生长率最大。当培养基中KH₂PO₄浓度为0.63mmol·L^-1时,人参皂苷Re、Rb1和多糖的含量最高。结论本实验确定了西洋参细胞悬浮培养的最佳碳源种类、氮源比例和磷源浓度,表明不同碳源、氮源和磷源对西洋参细胞生长和活性成分有显著影响。