人成纤维细胞样细胞株产生的肿瘤细胞生长抑制因子的初步提取物及其性质

用Sephadex G-200,DEAE-Bio-Gel A和Blue-agarose层析取得人成纤维细胞产生的肿瘤细胞生长抑制因子(HFDI)的初步提取物。用Sephadex G-200和高效液相层折(HPLC)测定,估算其分子量约为55000。HFDI初提物可耐受56℃,半h,于pH 4～9、4℃下24 h,并可在-70℃保存数周。初提物的肿瘤细胞敏感谱与细胞洗液相似,均未查出干扰素活性。     

人成纤维细胞样细胞株产生的肿瘤细胞生长抑制因子的发现和证明

在混合培养体系中,部份人成纤维细胞样细胞株,尤其人胚肌成纤维细胞株能抑制被测的大多数Burkitt淋巴瘤(BL)细胞系和人黑色素瘤(MM)细胞系;但不能抑制类淋巴母细胞系(LCL)和大多数人白血病细胞系。此效应具时间和细胞浓度依赖性。将被抑制的肿瘤细胞从混合培养体系中取出,洗涤后再悬于新鲜培养液中,肿瘤细胞生长有一定程度恢复。用成纤维细胞样细胞的洗液也可证明其抑制活性,它对链霉蛋白酶敏感。     

巨噬细胞移动抑制因子经Rho途径促进人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成

目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞6h、12h、24h、48h后,ELISA法测定细胞培养上清中TGF-β1蛋白含量;100μg/L的rMIF作用于MRC-5细胞48h,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白合成;100μg/L的rMIF刺激MRC-5细胞48h,刺激前0.5h加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632,RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA表达,western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果:与对照组比较,100μg/L的rMIF对细胞培养上清TGF-β1蛋白含量无显著影响(P>0.05);100μg/L的rMIF可显著促进Ⅰ型胶原mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)合成。Y27632预刺激后,100μg/L的rMIF促进Ⅰ型胶原mRNA和蛋白合成能力显著减弱(P均<0.01)。结论:MIF可能通过Rho途径刺激人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原合成从而在哮喘气道重塑的发病机制中发挥重要作用。     

白血病抑制因子对肾间质成纤维细胞活化的影响

目的 研究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对肾间质成纤维细胞活化的干预作用.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞,分对照组、转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理组及TGF-β1和LIF共处理组,电镜下观察细胞形态变化,通过RT-PCR及Western blot检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)表达的改变,双抗体夹心ABC-ELISA检测细胞上清Ⅰ型胶原.结果 TGF-β1引起成纤维细胞激活,产生形态学改变,α-SMA表达增高(P<0.01),Ⅰ型胶原产生增加(P<0.01).与TGF-β1处理组相比,LIF干预组形态学改变不明显,LIF能干预TGF-β1引起大鼠肾间质成纤维细胞α-SMA表达和Ⅰ型胶原产生.结论 LIF可以抑制TGF-β1引起的肾间质成纤维细胞激活.     

川芎嗪对瘢痕成纤维细胞形态和增殖抑制的影响

目的　探索川芎嗪治疗增生性瘢痕的机理。方法　将含川芎嗪的培养液加入增生性瘢痕成纤维细胞中 ,培养增生性瘢痕成纤维细胞 2 4h ,与未加药者对照比较。结果　 1)含川芎嗪组成纤维细胞形态发生变化 ,由长梭形变为圆形 ,而培养上清中的乳酸脱氢酶 (LDH)活性及MTT(四甲基偶氮唑 )比色法结果 ,用药组与对照组均无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;2 )流式细胞仪检测各时相细胞DNA水平 :用药组G0 +G1期细胞的百分比明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,而G2 +M期百分比则显著低于对照组(P <0 .0 1)。结论　川芎嗪能改变增生性瘢痕成纤维细胞形态和抑制其增殖 ,但并不影响其活力     

脂多糖和肿瘤坏死因子α对人牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖和分化的影响。方法 体外分离培养hDPSCs,分别用不同浓度LPS(0,0.1,1,10μg/mL)和TNF-α(0,1,10,100 ng/mL)培养细胞。培养24,48,72 h,应用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测hDPSCs增殖活性变化;培养7,14,21 d应用茜素红(AR)染色试剂盒和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)碱性磷酸酯酶(ALP)显色试剂盒检测hDPSCs肉眼观AR染色变化、钙结节定量、ALP染色和ALP活性等成骨分化指标。结果 (1)CCK-8实验显示1,10,100 ng/mL TNF-α作用于hDPSCs 24,48,72 h后细胞增殖活力降低(P<0.05)。AR成骨诱导染色结果显示培养7,14 d, TNF-α各浓度组肉眼观AR染色无明显差异;培养21 d, 10 ng/mL和100 ng/mL TNF-α组矿化程度相比0 ng/mL组低(P<0.05)。ALP染色和ALP活性试剂盒分析显示诱导培养7,14,21...     

透明质酸刺激因子对成纤维细胞胶原合成的影响

０引言在瘢痕机理的研究中，有学者发现一种相对分子质量（Ｍｒ）为１５０ｘ１０３的糖蛋白能刺激体外培养的成纤维细胞（ＦＢ）产生高浓度透明质酸（ＨＡ），称为透明质酸刺激因子（ＨＡＳＦ）．ＨＡＳＦ参与创伤愈合过程，是导致胚胎早期伤口无瘢痕修复的重要因素之一［１］，而瘢痕的主要基质成分为胶原蛋白，ＨＡＳＦ对于ＦＢ胶原合成的作用尚未见文献报道，我们利用体外培养的正常人皮肤及瘢痕ＦＢ，观察了ＨＡＳＦ对细胞胶原合成的影响．１方法１．１实验仪器与试剂ＬＳ－６５００液问计数仪（Ｂｅｃｋｍａｎ），ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２…     

碱性成纤维细胞生长因子对培养的人牙周膜细胞增殖和分化的作用

目的 :观察人重组碱性成纤维细胞生长因子 (hu manbasicfibroblastgrowthfactor,hbFGF)对人牙周膜细胞(periodontalligamentcells,PDLC)增殖和分化的效应 .方法 :对hbFGF (5 0 μg·L-1 )刺激后 3,9,1 5和 2 1d的细胞进行计数 ,同时行HE和免疫组织化学染色 .结果 :hbFGF (5 0 μg·L-1 )可促进PDLC细胞生长 ,在培养的 3,9,1 5和 2 1d时 ,其细胞计数分别是 38× 1 0 3 ,80× 1 0 3 ,1 0 6× 1 0 3 ,99× 1 0 3 .但不改变PDLC的形态和生长方式 ;与对照组相比PDLC的ConA ,WGA凝集素受体表达无差异 .两组细胞均未出现钙化现象 .结论 :hbFGF可促进体外PDLC的增殖 ,本实验未发现hbFGF对细胞的促分化效应     

IL-13和乙醇对人肺成纤维细胞增殖的影响

目的 研究乙醇和(或)IL-13对人肺成纤维细胞(HFL-1)的促增殖作用.方法 培养HFL-1,通过MTT法检测乙醇和(或)IL-13对HFL-1增殖的影响,并对结果进行分析.结果 ①25、50、100、200 mmol·L-1乙醇对HFL-1的增殖无影响(P>0.05).②10、20、50 μg·L-1的IL-13对乙醇有促增殖作用,且有浓度依赖性(P<0.05).③不同浓度的乙醇(25、50、100、200 mmol·L-1)和10 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果与10 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果差异无统计学意义(P>0.05);除50 mmol·L-1外,其余浓度的乙醇(25、100和200 mmol·L-1)和20 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果高于20 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果(P<0.05);不同浓度的乙醇(25、50、100和200 mmol·L-1)和50 μg·L-1 IL-13共同刺激HFL-1后增殖效果明显高于50 μg·L-1 IL-13单独刺激的效果(P<0.05),且具有浓度依赖性.结论 单独低浓度乙醇(25、50、100和200 mmol·L-1)不会影响HFL-1的增殖,但与一定浓度IL-13共同作用下将对HFL-1的增殖有显著影响.     

糖基化终末产物对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌及P65表达的影响

目的:研究糖基化终末产物(AGEs)对人牙龈成纤维细胞炎症因子分泌的影响及其可能的机制。方法:用体外酶消化结合组织块法培养人牙龈成纤维细胞;将细胞分为对照组和实验组,对照组为正常培养液培养的人牙龈成纤维细胞;实验组为含AGEs终浓度分别为1、5、10、20μL/mL培养液培养的人牙龈成纤维细胞;Real time PCR检测炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子TNF-α、NF-κB信号通路关键分子P65mRNA的表达情况。结果:酶消化加组织块法培养出来的牙龈成纤维细胞大多呈长梭形,胞液丰满;Real time PCR检测结果表明,与对照组相比,不同浓度AGEs刺激下的牙龈成纤维细胞IL-6表达量均升高,5、10、20μL/mL浓度AGEs刺激下TNF-α、P65的mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖基化终末产物可以导致牙龈成纤维细胞炎症因子的表达升高,其机制可能是通过激活NF-κB信号通路,从而影响了糖尿病患者的牙龈健康。     

Genistein对aFGF诱导的AGZY-83A细胞增殖的抑制作用

目的 探讨酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）诱导的肺腺癌细胞株ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞增殖的抑制作用。方法 以不同浓度的ａＦＧＦ刺激ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞,再对由ａＦＧＦ引起增殖的细胞施加不同浓度的Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,用细胞计数器计数细胞,观察Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对细胞增殖的抑制作用。结果 ａＦＧＦ可使该细胞株增殖比明显增加,而Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可引起细胞     

神经干细胞接种密度对其增生和分化的影响

为探讨神经干细胞不同接种密度对其增生和分化的影响,取10～12周龄胎儿的大脑皮质用胰酶消化获得单细胞,分别以1×10~2/mL、1×10~4/mL和1×10~6/mL的细胞密度接种,用无血清培养基DMEM/F12、上皮细胞生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白血病抑制因子(LIF)培养;用MTT法测OD值并观察神经干细胞的存活和增生情况。从培养基中剔除生长因子,继尔以10％胎牛血清诱导分化,用免疫细胞化学(ICC)方法,研究不同细胞密度培养后神经干细胞的分化能力。结果:在1×10~6/mL细胞密度下培养,神经干细胞增生活跃,形成神经球,Nestin表达阳性,10％胎牛血清诱导后神经干细胞可分化为神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞;低细胞密度(低于1×10~4/mL)培养不利于神经干细胞的存活和增生,血清诱导未见分化的细胞。提示:适宜的神经干细胞接种密度有利于其增生和分化。     

人成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的支持作用

目的观察人成纤维细胞对人胚胎干细胞（hESC）生长的支持作用，建立完全非动物源性培养系统。方法采用人包皮成纤维细胞为饲养层，以血清替代品取代动物血清，支持人胚胎干细胞生长，观察其增殖和分化情况。结果包皮成纤维细胞能很好地支持人胚胎干细胞生长增殖，并保持87％左右未分化表型：碱性磷酸酶（AKP）染色强阳性，阶段特异性胚胎抗原3（SSEA-3），肿瘤排斥抗原160（TRA-1-60）表达强阳性，可见转录因子OCT-4mRNA表达。核型正常，体外能形成拟胚体。结论人成纤维细胞完全可以支持人胚胎干细胞增殖，可望为胚胎干细胞定向诱导分化应用于临床打下基础。     

胰岛素样生长因子-1对神经干细胞增殖分化的影响

目的 寻找影响神经元和胶质细胞分化的外在因素，探素胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法 从E14的SD大鼠大脑中分离神经干细胞，分别用IGF-1、EGF和bFGF处理，台盼蓝染色确定活细胞数量，BrdU标记并分析细胞增殖能力，免疫细胞化学法鉴定神经干细胞、新生细胞和分化细胞。结果 分离得到的细胞表现出NSCs特性，用IGF-1、EGF和bFGF处理后均显示增殖效应，并能分化为神经元和胶质细胞样细胞。结论 IGF-1能促进NSCs增殖，并诱导其向神经元样和胶质细胞样细胞分化。     

负压培养对大鼠骨髓基质干细胞增殖及分化的影响

目的探讨负压状态培养对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)增殖及分化的影响。方法分离SD大鼠股骨骨髓中的单核细胞,常规培养,建立负压培养模型。设对照组(压力为0),低负压组(压力为-300mmHg)和高负压组(压力为-600mmHg)。观察细胞生长状况,绘制细胞生长曲线,通过倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态结构的变化,细胞免疫化学方法检测CD31受体的表达。结果低负压组细胞生长不受影响(>0.05),倒置显微镜下发现低负压组细胞形态与对照组类似,透射电镜下发现细胞内有大量线粒体和纤维束,CD31表达增加(<0.05);高负压组细胞增殖受抑制(<0.05),倒置显微镜下细胞稀少,透射电镜发现细胞内有纤维束,并且大量线粒体肿胀,呈空泡化,CD31表达明显增加(<0.05)。结论负压培养可诱导BMSCs向内皮细胞和成纤维细胞分化,但当负压增大为-600mmHg时,细胞增殖受到抑制。     

高糖加高胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察高浓度葡萄糖加高浓度胰岛素对心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后,利用结晶紫染色法观察细胞的增殖情况;利用[^3H]thymidine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果与正常对照组相比,高糖、高胰岛素、高糖加高胰岛素组分别造成了心肌成纤维细胞数目、DNA合成及S＋G2＋M期细胞的百分比增加,（P〈0．01）,而高糖加高胰岛素组的各项指标值显著高于其它各组,（P〈0．01）。结论 高糖加高胰岛素具有协同促进心肌成纤维细胞增殖的作用。     

高糖通过上调Axl受体表达促进心肌成纤维细胞增殖

目的探讨不同浓度糖在心肌成纤维细胞增殖中的作用及Axl酪氨酸激酶受体在血糖调控心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法分别用不同浓度糖孵育乳鼠心肌成纤维细胞,48h后分别检测细胞增殖、细胞周期以及Axl mRNA的表达量。结果 (1)高糖组心肌成纤维细胞增殖显著高于正常糖组[OD490:正常糖组(5mmol/L)0.358±0.023;高糖组(25mmol/L)0.446±0.036;P<0.01]。(2)高糖显著促进Axl表达上调(Ct值:正常糖组28.996±0.579;高糖组27.253±0.548;相对表达量:1∶2.63;P<0.05)。(3)高糖显著促进心肌成纤维细胞进入增殖周期(正常糖组G1%73.89±5.52;G2+S+M%26.11±5.52;高糖组G1%63.22±6.52;G2+S+M%36.78±6.52;P<0.05)。结论高糖能够通过上调Axl受体表达促进离体培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖,Axl受体在糖尿病性心肌病变中有可能扮演重要作用。     

白黎芦醇对人晶状体上皮细胞增殖的影响

探讨白黎芦醇(Res)对人晶状体上皮细胞(HLEC)增殖的影响。体外培养HLEC 24h,加入重组人碱性成纤维细胞生长因子(终浓度20μg/L)使HLEC处于增殖状态。MTT比色法检测不同浓度Res作用于增殖状态的HLEC 24h及25mg/L Res作用于增殖状态HLEC 6h、12h、24h、48h对细胞增殖的影响。结果表明不同浓度的Res,25mg/L Res于不同时间对增殖状态的HLEC有明显的抑制作用,并具有时间及剂量依赖关系。提示Res能够明显抑制HLEC增殖,有望成为防治后发性白内障的有效药物。