血管内皮细胞生长因子165基因转染对兔骨缺损修复的影响

目的 构建pcDNA3．1-血管内皮细胞生长因子（VEGF）165质粒,观察其对兔骨缺损修复的影响。方法构建成重组真核表达质粒pcDNA3．1-VEGF165;采用30只新西兰大白兔,制备双侧桡骨骨缺损模型,实验组以体积等大的明胶海绵置于创腔,局部直接注射稀释的质粒液200ng;对照组以同量生理盐水代替质粒液,同法处理。于术后1、2、4、6、8和12周行X线照片后获取标本,观察缺损局部组织修复及新生血管并计算微血管密度（MVD）。结果pcDNA3．1-VEGF165质粒构建成功,测序正确。术后X线：1周时两组无明显差别,实验组2周骨痂形成、骨质修复,12周时骨质已正常,对照组表现为修复迟缓;HE染色：实验组2周大量新生血管形成、通血,4周成骨细胞大量增殖、骨小梁形成,12周骨皮质改建完成,骨髓腔再通;对照组经历过程类似,但相对时间延迟,12周时骨髓腔及皮质改建尚未完成。2周时对照组及实验组MVD分别为56．1±6．1、69．1±5．4,均较1周时42．2±6．4、47．0±7．5时增加,组间及组内间差异有统计学意义（t=8．0347,P=0．0000）。结论骨缺损局部直接应用PcDNA3．1-VEGF165质粒液后,可表达并上调VEGF165,具有促进局部微血管形成、加快骨缺损修复的作用。     

血管化骨重组异种骨治疗骨缺损的血管内皮生长因子表达

目的: 探讨血管化骨重组异种骨(RBX)联合移植修复骨缺损的疗效及受体血清血管内皮生长因子(VEGF)的表达状况,作为移植诱骨效应的评价参考指标。方法: 27例骨缺损随机分为血管化骨RBX移植修复组(A组,9例);血管化骨移植修复组(B组,10例);RBX移植修复组(C组,8例)。临床评价以术后3、6、12个月随访的X线片来判断骨缺损是否修复成功、骨愈合时间长短、是否再吸收等。3组分别在术前及术后2周、4周、6周、8周采用发光免疫分析法测定受体血清VEGF的表达。结果: 术后3个月A组8例、B组6例、C组3例骨愈合,6个月A组1例、B组3例、C组3例延迟骨愈合,12个月B组1例、C组2例发生骨移植区部分再吸收,3组临床疗效差异无显著性(P>0.05)。3组术后第2、4周血清VEGF值均较术前升高(P<0.01),且A、B组均高于C组(P<0.01)。术后第6、8周3组的血清VEGF值术前后及各组间比较差异均无显著性(P>0.05)。结论: 血管化骨RBX组的骨折愈合率明显优于单纯血管化骨移植和RBX移植。血管化骨RBX组和血管化骨组的血清VEGF的值均明显高于术前及单纯RBX移植组。移植早期受体血清VEGF表达明显增高,其对移植诱骨效应的评价具有临床参考价值。     

血管内皮生长因子在骨缺损修复中的研究进展

骨缺损是骨科临床常见的一种疾病,其多由创伤、感染、肿瘤等所致。目前临床上用于骨缺损修复材料有自体骨、同种异体骨和各种人工合成材料等。自体骨移植是目前修复骨缺损的金标准,但其来源有限,应用受到限制。同种异体骨移植是在修复骨缺损上是目前应用最广的,其可不受数量和形状的限制,但其存在排异反应和潜在的疾病传播危险等特点。而有效的血管生成是各种人工合成材料移植的关键。不管骨缺损以何种方式修复,     

吻合血管的腓骨移植修复四肢骨缺损

我科自1996～1999年,采用吻合血管的腓骨移植,修复四肢外伤性和肿瘤切除后腔性骨缺损共11例,获满意效果,现报告如下。1　临床资料1.1　一般资料　本组男性8例,女性3例。年龄5～47岁,平均26.5岁。修复部位:肱骨动脉瘤样骨囊肿1例。桡骨远端骨巨细胞瘤1例,股骨中上段纤维异样增殖症2例,切除病变组织后骨缺损6～18cm。慢性骨髓炎引起骨缺损3例,(胫骨2例,肱骨1例),切除病变组织后骨缺损7～13cm。开放性骨折骨缺损4例(胫骨3例,股骨1例),清除病变组织后骨缺损6～14cm。1.2　手术方法　按Taylor方法切取腓骨,肱骨缺损受区血管选用肱动脉分支(肱深…     

血管内皮细胞生长因子水平对肺癌预后的影响

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平对肺癌预后的作用.方法采用ELISA方法对肺癌组(112例)、对照组(48例)、健康组(31例)的血清、尿液及恶性胸腔积液(46例)和结核性胸腔积液(31例)中VEGF水平进行检测,并对其进行分析.结果肺癌组血清VEGF含量[(506.22±365.06)μg/ml]明显高于对照组[(237.16±168.09)μg/ml]和健康组[(131.32±99.76)μg/ml](P＜0.001);血清VEGF的水平与病变侵袭程度、淋巴结转移、远处转移、生存时间密切相关;而与性别、组织学类型无关;恶性胸腔积液中VEGF含量[(937.23±400.92)μg/ml]明显高于结核性胸腔积液组[(257.41±361.47)μg/ml](P＜0.001);肺癌组尿液VEGF水平也明显增高[(167.40±186.89)μg/ml].结论血清VEGF检测可作为临床预测肺癌患者预后的重要指标之一.     

活血化瘀中药在骨缺损修复中的作用

目的 探讨活血化瘀中药对骨缺损修复过程中VEGF表达的影响.方法 选择家兔40只,10只为供骨组,另外30只在其左右桡骨制成20 mm的骨缺损,骨缺损处用供骨家兔的骨松质进行植骨.将植骨后的家兔随机分成两组,实验组用活血化瘀中药饲养,对照组用普通饲料饲养,于术后1、2、4、6、8周分别处死动物取材,标本进行HE染色、免疫组化及原位杂交染色,并在光镜下观察VEGF表达的变化.结果 实验组1周时VEGF表达均呈弱阳性,4周时表达呈强阳性,2、6、8周时表达呈阳性;对照组4周时VEGF表达呈阳性,2、6、8周时表达呈弱阳性.结论 活血化瘀中药对同种异体骨修复骨缺损有明显的成骨和促进血管化作用.     

血管内皮生长因子对缺氧诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧对培养人静脉内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预性影响。方法 （1）人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定。（2）建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型,TUNEL法观测不同缺氧时间（0、12、24、48h）对内皮细胞凋亡的影响及血管内皮生长因子的干预作用。结果 随缺氧时间延长,NUVECs凋亡率显著升高,血管内皮生长因子抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡。结论 内皮细胞的过渡凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素,血管内皮生长因子通过抑制内皮细胞凋亡,而具有内皮细胞保护作用。     

血管内皮生长因子与细胞支架复合物修复大鼠股骨缺损

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)与骨髓间充质干细胞(MSCs)、纳米晶胶原基骨(nHAC)复合物对大鼠股骨缺损的修复作用.方法:将20只SD大鼠制成股骨缺损模型后分2组:对照组植入MSCs/nHAC复合物,实验组植入VEGF/MSCs/nHAC复合物.术后第2,4,8周行影像学和组织学观察;术后第8周行新生骨痂环境扫描电镜(ESEM)检查.结果:术后第2,4,8周实验组与对照组放射学检查评价骨生成差异有统计学意义(P<0.05).组织学观察发现实验组较对照组能更快更有效地促进大鼠股骨缺损处的骨痂生长.结论:VEGF/MSCs/nHAC支架较MSCs/nHAC支架对骨缺损的修复有更好的效果.     

自体骨复合骨形态发生蛋白2和(或)血管内皮生长因子修复海水浸泡开放性骨缺损的实验研究

目的初步探讨骨形态发生蛋白2（BMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）单独及联合应用修复海水浸泡开放性骨缺损的疗效。方法将60只新西兰兔双侧桡骨中段制作1.5 cm骨缺损,海水浸泡3 h,随机分为A、B、C、D四组,每组15只兔。A组为对照组,植入自体髂骨;B、C、D三组为实验组,B组植入自体髂骨/可吸收胶原海绵（ACS）/BMP-2;C组植入自体髂骨/ACS/VEGF;D组植入自体髂骨/ACS/BMP-2/VEGF。分别于术后1、2、4、8及12周切取标本,每组每个时相点根据随机原则取6个标本,通过X线摄片、骨痂灰度值、组织形态学观察、免疫组织化学及环境扫描电镜观察各时相点骨缺损修复情况。结果①1、2周时,四组X线差异不明显,4、8、12周时B、C、D三组与A组的骨痂灰度值比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;D组与B、C两组平均骨痂灰度值比较差异有统计学意义（P〈0.05）;B、C、两组平均骨痂灰度值比较差异无统计学意义（P〉0.05）。②免疫组织化学结果表明：骨缺损修复早期BMP-2、VEGF二者相互促进,联合应用具有协同效应。结论①BMP-2、VEGF单独应用均能促进海水浸泡兔桡骨开放性骨缺损的修复。②BMP-2和VEGF联合应用能显著促进海水浸泡开放性骨缺损修复,两者联合应用具有协同效应。     

骨引导再生成骨中血管内皮生长因子的作用

目的:分析以无机骨(Bio-oss)作为载体,血管内皮生长因子(VEGF)在骨引导再生(GBR)过程中的作用。方法:新西兰大白兔60只随机分成4组,在左右两侧股骨大转子区制备骨缺损,左侧用Bio-oss充填骨缺损,右侧不予充填;术后1、2、4、8周分别处死各组动物,取种植体周围骨作为样本离心,采用ELISA双抗体夹心法测不同时期生成骨中VEGF浓度。结果:骨引导再生生成骨中VEGF浓度值高于非骨引导再生生成骨,且术后第1周浓度值最大。结论:VEGF是血管生成与骨再生协同作用的物质基础,对骨引导再生具有促进作用。     

VEGF基因在骨缺损模型家兔骨修复中的表达动态分析

[目的]动态分析骨缺损修复过程中血管内皮生长因子(VEGF)基因表达量与骨缺损修复时间的关系.[方法]取新西兰家兔30只,于右侧桡骨钻出直径为20 mm的骨组织,制作骨缺损模型,钻取自体髂骨骨颗粒,并移植于右侧桡骨骨缺损区域.分别于术后3 d、1周、2周、4周、6周、8周时处死动物取材,行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),观察并分析骨缺损修复过程中VEGF基因表达量.[结果]术后第3日、1周、2周、4周、6周、8周时骨缺损区域VEGF基因的相对表达量分别为2.08,1.00,0.88,3.40,1.71,1.17.[结论]VEGF基因在骨缺损修复过程中发挥重要作用,它的表达量在术后3 d及第4周时出现高峰.     

血管内皮生长因子与乙型肝炎的关系

目的：研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与乙型肝炎（乙肝）的关系。方法：对２１０例乙肝患者肝活检组织及４０例ＣＣｌ４实验大鼠不同时期肝组织,用 ＶＥＧＦ ｍＡｂ进行免疫组织化学（免疫组化）染色;同时,对其中 ７５例乙肝患者用ＥＩＡ法定量检测其血清 ＶＥＧＦ含量。结果：在 ＣＣｌ４大鼠实验早、中期（２～５周）,肝组织炎症反应显著,变性肝细胞 ＶＥＧＦ阳性表达;晚期（８～１２周）ＶＥＧＦ阳性肝细胞较少。在急性乙肝,ＶＥＧＦ呈弥散性强阳性表达,血清ＶＥＧＦ含量极显著升高（Ｐ＜０．００１）;在慢性乙肝及肝硬变（ＬＣ）,ＶＥＧＦ散在表达,以扩张肝窦的内皮细胞及周围肝细胞较显著,其血清ＶＥＧＦ含量并无升高,至ＬＣ反而下降（Ｐ＜０．０１）。结论：ＶＥＧＦ与乙肝的发病阶段、肝细胞再生、肝组织病变程度等密切相关,其在肝内血管改建中担当一重要角色。     

血管内皮细胞生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达

目的： 研究血管内皮细胞生长因血管内皮细胞生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达子（VEGF）基因转染兔骨髓间充质干细胞（MSCs）后的表达和分泌情况,为构建一种血供丰富、成骨能力及骨块存活能力更强的组织工程化人工颅骨奠定实验室基础。方法： 应用基因重组技术,将VEGF165基因全长片段克隆于真核表达载体pcDNA3中,构建pcDNA3-VEGF165真核表达质粒;应用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将pcDNA3-VEGF165真核表达质粒转染进入兔骨髓间充质干细胞中;利用RT-PCR及Western blotting方法检测VEGF基因在MSCs中的表达情况。结果： 构建的真核表达质粒-pcDNA3-VEGF165经双酶切后分别在5 400 bp和600 bp处出现条带,证实其构建成 功;成功进行了兔MSCs的原代及传代培养,并建立兔MSCs库,原代细胞初为淋巴细胞样小圆细胞,此后逐渐变为圆形、梭形或不规则形,而传代细胞则变为形态更均一、排列更有序的成纤维细胞样细胞;RT-PCR及Western blotting检测到瞬时转染后的细胞有VEGF mRNA及VEGF蛋白的表达。结论： pcDNA3-VEGF165真核表达质粒通过脂质体能够有效转染兔MSCs,转染后的细胞具有表达VEGF蛋白的能力。     

血管内皮生长因子在急性髓系白血病细胞中的表达

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在成人急性髓系白血病(AML)的发生发展中的作用。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)的方法研究50位AML病人及16位正常人骨髓细胞及血浆VEGF的表达。结果部分正常人和大多数AML病人的骨髓细胞及白血病细胞系均表达VEGF。AML病人骨髓细胞VEGF表达阳性率(82%)明显高于正常人(30.76%)及骨髓移植后的AML病人(41.76%)。难治型和非难治型AML病人血浆中VEGF浓度均显著高于正常人和AML骨髓移植后病人(P<0.01)。除正常人与骨髓移植后AML病人血浆中VEGF浓度比较无统计学差异外(P>0.05),另与其他两者之间均有显著性差异(P<0.01)。难治型和非难治型白血病病人骨髓细胞分泌的VEGF分别比正常人高11.0和7.3倍,且两者之间比较有显著性差异(P<0.01)。结论VEGF在AML病人中存在异常表达,在AML的发病机制中可能起一定的作用,且可能成为判断AML病人预后指标之一。     

Effects of adenovirus mediated vascular endothelial growth factor gene transfer on reconstitution of hematopoiesis in post-bone marrow transplantation mice

Background Bone marrow transplantation (BMT) conditioning procedure is considered as the cause of damage to bone marrow microvasculature and the delay of hematopoiesis recovery. However, hematopoiesis regulation post BMT by vascular endothelial growth factor (VEGF) has not yet been studied. In this study, adenovirus were used to investigate the effects of VEGF gene transfer on preventing damages to bone marrow microenvironment and its promotion of hematopoiesis in post-BMT mice.Methods Recombinant adenovirus (Ad)-enhanced green fluorescent protein (EGFP)/hVEGF165 was injected via tail vein into BALB/c mice undergoing syngeneic BMT. During the different phases post BMT, the distribution of adenovirus and the plasma levels of hVEGF were measured as well as the numbers of white blood cells (WBC), platelet (PLT) and red blood cells (RBC) in peripheral blood. At the same time, the mice were injected with Chinese ink via tail vein, following which the tibias were separated and were used for analysis of bone marrow microvasculature surface area and cellularity.Results Significant expression of EGFP and hVEGF was observed in multiple organs at different phases post BMT, and the plasma level of hVEGF was up to (866.67±97.13) pg/ml. The recovery of WBC, PLT and RBC of the group treated with recombinant adenovirus Ad-EGFP/hVEGF165 were significantly more rapid than those of other BMT groups （P&lt;0.05, respectively）. At the 20th day post BMT, the percentage of bone marrow microvasculature surface area in group treated with VEGF ［(61.2±4.0)%］ returned to normal level ［(62.0±5.0)%, P&gt;0.05］. The restoration of hematopoiesis was retarded more than that of microvasculature. The cellularity of bone marrow in each group was still lower than that of normal control ［(62.3±4.0)%, P&lt;0.05］ at the 30th day post BMT, but the percentage in group treated with VEGF at the 20th and 30th days post BMT ［(46.5±5.0)% and (55.1±4.5)%］ exceeded those of other BMT groups (P&lt;0.05, respectively).Conclusion VEGF gene transfer mediated by adenovirus may protect the hematopoietic microenvironment to promote the restoration of hematopoiesis in post-BMT mice.     

血管内皮细胞生长因子对Copenhagen大鼠乳腺癌发生的影响

目的：探讨外源性血管内皮细胞生长因子（VEGF）对致癌剂N-nitroso-N-methylurea（NMU）诱导Copenhagen（COP）大鼠乳腺癌发生的影响。 方法：NMU诱导的雌性COP大鼠持续给VEGF后,观察其乳腺癌的发生情况,同时采用RT-PCR及组织病理学等方法,检测大鼠乳腺上皮细胞中VEGF mRNA表达及乳腺组织中MAST细胞的浸润状态。 结果：①COP大鼠乳腺癌的发生率在VEGF处理组与未处理组之间差异无显著性（P>0.05）。②正常青春期COP大鼠乳腺上皮细胞VEGF mRNA的表达与阳性对照组Bufllo（BUF）大鼠相比差异无显著性,但230 d后前者的表达明显低于后者（P<0.05）。③由NMU诱导的COP大鼠乳腺癌上皮细胞中无VEGF的表达,而BUF大鼠有VEGF的阳性表达,两者差异有显著性（P<0.05）。④NMU处理的COP大鼠乳腺组织的增大淋巴结中有大量MAST细胞聚集,BUF组无MAST细胞的聚集。 结论：外源性VEGF不足以增加COP大鼠乳腺癌的发生率,但内源性VEGF表达减低及免疫反应的增加（MAST细胞聚集）在COP大鼠肿瘤抵抗性方面起一定的作用。     

人参三七组方对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子分泌及其受体2表达的影响

目的：探讨益气活血中药人参三七组方对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelialgrowth factor receptor-2,VEGFR-2）表达的影响。方法：体外培养HUVEC,分为高剂量人参三七组方（0.4 mg/mL）组、中剂量人参三七组方（0.2 mg/mL）组、低剂量人参三七组方（0.1 mg/mL）组,另设碱性成纤维细胞生长因子（bovine basic fibroblast growth factor,bFGF,320 U/mL）阳性对照组和只加培养液的空白对照组。酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中的VEGF含量,免疫细胞化学法检测VEGFR-2阳性细胞数及其光密度值,蛋白印迹法检测VEGFR-2蛋白的表达。结果：与空白对照组比较,高剂量人参三七组方组和bFGF组细胞上清液中VEGF含量增加（P〈0.05）,VEGFR-2阳性细胞数及光密度值增加,细胞中VEGFR-2蛋白表达增强。结论：促进HUVEC分泌VEGF和表达VEGFR-2可能是人参三七组方促血管生成的基础。