鞣花酸对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的体外抑菌效果

目的 观察鞣花酸对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的生长、黏附的影响。方法 将鞣花酸单体溶于二甲基亚砜（DMSO）,用二倍梯度稀释法测定最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。0.5 g/L氯己定作为阳性对照组,无药液组为阴性对照组,采用紫外分光光度计测定细菌黏附能力及生长曲线;通过生物膜结晶紫染色法测定生物膜抑制浓度和生物膜清除浓度。结果 石榴皮生物活性成分鞣花酸对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌最低抑菌浓度均为1 g/L,最低杀菌浓度均为2 g/L。在1 g/L时鞣花酸对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的细菌粘附能力的抑制率为80.68%和83.53%(P<0.05)。鞣花酸对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的生长影响为将牙龈卟啉单胞菌对数生长期由8 h推迟至12 h,将具核梭杆菌的对数生长期由4 h推迟至12 h。鞣花酸对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的生物膜抑制浓度及生物膜清除浓度均为4 g/L和8 g/L。结论 鞣花酸对牙周主要致病菌牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌都有显著的抑制作用,有望成为一种牙周病防治的辅助治疗药物。     

D-甲硫氨酸通过降低环二鸟苷酸清除牙龈卟啉单胞菌生物膜

目的探讨D-甲硫氨酸(D-methionine,D-Met)通过调控环二鸟苷酸(cyclic diguanosine monophosphate,c-di-GMP)清除牙龈卟啉单胞菌生物膜的作用机制。方法通过细胞活性、最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)实验确定D-Met的有效浓度。分别在牙龈卟啉单胞菌生物膜形成抑制实验和成熟生物膜裂解实验中加入不同浓度的D-Met,检测生物膜生物量、胞外多糖量、生物膜形态、细胞膜完整性以及c-di-GMP的含量变化。结果 D-Met <40 mmol/L为生物安全浓度。在生物膜形成抑制和成熟生物膜裂解实验中,D-Met≥20 mmol/L降低了生物膜生物量和胞外多糖量。扫描电镜结果显示,D-Met≥20 mmol/L时,细胞外基质和细菌密度显著降低。透射电镜结果表明,35 mmol/L D-Met在生物膜形成过程中导致了细胞膜破裂,并增加了成熟生物膜裂解时细胞膜的通透性。Cdi-GMP水平随着D-Me...     

1,8-桉叶油素对三种牙周致病菌的抑菌作用研究

目的:测定1,8-桉叶油素对几种常见的牙周致病菌包括牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌的抑菌效果。方法:采用二倍稀释法测定1,8-桉叶油素牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),利用BHI血平板稀释培养法测定最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration, MBC)。采用结晶紫染色法检测1,8-桉叶油素对牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌的生物膜形成的影响。结果:1,8-桉叶油素对牙龈卟啉单胞菌的MIC为31.25μL/mL,伴放线聚集杆菌MIC为15.63μL/mL,中间普氏菌MIC为7.81μL/mL;1,8-桉叶油素对3种牙周致病菌的MBC均为125μL/mL。1,8-桉叶油素能抑制牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、中间普氏菌生物膜的形成。结论:1,8-桉叶油素在体外对3种牙周致病菌均具有较好的抑菌作用。     

血红素浓度对双菌生物膜中牙龈卟啉单胞菌致病潜力的影响

目的:研究血红素浓度对白色念珠菌(C.albicans)-牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)双菌生物膜中P.gingivalis致病潜力的影响.方法:在0.1μg/mL(低)和5μg/mL(高)血红素培养条件下构建P.gingivalis-C.albicans双菌生物膜以及P.gingi-valis单菌生物膜,...     

群体感应抑制剂溴化呋喃酮对牙龈卟啉单胞菌生物膜形成影响的研究

目的 研究群体感应抑制剂溴化呋喃酮对牙龈卟啉单胞菌生物膜形成的影响.方法 采用二倍稀释法,确定溴化呋喃酮对牙龈卟啉单胞菌的最低抑菌浓度(MIC).含无水乙醇的牙龈卟啉单胞菌菌悬液作为阴性对照组,牙龈卟啉单胞菌菌悬液为空白对照组,通过光密度值测定和扫描电镜观察,研究1/4M1C、1/2MIC、MIC、2MIC等不同浓度溴...     

多孔HAPw/n-ZnO骨修复材料的抗菌机理及抗生物膜研究

目的:评估多孔羟基磷灰石晶须/纳米氧化锌(HAPw/n-ZnO)骨修复材料在抑制细菌生物膜中的作用,并探讨其抗菌机理。方法:分别建立金黄色葡萄球菌、变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌生物膜体外模型。无光条件在相同的多孔HAPw/n-ZnO浓度梯度(0~2 g/L)下分别进行生物膜抑制试验与细胞内活性氧(ROS)检测,并利用扫描电子显微镜分析材料性能,未加入材料组作为对照。结果:无光条件下随着材料浓度递增,各浓度多孔HAPw/n-ZnO组(1.00、1.25、1.50、1.75、2.00 g/L)相对于对照组(0 g/L),3种细菌的生物膜形成量(A值)逐渐减少以及细胞内活性氧(ROS)水平(荧光强度)逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。扫描电镜图片显示,复合材料组细菌黏附减少,生物膜形成受到抑制;细胞形态异常,细胞膜受损导致内容物泄露。结论:无光条件下多孔HAPw/n-ZnO材料对金黄色葡萄球菌、变形链球菌、牙龈卟啉单胞菌生物膜均有一定程度的抑制作用,其抗菌机理之一是活性氧(ROS)的形成。     

牙龈卟啉单胞菌对人滋养层细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测牙龈卟啉单胞菌感染对人胎盘滋养层细胞(HTR-8细胞)增殖以及凋亡的影响。方法:用不同感染复数(MOI)的牙龈卟啉单胞菌体标准菌ATCC 33277体外感染HTR-8细胞,未感染牙龈卟啉单胞菌的HTR-8细胞作为空白对照组。感染后,用Cell Counting Kit(cck-8)检测HTR-8细胞增殖情况,用线粒体膜电位凋亡检测试剂(JC-1)检测HTR-8细胞凋亡情况。结果:MOI=10组,感染72 h内,HTR-8细胞增殖未受抑制(P>0.05)。而MOI=100组和MOI=200组,感染24 h开始,HTR-8细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。并且与MOI=100组相比,MOI=200组在感染48 h(P<0.05)和72 h(P<0.01)时,HTR-8细胞增殖明显降低。牙龈卟啉单胞菌感染24 h,MOI=200组HTR-8细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01)。感染48 h,MOI=100组HTR-8细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。MOI=10组在感染24 h和48 h时细胞凋亡率与空白对照组相比差异无统计学意义。结论:在体外感染模型中,牙龈卟啉单胞菌标准菌ATCC 33277感染可抑制滋养层细胞增殖,且促进其凋亡。提示早产低体重儿与牙龈卟啉单胞菌感染引起滋养层细胞增殖和凋亡失衡有关。     

甘草酸对牙龈卟啉单胞菌生长影响的体外研究

目的研究甘草酸对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的抗菌活性。方法采用微量液体稀释法测定甘草酸对牙龈卟啉单胞菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最低杀菌浓度（minimal bactericidalconcentration,MBC）。用不同浓度的甘草酸培养牙龈卟啉单胞菌,分别于培养0、4、8、12、24、48 h测定细菌悬液600 nm波长处的光密度值,绘制牙龈卟啉单胞菌的生长曲线。结果甘草酸对牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC分别为1.57 g/L和12.5 g/L,甘草酸对牙龈卟啉单胞菌生长的抑制作用随药液浓度的增加而增强。结论甘草酸对体外培养的牙龈卟啉单胞菌的生长有抑制作用。     

不同细菌密度的浮游牙龈卟啉单胞菌及其生物膜对甲硝唑敏感性的体外研究

目的 比较体外培养的牙龈卟啉单胞菌在不同细菌密度的浮游状态及生物膜状态时对甲硝唑的敏感性变化.初步探讨细菌密度在牙龈卟啉单胞菌生物膜抗药机制中的作用.方法 采用微量液体稀释法,测定甲硝唑对牙龈卟啉单胞菌106CFU·mL-1和109 CFU·mL-1菌悬液(与生物膜细菌密度相同)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(...     

葡萄糖酸氯己定对牙龈卟啉单胞菌结合华卟啉钠的影响研究

目的 探讨葡萄糖酸氯己定(chlorhexidine gluconate,CHX)对牙龈卟啉单胞菌结合华卟啉钠(sinoporphyrin sodium,DVDMS)的影响.方法 根据牙龈卟啉单胞菌菌液中加入DVDMS的质量浓度分为4个实验组(1O、20、40、80μg/mLDVDMS组)与1个对照组(不加DVDMS)...     

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??Objective    To compare the biofilm formation of P. gingivalis  W83 and its sialidase-deficient mutant strain??ΔPG0352?? under stressful conditions. Methods    P. gingivalis  W83 and ΔPG0352 were cultured in trypticase soy broth??TSB??and supplemented with 5 μg/mL hemin and 1 μg/mL menadione under stressful conditions??including temperature??oxidatie stress and pH values. Biofilms were formed on the 96-well plates for four days??and stained with crystal violet. Detect the biofilm formation with spectrophotometer. Results    Both P. gingivalis  W83 and ΔPG0352 strains could form biofilms in normal culture conditions. P. gingivalis  W83 formed more biofilm??compared to ?PG0352 ??P < 0.05??. The biofilm formations of P. gingivalis  W83 and ΔPG0352 decreased in 34?? and 41?? ??P < 0.05??. As the concentration of H2O2 increased??biofilm formations of both strains decreased more and more seriously. The biofilm formations of ΔPG0352 were less than those of P. gingivalis  W83??when the ultimate concentration of hydrogen peroxide was 0.1??0.25 and 0.5 mmol/L. Both P. gingivalis  W83 and ?PG0352 formed less biofilm in alkaline condition??pH = 9????ΔPG0352 even less??and were unable to form biofilm in acidic condition??pH = 5??. Conclusion    Sialidase gene deletion can affect P. gingivalis  biofilm formation. Biofilms formations of both P. gingivalis  W83 and ΔPG0352 will decrease under stressful conditions.      

硫炔丙基半胱氨酸对三种牙周致病菌抗菌作用

目的:研究硫炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine,SPRC)溶液对牙周炎常见致病菌的体外抗菌作用.方法:体外分别将牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis),中间普氏菌(P.intermedia)和粪肠球菌(E.faecalis)与不同浓度SPRC(10,20,50和100 mmol/L)共培养,没...     

尼古丁和美卡拉明对牙周致病微生物的影响

目的 探讨尼古丁和美卡拉明对主要牙周致病微生物生长及生物膜形成的影响.方法 采用二倍稀释法,研究尼古丁对牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC).通过酶标仪测定吸光度值,研究在1/16 MIC、1/8 MIC、1/4 MIC、1/2 MIC、MIC等不同浓度的尼古丁对这2种细菌生物膜形成的影响.结果 尼古丁对2种细菌的菌悬液的MIC均为8 mg·mL-1,MBC为16 mg·mL-1.尼古丁浓度逐渐增加时,生物膜吸光度值逐渐增大;继续增加浓度,吸光度值减小;在8 mg.mL-1时,吸光度值减小到最低值,最低生物膜抑制浓度为8 mg.mL-1.添加尼古丁受体拮抗剂美卡拉明组较对照组吸光度值高.结论 小剂量的尼古丁能增加牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌的生物膜形成,浓度继续增加则抑制生物膜形成,加入美卡拉明后降低尼古丁浓度,更能明显观察到尼古丁对两种细菌生物膜的促进作用.     

NF-κB/IκB�ź�ͨ·������߲����������Ⱦ�յ�Ѫ����Ƥϸ��ICAM-1�������о�

目的探讨核转录因子一KB（NF—KB）／抑制因子KB（IKB）信号通路在调控牙龈卟啉单胞菌（Pgingivalis）感染诱导血管内皮细胞细胞间黏附分子-1（ICAM-1）高表达过程中的作用。方法本研究于2008年3月至2011年1月在中国医科大学中心实验室及中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。已知P．gingivalis感染血管内皮细胞可诱导其ICAM-1基因和蛋白表达增高。采用Real-timePCR和Westernblot法检测P．gingivalis感染后血管内皮细胞ICAM-1mRNA和蛋白表达;应用5、10、20μmol／L的蛋白酶体抑制剂MGl32分别预处理血管内皮细胞15、30、60min,再将细胞与P．gingivalis共同培养8h,观察细胞ICAM-1mRNA和蛋白表达的变化,分析NF—KB／IKB信号通路对ICAM-1表达的调控作用。结果10txmol／LMGl32预处理30rain,Pgirtgivalis感染的血管内皮细胞ICAM—lmRNA表达具有下降趋势;20p~mol／LMGl32预处理15min,P．gingivalis感染的血管内皮细胞ICAM-1表达即开始下降,预处理时间延长至30、60min,ICAM-1表达下降更趋明显。结论阻断NF—KB／IKB信号通路可抑制P．gingivalis感染诱导的血管内皮细胞ICAM-1表达。     

����߲����������������Ĥ����άϸ��MMP-1��TIMP-1���Ӱ����о�

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)W83、ATCC33277刺激人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的变化.方法 本研究于2010年9月至2011年6月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行.将P.gingivalis W83、ATCC33277作用于HPDLFs0、6、12、24、48h后,运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中MMP-1、TIMP-1质量浓度变化,并计算MMP-1/TIMP-1值.结果 P.gingivalis感染HPDLFs的MMP-1和TIMP-1表达均增强,并呈时间依赖性;且MMP-1/TIMP-1值明显高于未感染的对照组(P＜0.05).P.gingivalis W83感染后MMP-1/TIMP-1值明显高于P.gingivalis ATCC33277(P＜ 0.05).结论 P.gingivalis具有促进HPDLFs分泌MMP-1、TIMP-1的作用,且可造成牙周组织破坏;P.gingivalis W83降解细胞外基质的能力高于P.gingivalisATCC33277.     

牙龈卟啉单胞菌临床菌株的毒力分析

目的:利用啮齿动物模型,比较分析中国人群口腔中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)临床菌株的毒力。方法:采用小鼠脓肿形成实验,将6株从牙周炎患者牙周袋中分离获得的P.gingivalis临床菌株L2、L3、L4、L5、L11和L12分别注射至小鼠后背中央,观察其临床症状,并与国际标准菌株ATCC33277和W83进行比较,分析临床菌株的毒力特性。采用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析。结果:L3、ATCC33277和W83诱发小鼠产生原发性脓肿和轻微的全身反应,L2、L5、L11、L12则诱发小鼠产生远处转移性病变和严重的全身反应。结论:中国牙周炎患者口腔中的P.gingivalis临床菌株与国际标准菌株相比,在诱发实验鼠发生局部脓肿方面,具有一定程度的相似性,但临床菌株间的毒力特征具有较大差异。     

牙龈卟啉单胞菌不同毒力株基因差异的比较研究

目的比较牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pgingivalis）高毒力株W83与低毒力株标准参考菌ATCC 33277之间的差异基因。方法采用抑制消减杂交技术（SHH）对比牙龈卟啉单胞菌高毒力株W83与低毒力株标准参考菌ATCC 33277的基因差异。以高毒力株W83为被检菌，低毒力株ATCC 33277为参考菌，将提取的基因组DNA用内切酶Rsa Ⅰ酶切，连接特殊设计的接头进行两次消减杂交和PCR扩增，得到消减混合物，与TA克隆载体连接，转化到JM109中，建立消减文库，经PCR筛选鉴定阳性克隆，进而对部分片段进行测序和同源分析。结果经SSH筛选鉴定得到36个片段大小为88～372bp的阳性克隆基因片段。结论从全基因角度研究牙龈卟啉单胞菌高毒力株W83与标准株ATCC 33277之间的分子遗传差异，为牙龈卟啉单胞菌致病基因的筛选及今后牙周病预防、诊治的靶标提供依据。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牙龈卟啉单胞菌细菌毒力抑制作用的体外研究

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对牙龈卟啉单胞菌(Por-phyromonas gingivalis,P.gingivalis)体外抑菌活性及EGCG对P.gingivalis诱导人牙龈成纤维细胞(human gingi-val fibroblasts...     

牙龈卟啉单胞菌唾液酸酶基因突变株黏附与侵入KB细胞能力研究

目的    研究PG0352基因缺失对牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）黏附和侵入人口腔上皮癌KB细胞能力的影响。方法    本研究于2014年7—12月在中国医科大学口腔医学院中心实验室完成。实验组：将P. gingivalis W83菌株（W83菌株组）和PG0352基因突变株（PG0352突变株组）分别以100∶1的比例与KB细胞共培养2 h,制备P. gingivalis与KB细胞的黏附和侵入模型;对照组：单纯KB细胞培养。透射电镜观察KB细胞表面及细胞内是否有P. gingivalis存在;用PBS清除未黏附于KB细胞的细菌,裂解细胞后涂板检测P. gingivalis黏附和侵入KB细胞情况,抗生素保护法检测P. gingivalis侵入KB细胞情况。结果    透射电镜结果发现,W83菌株组和PG0352突变株组KB细胞内均有细菌侵入;通过涂板后菌落计数发现P. gingivalis W83菌株和PG0352基因突变株对KB细胞的黏附率分别为（15.559 ± 2.020）%和（9.309 ± 1.750）%,侵入率分别为（0.651 ± 0.287）%和（1.517 ± 0.233）%,两者差异均有统计学意义（均P < 0.05）。结论    P. gingivalis W83菌株和PG0352基因突变株均能够黏附和侵入KB细胞;与W83菌株相比,PG0352基因突变株黏附上皮细胞的能力较弱而侵入能力较强。     

Identification of the genes associated with a virulent strain of Porphyromonas gingivalis using the subtractive hybridization technique

Background/aims:  Porphyromonas gingivalis , a major etiological organism implicated in periodontal disease, can be classified into virulent and avirulent strains. Our aim was to identify a gene for the virulence of P .  gingivalis .
Methods:  The subtractive hybridization technique was employed to identify the genes specific to P .  gingivalis W83, a virulent strain. In this study, P. gingivalis W83 was used as the tester strain, and P .  gingivalis ATCC 33277 was the driver strain. The prevalence of W83-specific genes was determined by Southern blot analysis of several P. gingivalis strains.
Results:  We obtained 575 colonies using the subtractive hybridization technique. From among these, 26 DNA fragments were subjected to a homology search using the BLAST program. Compared with strain ATCC 33277, strain W83 contained 12 unique clones. The specificities of the isolated DNA fragments were analyzed among four P. gingivalis strains by Southern blot analysis. Five genes showed specificity for strain W83 compared with strain ATCC 33277. All five genes were also identified in strain W50.
Conclusions:  The subtractive hybridization technique was effective in screening the two strains for specific DNA sequences, some of which might be responsible for determining virulence. The results suggested that several genes specific to strain W83 were associated with its virulence. Further analysis of these DNA fragments will provide important information on the pathogenesis of virulent P .  gingivalis strains.