锌指E盒结合蛋白1在恶性肿瘤中的研究进展

锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)是上皮-间充质转化的重要转录因子,不仅促进肿瘤的发生发展,还与肿瘤的预后密切相关。目前已证实ZEB1在多种肿瘤中有高表达。就ZEB1在肿瘤的生长、转移和预后等方面的作用做一综述。     

人原发性肝细胞癌中锌指蛋白A20、NF-κB p65及多药耐药P-gp蛋白的表达

目的检测锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在人原发性肝细胞癌和癌旁组织中的表达,比较两者之间的差异,并探讨其与肝细胞癌临床病理学特征的关系。方法收集2009年2月至2010年8月期间于华西医院肝脏及血管外科行手术切除的32例原发性肝细胞癌患者的肝癌组织标本及对应的癌旁组织26例,行免疫组织化学染色,同时收集患者完整的临床病理学资料。结果锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达阳性率分别为87.5%(28/32)、81.3%(26/32)及65.6%(21/32),高于癌旁组织中的61.5%(16/26)、34.6%(9/26)及30.8%(8/26),P<0.05。锌指蛋白A20的表达与乙肝表面抗原(HbsAg)表达情况及肝硬变情况有关(P<0.05);NF-κB p65蛋白和P-gp蛋白的表达均与HbsAg表达情况有关(P<0.05)。结论锌指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原发性肝细胞癌组织中均呈高表达,而在癌旁组织中呈低表达;3种蛋白可能对肝脏肿瘤的良恶性判断起指导作用。     

转录抑制因子ZHX1的研究进展

锌指结构和同源框1(zinc-fingers and homeoboxes 1,ZHX1)属于ZHX蛋白家族,ZHX蛋白家族还包括ZHX2、ZHX3。ZHX1开放阅读框编码873个氨基酸,其中包含2个锌指结构(C2-H2 zinc-fingers)和5个同源结构域。ZHX1可与其家族成员ZHX2和ZHX3结合形成异源二聚体,或自身结合形成同源二聚体,定位于细胞核中发挥调控转录作用。     

从人肾癌酵母双杂交文库中筛选TCF4相关蛋白

目的：应用酵母双杂交技术寻找在肾癌发生过程中与Wnt信号家族成员T细胞因子4(TCF4)相互作用的新蛋白。方法：以Wnt通路中的关键信号分子TCF4的N端和DNA结合域(TCF4ND，1～495aa)为诱饵蛋白，筛选肾癌双杂交文库，得到的阳性克隆酶切分类，测序后在Gen-Bank中进行Blast分析。结果：筛出与hTCF4相互作用的阳性克隆51个，包括β环连蛋白(β-catenin)，hTCF4，激活转录因子5(ATE5)，人类锌指蛋白等，其中未知基因2个。结论肾癌的发生、发展可能有多种信号通路参与调控。     

锌指蛋白A20对兔腰椎间盘退变影响的实验研究

目的 探讨锌指蛋白A20对兔腰椎间盘退变的影响.方法 取3月龄新西兰大白兔26只,体质量2.0～2.5 kg,经腹细针穿刺法制备L3、4、L4、5、L5、6椎间盘退变模型,其中24只术后4周MRI检查明确造模成功,随机分为4组(n=6),于目标椎间盘中分别注射锌指蛋白A20过表达腺病毒(过表达A20组)、空载体腺病毒(...     

周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1(Ciz1)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法观察Ciz1蛋白在80例结肠癌和正常结肠组织中的表达。结果:癌组织中Ciz1蛋白的阳性表达率显著高于正常结肠组织(62.5%vs42.5%,P=0.007),Ciz1蛋白过表达与结肠癌T分期(P=0.027)、淋巴结转移(P=0.033)、M分期(P=0.027)以及AJCC分期(P=0.022)显著相关。结论:Ciz1蛋白过表达可能在结肠癌发生发展过程中发挥重要作用。     

甲状腺乳头状癌中XAF1基因表达及其临床意义研究

2000年Fong等[1]运用酵母双杂交技术首次发现X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子 1(X-linked inhibitor of apoptosis protein associated factor-1,XAF1)蛋白.研究显示,XAF1蛋白共有301个氨基酸,7个锌指结构,其在许多肿瘤中表达下调,是一个潜在的抑癌基因[1-2].而关于XAF1基因在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达研究,文献鲜见报道.本研究采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对70例PTC及其对应的癌旁非癌组织( non-cancerous epithelium,NCE)中XAF1基因mRNA表达进行检测与分析,探讨其与PTC发生、发展的关系及其临床意义,为PTC的生物学治疗提供理论依据.     

甲状腺乳头状癌中PDK1、ZEB1和Vimentin的表达及其临床意义

目的:探讨磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 (PDK1)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)和波形蛋白(Vi-mentin)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达情况,并探究三指标与PTC临床病理参数的相关性.方法:免疫组化EnVision法检测206例PTC及45例癌旁组织中PDK1、ZEB1和Vimentin表达,分析其与PT...     

人ZEB1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

上皮细胞-间充质转化(EMT)与恶性肿瘤的侵袭与转移密切相关~([1]).锌指增强子结合蛋白1(ZEB1)是目前发现的最强的EMT诱导因子,与肿瘤的恶性进展相关~([2]).为进行ZEB1与肝癌关系和基因治疗的研究,本实验构建靶向ZEB1基因的表达RNA干扰的慢病毒表达载体.     

影响人类精子耐冻性的蛋白质分析

目的:利用比较蛋白质组学技术研究影响人类精子耐冻性的蛋白质。方法:将10例供精志愿者的31份精液标本依据冷冻复苏率的不同分为高冷冻复苏率组和低冷冻复苏率组,应用二维电泳技术和质谱分析鉴定技术寻找两组标本的精子蛋白和精浆蛋白在表达量上的差异。结果:在精子蛋白和精浆蛋白中共发现了22个差异表达蛋白。其中精浆蛋白12个,分别为细胞角蛋白1、神经元导向因子3、Rho2样蛋白、Krueppel样因子10、FERM域蛋白8、GMP合成酶、鸟嘌呤结合蛋白G、溶质载体家族12、ATP结合盒亚家族D1、6-磷酸果糖-2-激酶、肌钙蛋白C、肌球蛋白轻链;精子蛋白9个,分别为卷曲螺旋结构域蛋白113、RAF原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、Ras相关蛋白Rab-31、α微管蛋白3C/D、锌指蛋白879、胆固醇26-羟化酶、DNA修复和重组蛋白、细胞角蛋白73、钙磷蛋白;精浆和精子共有蛋白1个,为细胞周期依赖性蛋白激酶1。文献调研发现这些差异蛋白主要与精子的能量代谢、成熟、运动、DNA修复等有关。结论:鉴定了多种可能影响人类精子耐冻性的蛋白质,为以后从分子水平上揭示精子冷冻复苏原理提供了依据。     

人胃癌耐药细胞株中锌指蛋白139和MMP-2、MMP-7、细胞间黏附因子1的表达及其意义

本研究拟通过检测人胃癌细胞株SGC7901及耐药细胞株SGC7901/ADR中锌指蛋白139 (zinc finger protein 139,ZNF139)与侵袭相关基因基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-7、细胞间黏附因子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的表达,了解侵袭相关基因与胃癌多药耐药性的关系,并探讨ZNF139在其中发挥的作用.     

锌指蛋白KLF12抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中胰岛素样生长因子结合蛋白-1表达

目的人子宫内膜间质细胞蜕膜化标志蛋白胰岛素样生长因子结合蛋白-1(insulin-like growth factor binding protein-1,IGFBP-1)参与调控月经周期、排卵、蜕膜化、胚胎种植以及胎儿生长等生理过程,本研究旨在探索锌指蛋白KLF12对人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP-1表达的影响。方法制备Ad-Flag-KLF12重组腺病毒,通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)结合重组腺病毒介导的KLF12过表达实验,阐述人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中KLF12对IGFBP-1表达调控作用。结果成功获得滴度为2×1011ifu/ml的重组KLF12腺病毒,该腺病毒可在人子宫内膜间质细胞中高表达Flag-KLF12融合蛋白;体外分离培养的人子宫内膜间质细胞经8-Br-cAMP和醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)联合诱导蜕膜化后,KLF12的mRNA表达随着诱导时间延长逐渐降低,72h降低最明显,较未刺激降低约70%;过表达KLF12显著抑制8-Br-cAMP和MPA诱导的人子宫内膜间质细胞中IGFBP-1mRNA的表达,并以时间依赖的方式明显抑制IGFBP-1的分泌(P0.01);过表达KLF12明显抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP-1启动子转录活性。结论锌指蛋白KLF12抑制人子宫内膜间质细胞体外蜕膜化过程中IGFBP-1的表达与分泌。     

人肝细胞生长因子转染L02细胞的锌指基因差异表达筛选

目的构建人肝细胞生长因子(hHGF)真核表达载体,在L02细胞中表达hHGF并筛选其中的差异表达基因。方法构建pcDNA3.1(-)-hHGF载体,测序鉴定;其转染L02细胞后进行蛋白免疫印迹检测;将pcDNA3.1(-)-hHGF和pcDNA3.1(-)载体分别转染L02细胞后,提取总mRNA并逆转录为cDNA,运用基因表达谱芯片技术分析差异表达基因。结果构建的hHGF真核表达载体pcDNA3.1(-)-hHGF经酶切和测序鉴定正确;转染L02细胞后经蛋白免疫印迹证实hHGF存在明确表达;pcDNA3.1(-)及pcDNA3.1(-)-hHGF分别转染L02细胞后提取总RNA,经基因表达谱芯片分析发现,表达水平显著上调和下调的基因分别有404个和145个,在表达显著上调的基因中包含7种锌指基因。结论筛选出了hHGF转染L02细胞后的差异表达基因,为其作用机制及与锌指蛋白相关性的研究提供了重要依据。     

锌指蛋白PRDM16在肥胖大鼠睾丸及睾周脂肪中的相关性研究

目的探讨肥胖大鼠睾丸及睾周脂肪中锌指蛋白PRDM16的表达及在睾丸中的定位。方法选取20只SD雄性大鼠,随机分成正常组6只和肥胖组14只,其中正常组普通饲料喂养,肥胖组高脂饲料喂养,12周后成功建立肥胖大鼠模型7只。取大鼠睾丸和双侧睾周脂肪组织称重,采用实时荧光定量PCR和Western Blot检测锌指蛋白PRDM16在两组大鼠睾丸及睾周脂肪中的表达,免疫组织化学法检测PRDM16在大鼠睾丸中的定位,同时留取附睾尾部的精液,检测精子浓度和活力。结果肥胖组大鼠体重(420.43±19.65)g、睾周脂肪质量(5.12±1.75)g显著高于正常组大鼠[分别为(330.80±9.76)g、(2.80±0.23)g](P0.05),肥胖组大鼠睾丸/体重比值(0.003 9±0.000 44)显著低于正常组大鼠(0.004 8±0.000 37)(P0.05),而睾丸重量组间无统计学差异[正常组(1.58±0.09)g、肥胖组(1.63±0.15)g,P0.05];免疫组织化学结果显示,锌指蛋白PRDM16主要表达于大鼠睾丸生精细胞胞质中;Western Blot和qPCR结果显示,与正常组大鼠相比,肥胖组大鼠睾丸及睾周脂肪中PRDM16蛋白表达量和mRNA表达量均显著降低(P0.05);精液分析结果显示,与正常组相比,肥胖组大鼠精子浓度[(36.14±5.58)×106/ml vs.(46.50±8.10)×106/ml]和活力[(40.57±3.31)%vs.(52.00±6.78)%]均显著降低(P0.05)。结论肥胖大鼠睾丸及睾周脂肪中PRDM16的蛋白和mRNA表达量均显著降低,推测PRDM16可能与肥胖和雄性生殖有关。     

锌指E-盒结合同源异形盒-1在膀胱癌细胞中的表达及对肿瘤细胞侵袭的影响

目的:锌指E-盒结合同源异形盒-1(ZEB1)是上皮-间质转换的重要调控因子。本研究探讨ZEB1在膀胱癌细胞系中的表达情况,以及对膀胱癌发展与转移的影响。方法:采用RT-PCR检测膀胱癌细胞系ZEB1的表达,免疫荧光检测ZEB1蛋白表达定位;转染ZEB1siRNA后通过RT-PCR与Western Blot检测ZEB1的mRNA与蛋白表达变化;以及通过细胞侵袭实验观察ZEB1影响细胞侵袭能力的变化。结果:膀胱癌细胞系UMUC3和5637均表达ZEB1,SV-HUC-1不表达ZEB1;ZEB1蛋白定位于胞核;ZEB1敲低后,其mRNA与蛋白表达降低,膀胱癌细胞系侵袭能力降低。结论:膀胱癌细胞系UM-UC3和5637可用于ZEB1与肿瘤相关的机制研究;ZEB1促进膀胱癌细胞侵袭。     

Smads在骨形态发生蛋白诱导成骨中的作用

Smads蛋白是骨形态发生蛋白细胞内信号传导中起重要作用的转录因子,在骨形态发生蛋白诱导骨形成中发挥着关键作用.骨形态发生蛋白可以激活多种Smads蛋白并使其转移至细胞核,通过直接与特定DNA序列相结合、与核调节因子形成复合体、募集转录共活化或共抑制因子等3种方式调节目的基因的转录,最终诱导骨形成.该文就Smads蛋白的定义与分类、Smads信号转导通路及其在骨形态发生蛋白诱导成骨中的作用机制、BMP/Smads信号调节通路与其他通路之间的关系等相关研究作一综述.     

ZFX蛋白在胃癌组织中的表达与病理和预后关系的研究

目的:探讨胃癌组织中X染色体连锁锌指蛋白(ZFX)的表达,评价其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选取2013年1月—2015年12月经手术切除的胃癌组织标本,并收集其癌旁组织标本作为对照组。采用qRT-PCR方法检测43例胃癌组织及其对应癌旁组织中ZFX mRNA的表达,免疫组织化学(IHC)方法进一步检测114例胃癌及其癌旁组织中ZFX蛋白的表达情况,观察并探讨其与临床病理参数之间的关系,采用Kaplan-Meier对胃癌患者生存情况进行分析。结果:qRT-PCR结果显示ZFX mRNA在胃癌组织中的表达异常升高,明显高于癌旁组织;进一步IHC结果表明,ZFX蛋白的表达位于细胞核,胃癌组织中的表达阳性率约为76.3%,而癌旁组织中的阳性率仅有19.3%,差异有统计学意义(P0.01)。进一步分析显示,胃癌组织中ZFX蛋白的表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位及TNM分期无关(P0.05),而与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤的浸润深度密切相关(P0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示ZFX蛋白阴性表达组的总生存期高于阳性表达组(P0.05)。结论:ZFX在胃癌组织中于基因水平和蛋白水平均呈现异常高表达,并与患者临床病理参数和预后密切相关,提示ZFX参与胃癌的发生发展,有望成为胃癌潜在的预后指标。     

锌指蛋白A20在创伤感染时对小鼠肝组织的影响

目的　研究创伤感染时小鼠肝组织中锌指蛋白A2 0的表达规律及其对内毒素性肝损害病理改变的影响。方法　选用健康昆明种小白鼠 95只 ,雌雄不拘 ,体重 18～ 2 2 g ,制作双侧股骨闭合性骨折创伤及创伤合并内毒素血症模型。随机分为正常对照组、单纯创伤组、单纯内毒素组和创伤内毒素组。以Westernblot技术检测肝组织中锌指蛋白A2 0的含量变化 ,结果以 5次实验结果的A2 0蛋白条带平均吸光度值的平均值作为蛋白含量的相对值。结果　正常对照组A2 0蛋白呈现低量表达 (12 .90± 2 .18) ;单纯创伤组各时相点与正常对照组相比差异无显著性 ;单纯注射内毒素后 0 .5h ,A2 0蛋白含量较对照组升高明显 (2 3 .80± 4.61,P <0 .0 5 ) ,至 2 .0h表达又有所升高 (2 8.40± 10 .2 0 ) ,内毒素注射后 4.0～ 7.0h为A2 0蛋白表达的高峰期 ,且较单纯创伤组显著升高 ;而创伤并注射内毒素后 0 .5hA2 0蛋白表达较单纯创伤组 0 .5h显著增高 (3 4.5 3± 1.64 ,P <0 .0 1) ;至 2 .0h表达又明显升高 (4 1.94± 3 .0 7) ,且也显著高于单纯创伤 2 .0h(P <0 .0 1) ;2 .0h后A2 0蛋白表达仍呈升高趋势 ;创伤并注射内毒素后 7.0h时表达至高峰 (5 4.2 0± 5 .61) ,与单纯创伤组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。病理观察结果显示 :创伤并注射     

疼痛的中枢敏感化与G蛋白和蛋白激酶

疼痛的中枢敏感化的发生发展过程与G蛋白和蛋白激酶存在着密切联系。本文从中枢敏感化与G蛋白、蛋白激 酶c、蛋白激酶A、蛋白激酶G和钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶等几方面的相关性进行了初步介绍。     

Numb和Notch蛋白与细胞转分化的研究进展

上皮细胞转分化的发生与细胞极性的改变、细胞间粘附性的降低、细胞迁移性的增加等密切相关.研究表明,起着相互生物学拮抗作用的细胞命运决定因子Numb蛋白和Notch蛋白与上皮细胞转分化发生的各个环节有关.本文就Numb和Notch蛋白的生物结构、生物学作用,二者与上皮细胞转分化及肾脏间质纤维化的关系作一综述.