固相配体文库技术分析胰腺癌差异血清蛋白表达谱的研究

 目的：通过胰腺癌患者血清差异蛋白表达谱鉴定胰腺癌的血清学生物标志物。 方法：应用固相配体文库技术处理胰腺癌及非癌对照的血清,然后采用二维电泳技术分析差异点、串联质谱鉴定与胰腺癌变相关的血清差异蛋白质分子;应用ELISA检测凝集素在胰腺癌血清中的表达情况。 结果: 7种蛋白质分子在胰腺癌患者血清中的表达量升高,包括凝集素（clusterin）, 玻连蛋白（vitronectin）,补体C4-A( complement C4-A), 维生素蛋白D结合蛋白（vitamin D-binding protein）,抗凝血酶III（ anitthrombin-III）, 补体C6（complement component C6）, 凝血酶原（prothrombin）;补体C7（complement component C7）血清表达量下降。ELISA检测结果表明胰腺癌患者血清凝集素水平显著高于非癌对照（P<0.05）。 结论: 凝集素可能与胰腺癌的发生发展过程密切相关,血清凝集素检测可能是重要的胰腺癌诊断生物标志物。     

反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度

目的应用反相高效液相色谱法测定兔血清中5-氟尿嘧啶的浓度。方法兔血清样品经乙酸乙酯/异丙醇(84/16)萃取后,水浴氮气吹干,流动相定容后进样。色谱柱为kromasil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为20mM醋酸铵/乙腈(体积比98.2∶1.8,pH8.05),流速0.8mL/min,紫外检测波长为270nm。结果5-氟尿嘧啶在5～80μg/L浓度范围内呈良好的线性关系。10、20、40μg/L三个浓度的批内RSD分别为11.6%、5.6%、5.4%;批间RSD分别为12.8%、2.7%、6.2%;平均回收率分别为106.7±11.7%、98.0±5.3%、99.3±5.3%。结论本方法可靠、重复性好,具有特异性强、灵敏、精密度与准确度高等特点,满足5-氟尿嘧啶药代动力学研究的要求。     

慢性阻塞性肺疾病患者血清淀粉样蛋白A、颗粒蛋白前体的表达及临床意义

探究慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清淀粉样蛋白A（SAA）、颗粒蛋白前体（PGRN）的表达及临床意义。研究发现血清SAA、PGRN在急性加重期COPD（AECOPD）中呈高表达,AECOPD患者血清SAA、PGRN水平与第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%预计值)及预后均具有负相关性。血清SAA、PGRN水...     

保元解毒汤含药血清对肌细胞萎缩模型E3组分蛋白表达的影响

<正>目的:研究保元解毒汤含药血清对小鼠成肌细胞C2C12萎缩模型中E3组分Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达的影响,深入探讨保元解毒汤干预肌肉蛋白降解的作用机制。方法:制备保元解毒汤含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、绿原酸、阿魏酸、乌头碱。建立TNF-α诱导的肌细胞     

高效液相色谱法测定血清碘海醇浓度方法的建立和应用

目的 建立利用高效液相色谱法(HPLC)测定血清碘海醇浓度的方法,为碘海醇血浆清除率临床应用及推广提供方法学支持.方法 设定色谱条件,对HPLC测定血清碘海醇浓度的方法进行方法学验证.对33例慢性肾脏病(CKD)儿童同时进行碘海醇清除率与99mTc-DTPA血浆清除率测定,并采用最新Schwartz公式估算肾小球滤过率(eGFR).以99mTc-DTPA血浆清除率为参照,分析碘海醇清除率及eGFR与参照方法的相关性和一致性.结果 在设定HPLC色谱条件下,碘海醇浓度在10～1 000 mg/L范围内线性良好(R2 =0.9998).批间测量和批内测量相对标准偏差(RSD％)＜5％,平均回收率(R％)＞96％.碘海醇血浆清除率、eGFR与99mTc-DTPA血浆清除率的相关系数(r)分别为0.95和0.63,偏差分别为(6.24±10.81)mL/(min·1.73 m2)和(12.11±22.96) mL/(min·1.73 m2).结论 建立了测定血清碘海醇浓度的HPLC法;初步探索并验证了碘海醇血浆清除率评价儿童肾功能的准确、可行.     

反相高效液相色谱法测定血清中的5-羟色胺

建立了一种简便、快速测定血清中5-羟色胺的反相高效液相分析方法。采用的色谱柱为Bondapak C18不锈钢柱(5μm,250mm×4.6mmi.d.),流动相为:甲醇—水—乙酸(70:30:0.1 V/V),流速:1ml/min,荧光监测器,激发波长278nm,发射波长333 nm。结果表明:该方法线性关系良好(r=0.99992),5-羟色胺测定的线性范围为0.10~2.00μg/mL,最低检测限为0.02μg/mL(S/N=3)。5-羟色胺在血清样品中的加标回收率为92.37%~100.12%。该测定方法结果准确,可用于临床研究。     

高效液相色谱分析红细胞膜磷脂各组分

目的探讨红细胞膜磷脂组分的高效液相测定方法。方法选用 Sｐｈｅｒｉｓｏｒｂ硅胶色谱柱,流动相为乙腈－甲醇－８５％磷酸（１００：１０：１.８Ｖ／Ｖ／Ｖ）,波长２０３ｎｍ。结果４分钟内完全分离膜的四种磷脂组分磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）、磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）、磷脂酰胆碱（ＰＣ）和神经鞘磷脂（ＳＭ）,最低检出限为１μｇ／ｍｌ,至少在４μｇ－２０００μｇ／ｍｌ范围内标准品浓度与峰面积积分值呈线性关系,ＰＳ、ＰＥ、ＰＣ、ＳＭ的回收率分别为９８.１±２.３％、９９．８±０.７％、９９.４±１.８％、９０．６±２．２％。结论本法适于临床检测和科研探索。     

中国内江猪头孢唑啉血药浓度及蛋白结合率的研究

目的 :研究中国内江猪肾脏排泄的药代动力学特点及头孢唑啉 (CEZ)血浆蛋白结合率。方法 :选择主要经肾脏排泄的CEZ为模型药 ,采用高效毛细管电泳法测定其血药浓度 ,并计算药代动力学参数 ;采用平衡透析法测定其血浆蛋白结合率。结果 :中国内江猪静注CEZ后 ,其代谢符合二室开放模型。血浆清除率 (Cls)为 8 3 5ml/kg·min 1,消除半衰期 (t1/ 2 β)为 2 7 3 5min。中国内江猪血浆白蛋白浓度为 45 5 4± 1 7 44μmol·L 1,CEZ蛋白结合率为 80 5 9%～ 5 8 2 2 % ,解离常数为 1 6 1 0± 2 67μmol·L 1。结论 :与正常人实验药动学参考值相比较 ,内江猪对CEZ的消除与人具有相似的规律 ,但清除率明显大于人。侧面提示肾脏排泄功能可能较人强。内江猪血浆白蛋白浓度、CEZ蛋白结合率较人低 ,而解离常数较人高 ,表明CEZ与中国内江猪血浆蛋白结合的动态平衡中 ,结合物稳定性差 ,处于游离状态的CEZ较多 ,更易于消除     

The separation of immunoglobulin M from human serum by fast protein liquid chromatography

A fast protein liquid chromatography (FPLC) system was evaluated as a method for rapid separation of serum immunoglobulin M (IgM) from immunoglobulin G (IgG) and immunoglobulin A (IgA). The system incorporates the use of a strong anion exchanger. Evaluation was carried out in 3 ways. The effect of increasing the serum percentage in the 500 microliters volumes loaded on to the column was tested. Samples containing up to 60% serum resulted in only small concentrations of contaminating IgG and IgA in the IgM fraction. Reproducibility was tested by fractionating the same serum sample several times; the coefficient of variation (CV) of the IgM concentration in the IgM fraction was 6%. A number of sera which varied considerably in immunoglobulin concentration were fractionated without any significant adverse effects on the immunoglobulin ratios in the IgM fraction. One serum sample containing a high concentration of IgG and IgA was included. In contrast to gel filtration chromatography, FPLC can separate IgM from IgG and IgA within 6 min. On loading 500 microliters samples containing from 20 to 60% serum, less than 0.01 g/l IgG was detected in the IgM fractions when tested by the radial immunodiffusion method.     

高效液相色谱法测定狼疮性肾炎患儿血浆中环磷酰胺的含量

目的 建立测定狼疮性肾炎(LN)患儿血浆中环磷酰胺含量的高效液相色谱(HPLC)方法,为制订个体化治疗方案提供依据.方法 色谱柱为Hypersil ODS-2 C18柱,流动相为乙腈-水(体积比为30:70),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为195 nm,进样量为20μl.以异环磷酰胺为内标,血浆样品经甲醇沉淀蛋白、离心取上清液进样检测.结果 血浆中环磷酰胺的质量浓度在0.5～20.0 mg/L范围内,环磷酰胺与内标的峰面积比呈良好的线性(r=0.9994),最低检出限为0.1 mg/L;日内、日间精密度和稳定性实验的相对标准偏差(RSD)均＜8％;加样回收率为100.60％～101.05％,结果满意.结论 该法简便、快速、准确、重现性好,可用于LN患儿血浆中环磷酰胺的含量测定及免疫抑制治疗的临床药学监护.     

高效液相色谱法测定人红细胞膜脂肪酸含量及组成

本文采用高效液相色谱法测定了４２例正常成人红细胞膜脂肪酸（ＦＡ）含量及组成。结果表明：该法分离效果好、定量准确。重复性变异系数平均５．５％，回收率平均９４．７％。人红细胞膜主要由廿二碳六烯酸（Ｃ２２６）、花生四烯酸（Ｃ２０４）、亚油酸（Ｃ１８２）、软脂酸（Ｃ１６０）、油酸（Ｃ１８１）和硬脂酸（Ｃ１８０）等六种ＦＡ组成，其中花生四烯酸含量最高，其次为硬脂酸。不饱和脂肪酸占７１．６％。     

DLPME-HPLC法同时测定人血清中维生素A和维生素E含量

目的 建立分散液相微萃取（DLPME）-高效液相色谱（HPLC）同时测定人血清中维生素A、E含量的方法。方法 2018年5月随机抽取人血液样本50例,经DLPME技术处理后,采用HPLC对人血清中维生素A、E含量进行检测,使用标准曲线法进行定量分析。结果 维生素A标准曲线方程为y=13225x+410.03,相关系数为0.9998,检出限为0.042 μg/ml;维生素E标准曲线方程为y=1383.9x-458.27,相关系数为0.9997,检出限为0.096 μg/ml。维生素A和维生素E的加标回收率分别为90.12%~103.70%和81.09%~92.21%,含量范围分别为（0.62±0.04）μg/ml和（8.41±0.43）μg/ml。结论 DLPME-HPLC法操作简便,节约试剂,对样本富集效率高,通过该方法的研究,对微量血清中维生素A和维生素E的测定具很好的的应用价值。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度与细胞膜表面P-糖蛋白170表达的相关性研究

目的分析对糖皮质激素（GC）敏感（SS）和耐药（SR）的原发性。肾病综合征（NS）患儿的外周血单个核细胞（PBMC）内地塞米松浓度和P-糖蛋白170（P—gp170）表达与GC耐药的关系,探讨P—gp170在GC耐药Ns患儿中的作用及介导耐药的可能机制。方法收集2006年1至10月在中南大学湘雅二医院儿科诊断为原发性NS的初治患儿为研究对象,依据对GC的反应分为SSNS亚组和SRNS亚组,并设同期行查体的健康儿童为对照组。应用地塞米松刺激SSNS和SRSS亚组患儿的PBMC并进行培养,以高效液相色谱法测定培养前（0 h）及培养后12、24和36h时PBMC内地塞米松浓度;蛋白质免疫印迹检测培养各时间点PBMC膜表面P—gp170的表达量;分别对不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P—gp170的表达量行相关性分析。结果研究期间SSNS亚组纳入16例,SRNS亚组纳入8例,对照组纳入10例。①PRMC内地塞米松浓度随培养时间延长SSNS亚组呈增高趋势（P〈0．05）,SRNS亚组变化不显著（P〉0．05）;各培养时间点PBMC内地塞米松浓度SSNS亚组和SRNS亚组均高于对照组（P〈0．05）。②SSNS亚组P—gp170表达随培养时间的延长而逐渐降低,各培养时间点差异有统计学意义（P〈0．05）,且均高于对照组（P〈0．05）。SRNS亚组各培养时间点P—gp170表达差异无统计学意义（P〉0．05）,但高于SSRN亚组（P〈0．05）。③对照组不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P—gp170表达呈显著负相关（12h：r=-0．852,24h：r=-0．794,36h：r=-0．847;尸均〈0．05）;SSNS亚组也呈显著负相关（12h：r=-0．728,24h：r=-0．785,36h：r=-0．842;P均〈0．05）;SRNS亚组无显著相关性。结论①PBMC膜表面P—gp170表达增高与Ns患儿GC耐药有关,P—gp170表达增高介导了部分Ns患儿的GC耐药;②应用GC可诱导NS患儿PBMC膜表面P—gp170的表达增高,部分Gc耐药患儿与GC应用所致P—gp170增高有关;⑧NS患儿PBMC膜表面P—gp170的表达增高为GC耐药标志之一.     

The metabolism of tramadol by human liver microsomes

Summary The metabolism of tramadol was investigated in vitro using microsomal fractions of human liver. The parent compound and its main metabolites were determined by a newly developed high performance liquid chromatography assay. O-demethylation of tramadol was found to be stereoselective. The V_max of the O-demethylation of (–)-tramadol was 210 pmol·mg^–·min^–1, whereas (+)-tramadol was O-demethylated with a V_max of 125 pmol·mg^–1·min^–1. The K_m for both enantiomers was determined to be 210 M. O-demethylation was inhibited competitively by quinidine (k_i=15 nM) and propafenone (k_i=34 nM). N-demethylation was also stereoselective, preferentially metabolizing the (+)-enantiomer. Whereas O-demethylation displayed monophasic Michaelis-Menten kinetics, N-demethylation was best described by a two-site model. Competitive inhibition of the O-demethylation both by quinidine and propafenone suggests that O-demethylation is carried out by P-450IID6.Abbreviations HPLC high performance liquid chromatography - k_i inhibitory constant - k_m apparent Michaelis-Menten constant - M1 O-demethylated metabolite of tramadol - M2 N-demethylated metabolite of tramadol - NADP nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate - T tramadol - v_max maximum velocity of the reaction