大鼠支持细胞(Sertoli)对淋巴细胞作用初探

目的 探索Sertoli细胞对淋巴细胞的作用,为人工构建免疫豁免等提供思路.方法 酶解法分离培养幼龄大鼠睾丸的Sertoli细胞;用丝裂原ConA、LPS分别刺激T、B淋巴细胞活化;用MTT法测定Sertoli细胞上清作用过的淋巴细胞增值活力;用AnnexinV/PI法测定经Sertoli细胞培养上清作用后淋巴细胞的凋亡率.结果 Sertoli细胞培养上清明显抑制ConA(MTT测定OD值阳性/对照:0.22/0.11)和LPS(MTT测定OD值阳性/对照:0.19/0.09)对淋巴细胞的促增殖作用,也可诱导这两种淋巴细胞凋亡率上升(34.5Vs29.9与48.6Vs33.9).结论 Sertoli细胞培养上清对丝裂原激活的T、B细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用.     

MTT比色分析法检测接种狂犬疫苗者淋巴细胞活性的初步报告

1983年Mosmann创建MTT比色分析法检测细胞增殖,1986年周道洪等用此法进行小鼠瘤细胞活性及脾细胞转化试验,认为它在评价细胞增殖活性方面与3H-Tdr掺入法结果相近。我们应用MTT法检测接种狂犬疫苗者的淋巴细胞转化以及狂犬疫苗激活淋巴细胞活性程度,获得初步结果。材料与方法 (一)标本来源:被犬咬伤以及注射不同针次疫苗的人群。(二)试剂仪器:RPMI1640培养液(日本),淋巴细胞分离液(上海试剂二厂);PHA(上海市医学化验所);MTT Fluka:(AG瑞士);人用组     

大鼠支持细胞（Sertoli）对淋巴细胞作用初探

目的探索Sertoli细胞对淋巴细胞的作用,为人工构建免疫豁免等提供思路。方法酶解法分离培养幼龄大鼠睾丸的Sertoli细胞;用丝裂原ConA、LPS分别刺激T、B淋巴细胞活化;用MTT法测定Sertoli细胞上清作用过的淋巴细胞增值活力;用AnnexinV/PI法测定经Sertoli细胞培养上清作用后淋巴细胞的凋亡率。结果 Sertoli细胞培养上清明显抑制ConA（MTT测定OD值阳性/对照：0.22/0.11）和LPS（MTT测定OD值阳性/对照：0.19/0.09）对淋巴细胞的促增殖作用,也可诱导这两种淋巴细胞凋亡率上升（34.5Vs29.9与48.6Vs33.9）。结论 Sertoli细胞培养上清对丝裂原激活的T、B细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用。     

应用MTT比色法评价新生小牛血清对培养细胞生长的影响

体外培养细胞成功与否常取决于所选用血清质量,不同批号的血清往往有个体差异,质量不尽一样,细胞长势差别很大,所以在培养细胞之前必须对使用的血清进行质量鉴定。血清质量鉴定方法有定性法、定量法、放射性核苷酸掺入法和MTT比色法,而细胞计数法、克隆形成率测定法和H-TdR掺人法存在操作复杂和放射性污染等缺点。自1983年Mosmann建立MTT比色法以来,经不断改良完善,已成为细胞生物学及相关研究领域一种分析细胞活性、生长增殖等常用方法。基于MTT比色法能定量检测细胞的增殖与生长,本室在细胞培养中应用MTT比色法检测300头新生小牛血清(未饮过初乳)支持细胞生长能力。     

用快速比色计量法测量细胞生长

有许多方法可用来检测体外培养细胞的生长、增殖或抑制(如染料排除法、软琼脂克隆试验和[~3H]胸腺嘧啶渗入法等),用于对增殖或活性因子和抗肿瘤药物筛选的研究,但这些方法因重复性差、实验周期长或操作困难等缺点,不宜推广。Mosmann报道的比色试验,检测培养于96孔板的活细胞数,其原理是活细胞脱氨酶的催化作用能使四唑盐(MTT)还原成蓝色甲臢结晶,后者溶于有机溶剂,进而用ELISA仪检测吸收光密度     

苯并(a)芘对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

苯并(a)芘(B(a)P)是广泛存在于环境中的重要污染物之一,具有较强的致癌性,近年来国外许多免疫毒理学者,对B(a)P的免疫毒性进行了研究,以了解其致癌机理。本研究用1983年Mosmann创立的、最近经我室改良的MTT颜色反应法,观察了不同剂量的B(a)P及注射B(a)P后不同时间对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。     

雪上一枝蒿多糖组分XP-10体内外免疫调节作用及机制研究

目的 研究雪上一枝蒿多糖组分XP-10体内外免疫调节作用及初步效应机制，为雪上一枝蒿多糖的应用和合理开发提供科学依据。方法 构建体外小鼠脾淋巴细胞模型，分别采用ConA、LPS和anti-CD3抗体诱导脾淋巴细胞增殖，MTT法检测各组脾淋巴细胞的活力；ELISA法检测ConA诱导的脾淋巴细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6水平。构建环磷酰胺诱导的体内免疫抑制模型，测定XP-10对模型小鼠免疫器官指数的影响；MTT法检测各组脾淋巴细胞的活力；流式细胞术检测各组脾淋巴细胞Treg细胞(CD4+Foxp3+)表达水平。结果 XP-10具有丝裂原活性，显著促进ConA和LPS诱导淋巴细胞增殖，且呈现显著的浓度依赖性关系(P＜0.05)。XP-10在250 μg/mL浓度下可促进anti-CD3抗体诱导的淋巴细胞增殖。XP-10药物干预显著促进细胞因子IFN-γ(P＜0.05)和IL-6(P＜0.05或P＜0.01)水平，然而对IL-2的产生无明显的影响(P＞0.01)。XP-10在125 mg/kg剂量下能显著提高免疫抑制模型脾指数和胸腺指数(P＜0.05)，提高免疫抑制模型小鼠脾淋巴细胞的增殖功能，下调Treg细胞(CD4+ Foxp3+ T细胞)比例(P<0.05)。结论 中药雪上一枝蒿多糖组分XP-10在体内外均具有较好的免疫调节活性，其机制可能与促进细胞因子IFN-γ分泌和下调Treg细胞表达有关，其可能在抗肿瘤免疫辅助用药方面具有一定的应用前景。     

免疫磁珠及尼龙毛分离纯化T淋巴细胞的比较研究

目的:探讨免疫磁珠及尼龙毛分离纯化外周血T淋巴细胞的方法及其特点.方法:用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再分别以尼龙毛和免疫磁珠分离出T细胞,然后使用流式细胞仪鉴定细胞纯度、回收率,以台盼蓝检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖性能.结果:免疫磁珠方法分离后T细胞的纯度显著高于尼龙毛分离方法(P＜0.05),而且回收率也大于尼龙毛分离方法(P＜0.001),但二种方法分离的T细胞在细胞活力和增殖性能方面比较差异无显著性(P＞0.05).结论:在细胞生物学研究中,免疫磁珠分离法是有效分纯T细胞的较佳方法.     

γ干扰素对Bel-7402细胞的杀伤作用及机制研究

目的:研究γ干扰素对肝癌细胞Bel-7402的影响及对其机制进行探讨。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,用Bel-7402细胞刺激其活化增殖,采用流式细胞仪对其进行免疫表型分析。加入γ干扰素同Bel-7402细胞共培养,MTT法检测肝癌细胞的增殖情况。结果:经肝癌细胞Bel-7402刺激的外周血单个核细胞可增殖分化为抗肿瘤的细胞毒效应细胞,CD4+/CD8+细胞比例偏移,CD8+T淋巴细胞增加,比例可以占到90％以上。扩增的CD8+T淋巴细胞能够显著抑制Bel-7402细胞的生长(P<0.01)。γ干扰素(500 u/mL)的加入在效靶比20:1时,能够增强淋巴细胞对Bel-7402的增殖抑制作用(P<0.05)。低效靶比的情况下(5:1),淋巴细胞的数量对Bel-7402细胞增殖的抑制功能减弱(P相似文献   

铜绿假单胞菌外毒素A对小鼠脾淋巴细胞的作用

①目的 了解铜绿假单胞菌外毒素A（PE）对小鼠脾淋巴细胞的作用。②方法 用培养法和MTT法测定PE作用后小鼠脾淋巴细胞的转化率和增殖率。③结果 PE可使小鼠脾淋巴细胞转化率增高，但不能刺激淋巴细胞的增殖。④结论 PE在一定的浓度下具有增强细胞免疫功能的作用。     

慢性淋巴细胞增殖性疾病83例免疫表型分析

目的 研究慢性淋巴细胞系统增殖性疾病的免疫表型特点.方法 采用多参数流式细胞术分析了83例慢性淋巴细胞系统增殖性疾病的免疫表型.结果 38.5％(32/83)患者共表达CD5和B细胞标志.采用WHO引用的计分系统,将患者分为B-慢性淋巴细胞白血病(B-CLL),毛细胞白血病(HCL)和其他B淋巴细胞增殖性疾病.典型的B-CLL表达CD5、CD23、CD20、CD19、HLA-DR,但仍有部分患者表达CD22、CD11c、CD25和FMC7.CD103似为HCL最特异的标志.但仅仅依靠免疫表型难以鉴别非典型B-CLL、B细胞-幼淋巴细胞白血病(B-PLL)和外套细胞淋巴瘤(MCL),细胞遗传学或分子生物学检查将有助于鉴别诊断.结论 免疫表型分析是诊断慢性淋巴细胞系统增殖性疾病非常有用的依据.     

红细胞促进外周血单个核细胞对PHA增殖反应及IgG分泌的实验研究

红细胞免疫是机体免疫功能的一个重要组成部分，红细胞除自身的免疫粘附功能外，对其它免疫细胞如T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞等的促进与调控作用也己逐渐被了解。本文就红细胞对外周血单个核细胞(PBMC)对植物血凝素（PHA)的增殖及IgG的分泌的促进作用进行实验研究，报告如下。     

CFSE标记的淋巴细胞增值实验检测方法的建立

[摘要] 目的　建立基于流式细胞术和活细胞荧光染料CFSE的淋巴细胞增殖、单向混合淋巴细胞实验的免疫学检测方法。 方法　分离单个核细胞，将反应细胞经CFSE染色后，分别加入不同的淋巴细胞增殖刺激物或与灭活异基因淋巴细胞共培养。培养后细胞经流式细胞术检测标记细胞是否增殖，应用CD4-PE抗体检测增殖细胞中CD4阳性T细胞亚群比例，ModFit软件分析增殖动力模型。计算增殖CDI或PI指数。 结果　基于CFSE建立的淋巴细胞增殖实验，经不同刺激物或异基因抗原刺激后增殖指数明显升高，使用CD4-PE抗体进行再次标记后可以对增殖实验中CD4阳性淋巴细胞亚群的增殖进行评估。 结论　成功建立了基于CFSE标记淋巴细胞的增殖实验检测方法，该方法简单，实用，灵敏度高，可以取代3H或MTT用于不同条件，不同免疫刺激情况下淋巴细胞增值的检测或评估。     

结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的免疫学特性

目的:研究结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPT64的免疫学特性. 方法:用原核表达的MPT64蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果. 分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,体外用抗原再刺激,MTT方法检测IFN-γ产生水平和MTT法检测淋巴细胞增殖,并对脾脏细菌负荷计数. 结果:MPT64免疫小鼠可引起体液免疫和保护性细胞免疫,免疫小鼠的脾淋巴细胞体外用抗原再刺激,淋巴细胞的增殖较显着. MTT方法检测小鼠的IFN-γ量为1024 ng/L,而生理盐水对照组低于80 ng/L. 结论:MPT64蛋白有可能作为新型结核疫苗的组分.     

淋转对几种癌症的实验室观察

(一) 原理 正常人外围血液中淋巴细胞根据其功能的不同分为T细胞和B细胞,它们都是处于细胞周期的休止期。具有免疫活力的T细胞在遇到“非已”抗原时,或已致敏的淋巴细胞遇到相应抗原时,则在巨噬细胞或其它因素(淋巴细胞介质)的参予下,经过DNA合成后,T细胞转化为免疫母细胞,并开始增殖分裂。目前应用植物血凝素(PHA)     

茶多酚免疫药理作用研究

目的：研究茶提取物-茶多酚（TP）对小鼠淋巴细胞免疫功能的影响。方法：采用MTT法测定TP在离体给药时对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞及小鼠巨噬细胞增殖反应的影响。结果：体外实验证明,TP对丝裂原诱导的小鼠脾淋巴细胞和小鼠巨噬细胞增殖反应具有明显的增强作用,可以显著增强ConA诱导的小鼠离体脾淋巴细胞及小鼠离体巨噬细胞增殖反应。结论：TP具有免疫增强作用。     

细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究

目的:探讨细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白诱导小鼠的免疫应答效果。方法:设立Eg95重组蛋白免疫组(rEg95组)和对照组(NS组)小鼠分别注射Eg95重组蛋白、福氏佐剂和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测IgG水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖反应。结果:Eg95重组蛋白免疫小鼠在第2次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25600。在第4次免疫后,进行淋巴细胞转化实验,MTT法检测证实Eg95重组蛋白免疫的小鼠,其脾细胞可在体外被特异性刺激增生。结论:细粒棘球绦虫Eg95重组蛋白可诱发小鼠产生特异的体液免疫和细胞免疫应答。     

期刊文摘

sPD-1封闭PD-L促进抗瘤免疫的机制研究[贺兰湘,张桂梅,贺宇飞等.中华微生物学和免疫学杂志,2006,26(5):463~467]为了研究自行构建的可溶性PD-1(sPD-1)真核表达质粒pPD-1A的抑瘤机制。采用转染了pPD-1A的BHK细胞分泌产物封闭树突状细胞上的PD-1配体(PD-L),并用MTT法检测树突状细胞(DC)对小鼠脾细胞的增殖激活作用。BALB/c小鼠接种H22肝癌细胞后次日开始接受质粒pPD-1A的注射。用RT-PCR法分析小鼠脾细胞的细胞因子和共刺激分子的mRNA表达水平,用流式细胞术测定肿瘤内T淋巴细胞的数量。结果显示:在淋巴细胞活化的早期sPD-1…     

MTT显色反应实验条件分析

目的 :检验分析MTT实验方法本底高、灵敏度低、稳定性差的影响因素 ,改进实验条件提高灵敏度和稳定性 ,降低本底。方法 :用MTT比色方法 ,细胞毒试验及细胞增殖实验 ,分析比较不同条件下MTT显色反应的性能特点。结果 :比较了 13种溶剂对Formazan的溶解性能。分析检验了琥珀酸脱氢酶在细胞上的分布特点、pH值对MTT反应体系的影响、酚红和牛血清对检验结果的影响 ,提出相应对策。检测了MTT反应时间曲线和细胞活力曲线。分析了改进后的MTT实验方法的灵敏度和稳定性。结论 :以MTT为底物的酶在细胞代谢中主要分布在细胞膜表面。MTT反应体系的pH值为 6 7,比较好的Formazan溶剂是正丙醇、异丙醇和乙二醇乙醚。去掉细胞培养上清 ,检测细胞上的酶 ,用溶剂使蛋白质变性 ,经沉淀去掉蛋白质影响 ,能使MTT实验方法的本底降低 ,灵敏度提高。通常情况下该方法检测K 5 62细胞和人淋巴细胞的灵敏度分别为 10 0 0和 10 0 0 0个细胞左右。     

肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞体外增殖的抑制作用

目的研究肺癌原代细胞和细胞系A549对肿瘤浸润性淋巴细胞的抑制作用及其临床意义.方法分离和培养肺癌细胞及TIL细胞,用MTT法检测原代肺腺癌细胞及腺癌细胞株A549对TIL体外增殖的抑制作用及FasL抗体对TIL的保护作用.结果原代肺癌细胞及A549细胞株对TIL均有不同程度的抑制作用.结论肺癌细胞对TIL细胞的抑制作用可能是机体逃避免疫攻击的机制之一.