蓖麻毒素被修饰前后在小鼠主要脏器的定位比较研究

为探讨引入二硫吡啶硫酮（ＰＤＰ）基团后，蓖麻毒素（ＲＴ）毒性降低和免疫增强的机理，作者将用异型双功能交联剂３－（２－吡淀二硫基）丙酸琥珀酰亚胺酯（ＳＰＤＰ）修饰的蓖麻毒素（ＲＴ－ＰＤＰ）与其修饰的蓖麻毒素注入小鼠腹腔内，然后取小鼠的心、肝、脾、肺、肾等主要脏器进行了免疫组化定位和计算机辅助图像分析。提示ＲＴ－ＰＤＰ对主要脏器组织亲和力和毒性明显降低，且有可能产生一种活化吞噬细胞的新功能，从而为蓖麻     

蓖麻毒素的化学修饰及其对小鼠肝脏毒性的影响

目的：观察蓖麻毒素（ＲＴ）修饰前后对小鼠肝脏毒性的影响，探讨化学修饰对改进ＲＴ抑瘤作用的意义，方法：Ｒ艇３－（２－吡啶二硫基）丙酸Ｎ－羟基琥珀酰亚胺酯（ＳＰＤＰ）－－一种异型双功能交联剂，进行修饰；生丰ＲＴ的ＳＰＤＰ衍生物（ＰＤＰ－Ｒ）；在同样条件下分别测定ＲＴ和ＰＤＰＲ中毒小鼠在没剂量和时间的血清谷胱甘肽转硫酶（ＳＧＳＴ）活性，以此为指标比较二者对肝脏的毒性差别，结果：伴随中毒剂量的增加和时间的     

肝病患者红细胞体积分布宽度变化及临床意义

目的：探讨各种肝病患者红细胞体积分布宽度的变化及其临床意义,方法：应用Ｋ－１０００型全自动血液分析仪测定１６２例肝癌患者红细胞体积分布宽度标准差（ＲＤＷ－ＳＤ＿）和红细胞体积分布宽度变异系数（ＲＤＷ－ＣＶ）。结果：表明慢性活动性肝炎组、肝硬变组和肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组ＲＤＷ－ＳＤ和ＲＤＷ－ＣＶ值与正常对照组比较均升高（Ｐ〈０．０５）或Ｐ〈０．０２）,升高程度依次为ＨＣＣ组〉肝硬变组〉慢活性肝活（Ｐ     

蓖麻毒素及其SPDP修饰物对小鼠肝脏GSH含量的影响

目的：观察麻毒素（ＲＴ）修饰前后对小鼠肝脏毒性的影响。方法：ＲＴ用３－（２－吡啶二巯基）丙酸Ｎ－羟基琥珀酰亚胺酯中（ＳＰＤＰ）－－一种异型双功能交联剂,进行化学修饰,自下而上的ＳＰＤＰ衍生物（ＰＤＰ－Ｒ）,测定两者在不同剂量和时间对小鼠肝脏还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量的影响,以比较两者的毒性差别,结果：随着中毒剂量的增加和时间的延长,两者与可使小鼠肝脏ＧＳＨ含量下降,但ＲＴ组下降程度较ＰＤＰ－Ｒ     

蓖麻毒素被修饰前后的毒性及抗肝癌性比较研究

蓖麻毒素被修饰前后的毒性及抗肝癌性比较研究董巨莹，王文学（毒理学教研室西安７１００３３）关键词蓖麻毒素；修饰；毒性；抗肝癌性中图号Ｒ７３０．１蓖麻毒素（ｒｉｃｉｎｔｏｘｉｎ，ＲＴ）是从蓖麻籽中提取的一种植物糖蛋白，它能使真核生物细胞内的核糖体６０Ｓ亚...     

肝癌病人自由基,IL—2系统,T细胞亚群的变化及其相互关系

目的：探讨肝癌病人自由在和免疫功能的变化，资料和方法：３０例肝癌病人（男１６例，女１４例）３０例健康人，（男１６例，女１４例）和３０例肝良性病变者作对照组，用双抗体夹心法（ＥＬＩＳＡ）测ＳＩＬ－２Ｒ水平，ＩＬ－２ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８，ＬＰＯ，ＳＯＤ也同步测定。结果：（１）肝癌病人ＩＬ－２，ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ４／ＣＤ８，ＳＯＤ明显低于常人及良癌病人的ＬＰＯ与ＳＯＤ间呈负相关（γ＝０．４３，Ｐ〈０     

月桂酸修饰的超氧化物岐化酶保护红细胞抗氧化溶血作用的实验研究

目的：为了证实月桂酸修饰的超氧化物歧化酶（ＡＣ－ＳＯＤ）保护红细胞抗氧化溶血作用是否更优于未修饰的ＳＯＤ．方法：先在人的红细胞悬液中分别加入ＡＣ－ＳＯＤ（Ａ组）、ＳＯＤ（Ｂ组）、生理盐水（Ｃ组），于３７℃温育２０ｍｉｎ后，洗掉未结合在膜上的酶，再于三组红细胞悬液中均加入黄嘌呤（Ｘ）和黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）以产生超氧阴离子（Ｏ－２）造成溶血．各组再分别温育３０ｍｉｎ和１ｈ，以红细胞加蒸馏水的全溶血试管作为对照，用分光光度法测光密度值，计算溶血率．结果：温育３０ｍｉｎ的溶血率，Ａ，Ｂ，Ｃ三组分别为１１．６±０．８６，１３．３２±１．２５和１４．３４±１．３８，Ａ组明显低于Ｂ组（Ｐ＜０．０５）．Ｂ组与Ｃ组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）．温育１ｈ的溶血率分别为１６．３６±０．４８，２３．５４±１．４９和２７．６６±２．３０，Ａ组非常显著地低于Ｂ组和Ｃ组（Ｐ＜０．００１）．结论：月桂酸修饰的ＳＯＤ保护红细胞抗氧化溶血作用明显优于未修饰的ＳＯＤ．     

聚乙二醇化学修饰重组人白介素—2

利用聚乙二醇活性酯（ＰＥＧ，Ｍｗ５０００）在不同反应条件下修饰重组白介素－２可改变其分子量，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量和ＣＴＬＬ－２短期培养结合＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＩＬ－２生物活性，ＰＥＧ修饰ｒＩＬ－２的方法学研究结果表明：随着ＰＥＧ对ｒＩＬ－２投料摩尔比的增加或修饰反应时间的延长，ｒＩＬ－２的修饰度和修饰率及修饰产物的分子量和不均一性均增加，修饰产物的分子量因反应条件的不同而从１５ＫＤ增     

分泌性中耳炎猫中耳粘膜SP和NPY含量的变化

目的：探讨Ｐ物质（ＳＰ），神经肽Ｙ（ＮＰＹ）在分泌性中耳炎发病过程中的作用。方法：阻塞咽鼓管建立分泌性中耳炎模型。用免疫组化ＡＢＣ－ＧＤＮ及图像分析技术研究中耳粘膜ＳＰ，ＮＰＹ的分布及含量的变化。结果：中耳粘膜ＳＰ免疫反应（ＳＰ－ＩＲ）阳性纤维定位分布多与血管无关，ＮＰＹ免疫反应（ＮＰＹ－ＩＲ）阳性纤维多伴中小动脉走行。咽鼓管阻塞８ｈ后，中耳即有明确渗出，中耳粘膜ＳＰ－ＩＲ阳性纤维２４ｈ开始增粗、     

刺五加在大鼠实验性肝癌诱发过程中作用的探讨

目的探讨大鼠实验性肝癌发病中刺五加对肌体免疫功能和抗氧化酶活性的影响。方法４６只ＳＤ雄性大鼠被随机分成对照组（喂普通饲料）、３－甲基４－双甲氨基偶氮苯（３－Ｍｅ－ＤＡＢ）组（喂含０．０６％３Ｍｅ－ＤＡＢ饲料 １０周）和刺五加组（饲喂同 ３－Ｍｅ－ＤＡＢ外、另加入刺五加 ４．５ｇ／ｋｇ饲料,用常规方法检测全血谷光甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）、血清超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量,用微量化学发光造检测吞噬细胞活性（ＰＭＮ－ＣＬ）。结果１．ＰＭＮ－ＣＬ检测峰值、积分值和吞噬细胞指数,３－ＭｅＤＡＢ组较正常组和刺五加组均有显著升高（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１）２．全血ＧＳＨ－ＰＸ活性、ＳＯＤ活性,刺五加组较３－ＭｅＤＡＢ组均有显著升高（Ｐ＜０．０５）。ＭＤＡ含量刺五加组和３－ＭｅＤＡＢ组均较正常组升高（均Ｐ＜０．０５）。结论刺五加在大鼠实验性肝癌诱发过程中有提高抗氧化酶活性和对抗致癌剂引起的机体中性粒细胞吞噬功能代偿性增高的作用。     

蓖麻毒素修饰物的制备和细胞毒作用

为了降低蓖麻毒素的毒性，保留其抗肿瘤活性。采用３－Ｎ－羟基丙酸琥珀酰亚胺酯修饰ＲＴ，实验观察修饰前后ＲＴ的急性及体外对三株肿瘤细胞杀伤作用的。ＲＴ－ＰＤＰ小鼠腹腔ＬＤ５０为６８．２μｇ／ｋｇ，比ＲＴ大２．４５倍，并且对人子宫颈癌细胞胃癌及小鼠乳腺癌细胞的均有较强杀伤性。     

兔VX2肝癌模型制作及肝动脉插管技术改良

目的 应用VX2细胞株制作新西兰兔移植性肝癌模型,并探讨对肝动脉插管技术的改良.方法 开腹分别种植VX2瘤块于兔肝左、右叶.制作40只兔VX2肝癌模型.瘤株接种2周后,实验组(26只)采取改良显微外科手术直接行肝动脉插管法行介入治疗,对照组(10只)采用3F微导管经股动脉.肝动脉插管法作对比研究.术前及术后用多层螺旋CT和DSA造影方法进行兔VX2肝癌的影像学观察.结果 CT扫描及开腹手术证实瘤株接种成功36只.实验组的插管成功率为88%(23/26);对照组的插管成功率为40%(4/10).多层螺旋CT平扫兔VX2肝癌表现为低或等密度结节灶;DSA造影示肿瘤呈均一的或结节状染色.结论 采用改良显微外科手术直接行肝动脉插管法对兔VX2肝癌行介入治疗成功率较高,实验人员可较大程度地避免辐射,是值得推广的实验方法.     

Preparation and in vitro killing effect of adriamycin-loaded immunonanosphere against hepatoma led by F (ab')2 Fragment of monoclonal antibodies]

OBJECTIVE: To study the preparation method and in vitro killing effect of adriamycin (ADR)-loaded human serum albumin (HSA) immunonanosphere (HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP) against hepatoma led by F(ab')2 fragment of human hepatoma specific monoclonal antibody HAb18. METHODS: After ADR loaded HSA nanosphere (ADR-HSA-NP) was prepared in the emulsifying high temperature solidifying way, HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP was prepared using the modified N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio) propionate (SPDP) method. In vitro binding characters of HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP and ADR-HSA-NP and hepatoma cell SMMC-7721 were observed under optical microscopy and electronic microscopy. In vitro effects of killing hepatoma cell SMMC-7721 of two microspheres were determined using the method of 3H-TdR. RESULTS: The surfaces of HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP gave out bright yellow-green fluorescence after it was dyed with fluorescent agent, whereas ADR-HSA-NP did not give out fluorescence. HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP could integrate with hepatoma cell SMMC-7721 and effectively killed hepatoma cell SMMC-7721 with dose dependence, but ADR-HSA-NP could not obviously integrate and kill SMMC-7721. Neither of the two microspheres could bind and kill human large intestine cancer cell SW1116. CONCLUSION: HAb18 F(ab')2-ADR-HSA-NP has a good character for in vitro specific targeting to bind and kill human hepatoma cell.     

蓖麻毒素温敏型凝胶间质化疗对H22肝癌荷瘤小鼠的影响

目的：探讨蓖麻毒素温敏型凝胶经皮瘤内注射间质化疗治疗小鼠H22肝癌的有效性及可行性。 方法：采用色谱方法纯化蓖麻毒素,高效液相色谱法和蛋白印迹法进行纯度和性质鉴定。建立小鼠皮下移植肝癌模型,分为模型组、空白凝胶组、游离蓖麻毒素组、蓖麻毒素温敏型凝胶组,瘤体内注射相应药物。治疗后第15天,剥离肿瘤称取质量并计算抑瘤率;光学显微镜下观察肿瘤组织坏死情况;透射电子显微镜观察肿瘤组织细胞的超微结构变化及凋亡的形态学改变;分光光度计法检测肿瘤组织半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性;取血检测小鼠肝肾功能。 结果：蓖麻毒素温敏型凝胶瘤体内注射间质化疗对小鼠肝肾功能无明显影响;局部给药一次抑瘤率达71.31%;光学显微镜观察结果提示,肿瘤组织大片坏死;透射电子显微镜观察结果显示肿瘤细胞染色质边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变;肿瘤细胞caspase-3活性亦明显升高。 结论：蓖麻毒素温敏型凝胶间质化疗可抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,且具有较高的安全性。     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

肝癌组织及肝癌细胞株中TRAIL受体的检测

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体在原发性肝癌(PHC,简称肝癌)组织及肝癌细胞株HepG2及SMMC7721中的表达,以期选出与肝癌组织中TRAIL受体表达相近的细胞株。方法:收集原发性肝癌组织30例,以常规方法培养人肝癌细胞株HepG2及SMMC7721,以半定量RT-PCR法,对TRAIL受体的表达作半定量检测。结果:30例肝癌组织及HepG2细胞中均有TRAIL受体DR4(deathrecptor4)、DR5、DcR1(decoy receptor1)、DcR2的表达,而SMMC7721细胞中不表达DcR1;半定量结果显示肝癌组织及HepG2中DR4及DR5的表达量明显高于DcR1及DcR2;肝癌组织中4对受体间的表达量存在相关性,HepG2细胞中DR4的表达与DcR1及DcR2间存在相关性。结论:HepG2中TRAIL受体的表达类似于肝癌组织。     

钙激活中性蛋白酶在肝癌细胞迁移能力中的作用

目的:观察不同转移能力肝癌细胞中钙激活中性蛋白酶(calpain)的表达情况,利用抑制剂抑制calpain活性,评价calpain对肝癌细胞迁移能力的影响.方法:用蛋白质印迹(Western blotting)检测不同转移能力肝癌细胞或肝细胞中calpain-1、calpain-2和Src的表达和酶解情况;用划痕法观察...     

RTA—RA3是B220特异性的有潜力的抗自身免疫的免疫毒素

将抗B220单克隆抗体分泌克隆RA3注射至SCID小鼠腹腔以获取腹水，抗体经proteinA亲和层析柱提纯，再经SPDP双功能交联剂修饰后，与还原的去糖基蓖麻毒蛋白A链反应生成免疫毒素RTA-RA3．SephadexG150柱层析分离纯化此免疫毒素，在还原状态下可见到免疫球蛋白重链、轻链及另一条带RTA．免疫毒素体内注射，研究MRL/＋和MRL/lpr小鼠脾细胞的淋巴细胞标志．实验表明：RTA－RA3对脾B220＋细胞有显著抑制作用．提示这一免疫毒素可用于治疗自身免疫性疾病。     

新型抗体偶联胶原包被质粒DNA血管支架的研制

目的研制一种以支架为基础的高效、局部定位的新型基因投递体系。方法利用双官能偶联剂N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)将支架表面涂布的胶原与抗DNA抗体化学键合,该抗体再与质粒DNA(pEGFP-C1)免疫结合,并加入阳离子脂质体提高细胞转染效率。用125I标记抗DNA抗体,检测支架表面偶联的抗体量。用32P标记pEGFP-C1检测通过上述方法结合在支架上的DNA量,同时以物理吸附组作为对照,通过细胞培养和兔体内实验验证其效果。结果实验组胶原基质携带抗体量约为对照组的15倍(P<0.005)。实验组胶原基质携带质粒DNA量显著高于对照组(P<0.01),释放时间达13d以上。细胞转染实验结果表明,抗DNA抗体连结pEGFP-C1质粒组支架胶原涂层表面有较多GFP转染阳性细胞生长,而未与支架接触的周边细胞几乎无转染。动物实验结果显示约有(2.8±0.7)%血管壁细胞被转染,新生内膜转染率最高,达7%,远隔器官未见载体扩散。结论抗体偶联胶原包被质粒DNA血管支架是一种新型高效、局部定位的基因转染体系。该体系适用于多种基因转染,且基因释放在一定条件下可控,为开发心血管内靶向基因投递体系提供了新思路。