sCD40L联合长春瑞滨对肺腺癌A549细胞的作用

背景与目的 CD40信号对肿瘤细胞化疗敏感性的影响存在争议.本研究旨在观察可溶性CD40配体(sCD40L)联合长春瑞滨对肺腺癌A549细胞的作用.方法 以sCD40L处理AS49细胞,MTT法和流式细胞仪检测CD40激发前后长春瑞滨作用下A549细胞的生长、细胞周期及凋亡率等生物学行为的变化,同时用Caspase-3检测试剂盒分析Caspase-3活性的改变.结果 sCD40L对CD40分子的激发可增强长春瑞滨对表达CD40肺癌细胞株A549增殖的抑制率(P＜0.05),但并不显著影响细胞周期时相和细胞凋亡率(P＞0.05),Caspase-3活性反而显著下降(P＜0.05).结论 以sCD40L激发CD40信号可增强肺腺癌细胞A549对长春瑞滨的敏感性,可能通过非凋亡的、Cas-pase非依赖性的机制,且可能与抑制细胞周期进程无关.     

Rh-Apo2L联合长春瑞滨杀伤人肺腺癌A549细胞的作用研究

[目的]对比PET／CT与MRI诊断鼻咽癌颅底、颅内侵犯的效能．评估PET／CT对以MRI为基础的鼻咽癌T分期影响。[方法]2005年1月至2009年12月,60例患者均行PET／CT和MRI检查,对比PET／CT和MRI的诊断效能及T分期结果。[结果]PET／CT和MRI对鼻咽癌颅底侵犯的敏感性、特异性、准确率分别为96．7％、60．0％和78-3％;76．7％、93.3％和85．0％。PET／CT使28.3％病例T分期提高,8．3％病例T分期下降。[结论]虽然PET／CT对鼻咽癌原发灶侵犯范围的评估效能与MRI相仿,但如以PET／CT作为鼻咽癌分期基础,可能使T分期提高,临床需予以重视。     

rh-Apo2L联合长春瑞滨对诱导肺鳞癌细胞凋亡作用及机制的研究

目的 晚期肺鳞癌治疗方式相对有限.Ⅲ期临床试验提示,rh-Apo2L有望为其提供一种新颖、有效的治疗方法.本研究旨在观察rh-Apo2L、长春瑞滨及两药联合对人肺鳞癌细胞SK-MES-1的抑制增殖和促进凋亡作用,并探讨其机制.方法 将不同质量浓度的rh-Apo2L、长春瑞滨干预人肺鳞癌SK-MES-1细胞,采用CCK8法检测细胞增殖;Annexin Ⅴ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白DR4、DR5和Caspase-3的表达.结果 通过CCK8检测发现,rh-Apo2L对人肺鳞癌细胞SK-MES-1的体外增殖具有抑制作用,24和48 h的IC50分别为28.57和8.97 μg/mL;长春瑞滨对人肺鳞癌细胞SK-MES-1的体外增殖具有抑制作用,24和48 h的IC50分别为27.30和7.87 μg/mL.其中,1μg/mL rh-Apo2L组、1 μg/mL长春瑞滨组和两药联合组(rh-Apo2L和长春瑞滨质量浓度均为1 μg/mL)的24 h细胞增殖抑制率分别为(15.03±1.54)％、(21.88±2.75)％和(65.11±4.09)％;0.1 μg/mL rh-Apo2L组、0.5 μg/mL长春瑞滨组和两药联合组(rh-Apo2L质量浓度为0.1μg/mL,长春瑞滨为0.5 μg/mL)的48 h细胞增殖抑制率分别为(19.01±1.12)％、(19.97±1.23)％和(84.81±3.99)％;24和48 h联合组两药相互作用指数(q值)分别为1.94和2.40.细胞凋亡实验结果显示,1 μg/mL rh-Ap02L组、1μg/mL长春瑞滨组和两药联合组(rh-Ap02L和长春瑞滨质量浓度均为1 μg/mL)干预细胞24 h的凋亡率分别为(21.76±3.13)％、(37.31±2.21)％和(74.88±3.63)％;与单药组相比较,两药联合组对SK-MES-1细胞增殖的抑制作用明显增强(P＜0.001),两药联合干预24 h的凋亡指数显著升高,P＜0.001.蛋白印迹法检测结果发现,rh-Ap02L联合长春瑞滨在上调DR4(P=0.026)和DR5(P=0.001)表达方面具有交互作用,在增加Caspase-3活性片段表达亦具有交互作用,P=0.011.结论 rh-Apo2L与长春瑞滨均能协同抑制人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调SK-MES-1细胞表面的DR4、DR5蛋白表达和活化Caspase-3相关.     

rm hTNF-α联合吉西他滨杀伤人肺腺癌细胞A549作用研究

背景与目的 目前,晚期非小细胞肺癌患者化疗效果已达平台,生物治疗与化疗联合使用可明显改善此类患者的治疗效果.本课题旨在研究rmhTNF-α联合吉西他滨对人肺腺癌细胞A549的杀伤作用及其作用机制.方法 应用CCK-8法检测不同浓度rmhTNF-α及吉西他滨对A549细胞抑制率,应用细胞生长曲线描述经rmhTNF-α、吉西他滨干预过的A549细胞增殖情况,应用流式细胞仪检测各药物处理组48 h的细胞周期分布及凋亡率,并用光学显微镜及透射电子显微镜观察A549细胞形态及超微结构.结果 CCK-8检测结果及细胞生长曲线均提示rmhTNF-α不仅具有抑制A549细胞生长作用,而且可以增强吉西他滨对A549细胞杀伤作用;FCM显示两药联合组可促使A549细胞阻滞在S期,降低G2/M期比率;凋亡比率以吉西他滨 rmhTNF-α组最明显,光镜及电镜下观察结果均能明显观察到A549细胞呈凋亡形态学改变.结论 rmhTNF-α通过诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡及细胞周期阻滞,从而增强吉西他滨对其的杀伤作用.     

长春瑞滨对人肺腺癌973细胞放射增敏作用的实验研究

目的：探讨长春瑞滨（NVB）对非小细胞肺癌细胞放射效应影响及其与放射的最佳结合序贯。方法：以指数生长期的人肺腺癌973细胞为研究对象，采用克隆形成分析法进行0．1nM及1nMNVB与放射不同结合序贯实验，研究NVB与放射结合效应，利用“多靶单击”数学模型（SF=1-（1-e^-D/D0）N）进行曲线拟合，获得细胞存活曲线及平均致死剂量、准阈剂量、D。比和增敏比等参数，进行效应评估。结果：0．1nM及1nMNVB照前、照后给药组的增敏比（SER）分别为0．957和0．989，1．295和1．042；0．1nM及1nMNVB照前、照后给药组的D0比分别为1．073和1．099，1．374和1．106。表明0．1nMNVB照前、照后给药时均无放射增敏作用；1nMNVB照前、照后给药时均与放射效应具有较明显协同作用，且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。结论：0．1nMNVB不具有增强放射效应的作用，1nMNVB具有较明显放射效应增强作用，且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。     

单药长春瑞滨对乳腺癌原代细胞杀伤效果的体外研究

 目的 探讨长春瑞滨用于复发性乳腺癌患者的治疗效果和应用前景。方法 取得原发性和复发性乳腺癌患者的癌组织标本，采用胶原酶消化法获取乳腺癌原代细胞，应用原代培养和MTT法检测5种化疗药物在体外对乳腺癌原代细胞的杀伤效果。结果 对原发性乳腺癌原代细胞，紫杉醇和多西紫杉醇（多西他赛）的杀伤效果（敏感率分别为91.04 ％、92.54 ％）优于多柔比星、表柔比星和长春瑞滨（敏感率分别为73.13 ％、74.63 ％、71.64 ％；P＜0.01）；对复发性乳腺癌原代细胞，长春瑞滨和紫杉醇、多西紫杉醇的杀伤效果（敏感率分别为74.07 ％、66.67 ％、66.67 ％）明显优于多柔比星和表柔比星（敏感率分别为37.04 ％、40.74 ％；P＜0.01）。结论 长春瑞滨可以作为化疗一线药物应用于复发性乳腺癌患者。     

长春瑞滨对人肺腺癌973细胞放射增敏作用的实验研究

目的:探讨长春瑞滨(NVB)对非小细胞肺癌细胞放射效应影响及其与放射的最佳结合序贯。方法:以指数生长期的人肺腺癌973细胞为研究对象,采用克隆形成分析法进行0.1nM及1nMNVB与放射不同结合序贯实验,研究NVB与放射结合效应,利用"多靶单击"数学模型(SF=1-(1-е-D/D0)N)进行曲线拟合,获得细胞存活曲线及平均致死剂量、准阈剂量、D0比和增敏比等参数,进行效应评估。结果:0.1nM及1nMNVB照前、照后给药组的增敏比(SER)分别为0.957和0.989,1.295和1.042;0.1nM及1nMNVB照前、照后给药组的D0比分别为1.073和1.099,1.374和1.106。表明0.1nMNVB照前、照后给药时均无放射增敏作用;1nMNVB照前、照后给药时均与放射效应具有较明显协同作用,且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。结论:0.1nMNVB不具有增强放射效应的作用,1nMNVB具有较明显放射效应增强作用,且照前给药组的协同作用明显强于照后给药组。     

长春瑞滨对人肺腺癌Anip973细胞凋亡和端粒酶表达的影响

目的 探讨长春瑞滨(NVB)对人肺腺癌Anip973细胞的凋亡、端粒酶活性以及人端粒酶逆转录酶mRNA(hTERT mRNA)表达的影响.方法 以不同浓度的NVB作用于Anip973细胞,在不同时间内收集细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察NVB对Anip973细胞的生长抑制作用;通过流式细胞术观察Anip973细胞凋亡率;用倒置显微镜和电镜观察细胞形态学变化;应用以聚合酶链反应(PCR)为基础的端粒重复序列扩增(TRAP-PCR)银染法检测端粒酶活性;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA表达.结果 不同浓度的NVB可诱导Anip973细胞凋亡,而且可降低Anip973细胞中端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,并呈时间-剂量依赖性.0.08μg/ml NVB作用Anip973细胞24 h,细胞增殖被抑制,细胞凋亡率为(7.37±0.35)%,hTERT mRNA表达为57.01±1.71,与对照组差异均有统计学意义(P＜0.01);端粒酶活性值为6.36±0.06,与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);hTERT mRNA表达的改变比端粒酶活性更敏感.0.4μg/ml NVB组和2.0μg/mlNVB组各时间点的细胞凋亡率、端粒酶活性和hTERT mRNA表达与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).2.0μg/ml NVB作用Anip973细胞72 h时,端粒酶活性为1.36±0.27,而细胞凋亡率为(74.87±1.88)%,表明细胞凋亡率的增加与细胞hTERT mRNA表达呈负相关(r=-0.96046,P＜0.01).结论 NVB的作用机制与端粒酶有关,诱导凋亡是其发挥抗癌作用的机制之一.检测端粒酶活性和hTERT mRNA的表达,有助于判定NVB诱导肺癌细胞凋亡的敏感性.     

自噬在长春瑞滨诱导的肺癌细胞A549死亡中的作用

背景与目的已有的研究表明,很多药物可以诱导肿瘤细胞发生自噬。本研究旨在明确自噬在肺癌A549细胞长春瑞滨处理过程中的存在,研究自噬在长春瑞滨诱导的A549细胞死亡中的作用。方法MTT法检测细胞生存率;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性及定量检测自噬特异性蛋白LC3的表达;AnnexinV-FITC流式细胞术检测细胞凋亡;自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和长春瑞滨共同作用细胞后用MTT法和流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果长春瑞滨处理肺腺癌细胞早期(24h内)可出现明显的自噬性变化,自噬高峰期出现在长春瑞滨诱导(6-12)h,在长春瑞滨给药前阻断自噬,长春瑞滨对A549细胞的毒性作用增强,而在其给药后阻断自噬则长春瑞滨对A549细胞的细胞毒性作用有所减弱。结论长春瑞滨可以诱导肺癌A549细胞自噬,在长春瑞滨给药前期,自噬对细胞有保护作用,可以延迟凋亡的发生;而在长春瑞滨给药后期,自噬则作为一种细胞的的死亡程序,与凋亡一起促进细胞死亡。     

吉西他滨联合长春瑞滨方案治疗复治中国晚期非小细胞肺癌患者的多中心回顾性研究

背景与目的 本研究旨在回顾性分析使用吉西他滨+长春瑞滨(GN)方案治疗复治晚期非小细胞肺癌的疗效和安全性.方法 通过非干预的方式收集国内4家医院2004年1月1日-2010年6月30日间行GN方案治疗的晚期非小细胞肺癌二线或二线以上的患者,评价该化疗方案的疗效、无进展生存期、中位生存期和毒副反应.卡方检验比较二线和二线以上患者的疗效差异,应用Kaplan-Meier法进行生存比较和分析.结果 共53例患者在二线或二线以上采用了GN方案,其中二线患者28例,三线或三线以后的患者25例,所以患者均可评价疗效和不良反应.客观缓解率( objective response rate,ORR)为9.4％,疾病控制率(disease control rate,DCR)为56.6％,中位无进展生存期(progression free survival,PFS)为3.0个月,中位总生存期为17.6个月,多数患者的毒副反应可以耐受.单因素分析显示体能状况评分( performance status,PS)是影响患者PFS的因素.结论 吉西他滨联合长春瑞滨方案在晚期非小细胞肺癌复治患者中有较好的疗效和安全性,可以作为一种治疗选择.     

诺维本联合放射对人肺腺癌细胞的杀伤作用

[目的]研究诺维本联合放射对人肺腺癌细胞(PAA)的杀伤作用.[方法]应用四唑盐比色试验(MTT)检测诺维本对PAA细胞生长的抑制率和时间效应;流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况.[结果]不同浓度(20、40、60、80、100μmol/L)的诺维本作用24h后对细胞生长的抑制率分别为6.12%、18.80%、53.91%、77.10%和90.20%,ID50为59.10μmol/L;诺维本对细胞生长的抑制作用在高浓度时具有明显的时间依赖性;从流式细胞术的细胞周期分析结果发现,经诺维本作用后G2/M期细胞的比例明显增加;单纯药物组的凋亡在24h出现,单纯放射组在放射后12h出现明显的凋亡小峰,药物放射联合组出现凋亡的时间更早,凋亡峰亦更明显,各组细胞在不同时间内的平均凋亡百分数分别为:对照组5.362±4.123,单纯放射组6.523±6.214,单纯药物组9.985±9.023,药物联合放射组18.100±8.965,药物联合放射组与其它3组相比,P均＜0.05.[结论]诺维本联合放射对人肺腺癌细胞有协同杀伤作用.     

阿霉素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其免疫原性研究

[目的]研究阿霉素诱导的人肺癌A549细胞凋亡及免疫原性。[方法]体外培养人肺癌A549细胞,将阿霉素加入A549细胞培养液中,使其终浓度分别为1mg/L、3mg/L、5mg/L,12h后以吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色凋亡方法检测其诱导的细胞凋亡情况;以凋亡的A549细胞为抗原,体外致敏分离的正常人外周血单个核细胞,72h后以MTT法检测其对培养的A549细胞的杀伤效果。[结果]阿霉素按1mg/L、3mg/L、5mg/L终浓度作用A549细胞12h后,凋亡率分别为17.60%±1.77%,62.93%±1.70%,16.80%±0.65%。在外周血单个核细胞杀伤实验中,阿霉素诱导的A549凋亡细胞抗原组(A组)光密度(OD)值为0.66508±0.036859,正常细胞对照组(N组)OD值为0.94132±0.018455,凋亡抑制组(Z-A组)为0.71810±0.026841。A组与N组、Z-A组相比,OD值均显著降低(P<0.05)。[结论]阿霉素可诱导A549细胞凋亡,而由凋亡细胞致敏的体外单个核细胞可产生对A549细胞的杀伤效应。     

扁柏醇联合氯喹对人肺腺癌细胞凋亡的影响

目的 探讨扁柏醇（Hinokitiol）联合氯喹对人肺腺癌（H1975）细胞凋亡的影响。方法 选用人肺腺癌H1975细胞系,应用MTT法检测扁柏醇和（或）氯喹对H1975细胞活性的影响,Westernblot法检测扁柏醇和（或）氯喹对H1975细胞凋亡通路相关蛋白（Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax）表达水平的影响。结果 0、2.5、5、10 μmol/L扁柏醇作用H1975细胞24 h后,呈剂量依赖性地抑制H1975细胞增殖,H1975细胞凋亡相关蛋白（Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Bax）表达水平升高。当氯喹和扁柏醇联合应用时,与单用扁柏醇相比,显著降低H1975细胞存活率,并提高H1975细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3表达水平显著增加。结论 氯喹增加扁柏醇诱导人肺腺癌H1975细胞凋亡。     

热疗联合 IL-2逆转人肺腺癌细胞 A549/CDDP 的作用及其可能机制

目的：观察热疗联合白介素-2（IL-2）对人肺腺癌细胞株 A549/ CDDP 的耐药逆转作用,并探讨其可能作用机制。方法采用细胞培养技术,分别培养人肺腺癌细胞株 A549及其耐药细胞株 A549/ CDDP。42℃热疗,联合或不联合200 u·mL -1的 IL-2,同时在2μg·mL -1的 CDDP 作用下,分别干预敏感细胞株和耐药细胞株2 h 后,采用 MTT 法检测2种不同细胞对 CDDP 的敏感性,流式细胞仪间接免疫荧光法检测热疗、IL-2等不同条件作用下细胞中 P -糖蛋白（P-gp）、多药耐药蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）的表达差异,以及细胞内荧光药物 CDDP 的聚集量的变化。结果分别联用热疗、IL-2时,较单用 CDDP,A549/ CDDP细胞的抑制率得到提高,A549/ CDDP 细胞 P-gp、MRP 表达下降,细胞内荧光强度增强,差异均有统计学意义（P 均﹤0.05）。热疗联合 IL-2合用 CDDP 时,A549/ CDDP 细胞的抑制率进一步提高,A549/ CDDP 细胞P-gp、MRP 表达明显下降,细胞内荧光强度显著增强,差异均有统计学意义（P 均﹤0.05）,但 LRP 的表达差异无统计学意义（P ﹥0.05）。结论热疗、IL-2分别能部分逆转 A549/ CDDP 细胞对 CDDP 的耐药性;热疗联合 IL-2可进一步增强其耐药逆转效应。其逆转耐药机制,推测可能与抑制 P-gp、MRP 表达,增加细胞内药物 CDDP 的积聚有关。     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布联合顺铂对A549人肺腺癌细胞株增殖影响的体外实验研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布（Celecoxib）与化疗药物顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腙癌细胞增殖的影响。方法应用MTS法检测Celecoxib与DDP联用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。结果在一定浓度范围内，Celecoxib和DDP均可抑制A549人肺腺癌细胞的生长，其抑制作用呈量-效关系。Celecoxib（0．35mg／L）与DDP联用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg／L时两者具有协同或相加作用；且在一定浓度范围内，Celecoxib与DDP联用对细胞的生长抑制作用呈时-效关系。结论Celecoxib与DDP联合可增强对A549人肺腺癌细胞的生长抑制效应。     

肺腺癌细胞A549中人survivin基因核心启动子位置与功能初探

[目的]探讨人survivin核心启动子的位置及在A549细胞中的转录激活功能。[方法]在生物信息学分析基础上,构建了4个分别由survivin 5′上游-1436~ 64、-612~ 64、-414~ 64和-203~ 64片段驱动的报告载体,分别瞬时转染A549及HK-2细胞,观察其在两种细胞的表达活性并比较在A549细胞中表达的活性差异。[结果]生物信息学提示survivin TSS位于ATG上游-64bp处,启动子近端富含若干潜在Sp1、p53和HIF-1α等结合位点。4种报告载体在A549细胞均有活性,且不同长度的启动子活性存在统计学差异。而在HK-2细胞中,4种载体未见显著性差异。[结论]人survivin启动子的活性具有肿瘤特异性,核心启动子可能位于TSS上游-203bp至 64bp处。suvivin核心启动子内可能存在2处HIF-1α的结合位点。     

人肺腺癌A549及A549/DDP细胞株差异蛋白质组学分析

 目的 比较人肺腺癌细胞株A549和耐顺铂株A549/DDP细胞的蛋白表达谱,筛选肺癌耐药相关蛋白,为 阐明肿瘤细胞的耐药提供新线索。 方法 对两种细胞株进行比较蛋白质组学研究,利用双向凝胶电泳技术（2-DE）分离细胞总蛋白,经 图像分析软件分析、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白质点 ,并用免疫细胞化学（ICC）对部分差异蛋白进行验证。 结果 获得分辨率高、重复性好 的A549、A549/DDP总蛋白图谱,初步筛选出差异蛋白质点,经质谱分析及数据库检索,鉴定出 13种差异表达蛋白质,这些蛋白与细胞代谢、结构、解毒和DAN修复、以及信号转导等相关。 结论 A549、A549/DDP细胞株存在差异表达蛋白质点,提示这些蛋白可能与A549细胞耐顺铂相关,为 研究肺癌耐药提供依据。