乌司他丁对急性肺损伤组织中水通道蛋白及Fas表达的研究

目的 探讨乌司他丁(UTI)对急性肺损伤组织中水通道蛋白-1、4(AQP-1、4)及Fas的表达及临床意义.方法 应用脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)模型,然后应用乌司他丁进行干预.实验分为3组:实验对照组、模型组、乌司他丁组.采用免疫组化染色,检测UTI 对急性肺损伤大鼠肺组织中AQP-1、4及Fas的表达,利用HPIAS-2000图像分析系统测定水通道蛋白-1、4和Fas在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果 实验对照组肺组织高水平表达AQP-1、4,Fas呈低表达;模型组肺组织呈浅黄色染色,AQP-1、4表达较低,Fas呈高表达;乌司他丁组肺组织高水平表达AQP-1、4,Fas呈低表达.经q检验,实验对照组与模型组之间,AQP-1、4及Fas的平均光密度及阳性面积率差异有统计学意义(P＜0.01﹚,实验对照组与乌司他丁组之间,AQP-1、4及Fas的平均光密度及阳性面积率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乌司他丁能使急性肺损伤组织中AQP-1、4呈高表达,Fas呈低表达,乌司他丁对急性肺损伤组织有重要的保护作用.     

N-乙酰半胱氨酸对急性肺损伤大鼠环氧合酶2的影响

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）对急性肺损伤（acute lung injury,ALI）大鼠环氧合酶2（cyclooxygenase-2,COX-2）的影响,进而研究NAC对ALI肺组织的保护作用。方法应用脂多糖诱导大鼠ALI模型,然后应用NAC进行干预。实验设对照组、模型组、NAC组,在肺损伤模型成功后24h处死大鼠,取左叶肺组织。采用免疫组化染色,检测NAC对急性肺损伤大鼠肺组织中COX-2表达的影响,利用HPIAS-2000图像分析系统测定COX-2在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果实验中对照组肺组织中COX-2的表达较低;模型组肺组织中COX-2的表达高;NAC组肺组织中COX-2表达较低。经q检验,对照组与模型组之间,COX-2的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P〈0.01）,对照组与NAC组之间,COX-2的平均光密度及阳性面积率差异无显著性（P〉0.05）。结论NAC可以减轻肺损伤的程度,对急性肺损伤组织具有重要的保护作用。     

脓毒症性ARDS大鼠肺泡表面活性物质结合蛋白的变化及乌司他丁的干预效果

目的:观察乌司他丁注射液干预前后盲肠结扎穿孔法(CLP)致脓毒症性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺泡表面活性物质的改变,探讨表面活性物质在CLP致ARDS发生中的作用以及乌司他丁对其影响。方法:健康成年SD大鼠90只,体质量200~240 g,随机分为3组:假手术对照组(Sham组,n=30)、脓毒症组(CLP组,n=30)和乌司他丁组(UST组,n=30)。利用CLP法建立大鼠脓毒症模型。测定各组大鼠造模后6、12、24、48 h四个时间点肺湿/干质量比(肺水肿指数);使用苏木精-伊红(HE)染色方法和透射电镜对肺组织进行病理观察及急性肺损伤病理评分;通过实时荧光定量核酸扩增技术(RT-PCR)和免疫印迹试验(WB)分别检测肺泡表面活性物质结合蛋白B(SP-B)和肺泡表面活性物质结合蛋白C(SP-C)在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况。结果:与对照组相比,肺水肿指数和肺损伤病理评分显示乌司他丁组大鼠肺损伤明显减轻(P<0.05);乌司他丁组大鼠肺组织中SP-B和SP-C在mRNA水平和蛋白质水平的表达都较CLP组明显升高(P<0.01)。结论:乌司他丁可以提高脓毒症性ARDS大鼠肺泡表面活性物质结合蛋白含量,有效减轻肺损伤。     

乌司他丁对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤NF-κ Bp65及MMP-2表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的失鼠急性肺损伤中肺组织NF-κ Bp65及MMP-2表达的影响.方法 将45只SD大鼠随机分为3组,每组15只.正常对照组尾静脉注射生理盐水2mL/kg;急性肺损伤组尾静脉注射脂多糖5 mg/kg;乌司他丁干预组大鼠腹腔注射乌司他丁100 ku/kg,30 min后尾静脉注射脂多糖5 mg/kg.给药后4h处死大鼠,测动脉血氧分压、肺湿干重比、行肺组织HE染色.采用免疫组化法测定肺组织NF-κ Bp65及MMP-2的表达,并进行统计学分析.结果 与正常对照组相比较,急性肺损伤组和乌司他丁干预组肺组织NF-κ Bp65及MMP-2的表达均增多,差异有显著性(P＜0.05),乌司他丁干预组较急性肺损伤组NF-κBp65及MMP-2的表达低,差异有显著性(P＜0.05).结论 NF-κ Bp65及MMP-2在急性肺损伤中起着一定的作用,乌司他丁可抑制NF-κ Bp65及MMP-2表达.     

乌司它丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1的影响

目的:探讨乌司他丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1表达的影响.方法 30只成年SD大鼠,随机分为3组(n＝10).正常组(A组)经大鼠尾静脉注射0.2mL/kg生理盐水;急性肺损伤组(B组)、乌司他丁组(C组)经大鼠尾静脉注射油酸0.2mL/kg制成急性肺损伤模型,随后立即给予A组、B组腹腔注射生理盐水10mL/kg,C组100ku/kg的乌司他丁腹腔注射.测取动物4h时间点呼吸频率和左心室动脉血氧分压,并于4h后取右下肺组织行HE染色和HO-1免疫组织化学检查,观察光镜下病理改变以及血红素氧化酶-1的表达.结果: 乌司他丁能显著改善油酸所致急性肺损伤所致的呼吸窘迫;肺组织血红素氧化酶-1在对照组仅有少量表达,急性肺损伤组表达增多,乌司他丁干预组表达明显增强.结论:乌司他丁可通过增加肺组织中血红素氧化酶-1的表达而发挥保护作用.     

不同剂量乌司他丁对脂多糖致急性肺损伤新生大鼠MMP-2表达的影响

目的:探讨乌司他丁(ulinastatin,UTI)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤新生大鼠MMP-2表达的影响。方法:选择40只新生7日龄SD大鼠,随机分为生理盐水对照组、急性肺损伤模型组、乌司他丁小剂量组(2.5万U.kg-1)、乌司他丁中剂量组(5.0万U.kg-1)、乌司他丁大剂量组(10.0万U.kg-1),每组8只。以5 mg.kg-1 LPS腹腔注射制作急性肺损伤模型,同时予以乌司他丁腹腔注射进行干预,4 h后观察新生大鼠肺组织的病理改变,用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中MMP-2的蛋白和mRNA的表达。结果:乌司他丁中、大剂量组的MMP-2水平明显低于急性肺损伤模型组(分别P<0.05,P<0.01),乌司他丁小剂量组虽低于急性肺损伤模型组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乌司他丁对LPS致新生大鼠急性肺损有保护作用,可能是通过抑制肺组织MMP-2的表达水平实现的,且其抑制作用呈剂量依赖性。     

乌司他丁联合谷氨酰胺对大鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨蛋白酶抑制剂乌司他丁联合谷氨酰胺对大鼠急性肺损伤的保护作用。方法将40只SD雄性大鼠随机分为4组,即对照组、急性肺损伤阳性对照组（LPS组）、肺损伤后乌司他丁注射组（UTI组）、肺损伤后乌司他丁联合谷氨酰胺注射组（UTI＋GLN组）。LPS组经尾静脉注射LPS造成急性AU模型,UTI组在按与LPS组相同标准给予LPS的同时给予乌司他丁（U1I）（10万U／kg）,UTI＋GLN组在按与LPS组相同标准给予LPS的同时给予乌司他丁（10万U/kg）和大剂量谷氨酰胺（0．75g,kg）,4h后取肺组织测量肺湿干重比（W／D）,ELIsA法检测动脉血清及肺组织中白细胞介素-18（IL-18）水平、过氧化物酶（MP0）的活性。结果与对照组相比,其他各组的W／D、血清及肺组织中IL-18、MPO活性均有显著性差异（P〈0．01）;与LPS组相比,无论是UTI组还是UTI＋GLN组,其肺炎性损伤指标都有明显改善,具有显著性差异（P〈0．01）。UTI＋GLN联合与单纯应用UTI相比,各项指标的改善也有显著性差异（p〈0．05）。结论乌司他丁和谷氨酰胺联合应用具有显著的协同作用。可以明显改善由LPS所致的大鼠急性肺损伤,对于指导临床用药有重要意义。     

乌司他丁对异氟烷介导的大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨乌司他丁预处理对异氟烷介导的大鼠海马神经元线粒体途径凋亡的影响及可能的机制。方法36只SD雄性 大鼠随机分为对照组、异氟烷组和乌司他丁组,每组12只。对照组不给与任何处理,异氟烷组和乌司他丁组采用0.75%异氟烷 急性暴露6 h,而乌司他丁组在采用0.75%异氟烷急性暴露前,先给与50000 U/kg乌司他丁预处理。以TUNEL染色检测细胞凋 亡,JC-1探针检测线粒体膜电位（△ψm）,Western blot检测细胞色素C释放及caspase-3活性,H2DCFDA探针检测细胞内活性氧 （ROS）。结果与对照组比较,异氟烷组海马神经元凋亡显著增加（P<0.05）,而乌司他丁组显著下降（P<0.05）;异氟烷组神经元 线粒体△ψm显著降低（P<0.05）,乌司他丁组显著提高（P<0.05）;异氟烷组海马神经元ROS、细胞色素C释放及caspase-3活性均 显著增加（P<0.05）,而乌司他丁组显著降低（P<0.05）。结论乌司他丁可以抑制异氟烷介导的大鼠海马神经元凋亡,其机制可 能与抑制线粒体途径凋亡有关。     

乌司他丁对兔百草枯中毒急性肺损伤的保护作用

目的:探讨乌司他丁对兔百草枯中毒急性肺损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法:新西兰白兔30只,随机分为对照组,百草枯组和乌司他丁组。百草枯组和乌司他丁组腹腔内注射百草枯,对照组注射等体积无菌生理盐水,乌司他丁组同时给与乌司他丁治疗。3d后测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性和肺叶湿/干重比。结果:百草枯组和乌司他丁组支气管肺泡灌洗液中总细胞数、中性粒细胞数、巨噬细胞数、BALF-NE和肺叶湿/干重比均较对照组增高(P<0.05),乌司他丁组各指标明显低于百草枯组(P<0.05)。结论:蛋白酶抑制剂乌司他丁对兔百草枯中毒急性肺损伤有保护作用。     

乌司他丁对体外循环中肺组织ICAM-1表达的影响

目的 探讨乌司他丁对体外循环（CPB）期间肺组织ICAM-1表达的影响.方法 随机将健康成年犬分为对照组（C组,n=6）和乌司他丁组（U组,n=6）.建立CPB模型,两组均在转机前（T1）、阻断升主动脉15 min（T2）、45 min（T3）,开放30 min（T4）、60 min（T5）取肺组织和静脉血.测血浆黄嘌呤氧化酶（XOD）含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）的活性,肺组织细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的免疫组化染色并进行图象分析及光镜检查.结果 CPB后,U组各时点血浆XOD含量、肺组织MPO活性及肺组织ICAM-1的平均灰度值明显低于C组（P＜0.01）.结论 乌司他丁可能通过抑制肺组织ICAM-1的表达,减少中性粒细胞在肺组织内聚集及氧自由基的生成,从而减轻CPB后的肺损伤.