葛根素对高糖培养成骨细胞增殖、矿化及凋亡的影响

目的:探讨葛根素(PUE)对高糖培养成骨细胞(OB)增殖、矿化及凋亡的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松提供实验依据。方法:体外分离培养成骨细胞,接种24 h后分为正常组、高糖组、葛根素各浓度组和高糖培养加葛根素各浓度组,各组成骨细胞分别培养48 h,每组8孔。MTT法测定OB细胞的增殖活力,茜素红染色计数矿化结节;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡情况。结果:与正常组相比,高糖组成骨细胞增殖明显降低,矿化结节明显减少,早期凋亡率明显升高具有统计学意义(P0.05或P0.01);葛根素各组均能促进成骨细胞增殖、矿化,抑制凋亡,与高糖组比较,差异显著(P0.01),以10~(-8) mol/L浓度组效果最为显著;高糖+葛根素各组成骨细胞增殖较高糖组也明显增强,矿化结节明显增多,凋亡抑制率明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:葛根素具有促进高糖培养成骨细胞增殖、矿化及抑制凋亡作用。     

葛根素注射液对高糖培养成骨细胞保护作用的研究

目的：探讨葛根素注射液对高糖培养成骨细胞的保护作用,为临床治疗糖尿病骨质疏松提供实验依据。方法：体外分离培养成骨细胞,并随机分为正常培养基组、高糖培养基组和高糖培养基添加葛根素注射液组。3组成骨细胞各自培养48小时后进行形态学观察,同时检测其碱性磷酸酶（ALP）表达的阳性率。结果：高糖培养组成骨细胞增殖分化能力减弱,细胞数量及连接减少,其碱性磷酸酶（ALP）阳性率也明显低于正常组;葛根素组上述指标均明显改善。结论：高糖可影响骨组织代谢及成骨细胞的增殖分化,葛根素对上述改变有一定的保护作用。     

杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX)10-8mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况。由Pierce BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况。用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1αI)分泌随时间的变化情况。各组干预24 h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αI mRNA的表达情况。结果 1杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P0.05)。2药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的I型胶原蛋白表达提高(P0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P0.05)。3PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的I型胶原基因的表达增加,而且这种促进I型胶原分泌的能力有量效趋势。结论杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达。     

地黄梓醇对原代培养SD乳大鼠成骨细胞成骨活性的影响研究

目的观察不同浓度地黄梓醇对体外培养新生SD大鼠成骨细胞增殖及成骨活性的影响,为地黄防治骨质疏松症提供实验依据。方法体外培养原代新生24 h SD大鼠成骨细胞,细胞传至第5代,分别加入1×10-3,1×10-5,1×10-7,1×10-9mol/L梓醇溶液及生理盐水10μL/孔,继续培养24,48,72 h后,分别检测成骨细胞增殖情况、骨钙素(BGP)及碱性磷酸酶(ALP)活性。结果培养24 h时,1×10-3mol/L梓醇溶液能显著促进成骨细胞增殖(P<0.05);培养48 h时,1×10-3mol/L梓醇溶液促增殖作用最强(P<0.05)。培养48h时,1×10-7mol/L组和1×10-3mol/L组ALP活性显著高于对照组(P均<0.05);培养72 h时,1×10-3mol/L组ALP活性显著增加(P<0.05)。培养48,72 h后,各浓度梓醇溶液组BGP活性均高于对照组(P均<0.05),且1×10-3mol/L组明显高于其他浓度组(P均<0.05)。结论梓醇在1×10-5mol/L和1×10-3mol/L范围对体外培养SD大鼠成骨细胞的增殖、分化及成骨作用相对显著,尤其在1×10-3mol/L浓度下作用最显著,且具有时效及量效关系。     

葛根素对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡及CHOP通路的影响研究

目的:探讨葛根素对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡及CHOP通路的影响。方法:设置MC3T3-E1组,葛根素低、中、高剂量组。MC3T3-E1组常规培养,葛根素低、中、高剂量组分别用浓度为20.0μg/mL、40.0μg/mL、80.0μg/mL的葛根素溶液干预培养。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)法测定各组MC3T3-E1细胞增殖水平,流式细胞法测定各组MC3T3-E1细胞凋亡水平,逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定各组MC3T3-E1细胞转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP) RNA表达水平,Elisa法测定各组MC3T3-E1细胞ATF4、CHOP、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)蛋白表达水平。结果:与MC3T3-E1组比较,葛根素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达水平均升高(P0.05)。与葛根素低剂量组比较,葛根素中、高剂量组凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达均升高(P0.05)。与葛根素中剂量组比较,葛根素高剂量组凋亡率、MDA蛋白表达水平与ATF4、CHOP RNA及蛋白表达水平均降低(P0.05);OD值、增殖率与SOD、GSH蛋白表达水平均升高(P0.05)。结论:葛根素能拮抗高糖对MC3T3-E1成骨细胞的增殖抑制作用和凋亡促进作用;其机制与葛根素抑制ATF4、CHOP RNA及蛋白的表达拮抗了高糖环境引起的成骨细胞内质网应激,进而减轻成骨细胞氧化应激反应有关。     

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和Ⅰ型前胶原αmRNA表达影响.根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR-106/01,采用3H-Tdr法检测细胞增殖,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ型胶原αmRNA的表达,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响;FCM法检测细胞周期.结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异无显著性.续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异也无显著性.细胞凋亡率和G0-G1期细胞比率显著低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖,防止成骨细胞凋亡,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一.     

银杏叶提取物对高糖环境下系膜细胞血小板源性生长因子-B表达的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖培养条件下系膜细胞外基质产生及血小板源性生长因子-B(PDGFB)表达的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,分为对照组(葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖终浓度为30 mmol/L)、银杏叶提取物干预组(12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L),采用实时定量PCR检测系膜细胞PDGF-B m RNA的表达、Western blot检测系膜细胞PDGF-B蛋白表达、ELISA检测上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:高糖组刺激24 h后,细胞上清液中Fn、ColⅣ含量、系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均高于对照组(P0.05);银杏叶提取物干预组(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用24 h后,细胞上清液Fn、ColⅣ含量均低于高糖组,系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均低于高糖组(P0.05);且银杏叶提取物浓度越高,该作用越明显。结论:银杏叶提取物可以呈浓度依赖性抑制系膜细胞PDGF-B的合成,从而达到减少细胞外基质聚集、保护肾脏的作用。     

鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖及分化的影响

目的:研究鹿瓜多肽注射液对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离、培养SD大鼠成骨细胞,CCK-8法检测成骨细胞增殖活性;碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测成骨细胞ALP活性比;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测成骨细胞Ⅰ型胶原(Col1α1)、骨钙素(Bglap)及Runx-2的表达水平。结果:鹿瓜多肽注射液干预成骨细胞3d,发现鹿瓜多肽注射液组成骨细胞活性较对照组明显增强(P<0.05);在鹿瓜多肽注射液干预细胞后第8天时,鹿瓜多肽注射液组成骨细胞ALP活性较对照组明显增加(P<0.05);鹿瓜多肽注射液组成骨细胞骨钙素及Runx-2表达均较对照组明显增强。结论:鹿瓜多肽注射液能显著促进成骨细胞发育成熟。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:中药复方补肾健脾活血方可以促进大鼠成骨细胞增殖分化,提高BMP-2、Smad5 mRNA和蛋白表达。     

葛根素对SD大鼠MSCs增殖及骨向分化的影响

目的:观察葛根素(Puerarin,Pue)对骨髓间充质干细胞(Marrow pluripotent stromal stem cells,MSCs)增殖和向成骨细胞(Osteoblasts,OB)分化的影响,从干细胞的角度探讨中药防治骨质疏松的可能机制和影响途径。方法:成功建立MSCs培养体系,取第三代SD大鼠MSCs,随机分为三组:空白组、不同浓度的Pue组、经典诱导组,通过MTT比色法及流式细胞仪技术,ALP染色技术观察Pue对MSCs增殖及向OB分化的影响。结果:通过对生长曲线的绘制,对多向诱导分化能力检测,及对表面抗原中CD29、CD44表达阳性,CD45表达阴性的检测,说明成功建立MSCs体外培养体系。经MTT比色法检测显示,10~(-7)mol/L、10~(-8)mol/L Pue与空白组对比具有促进MSCs增殖的作用,具有统计学意义。ALP染色阳性细胞表达率显示,10~(-6)mol/L Pue与空白组相比具有确定的诱导MSCs向OB分化的作用,说明Pue可以促进MSCs向OB分化。结论:葛根素具有促进体外培养MSCs增殖及向OB分化的能力。     

梅花鹿鹿茸Ⅰ型胶原对大鼠成骨样细胞(ROS1728)的影响及其分子机制的研究

该文研究梅花鹿鹿茸I型胶原(SPC-I)对大鼠成骨样细胞ROS1728的影响,为SPC-I抗骨质疏松的治疗提供理论依据。采用贴壁法培养大鼠成骨样细胞ROS1728,通过CCK-8法检测SPC-I对ROS1728细胞增殖的影响,利用RT-PCR法检测成骨相关基因Runx2,osernix,ALP,Coll-I,OC的表达,利用Western-bolt法检测Runx2蛋白的表达。结果表明SPC-I质量浓度5g·L~(-1)组轻度抑制ROS1728细胞的增殖,但能够明显促进ROS1728细胞特异性转录因子Runx2,osterix m RNA的表达,Runx2蛋白的表达,以及标志基因ALP,Coll-I,OC m RNA的表达(P0.01),并且呈现出时间依赖性。SPC-I质量浓度2.5,10 g·L~(-1)组均明显抑制ROS1728细胞的增殖(P0.01),并抑制相关基因的表达。该实验证明质量浓度5 g·L~(-1)组轻度抑制ROS1728细胞的增殖,但可以明显增强ROS1728细胞的功能,通过调控Runx2基因的表达,促进ROS1728细胞的分化、成熟。     

淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化作用的实验研究

目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用特点。方法 (1)采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12、15、18、21天对细胞上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,采用茜素红染色法检测各浓度组BMSCs矿化情况,观察不同浓度的淫羊藿苷促BMSCs骨向分化的作用。(2)将BMSCs细胞分为空白对照组、成骨诱导组及淫羊藿苷组(0.5μg/m L),在培养第7、14、21天检测各组细胞上清ALP活性,并于第14及21天分别检测各组细胞ALP阳性染色率与矿化结节数,同时采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测3个不同时间点各组细胞中核心结合蛋白因子(Runt-related transcripition factor-2,Runx2)及骨钙素(Osteocalcin)mRNA的表达水平。结果 (1)0.05~5.0μg/m L淫羊藿苷均可明显提高细胞上清液中ALP活性,其中0.2~2.0μg/m L浓度组细胞结节数亦明显增加(P0.01)。(2)淫羊藿苷促BMSCs骨向分化时,Runx2 mRNA表达水平及ALP活性均先升后降;Osteocalcin mRNA表达水平则持续上升(P0.01);与成骨诱导组比较,作用14天后,淫羊藿苷组ALP活性及ALP阳性染色率均明显提高(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷通过上调Runx2基因的表达,促使BMSCs向成骨细胞分化,并通过增加细胞ALP分泌及Osteocalcin基因的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟。     

骨康方对大鼠MSCs体外向成骨细胞分化和ALP的影响

目的:观察骨康方对大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)体外增殖并向成骨细胞分化和其对碱性磷酸酶(ALP)活性的作用。方法:用流式细胞仪鉴定第3代MSCs表面抗原,采用不同浓度的含骨康方药血清联合诱导剂对大鼠MSCs定向诱导分化,观察MSCs诱导前后形态学变化,MTT法观察各组对MSCs的增殖作用并绘制细胞生长曲线,检测ALP活性。结果:CD34表达为阴性,CD44表达为阳性。原代MSCs及诱导后形态正常。细胞生长曲线示各组MSCs数量均随时间延长增加,联合使用高、中浓度骨康方药加诱导剂可显著提高MSCs增殖,并向成骨细胞增殖。联合使用高、中、低不同浓度骨康方药加诱导剂均可显著提高MSCs分化为成骨细胞的ALP活性。结论:骨康方能促进大鼠体外MSCs增殖,并向成骨细胞分化。且能提高成骨细胞的ALP活性,从而增强其成骨能力。     

牛膝甾酮对小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响

目的研究牛膝甾酮(IS)对小鼠成骨细胞系(MC3T3-E1细胞)增殖、分化的影响及其可能的分子机制。方法将MC3T3-E1细胞分为对照组及IS不同浓度组(10~(-4)～10~(-1)ng/μL),24、48 h后采用细胞计数(CCK8)试剂盒检测细胞增殖,7、14天后采用碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测ALP活性,茜素红染色检测矿化结节,原位末端标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨分化相关标志物Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、ALP以及雌激素受体alpha(ERα)、雌激素受体beta(ERβ) mRNA的表达水平。结果与对照组比较,在干预48 h后,10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS能抑制细胞的增殖(P0.05),但对细胞凋亡无明显影响。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能够促进ALP活性及矿化结节的形成(P0.05),亦能促进ERα、OPG、CollagenⅠ、ALP mRNA表达(P0.05);10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能促进OPN、OCN mRNA表达(P0.05),10~(-1)ng/μL IS能够促进ERβmRNA表达(P0.05)。结论 IS能促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,其可能机制与上调成骨分化标志物及提高ERαmRNA表达有关。     

不同浓度地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞(MSCs)体外定向诱导分化为成骨细胞所需的地塞米松的最佳浓度。方法抽取兔骨髓,采用全骨髓贴壁培养法体外培养,贴壁细胞进行传代。取第3代细胞,随机分为5组,在培养基中添加成骨分化诱导剂β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸,5组添加的地塞米松的浓度分别为1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L、1×10-10mol/L。培养10 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,计算细胞浓度,采用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)/氯化硝基四氮唑蓝(NBT)底物显色试剂检测碱性磷酸酶(ALP),茜素红染色检测钙结节。结果较高浓度(1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)的地塞米松相对于较低浓度(1×10-9mol/L、1×10-10mol/L)的地塞米松可显著增加ALP表达(P均<0.05),并可增加钙结节的形成;1×10-9mol/L及其以下浓度的地塞米松对细胞增殖无明显影响(P均>0.05),1×10-7mol/L以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖(P<0.01)。结论地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞,最佳的浓度为1×10-8mol/L。     

骨碎补总黄酮对高糖作用下成骨细胞分化及ERK_(1/2)和p38蛋白激酶表达的影响

目的:研究骨碎补总黄酮(TFDF)对高浓度葡萄糖作用下成骨细胞(OB)分化活性及对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号蛋白的影响,为TFDF能否用来防治糖尿病性骨质疏松提供细胞分子学依据。方法:二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨OB及活性观察;MTT法检测TFDF对OB的细胞毒性,确定实验药物在培养基中的添加剂量;pNPP、ELISA、茜素红染色法分别检测不同浓度葡萄糖对OB碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙素(BGP)以及矿化能力的影响,并观察TFDF对高糖作用下OB分化活性的干预作用;Western-blot检测TFDF对高糖作用下OB ERK1/2和p38蛋白磷酸化的情况。结果:原代分离培养新生SD大鼠OB,具有典型的OB分化特性;根据TFDF对OB的毒性试验,选择TFDF的浓度25、50、100 mg/L为实验梯度浓度;葡萄糖(25、50 mmol/L)可以降低OB表达ALP、ColⅠ、BGP,降低其矿化能力;TFDF能剂量依赖性的提高高糖(25 mmol/L)作用下OB表达ALP、ColⅠ、BGP和矿化能力;TFDF(50 mg/L)能提高高糖(25 mmol/L)作用下p38和ERK1/2的蛋白磷酸化。结论:高糖可以降低OB分化和矿化能力,TFDF可提高高糖作用下OB的分化和矿化能力,其作用机理可能和提高p38和ERK1/2信号蛋白的磷酸化有关。     

人成骨细胞的Ⅰ型胶原合成及基因表达

目的观察分析人成骨细胞在骨化三醇作用下细胞Ⅰ型胶原的分泌.方法应用酶法分离细胞,四环素、茜素红鉴定,在成骨细胞生长的早期测定放射性元素掺入后细胞胶原的合成,原位杂交、mRNA表达反映细胞基因水平胶原的合成.结果10(-8)mol/L骨化三醇明显提高成骨细胞内胶原的生成(4.43±0.23),杂交提示细胞胶原的灰度值为(287±25),Ⅰ型胶原α2链表达(3.26±0.35)和对照组有显著性差异(P＜0.05).结论10(-8)mol/L的骨化三醇在成骨细胞生长的早期,使细胞Ⅰ型胶原的分泌明显的增加.     

葛根素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的:探讨葛根素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,葛根素以不同浓度加入细胞培养体系,作用不同时间后,用MTT法检测成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,用改良的Lowry法测蛋白含量。结果:葛根素在1×10-4mol/L~1×10-8mol/L浓度范围内24h,48h促进成骨细胞增殖,在1×10-6mol/L~1×10-8mol/L范围内48h及1×10-8mol/L72h提高成骨细胞内碱性磷酸酶的活性。结论:葛根素体外能促进成骨细胞的增殖与分化。     

葛根素对极低频电磁辐射下RPE细胞增殖活性及转化生长因子β2的影响

目的研究葛根素对极低频电磁场(ELF-EMF)作用下人视网膜色素上皮(RPE)细胞病理改变的影响,探讨其在近视防治中的可能作用。方法实验细胞分为对照组、辐射组、葛根素组(终浓度100μmol/L)。CCK8检测RPE细胞的增殖活性,Real-time PCR法检测RPE细胞中转化生长因子-β2(TGF-β2)m RNA的表达情况。ELISA检测RPE细胞培养上清中TGF-β2的蛋白含量。结果与对照组相比,辐射组RPE细胞增殖活性降低;TGF-β2 m RNA表达增高,RPE细胞上清中TGF-β2含量上调。与辐射组相比,葛根素组RPE细胞增殖活性增高,TGF-β2 m RNA表达降低,RPE细胞上清中TGF-β2含量下调,差异有统计学意义。结论ELF-EMF在一定范围内影响体外培养的RPE细胞的增殖活性及TGF-β2的表达与分泌,葛根素在一定程度上逆转了这一作用。     

蛋白免疫印迹杂交法研究葛根素对于促进成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响

目的:通过蛋白免疫印迹杂交法(Western blot法)、MTT法探讨葛根素通过OPG/RANKL蛋白对于促进成骨细胞增殖、分化机制的研究.方法:通过原代细胞培养:取新生24h的SD大鼠头盖骨,使用0.1％Ⅱ型胶原酶消化法分离出成骨细胞,使用碱性磷酸酶法鉴定成骨细胞,用MTT法确定葛根素对于促进成骨细胞增殖的最佳浓度和时间,取第四代的成骨细胞进行实验,实验分成4个组:其中对照组为10％ DMEM(low glucose),其它3组浓度分别为1 mg/mL,0.1 mg/mL和0.01 mg/mL的葛根素处理组.24h后,通过Western blot方法检测OPG/RANKL蛋白的表达.结果:通过碱性磷酸酶法、MTT法,可以鉴定不同浓度葛根素处理的成骨细胞中碱性磷酸酶活性均有增高.不同浓度的葛根素处理液均可以提高OPG/RANKL蛋白的表达,其中OPG、RANKL分别与对照组比较,具有统计学差异(P＜0.05).结论:葛根素可以通过OPG/RANKL系统促进成骨细胞的增殖和分化.