聚合酶链反应检测HCV的可靠性

聚合酶链反应(PCR)是使微量遗传物质扩增到可检出水平的方法,它能检出病毒DNA或RNA,并已用于丙型肝炎病毒(HCV)感染的检测。由于PCR检测结果影响对病人的处理,因此31个实验室合作研究了PCR检测HCV RNA的质量控制问题。 将一组编号的新鲜冷冻血浆样品分送给38个HCV实验室,其中30个实验室在欧洲,7个在美国,1个在日本。共有22份含或不含HCV RNA的样品,其中12份样品由两份样品各作6个10倍稀释(10~(-2)～10~(-7))而得,10份为未稀释样品(6月份无HCV     

用高度敏感的RT-PCR检测HCV感染者唾液中的HCV RNA

丙型肝炎病毒 ( HCV)主要经血液传播 ,含 HCV的唾液在非人灵长类动物的实验性感染以及 HCV通过人咬伤传播也有报道。本研究旨在用高度敏感的逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)方法 ,测定血浆 HCV RNA阳性患者唾液中的 HCV RNA。　　研究对象为 74例血浆 HCV RNA阳性的感染者 ,包括 54名男性 ( 73% )和 2 0名女性 ( 2 7% ) ,平均年龄 40 .5± 1 4.6岁 ( 2 0～ 71岁 )。有注射毒品史者占 45.9% ,输血史者占 8.1 % ,平均感染持续时间为 1 1 .4± 8年。平均肝酶值为 :天冬氨酸转氨酶6 0 .4± 42 .7IU/ l( 5～ 2 0 0 ) ;丙氨酸转氨酶1…     

丙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒RNA检测对丙型肝炎的诊断价值

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)、丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)检测对丙型肝炎(丙肝)的诊断价值。方法对218例HCV感染者、100例健康体检者进行HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA检测,对3 1 5例丙氨酸氨基转移酶增高但HCV-Ab检测阴性的高危者进行HCV-cAg检测。HCV-RNA检测采用实时荧光定量PCR法,HCV-CAg和HCV-Ab检测采用ELISA法。结果 HCV感染组HCV-Ab检出阳性210例(96.3%),HCV-cAg检出阳性131例(60.1%),HCV-RNA检出阳性103例(47.2%)。HCV高危组中检出HCV-CAg阳性2例(0.6%)。对照组3项检测结果均为阴性。结论 HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA三项联合检测已成为HCV感染的主要指标,可提高HCV感染"窗口期"的检出率。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测在血液筛查中应用

目的应用丙型病毒性肝炎核心抗原（HCV2cAg）EL ISA检测试剂,用于诊断早期丙型肝炎（HCV）病毒标志物。方法78份怀疑为HCV感染患者血清中采用ELISA法检测的HCV核心抗原,并以HCV RNA PCR法和抗-HCV检测结果作为比较。结果78份样本中,PCR法测HCV RNA,阳性36例,阴性42例,ELISA法测HCV核心抗原,阳性34例,阴性44例,RT2PCR荧光定量法测抗-HCV,阳性29例,阴性49例;结论以PCR法测HCV RNA与多种方法检测丙型肝炎病毒核心抗原的临床价值。     

直接原位聚合酶链法检测肝组织中丙型肝炎病毒RNA

液相聚合酶链反应(PCR)技术已广泛应用于临床,协助诊断常见的各型(甲、乙、丙、丁、戊、庚等)病毒性肝炎,为了探讨丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)在肝脏组织中的定位,探讨丙型肝炎发病机理,笔者等用直接法原位反转录—PCR法检测肝组织中HCVRNA,现报道如下:     

PCR定量测定慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA水平:与血清AST的相关性

黑猩猩自然感染丙型肝炎病毒(HCV)期间的感染性滴定效价约为10~2～10~3黑猩猩感染单位(CIU)/ml的低病毒水平,而半定量聚合酶链反应(PCR)法则显示为10~2～10~8CIU/ml的较高滴度.本文作者用一种定量PCR法对10例病人(9例为慢性丙型肝炎,1例为暴发性丙型肝炎)的15份血清标本进行了HCV RNA的定量检测,并观察了病程中     

NHL中HCV感染与P53表达的相关性

目的探讨非霍奇金淋巴瘤 (NHL)中丙型肝炎病毒 (HCV)的感染与P5 3表达的相关性及其意义。方法应用免疫组织化学S P法对 133例NHL和 2 5例良性淋巴组织病变 (BLPC)进行P5 3及HCVTORDJI 2 2蛋白的检测 ,对其中 5 8例NHL和全部BLPC进行HCVRNA的原位RT PCR检测。结果HCV感染阳性共 17例 (TORDJI 2 2阳性 9例 ,HCVRNA阳性 11例 ,双阳性 4例 ) ,感染阳性率为 12 8% (17/ 133) ,BLPC中HCV感染阴性 ,两组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。NHL中P5 3阳性 71例 (5 3 4 % ) ,BLPC中P5 3均为阴性。 17例HCV阳性NHL中P5 3阳性 13例 (P <0 0 5 )。结论 (1)HCV感染与NHL之间有相关性 ;(2 )HCV可能通过调控P5 3的表达而参与NHL的发生。     

用PCR检测常规杂交试验HBV DNA阴性的慢性乙型肝炎儿童血清和肝组织中的HBV DNA

作者取慢性乙型肝炎患儿血清216份,肝组织活检样品104份,分别用斑点印迹法和DNA印迹杂交法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA。结果87份血清和40份肝活检组织未检出病毒DNA。将这些阴性样品再用聚合酶链反应(PCR)法检测HBV DNA。结果87份血清中73份PCR阴性,其中HBeAg阳性14份,抗-HBe阳性56份,HBeAg和抗     

微粒子化学发光法检测丙型肝炎病毒核心抗原及临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原在丙型肝炎诊断中的意义。方法采用微粒子化学发光免疫分析方法检测血浆276份,样品同时用酶联免疫吸附试验检测抗HCV、用荧光定量PCR技术检测HCV—RNA。结果187份HCVAb反应性标本中检出HCVAg45份,HCVAg检出率为24．06％;89份HCVAb非反应性样本中HCVAg检出8例,HCVAg检出率为8．99％,两者样本检出率差异有统计学意义（χ2=2．01,P〈0．05）,HCVAg与HCVAb的检测符合率为45．65％。55份HCVRNA阳性样本中,有HCVAg反应性样本50份;221份HCVRNA阴性样本中,HCVAg非反应性样本218份,两种方法检测结果的符合率为97．10％。两样本检出率差异无统计学意义（χ2=0．00,P〉0．05）。结论微粒子化学发光检测HCVAg与荧光定量PCR检测HCV—RNA具有良好的相关性,丙型肝炎核心抗原检测可以作为抗HCV检测的补充。     

实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床价值

目的研究实时荧光PCR定量检测HCV RNA载量与抗-HCV、HCV抗原含量以及丙氨酸转氨酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法用RFQ-RT-PCR法检测130份怀疑HCV感染的血清中的HCV RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果130份样本中HCV RNA阳性率为53.9%(71/130);抗-HCV阳性率为56.3%(72/130);ALT异常率为50.0%(65/130)。抗-HCV、HCV抗原滴度和ALT异常率随着HCV RNA载量升高而增加。结论用RFQ-RT-PCR-法检测HCV RNA可以确定。①长期高滴度抗-HCV血清具有传染性,并常预示患者肝硬化和肝癌的可能性加大,应该积极治疗。②抗-HCV、HCV抗原含量与HCV RNA之间呈正相关关系,且有符合性和互补性。③对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV RNA出现升高1lg10以上可以鉴别活动性、复制性程度。④是选择抗病毒药物和评价抗病毒治疗效果的重要指标。     

丙型肝炎病毒在唾液腺中增殖

非甲非乙型肝炎可通过皮下接种唾液实验性感染黑猩猩。应用聚合酶链反应(PCR)可在血清丙型肝炎病毒(HCV)阳性病人的唾液中检出HCV。尽管唾液中HCV被认为源于唾液腺,但未被证实。由于HCV的基因组系正极单股RNA分子,在任何组织中负股HCVRNA的选择性检出证实HCV能在该组织中复制并感染该组织。本文报道在尸体解剖病     

PCR和ELISA检测不同人群TTV的感染状况

目的　检测湛江地区不同人群TTV的感染情况。方法　应用PCR和ELISA法同时检测正常献血员血清标本 5 12份 ,HBsAg阳性血清标本 60份 ,抗 HCV阳性血清标本 48份。结果　正常献血员、HBsAg阳性、抗 HCV阳性标本用PCR法检测TTVDNA阳性率分别为 10 .94%、13 .3 3 %和 16.67%;ELISA检测抗 TTVIgG ,阳性率分别为 7.42 %、10 .0 0 %和 10 .42 %。两种检测方法结果差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,不同人群TTVDNA和TTVIgG阳性率差异也无显著性 ( P >0 .0 5 )。结论　该地区献血员人群TTVDNA、TTVIgG与HBsAg阳性、抗 HCV阳性无明显相关性     

荧光聚合酶链反应定量检测丙型肝炎患者血清中的HCV RNA及其意义

目的探讨定量检测丙型肝炎患者血清中HCV RNA与急、慢性病毒性肝炎和肝纤维化等疾病之间的关系,分析其与血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平之间的关系。方法在本组试验中,主要采用荧光聚合酶链反应(PCR)方法,以我院收治的103例不同临床类型的丙型肝炎患者为研究对象,对其血清中的HCV RNA进行定量检验。结果无症状HCV感染者血清HCV RNA含量显著低于急性丙型肝炎、慢性丙型肝炎、肝硬化患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血液中HCV RNA的检测已成为HCV感染诊断,是丙型肝炎患者病毒药物治疗疗效监测及血液筛查的重要手段。在肝损害和肝脏疾病进展过程中,高水平HCV RNA发挥着重要的作用。     

贵州省2012年度甲型流感病毒组成情况分析

目的了解2012年度贵州省甲型流感病毒各个亚型的组成情况。方法收集流感样病例标本,提取病毒核酸RNA,通过实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)方法筛选甲型流感病毒阳性的标本,再对其进行各个亚型的鉴别,了解甲型流感病毒各个亚型的组成情况。结果本年度共检测到甲型流感病毒73份,其中甲型H3亚型病毒71份;新型H1N1病毒2份;甲型H1亚型病毒未检出。结论贵州省2012年度甲型流感病毒的优势毒株为甲型H3亚型病毒,占总甲型流感病毒的97.27%;新型H1N1病毒占总甲型流感病毒的2.73%。甲型H1亚型病毒未检出。     

膜显色DNA芯片技术检测丙型肝炎病毒基因型及临床意义

目的了解丙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对89例抗HCV阳性血清进行HCV RNA扩增,再应用膜显色DNA芯片技术,对HCV进行基因分型,并对部分标本用基因测序法作对照。结果89份抗HCV阳性血清中,检测出HCV RNA阳性73例。其中,HCV／1b型66例(90．4％),HCV／1a型1例(1．4％),2a型3例(4．1％),3b型3例(4．1％)。13例标本作基因测序分型对照,分型结果完全一致。15例献血员血清中未检出HCV RNA。结论HCV／1b型是江苏常州地区丙肝病毒优势株。膜显色DNA芯片可用于HCV RNA检测及基因分型检测,方法简便、快速、准确,适合临床推广应用及流行病学研究。     

EBER1原位杂交技术在淋巴瘤诊断中的作用

应用原位核酸杂交检测某些特异病毒 ,可分析病毒与组织损伤的关系及病毒和某些肿瘤的发生发展的关系。我室用 EB病毒编码的 RNA(EBER1)原位杂交方法 ,检测EB病毒在淋巴瘤中的基因表达 ,获得了较好的效果 [1 - 2 ] 。1　 EBER1杂交方法1.1　溶液、器材的准备原位杂交试剂为 GBI公司提供。探针 :生物素标记 30 0mer寡核苷酸。缓冲液包括 :5 0 % (V/V)甲酰氨、10 % (W/V)硫酸葡萄糖、3× SSC(0 .45 m ol Na Cl、0 .0 4m ol枸椽酸钠 )、1× Denhard′s液、10 0 μg/m L 变性鱼精蛋白、12 5 μg/m L 酵母菌 t RNA、2 0 m L PBS(p …     

洗涤方法和冻存温度对外周血单个核细胞内HCV RNA含量的影响

目的 分析洗涤方法和冻存温度对外周血单个核细胞(PBMC)内HCV RNA含量的影响.方法 收集同一天内17例血清HCV RNA阳性慢性丙型肝炎患者PBMC,随机分成A组(6例)和B组(11例),A组把细胞分成2份后分别采用常规法及改良法洗涤细胞5次,并留取每次洗涤液及细胞;B组采用改良法洗涤细胞后把细胞分成2份,分别作为新鲜组和-20℃冻存组,然后采用离心柱型RNA提取法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测洗涤液和细胞中HCV RNA含量.结果 (1)洗涤完3次时,常规法有1份洗涤液HCV为阳性,改良法均为阴性;与第1次洗涤液相比,改良法再洗涤1次的病毒含量下降幅度明显高于常规法;(2)新鲜组与冻存组HCV RNA含量不存在明显差异.结论 洗涤PBMC以采用改良法洗涤3次为宜;-20℃简易冻存6周的PBMC标本仍可用于FQPCR检测.     

三种诊断方法在丙型肝炎中的应用

目的探讨三种检测方法作为临床筛选和诊断丙型肝炎的的优缺点。方法随机收集71例丙肝患者血清作为阳性组,63例非丙肝患者血清作为阴性组,采用PCR-荧光探针法检测HCV RNA,同时采用CMIA法和ELISA法检测Anti—HCV。结果阳性组中,PCR-荧光探针法灵敏度为87．32％,CMIA为100％,ELISA为97．18％;经卡方检验分析,χ^2=4．95,两种Anti—HCV检测方法均与PCR-荧光探针法检测结果的差异有统计学意义（P〈0．05）;而两种Anti—HCV检测方法之间差异无统计学意义（P〉0．05）;阴性组中,HCV RNA特异度为100％,CMIA为95．23％,ELISA为98．41％;经χ^2检验分析,χ^2=3．84,三种诊断方法特异度的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论三种方法各有利弊,在诊断丙型肝炎方面,本文推荐采用其中一种抗体检测方法与PCR-荧光探针法联合检测;在疗效观察方面,本文推荐PCR-荧光探针法;在大规模体检时,考虑经济因素,本文推荐ELISA;在Anti—HCV检测结果为阳性,或者两种Anti—HCV检测方法结果不一致时,需联合HCV RNA检测。     

联合检测丙型肝炎抗体和核心总抗原的临床价值探讨

目的探讨联合检测丙型肝炎抗体和核心总抗原（HCV—cAg）在临床中的应用价值。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）法联合检测HCV抗体和HCV—cAg,并与荧光定量PCR法检测丙型肝炎核酸（HCV—RNA）的结果进行对照。结果157例患者中共检出HCV抗体阳性149例、HCV—cAg阳性99例、HCV-RNA阳性115例;5例HCV抗体阴性而HCV—cAg阳性的患者,经HCV—RNA证实为HCV感染;共检出HCV抗体或HCV—cAg阳性154例,另外3例经HCV—RNA排除HCV感染。结论联合检测HCV抗体和HCV—cAg提高了HCV感染的检出效率,可有效避免漏检,适合在普通医疗机构推广使用。