糖尿病大鼠肾脏nephrin表达的动态观察

目的从不同时间点动态观察足细胞相关分子nephrin在糖尿病大鼠肾组织中的表达,探讨nephrin在DN蛋白尿发生发展中的改变及意义。方法将SD大鼠分为健康对照组(C组)、糖尿病组(DM组)。SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型,正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液。分别于0、2、4、6、8、12周动态检测尿白蛋白(UA),血糖(BG)及肾功能,取肾组织行常规病理检查,免疫组化、Western blot分析技术检测肾脏nephrin的表达。结果 (1)与NC组相比,DM组随着病程的延长,尿白蛋白、BUN、Ccr均逐渐出现明显的变化,而白蛋白尿早于BUN、Ccr异常的出现;(2)与NC组相比,DM组足细胞相关分子nephrin蛋白于第2周出现表达下调,随着时间的进展,nephrin蛋白的表达进一步减少,直至第12周,各周间比较差异有显著性(P0.05);(3)相关分析显示:尿白蛋白排泄与足细胞相关分子nephrin呈负相关。结论糖尿病大鼠早期(2周)出现足细胞相关分子nephrin表达下调,是糖尿病肾病早期损伤指标,nephrin参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生及发展。     

Nephrin与糖尿病肾病的关系

Nephrin是肾小球裂孔膜上发现的第一个跨膜蛋白,在维持肾小球滤过屏障完整性及其正常功能过程中起关键作用。糖尿病肾病是糖尿病慢性并发症之一,糖尿病情况下nephrin表达和功能异常,使肾滤过膜结构与屏障功能完整性破坏,参与糖尿病肾小球硬化和蛋白尿的产生。进一步深入研究nephrin结构、功能及其影响因素等,有助于更好了解糖尿病肾病的发病机制,并对其诊断和治疗有重要的指导意义。     

糖尿病肾病大鼠肾脏Tensin表达的变化

目的 观察tensin在糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏中的表达，探讨其在DN肾小球纤维化中的作用。方法 链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠DN，间接免疫荧光组织化学方法观察DN大鼠肾脏tensin的表达。结果 糖尿病肾病大鼠的肾脏tensin表达明显增加（与正常对照组相比P〈0．01，有统计学意义），阳性表达主要位于系膜细胞胞浆内。结论 tensin在糖尿病肾病大鼠系膜细胞中高表达可能参与了糖尿病肾病过程中肾小球纤维化的形成。     

黄芪多糖对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的: 观察黄芪多糖(APS)对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(nephrin和podocin)表达的影响,探讨其防治DN的作用机制。方法: 24只健康雄性SD大鼠,随机抽取8只为正常对照组,其余大鼠链脲佐菌素(STZ)腹腔注射复制糖尿病模型,1周后经血糖浓度测量确定大鼠糖尿病建模成功,将造模大鼠分为STZ组(8只)和STZ+APS组(8只),各组分别干预8周。于干预后第2、5、8周检测大鼠血糖浓度;第8周末称量大鼠体重,计算肾指数,观察肾脏病理改变;检测24 h 尿蛋白总量t和 血尿素氮、血肌酐;蛋白免疫印迹法检测大鼠肾组织nephrin和podocin的表达水平。结果: 应用APS干预后,大鼠血糖、肾系数、24 h尿蛋白总量、血尿素氮和血肌酐明显降低(P<0.05),体重增加(P<0.05);病理改变减轻;nephrin和podocin蛋白表达增加(P<0.05)。结论: APS对DN肾脏的保护作用可能与维持足细胞nephrin和podocin的表达有关。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达的影响

目的： 观察nephrin在糖尿病肾病（DN）大鼠肾小球足细胞中的表达，探讨厄贝沙坦对DN肾脏保护作用的机制。方法： 应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型，将DN模型大鼠随机分为2组：厄贝沙坦治疗组、模型对照组；另设正常对照组。各组分别干预8周后，观察大鼠体重、肾重、相对肾重、24 h尿蛋白定量、血糖、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯变化，利用光镜、电镜观察肾脏病理改变，应用免疫组化技术观察nephrin表达情况。结果： 应用厄贝沙坦干预后，DN大鼠24 h尿蛋白定量明显减少、肾功能改善、肾脏病理改变显著减轻、足细胞nephrin表达量明显减少。结论： 厄贝沙坦对DN肾脏的保护作用可能与其抑制足细胞nephrin表达有关。     

糖尿病肾病的低蛋白饮食治疗

糖尿病肾病的低蛋白饮食治疗很重要 ,它具有减少尿蛋白排泄及改善蛋白质代谢、延缓肾损害进展、减轻胰岛素抵抗及改善碳水化合物代谢等作用。美国糖尿病协会建议 :对于肾功能正常的临床糖尿病肾病期病人 ,给予饮食蛋白 0 8g (kg·d) ;在肾小球滤过率下降后 ,蛋白入量应进一步限制至 0 6g (kg·d) (占日热卡摄入量的 10 % ) ,这是目前可遵循的方案。实施低蛋白饮食治疗需注意防止营养不良发生 ,保证足量热卡、病人饮食依从性及各种营养指标的检测     

调控Nampt对糖尿病肾病肾小球细胞表达波形蛋白的影响

目的探讨肾小球细胞内源性Nampt对波形蛋白(vimentin)表达的影响和作用机制。方法用C57/BL6糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏组织经包埋、固定、切片,经免疫共聚焦技术分析内源性Nampt和vimentin蛋白的表达和定位关系;在200 mmol/L葡萄糖(高糖)培养肾小球膜HBZY-1细胞至第5 d时,分别用10μmol/L FK866和1 mmol/L NMN干预,通过免疫荧光和免疫印迹方法检测内源性Nampt对NF-κB、Sirt1和vimentin表达;按高糖不同培养时间(24、48、72、96、120和144 h)分组,检测细胞Nampt、NF-κB和Sirt1表达时间效应关系。结果 1)DN组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Nampt、vimentin蛋白表达明显增加(P0.01);2)应用FK866处理细胞,vimentin表达明显减少(P0.01);用NMN干预后,vimentin表达同样低于相应对照组(P0.01);3)随高糖培养细胞时间延长,Nampt和NF-κB表达明显增加(P0.01),相反Sirt1表达减少(P0.01)。结论在DN肾小球纤维化中,Nampt能够通过增强NF-κB和抑制Sirt1信号途径,影响肾小球内vimentin蛋白表达。     

糖尿病肾病患者血浆内皮素含量的变化和临床意义

研究糖尿病肾病患者血浆内皮素(ET)含量的变化和临床意义. 对照组53名, 糖尿病肾病组63例, 糖尿病无肾病组69例. 用放射免疫分析法(RIA)测定血浆ET水平. 糖尿病无肾病组、糖尿病肾病组ET浓度均明显高于对照组(P＜0.01); 糖尿病肾病组与糖尿病无肾病组相比, 血浆ET含量亦明显升高(P＜0.01).血浆ET的检测对糖尿病肾病患者的早期诊断和合理治疗有一定的意义.     

肾小球系膜细胞增殖在糖尿病肾病肾小球硬化中作用的研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病患者常见的微血管慢性并发症.系膜细胞(MC)是肾小球内主要的细胞成分.高糖刺激可通过降低细胞内源性硫化氢的浓度、激活转化生长因子β(TGF-β)超家族和影响长链非编码RNA(Ln-cRNA)水平促进系膜细胞增殖.系膜细胞的异常激活在糖尿病肾小球硬化的进程中起重要推动作用.     

糖尿病肾病的诊治及进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy.DN)是糖尿病的严重微血管并发症之一。糖尿病肾病所导致的肾功衰竭目前已居国内终末期肾功能衰竭病因的第二位[1]。因其常合并严重的心血管并发症,治疗较复杂。一般认为糖尿病肾病(DN)特指糖尿病性肾小球硬化症,一旦起进入临床蛋白尿期,肾脏损害将无法逆转。     

SGK1在糖尿病小鼠肾脏皮质中时间差异性表达及意义

目的：研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1）在糖尿病（DM）小鼠肾脏皮质中时间上差异性表达及意义。方法: 采用链脲佐菌素（STZ）单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型。将2月龄C57BL/6小鼠随机分成10组：第1、2、3、4、6、8、12周糖尿病小鼠组（DM₁、DM₂、DM₃、DM₄、DM₆、DM₈、DM₁₂）和相应的第1、4、8周正常对照组（N₁、N₄、N₈）。分别在DM模型制作成功后第1、2、3、4、6、8、12周末收集小鼠24 h尿量，检测24 h尿蛋白量；观察肾脏病理改变；半定量RT-PCR检测小鼠肾脏皮质SGK1及结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达，Western blotting检测N₄、DM₄、DM₈组皮质SGK1、CTGF蛋白的表达。结果: 随着糖尿病病程的进展，DM组小鼠肾小球体积逐渐增大、系膜区逐渐增宽；DM组小鼠24h尿蛋白从第2周起开始逐渐增多，肾脏皮质SGK1 mRNA表达从第2周开始明显上调，在第４周达到峰值。CTGF随着糖尿病病程的进展表达逐渐递增。结论: SGK1在糖尿病早期肾脏表达峰值的出现及CTGF 持续递增的表达，提示SGK1在糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展过程中起重要作用。     

糖尿病肾病时血浆基质金属蛋白酶3及血栓前体蛋白的变化

目的： 探讨基质金属蛋白酶3（MMP-3）和血栓前体蛋白（TpP）在2型糖尿病肾病（DN）中的变化。方法: 用ELISA双抗体夹心法测定57例DN患者及35例正常对照者的血浆MMP-3和TpP水平,DM组根据24 h尿白蛋白排泄量（UAE）分DN0(UAE＜30 mg/24 h)、DN1（30 mg/24 h≤UAE＜300 mg/24 h）、DN2（UAE≥300 mg/24 h）3组。 结果: DN0组血浆MMP-3和TpP水平与正常对照组间无显著差异。DN1组血浆MMP-3水平高于正常对照组（P＜0.05）,但TpP水平无显著差异。DN2组血浆MMP-3水平显著高于正常对照组（P＜0.01）、DN0组（P＜0.05）及DN1组（P＜0.05）,TpP水平也高于正常对照组（P＜0.01）。DN患者血浆MMP-3和TpP水平呈正相关（P＜0.01）。 结论: MMP-3及TpP可能参与DN发生,MMP-3水平变化与DN病变程度相关。     

Changes in the expression of nephrin gene and protein in experimental diabetic nephropathy

Diabetic nephropathy is a major complication of diabetes leading to thickening of the glomerular basement membrane, glomerular hypertrophy, mesangial expansion, and overt renal disease. The pathophysiologic mechanisms of diabetic nephropathy remain poorly understood. Nephrin is a recently found podocyte protein crucial for the interpodocyte slit membrane structure and maintenance of an intact filtration barrier. Here we have assessed the role of nephrin in two widely used animal models of diabetes, the streptozotocin model of the rat and the nonobese diabetic mouse. In both models, the expression levels of nephrin-specific mRNA as determined by real-time quantitative polymerase chain reaction increased up to two-fold during several weeks of follow-up. Immunohistochemical stainings revealed nephrin also more centrally within the glomerular tuft along with its preferential site in podocytes. Interestingly, as detected by immunoblotting, nephrin protein was also found in the urine of streptozotocin-induced rats. We conclude that nephrin is connected to the early changes of diabetic nephropathy and thus may contribute to the loss of glomerular filtration function.     

血清miR-21在糖尿病肾病中的诊断价值

 目的：评价血清miR-21对糖尿病肾病的诊断价值,探讨糖尿病肾病诊断的分子标志物。方法：对25例糖尿病肾病患者、25例II型糖尿病患者A［尿微量白蛋白（UmAlb）＜1429 mg/L］、25例II型糖尿病患者B（UmAlb＞1429 mg/L）、25例糖尿病肾病引发的尿毒症患者及25例正常对照组的血清标本进行总RNA提取,并进行miR-21的实时荧光定量PCR检测,分析血清miR-21相对表达量与相关临床指标的关系,评估血清miR-21对糖尿病肾病的诊断效能。结果：miR-21在糖尿病肾病患者血清中的相对表达量显著低于正常对照组、糖尿病A组及B组,同时显著高于尿毒症组(均P＜001),糖尿病肾病患者血清miR-21水平与胱抑素C、UmAlb、UmAlb/尿肌酐呈显著负相关（P<001,P<005,P<005)。经logistic回归及ROC曲线分析,血清miR-21在糖尿病肾病患者与正常对照组、糖尿病A组、糖尿病B组、糖尿病A组＋正常对照组、糖尿病B组＋正常对照组和糖尿病A组＋糖尿病B组中诊断糖尿病肾病的曲线下面积（AUC）为0848(95%CI：0737~0959)、0896(95%CI：0812~0980)、0782(95%CI：0641~0922)、0838(95%CI：0743~0933)、0796(95%CI：0675~0917)和0808(95%CI：0704~0911),敏感性和特异性分别为800%和720%、720%和880%、720%和840%、760%和770%、760%和820%、700%和860%;在4组人群中诊断糖尿病肾病的AUC为0845(95%CI：0752~0939),敏感性和特异性分别为760%和773%。结论：血清miR-21可作为糖尿病肾病的分子诊断标志物。     

尿胞外体亮氨酸氨基肽酶及二肽基肽酶在糖尿病肾病中的变化

目的: 探讨2型糖尿病患者尿液胞外体的亮氨酸氨基肽酶(exosome-LAP)及二肽基肽酶4(exosome-DPP4)的水平变化在糖尿病肾病发展过程中的意义。方法: 选取127例2型糖尿病患者,根据24 h 尿白蛋白肌酐比(UACR)分为糖尿病正常白蛋白尿组(DM, 43 例)、微量白蛋白尿组(DN1, 50 例)和大量白蛋白尿组(DN2, 34 例)。另选健康对照组 34 例。采用特异性的单克隆抗体提纯胞外体,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液胞外体的 exosome-LAP 和exosome-DPP4 。同时检测糖化血江蛋白(HbA1c)、血胆固醇(CH)、肌酐(CR)、尿素氮(BUN)。应用多元逐步回归方法分析 DPP4 及 LAP 与 HbA1c、CH、UACR、CR、BUN 相关性。结果: DM、DN1、DN2 组 exosome-LAP和exosome-DPP4 水平均显著高于正常组(均P<0.01);与 DM 组比较,DN2 组 exosome-LAP水平显著升高(P<0.01)。尿 exosome-LAP、 exosome-DPP4 与 HbA1c、CH、UACR、CR、BUN 显著相关。逐步多元回归分析显示,CH、UACR 是 exosome-LAP 的独立危险因素(均P<0.01);UACR、HbA1c 是 exosome-DPP4 的独立危险因素(均P<0.01)。结论: Exosome-LAP和exosome-DPP4 水平与糖尿病肾病严重程度密切相关,以上指标对于糖尿病肾病的诊断及预后估计具有一定临床价值。     

肾上腺髓质素在糖尿病肾病中的变化及作用

目的: 探讨肾上腺髓质素(AM)在糖尿病肾病中的变化及作用。方法: 通过体外人肾小球系膜细胞培养实验,观察高糖条件对系膜细胞AM mRNA、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)mRNA表达、分泌及细胞外基质(层粘连蛋白和Ⅳ型胶原)含量的影响及肾上腺髓质素干预对高糖不良作用的影响。结果: 在高糖条件下培养的人肾小球系膜细胞AMmRNA、TGF-β₁mRNA表达和AM、TGF-β₁分泌较低糖对照组分别增加1.01倍、0.59倍和3.49倍、1.61倍;细胞外基质蛋白LN和Ⅳ型胶原含量分别升高0.95倍和1.13倍。用不同浓度AM(10^-7、10^-8和10^-9 mol/L)干预后,TGF-β₁mRNA表达分别下降50%、28%和16.2%,TGF-β₁含量分别下降39%、26%和11%;LN含量分别下降53%、45%和18%,Ⅳ型胶原含量分别下降29%、26%和20%。结论: 葡萄糖水平升高是AM表达分泌的剌激因子之一。AM的肾脏保护作用可能与抑制TGF-β₁的表达与分泌,进而减少基质蛋白和胶原的过度积聚相关。     

二十碳五烯酸抑制早期糖尿病肾病单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的:观察二十碳五烯酸(EPA)对早期阶段的糖尿病肾病单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法:体内实验中,KKAy/Ta小鼠随机分为2组:治疗组予以EPA1g·kg-1.d-1腹腔内注射共8周,对照组同步予以生理盐水注射,应用免疫组化和实时RT-PCR检测肾脏中MCP-1表达及巨噬细胞浸润的变化。应用ELISA方法检测高糖和EPA刺激后的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上清MCP-1的表达。结果:EPA治疗后KKAy/Ta小鼠肾脏MCP-1的蛋白表达及巨噬细胞浸润明显减弱。实时RT-PCR结果显示EPA治疗组小鼠肾皮质MCP-1mRNA的表达明显低于对照组。25mmol/LD-葡萄糖作用72h可引起HUVECs分泌MCP-1明显增加,30μmol/L和50μmol/LEPA均可显著地抑制高糖诱导的MCP-1表达。结论:EPA降低了KKAy/Ta小鼠肾脏及高糖诱导的内皮细胞MCP-1的表达,提示EPA可能抑制早期糖尿病肾病的炎症反应。     

C肽对GK大鼠糖尿病肾病的影响

目的研究C肽对糖尿病肾病GK大鼠肾脏病理和肾脏功能的影响及相关机制。方法SPF级自发性糖尿病GK大鼠,在糖尿病发病并且24小时尿蛋白超过300mg后,随机分为3组：C肽治疗组、空白对照组和胰岛素治疗组,每组8只,持续治疗12周。以同龄的正常Wistar大鼠作为正常组。治疗前及治疗后每4周检测各组大鼠血糖、24小时尿蛋白以及24小时尿白蛋白。治疗结束后,取各组大鼠肾脏,透射电子显微镜观察大鼠肾脏肾小球病理改变。采用实时定量PCR、westernblot以及免疫组织化学的方法检测肾小球RAGE、PKC－6和PKA的表达。采用单因素方差分析评价各组间的差异。结果与正常组相比,空白对照组的血糖、24小时尿蛋白和24小时尿白蛋白都明显升高：虽然C肽治疗组大鼠的血糖没有明显改变,但24小时尿蛋白和24小时尿白蛋白与空白对照组相比都明显减少;胰岛素治疗组的血糖明显降低,但24小时尿蛋白和24小时尿白蛋白与空白对照组相比没有明显差异。病理学检查显示,与空白对照组相比,C肽治疗组大鼠的肾小球硬化、肾小球系膜增生、基底膜厚度和足细胞的形态都明显改善,而胰岛素治疗不具有类似的作用。实时定量PCR、westernblot和免疫组织化学结果显示,C肽能够显著下调RAGE和PKC—β在糖尿病肾病大鼠肾小球的表达,并显著上调PKA的表达;而胰岛素仅能明显下调RAGE,对PKC、PKA的表达没有明显调节作用。结论C肽可能通过下调。肾小球毛细血管RAGE、PKC－β的表达和上调PKA的表达而改善GK大鼠的糖尿病肾病。     

阿托伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制探讨

目的：探讨阿托伐他汀对糖尿病大鼠肾脏保护作用和其机制。 方法: 酶联免疫吸附（ELISA）法测定各组大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中NF-κB活性；免疫组化检测各组肾组织NF-κB、纤粘蛋白（FN）的表达。 结果:糖尿病组PBMCs中NF-κB活性、肾小球中NF-κB和FN表达高于对照组（P<0.01），阿托伐他汀明显抑制NF-κB活化，降低FN表达（P<0.05），减少24　h尿蛋白排泄（P<0.01），改善肾功能指标及肾组织病理学损害。 结论： NF-κB在糖尿病肾病发病中具有重要作用。阿托伐他汀对糖尿病肾病具有明显防治作用,抑制NF-κB的活化和降低血脂可能是他汀类药物发挥肾脏保护作用的机制。     

糖尿病大鼠肾小管PKCα和CTGF表达的动态变化

 目的：观察糖尿病大鼠肾小管蛋白激酶Cα（PKCα）、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白（FN）表达的动态变化，探讨相互间的关系及其在糖尿病肾病发病中的作用。方法：随机将SD大鼠分为正常对照组(A组)、糖尿病2周组（B组）、糖尿病4周组（C组）、糖尿病8周组（D组）、糖尿病12周组（E组）。用免疫组织化学方法检测CTGF、PKCα、FN的表达；用Western印迹法检测CTGF蛋白表达水平； PAS染色，光镜观察肾组织的形态改变；生化方法测定血糖、血肌酐、甘油三酯、总胆固醇及24 h尿蛋白。 结果：随着糖尿病病程的进展，出现肾小管和间质病变，肾小管表达PKCα和CTGF增多，表达部位一致，与此同步，小管间质FN表达也增加，三者之间呈显著正相关。 12周组大鼠血糖高于其余糖尿病组，血脂和血肌酐明显高于正常对照组；蛋白尿十分显著，并且与CTGF和PKCα呈显著正相关。结论：糖尿病状态促进CTGF分泌增多从而使肾小管间质FN等细胞外基质沉积增多，使肾脏肥大和纤维化，而PKCα参与该过程的信号转导。