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从活化的正常人外周血单核细胞中提取总RNA,经逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)获得了人白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)cDNA。经过DNA测序分析,发现该片段和国外发表的IL-1RacDNA序列一致,将该目的基因插入pBV220载体,并转入大肠杆菌HB101中,经热诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE后发现,菌体超声裂解后,在可溶性上清中有一M17000的特异带,约占菌体可溶性总蛋白的80%以上 相似文献
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大鼠神经肽Y前体cDNA克隆,测序及哺乳动物细胞表达载体的构建 总被引:3,自引:3,他引:0
利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从大鼠脑组织中钩得神经肽Y前体cDNA编码区序列,将该cDNA定向亚克隆入哺乳动物细胞表达载体pRc/CMV中,构建了重组质粒pRc/CMV-NPY。经双脱氧核苷酸终止法对插入片段作序列分析,证明NPYcDNA序列的准确性及插入方向正确。 相似文献
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选择DMD/BMD缺失突变热点区基因片段cDNA5-7kb,经序列测定,逐步克隆,插入到原核表达载体pSM43,转化大肠杆菌TAP106,获得了重组基因的高效表达菌株,成功地表达出分子量49000的DMDcDNA5-7蛋白,表达量占菌体总蛋白的12%。为时一步;研究Dystrophin结构与功能奠定了基础,并为临床开展蛋白诊断的应用研究制备了基因工程抗原。 相似文献
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中国版纳猪MHCI类P1分子全长的原核表达与纯化 总被引:8,自引:0,他引:8
目的:获得原核表达的中国版纳猪SLAI类P1蛋白质分子。方法:PCR扩增去信号肽的SLAI类P1cDNA序列,亚克隆至pGEMT载体,测序。将亚克隆的P1 cDNA片段插入表达载体pET42b(+),构建重组表达质粒pET-42b(+)/sla-pl,转化E·coli表达菌 BL21-CodonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导 P1-8 x his融合蛋白表达,经包涵体洗涤,8 mol/L尿素变性溶解,Ni2+亲和层析,梯度透析后,定量保存。SDS-PAGE、western-blotting鉴定目的蛋白的表达与纯化。结果:目的蛋白(分子量39.5 kD)表达量占细菌总蛋白 15%,每升表达菌获得纯度95%的目的蛋白 40 mg~60mg。结论:成功建立猪 SLA分子全长原核表达、纯化体系,为建立间接识别猪移植抗原SLAI类分子的人T细胞系及表位分析打下基础。 相似文献
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选择DMD/BMD缺失突变热点区基因片段cDNA5~7kb,经序列测定,逐步克隆,插入到原核表达载体pSM43,转化大肠杆菌TAP106,获得了重组基因的高效表达菌株,成功地表达出分子量49000的DMDcDNA5-7蛋白,表达量占菌体总蛋白的12%。为进一步研究Dystrophin结构与功能奠定了基础,并为临床开展蛋白诊断的应用研究制备了基因工程抗原。 相似文献
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人单核细胞超化蛋白—1(MCP—1)基因的PCR扩增,克隆… 总被引:2,自引:1,他引:2
本文报道用植物血凝素(PHA)诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC,包括单核细胞和淋巴细胞),提取细胞总RNA,反转录合成cDNA第一链,再以其为模板进行PCR,得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的cDNA。该cDNA用EcoRI、BamHI双酶切后,回收含MCP-1基因的长约280bp的DNA片段,插入到经EcoRI、BamHI双酶切的pUC19载体中,进行序列分析。结果表明,MC 相似文献
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将人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的cDNA插入融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,构建成质粒pGEX/MCP转化大肠杆菌JM109,经IPTG诱导后合成GST-MCP-1融合蛋白。用12%SDS-PAGE检测在30kD左右有新生蛋白条带出现,表达量约占菌体总蛋白的31.7%。趋化实验证明,该产物具备明确的单核细胞趋化活性。 相似文献
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将人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的cDNA插入融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,构建成质粒pGEX/MCP转化大肠杆菌JM109,经IPTG诱导后合成GST-MCP-1融合蛋白。用12%SCS-PAGE检测在30kD左右有新生蛋白条带出现,表达量约占菌体总蛋白的31.7%,趋化实验证明,该产物具备明确的单核细胞趋化活性。 相似文献