IL—10对外周血单个核细胞体外产生IL—2及IFN—γ的调节作用

为探讨Ｔｈ１与Ｔｈ２两类细胞因子间相互调节，研究了ｒｈＩＬ－１０对ＰＨＡ体外诱导人ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ的影响。结果表明，１０ｎｇ／ｍｌＩＬ－１０明显抑制ＰＢＭＣ产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ（Ｐ＜０．０２及Ｐ＜０．０１）。在加入兔抗人ＩＬ－１０抗体的ＰＢＭＣ体外培养体系中，在５μｇ／ｍｌ浓度时，ＩＬ－２产生可明显增加（Ｐ＜０．０５），随着抗体浓度增加，ＩＬ－２呈剂量依赖性增加（ｒ＝０．９６２，Ｐ＜０．０１），ＩＦＮ－γ产生亦增加，但差异不明显。本研究表明ＩＬ－１０抑制活化人ＰＢＭＣ体外产生ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ，而抗人ＩＬ－１０抗体则表现出增强作用。ＩＬ－１０介导Ｔｈ１与Ｔｈ２两类辅助性Ｔ细胞间的相互调节，选择机体对抗原的免疫应答类型，从而对临床疾患的防治有一定指导意义。     

秋水仙碱对单核细胞产生细胞因子的影响

微管聚合抑制剂秋水仙碱（Ｃｏｌ，１０－５ｍｏｌ／Ｌ）可抑制ＬＰＳ刺激人单核细胞分泌１７ｋＤＴＮＦ－α及膜相关２６ｋＤＴＮＦ－α；与之相反，它却可促进ＩＬ－１β（多为分泌型）的分泌，而对ＩＬ－１α（多为膜相关型）则表现为抑制作用。对于ＩＬ－６，Ｃｏｌ无明显影响。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析显示，Ｃｏｌ对ＴＮＦ－α及ＩＬ－１βｍＲＮＡ产生亦表现为相反作用，即对前者抑制，对后者促进作用。     

P物质与生长抑素对美洲商陆诱导小鼠脾细胞产生…

本实验研究了Ｐ物质和生长抑素在体外对美洲商陆诱导小鼠脾细胞产生γ干扰素的调节作用。结果显示：０．１～１０μｍｏｌ／Ｌ ＳＰ对５，２．５及１．２５μｇ／ｍｌＰＷＭ诱生的ＩＦＮ－γ效价有明显增高作用，但０．００１～１μｍｏｌ／Ｌ ＳＰ对１０μｇ／ｍｌＰＷＭ诱生ＩＦＮ－γ没有影响。与ＳＰ相反，０．１～１０μｍｏｌ／ＬＳＯＭ可显著降低１，０．５及０．２５μｇ／ｍｌ ＰＷＭ诱生的ＩＦＮ－γ效价。用５、２．５     

实验大鼠梗阻性黄疸形成中TNF-α和IL-6对肝脏的影响

目的：探讨梗阻性黄疸形成过程中,血清及肝组织ＴＮＦα和ＩＬ６ 的水平及其与肝损害的关系。方法：以结扎胆总管（ｌｉｇａｔｉｎｇ ｃｏ ｍ ｍ ｏｎ ｂｉｌｅ ｄｕｃｔ , ＬＣＤ） 的大鼠为模型, 采用放射免疫法, 测定ＬＣＤ 后不同时间血清和肝组织中ＴＮＦ－ α和ＩＬ－ ６ 的含量。结果：ＬＣＤ 组血清ＴＮＦα和ＩＬ６ 的水平［ 分别为（１２８５ ．００ ±７２ ．２３） μｇ／ Ｌ 和（３０１ ．２５ ±４４ ．８６） μｇ／ Ｌ］ 明显高于假手术对照组［ 分别为（７９１ ．００ ±１６４） μｇ／ Ｌ 和（２３５ ．００ ±４７） μｇ／ Ｌ］ ,（ Ｐ ＜ ０ ．０１ 和Ｐ ＜０ ．０５） ,肝组织中ＴＮＦα和ＩＬ６ 的含量［ 分别为（２３５３ ．７５ ±６９５ ．４５）μｇ／１００ｇ 和（９７２ ．７５ ±１５４ ．６２）μｇ／１００ｇ］ 也明显高于对照组（ 均为＜ ３００ μｇ／１００ｇ ,Ｐ ＜ ０ ．０１） ;于ＬＣＤ 后１ ｄ ～３ ｄ 变化最为明显,第７ 天～１４ 天维持在一较高水平。二者与谷丙转氨酶（ ＡＬＴ） 的变化均呈显著的正相关（ 相关系数ｒ 分别为０ ．６３１ 和０ ．７８２） 。结论：ＴＮＦα和ＩＬ６ 均参与了肝脏的损伤。     

鼠脾细胞肿瘤坏死因子的诱生和检测

本文报道采用Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＰＳ刺激ＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞诱生ＴＮＦ的最适条件，并用人ＴＮＦ ＥＬＩＳＡ方法检测小鼠ＴＮＦ。结果显示：脾细胞经ＬＰＳ刺激２ｈ就可在上清液中测出ＴＮＦ，１２ｈ达高峰，ＬＰＳ最适刺激浓度为１０＾－２μｇ／ｍｌ，ＴＮＦ产量依赖于脾细胞的浓度。     

IL—10抗内毒素气管内滴注致急性肺损伤作用的实 …

目的：探讨中性粒细胞（ＰＭＮ）在急性肺损伤（ＡＬＩ）发生中的作用及ＩＬ－１０对ＡＬＩ的拮抗作用。方法：用ＬＰＳ（１００μｇ／只）或ＬＰＳ＋ＩＬ－１０（１μｇ／只）向ＳＤ大鼠气管内滴注复制ＡＬＩ模型，检测支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＰＭＮ数目、蛋白质及丙二醛（ＭＤＡ）含量，并进行组织学观察。结果：ＬＰＳ气管内滴注可引起ＢＡＬＦ中ＰＭＮ数目明显增加，伴有蛋白质及ＭＤＡ含量的增高，光镜观察显示肺组织间     

羧甲基茯苓多糖对HPBL分泌IL—2,TNF,IL—6,IFN—γ的调节作用

用ＣＭＰ培养外周血淋巴细胞（ＨＰＢＬ）２４、３６、４８、７２ｈ采样检测的ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ效价分别可达１３．６±４．３，４１．９±２．０，１８３７．４±４６４．３，１０３７．９±２１１．０Ｕ／ｍｌ，分别比无ＣＭＰ的细胞培养对照组的效价高０．８，７．４，０．５，１０．９倍（Ｐ＜０．０１），说明ＣＭＰ具有ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ的诱生剂功能。由ＣＭＰ预处理ＨＰＢＬ后经ＰＨＡ和／或ＣｏｎＡ促诱生组的ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ效价分别比无ＣＭＰ的ＰＨＡ和／或ＣｏｎＡ刺激的相应常规诱生组高１．２～２．８，０．５～１．１、０．５～０．８、０．４～０．６倍（Ｐ＜０．０１），尤以ＣＭＰ＋ＰＨＡ＋ＣｏｎＡ促诱生细胞因子效果最佳（Ｐ＜０．０１），说明ＣＭＰ又具有ＩＬ－２、ＴＮＦ、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ促诱生效应。     

慢性肝病、肝癌患者IL－1、IL－8及TNFα活性测定

对２８例慢性肝炎、２３例肝炎性肝硬化及２６例原发性肝癌患者血清中ＩＬ－１、ＩＬ－８及ＴＮＦα活性进行了测定。结果表明，慢性肝炎患者ＩＬ－１、ＩＬ－８及ＴＮＦα活性分别为１５３８．３±３８６．５ｐｇ／ｍｌ，５０６．５±１３１．３ｐｇ／ｍｌ及２１２．６±９８．４ｐｇ／ｍｌ，明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；肝炎性肝硬化患者ＩＬ－１、ＩＬ－８及ＴＮＦα活性分别为２１６２．８±４３６．６ｐｇ／ｍｌ，６８２．６±２０４．５ｐｇ／ｍｌ及２４１．５±１０９．６ｐｇ／ｍｌ，明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；原发性肝癌患者ＩＬ－１、ＩＬ－８活性分别为６３２．６±１０７．６ｐｇ／ｍｌ，３１２．８±９５．８ｐｇ／ｍｌ，与对照组比较，ＩＬ－１活性明显升高（Ｐ＜０．０５），ＩＬ－８活性程度升高，但无明显差异（Ｐ＞０．０５）ＴＮＦα活性为３２１．６±１８３．２ｐｇ／ｍｌ，明显高于对照组。亦对上述３种细胞因子与慢性肝炎、肝硬化发生发展关系进行了初步分析与探讨。     

病毒性肝炎患者IL－1、IL－6和TNFα活性的检测

检测了甲、乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦα的诱生活性及其血清中活性。结果表明，乙型慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）、乙型肝炎后肝硬化（ＨＣ）和乙型重型肝炎（ＳＨ）ＰＢＭＣｓ经脂多糖诱导后，ＩＬ－１活性分别为３５３１．１±８８２．７Ｕ／ｍ１、２７６９．７±７３０．４±Ｕ／ｍｌ和５３２９．３±１０８９．３Ｕ／ｍｌ，高于正常对照组（Ｐ＜０．０５或（０．０１）；ＩＬ－６诱生活性分别为３８．９０±１４．７５Ｕ／ｍ１、２．４５±１８．８５Ｕ／ｍｌ和７１．９５±２８．０５Ｕ／ｍｌ（与正常对照组相比，ｐ＜０．０５或＜０．０１）；ＴＮＦα诱生活性在乙型慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）、ＣＡＨ、ＨＣ和ＳＨ中分别为３３．２３±７．２５Ｕ／ｍｌ、６．９９±１．８４Ｕ／ｍ１、４．２９±２．１７Ｕ／ｍｌ和８６．７０±２４．１８Ｕ／ｍｌ，与对照组相比Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１。各型患者血清中ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦα活性均有不同程度的增高。文中对ＳＨ患者ＩＬ－１、ＩＬ－６和ＴＮＦα之间的相互关系进行了探讨。     

LPS和IFN－γ对人不同胎龄脾M￠分泌单核因子的影响

制备不同胎龄水囊引产胎脾Ｍ，以ＬＰＳ（１０ｍｇ／Ｌ）为诱导剂，刺激４８ｈ，ＭＴＴ法检测不同胎龄胎脾Ｍ上清中ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ的含量，并与外伤成人脾Ｍ的分泌功能进行比较，发现不同的单核细胞团子，其胚胎发育状况极不一致：胎脾ＭＩＬ－１的分泌在胚胎３２周达成人水平（Ｐ＞０．０５）并保持至出生；ＩＬ－６的分泌在胚胎２０周时已与成人无差别（Ｐ＞０．０５），至出生前，已显著超过成人水平（Ｐ＜０．０１）；而ＴＮＦ的分泌，在胚胎期一直处于较低水平（Ｐ＜０．０１）。同时观察到免疫介质（ＬＰＳ、ＩＦＮ－γ）对胎脾Ｍ分泌ＩＬ－６、ＴＮＦ有协同刺激作用。     

一组抗人重组IL－6单克隆抗体的制备及鉴定

以基因重组的人ＩＬ－６免疫了Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，利用小鼠杂交瘤技术，建立了２０余株分泌抗人重组ＩＬ－６单克隆抗体的杂交瘤，并对其中的Ｃ＿（９２）、Ｃ＿（９７）、Ｃ＿（２０３）、Ｃ＿（２２０）进行了较系统的鉴定，其抗体类别均为ＩｇＧ，亚类分别为ＩｇＧ＿（２ａ）、ＩｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ａ）和ＩｇＧ＿（２ａ）。它们均特异性地识别ＩＬ－６，而与多种其它因子和无关蛋白无交叉反应。免疫转印结果显示，各单抗均能识别分子量为１７ｋＤ的ＩＬ－６单一条带，并具有中和ＩＬ－６生物活性的效应。     

大肠杆菌菌株(λ衍生噬菌体)/PBR322衍生质粒作为人IL-6表达系统的研究

为探索人白细胞介素－６（ＩＬ－６）在原核细胞中高效表达的途径，选用ＢＬ２１（ＤＥ３）／ＰＥＴ－２８作为表达系统，以聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增了ｈＩＬ－６的互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）的编码区，引入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ位点。用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切后，克隆于ＰＥＴ－２８载体的相应位点，转化ＤＨ５α。选出阳性克隆，经ＤＮＡ序列分析，表明其编码区内无非特异突变。将重组质粒转入ＤＨ５α，筛选阳性克隆，用异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导表达。全细菌裂解液进行十二烷基黄酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），结合固化蛋白质的免疫学测定（Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）杂交进行分析。结果表明：Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ杂交发现有与抗ＩＬ－６特异结合的蛋白带，以４ｈ的产量最多，激光扫描显示ＩＬ－６的吸收峰占总吸收面积的３７％（４ｈ诱导）。分子量约为２７ｋＤ。实验显示，人ＩＬ－６在原核细胞中实现了高效表达，表达产物具有ＩＬ－６的免疫活性     

槲皮素磷酸钾对大鼠脑血栓形成模型血小板聚集及血浆TXB_2和6-keto-PGF_(12)水平的影响

以大鼠脑血栓形成为模型,观察槲皮素磷酯钾对大鼠脑血栓形成术24h后血小板聚集、血浆TxB2和6-keto-PGF12水平的影响,以及脑电图、脑重量和病理组织学改变。结果表明:复合血栓诱导剂1ml kg-1经颈内动脉注射能诱发大鼠同侧大脑半球内血栓形成,槲皮素磷酯酶钾10-20 mg kg-1能对抗大鼠脑血栓形成,降低体内血小板自发性聚集,抑制血浆TxB2的升高。提示槲皮素磷酸酯钾可能通过其抗血小板聚集及影响花生回烯酸代谢而发挥抗脑血栓形成作用。     

胶质瘤血瘤屏障体外模型的形态学观察

目的 探讨胶质瘤血瘤屏障体外模型的形态学特征。方法 利用电镜技术观察血管内皮细胞Ecv304和C6胶质瘤细胞共培养(混合共培养、Transwell共培养、Transwell膜两面共培养)后的内皮细胞的孔窗、内皮细胞之间的连接及内皮细胞与肿瘤细胞的相互关系、瘤细胞的“血管周足”等的形态学特征；并与4例人脑胶质瘤组织标本的血瘤屏障进行比较。结果 电镜下发现ECV304细胞经与C6细胞按3种不同方式共培养汇合后均为无孔窗型内皮细胞，细胞间出现紧密连接；Transwell共培养的膜上C6细胞未见伸出伪足突向膜的微孔；经膜两面共培养的瘤细胞则可通过Transwell的微孔突向内皮细胞侧，但瘤细胞未伸出伪足包绕内皮细胞或突入内皮细胞间隙，瘤细胞的“血管周足”不完整，后两者与脑胶质瘤组织标本的血瘤屏障的形态特征相类似。结论 在体外经Transwell膜两面共培养的ECV304和C6胶质瘤细胞的系统可在一定程度模拟体内的血瘤屏障的形态学特征。     

帕金森病大鼠丘脑底核的时间相关性放电模式分析

为了研究帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠丘脑底核(subthalamic nucleus,STN)放电模式随时间变化的规律,本文应用6-OHDA(6-羟基多巴胺)建立PD大鼠模型,在立体定向仪的引导下对大鼠进行手术,记录对照组及实验组STN神经元的放电情况,并分析其放电模式。结果表明,6-OHDA导致的PD动物模型成功率可达60%,正常鼠STN的放电包括规则性放电和束发式放电两种模式,但模型鼠束发式的放电比率显著高于对照组。以上结果提示:(1)6-OHDA可以诱导PD模型的建立;(2)PD大鼠STN的放电模式发生了改变,术后束发式放电明显增多。     

白细胞介素6在乙型肝炎自身免疫反应中的作用

在观察乙型肝炎特异性病毒抗原诱导乙肝患者淋巴细胞产生ＩＬ－６以及ＩＬ－６在乙肝自身免疫发生中的作用发现：ＨＢｃＡｇ可诱导患者产生ＩＬ－６，而ＨＢｓＡｇ则无此作用；ＩＬ－６可协同ＨＢｃＡｇ等促进乙肝患者自身抗体─—抗ＬＳＰ的形成，而且患者高活性水平ＩＬ－６与血清中抗ＬＳＰ抗体的滴应有一定相关性。ＩＬ－６在体外可增强患者非特异性ＩｇＧ形成，但不能促进抗ＨＢｓ形成。     

白纹伊蚊CYP6N3基因启动子序列的分子克隆与功能分析

根据本室已获得的白纹伊蚊CYP6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的5′-末端核苷酸序列,设计2个反向特异引物(GSP1和GSP2),利用4种限制性内切酶Dra Ⅰ、EcoR Ⅴ、Pvu Ⅱ和Stu Ⅰ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA,消化产物与适配子连接产生4种消化的DNA库,并分别以此为模板,进行基因步移.用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第1步PCR扩增,然后再以第1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第2次PCR扩增.将扩增产物进行T-A克隆及测序.结果显示分别以Dra Ⅰ、EcoR Ⅴ、Pvu Ⅱ和Stu Ⅰ消化的DNA库为模板而获得4个长短不一的DNA序列806bp、2 190bp、3 076bp和2 206bp,它们均包括有CYP6N3全长cDNA5′-非翻译区序列及氨基端开头10个氨基酸的编码序列;在其ATG上游序列中均存在有若干个典型的TATA盒、Barbie盒和/或CCAAT盒、抗氧化剂反应元件或外源化合物反应元件.表明本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6N3基因4个上游启动子区序列,并分析、讨论了它们在蚊虫中细胞色素P450基因多样性及其参与杀虫剂抗性中的作用.     

白细胞介素6单克隆抗体的研制

采用纯化的工程菌表达产物白细胞介素６免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）在ＰＥＧ作用下进行融合,通过ＥＬＩＳＡ筛选并多次亚克隆,获得了１株能分泌抗ＩＬ－６单克隆抗体的杂交瘤细胞Ｉｃ－１．３．４．５。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示：抗体结合抗原的分子量与ＩＬ－６相符,为特异性抗ＩＬ－６抗体。亚类鉴定表明：该细胞分泌的单克隆抗体为ＩｇＧ１亚类,ｋａｐｐａ型。染色体数目为１００条左     

白纹伊蚊基因组中CYP6家族新成员基因片段的克隆与分析

目的获得白纹伊蚊CYP6基因家族中新成员的基因片段。方法根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,分别以白纹伊蚊敏感品系和抗性品系基因组DNA为模板进行PCR,产物经T-A克隆转化至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序,获得与设计的细胞色素P450基因片段大小相符合的5个基因片段,并将推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果在白纹伊蚊敏感品系中获得了2个基因片段(AEDG-S1,AEDG-S2),核苷酸序列长度分别为240bp和236bp;在白纹伊蚊溴氰菊酯抗性品系中获得了3个基因片段(AEDG-R2,AEDG-R3,AEDG-R4),核苷酸序列长度分别为236bp、236bp和239bp。所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在23.1%～53.8%之间,与CYP3家族的同源性在25.6%～43.9%之间,而与CYP4家族同源性较低,为13.9%～24.4%。结论所得5个序列为CYP6家族中5个新成员的基因片段。