层粘连蛋白受体单克隆抗体对人肺癌细胞生长状态的影响

观察了层粘连蛋白受体单克隆抗体对高转移能力的人肺巨细胞癌系体外培养细胞生长状态的影响。结果显示ＭｃＢ１能明显降低ＰＧ瘤细胞的生长速度。提示肿瘤细胞体外生长的调控与层粘连蛋白（ＬＮ）及层粘连蛋白受体（ＬＮ－Ｒ）的作用密切相关。     

层粘连蛋白特异性受体--整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法：利用整合素α6 cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体，在大肠杆菌中表达GST－整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb/C小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤，氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后，分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定。结果：经ELISA双筛，获得了一株能稳定分泌对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分泌抗体亚类为IgG1。免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL－7402呈强阳性反应。结论：通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体，对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义。     

层粘连蛋白受体研究进展

层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）是细胞与基质、细胞与细胞间相互作用与调节的重要组成部分。目前已分离纯化的ＬＮＲ多达２０余种。不同组织细胞上表达的ＬＮＲ各不相同，而同一种细胞上可表达多种不同的ＬＮＲ。     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白（hLN）的单克隆抗体（McAb）。方法用纯化的人层粘连蛋白（hLN）作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株（2A1、3B5、2C4、4D1）,培养上清的ELISA效价分别为：1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为：1×10^6、1×10^7、1×10^6、1×10^5;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

抗人胎盘层粘连蛋白P1单克隆抗体的制备与初步应用

在纯化人胎盘层粘连蛋白Ｐ１段（简称Ｐ１）的基础上，应用杂交瘤技术获得两株抗Ｐ１的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ１５和１Ｂ５。两株ＭｃＡｂ均属ＩｇＧ１，同人纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原无交叉反应。纯化的腹水ＭｃＡｂ效价分别为６．４×１０－７（３Ａ１５）和２×１０－８（１Ｂ５），分别识别Ｐ１分子上的不同表位。利用ＭｃＡｈ３Ａ１５和１Ｂ５建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ，用于检测Ｐ１的下限为１０ｎｇ／ｍｌ，标准曲线在１０～５００ｎｇ／ｍｌ之间呈直线关系。对１００例健康献血员、１８例慢性肝炎患者和１２例肝硬化患者血清Ｐ１的检查结果分别为３３．８±１１．６、６７．３±３１．７和１０７．５±５８．４ｎｇ／ｍｌ。     

乳腺癌组织层粘连蛋白受体表达的预后意义

目的：为了观察层粘连层白受体与乳腺癌临床和病理参数之间的关系，以及对患者生存的影响。方法：用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测了１０９例乳腺癌原位灶组织和其中３７例淋巴结转移灶组织中层粘连蛋白受体（ＬＲ）的表达情况，结果：在乳腺癌原发灶中有６０例（５５．０４％）阳性，淋巴结转移灶中３１例（８３．７８％）阳性，两者表达率之间的差异有显著性意义。ＬＲ表达与患者年龄、组织分级、肿瘤坏死和核分裂无显著关系。有淋巴     

微血管密度及层粘连蛋白受体表达在乳腺癌中的意义

侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因。研究表明,层粘连蛋白受体（laminreceptor,LN－R）是连接肿瘤细胞与细胞外基质的重要分子,在肿瘤的血管生成、侵袭和转移中起重要作用［1.2］。正常情况下,LN－R位于细胞基底部,与基底膜的层粘连蛋白（laminin,LN）结合,定位于基底膜上,能够调节细胞的粘附、扩散、迁徙和增殖［1］。LN-R表达和微血管密度（microvesseldensity,MVD）可作为乳腺癌的预后指标已见报道,但联合检测LN-R和MVD并进行相关性研究国内尚未见报道。作者通过联合检测LN-R和MVD,探讨二者之间的关系及其在…     

福尔马林固定后层粘连蛋白受体抗原活性的恢复

常规福尔马林固定，石蜡包埋后，使组织内许多有意义抗原的抗原活性减弱。消失而很难检测到。最近，许多实验室证明用微波辐射能使一些抗夺的有所恢复。以往我们在福尔马林固定，石蜡包进组织中未能染出层粘连蛋白受体。     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长和分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以下呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。     

一次细胞融合制备分泌抗狂犬病毒单抗杂交瘤及分泌抗独特型单抗杂交瘤的实验研究

根据独特型与抗独特型的免疫网络与免疫调节学说，利用狂犬病毒作为免疫原，设计了不同的动物免疫方案，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞经一次融合，同时获得了分泌抗狂犬病毒单克隆抗体杂交瘤及分泌狂犬病毒抗独特型单克隆抗体杂交瘤，为抗独特型抗体的制备开辟了一条简捷经济的途径。     

结肠癌单克隆抗体的制备和鉴定

用1高碘酸处理结肠癌组织,然后免疫小鼠制备单克隆抗体.获得2株产生高效价、针对结肠癌抗原的抗体杂交瘤细胞株C_8和C_(102)。经免疫组织化学染色后知其抗原定位于结肠癌腺体的上皮细胞及其分秘物.由Immunoblotting知其抗原的分子量为20万道尔顿.初步研究表明,C_8和C_(102)是特异性较强的针对结肠癌的单克隆抗体(IgG2b).经高碘酸(或胰酶)处理证明,其相应抗原决定基部分是蛋白质而不是多糖.     

亮氨酸甲基酯处理法制备抗人肾癌单克隆抗体

以本所自建的肾癌细胞株（ＧＲＣ－１）作为免疫原，用亮氨酸甲基酯（ＬｅｕＯＭｅ）处理免疫后的脾细胞，可以显著细胞融合率，并且筛选到４株抗人肾癌单克隆抗体（ＭＡｂ）。ＹＤ－５为其中特异性较好的１株，属ＩｇＧ１亚类，在正常肾组织的肾小管、大多数肾癌（１３／１５）组织中表达，且与其它被检正常组织叉反应少，当以某些肿瘤细胞株作为免疫原且融合率很低时，用ＬｅｕＯＭｅ处理法来提高融合率是很有意义的。     

小鼠胸腺基质细胞系的分型

为鉴定８株小鼠胸腺基质细胞（Ｔｈｙｍｉｃｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ，Ｔｓｃ）系的类型及本室研制出的抗小鼠ＴＳＣ单抗的价值，我们采用细胞ＥＬＩＳＡ和免疫荧光法对３０种自制的及国外引进的ＭＴＳ系列抗小鼠ＴＳＣ单抗与８株ＭＴＳＣ细胞系的反应性进行了观察，结果表明：①ＭＴＳＣ１，２为髓质型胸腺上皮细胞（Ｔｈｙｍｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＴＥＣ）的不同亚群；ＭＴＳＣ３，５，６，７，８为皮髓质交界型ＴＥＣ的不同亚群。②在不同类型的ＴＳＣ间及胸腺细胞和ＴＳＣ间，均存在共同抗原。③ＭＴＳ系列ＭｃＡｂ不能鉴定的ＭＴＳＣ系，能用本室自制的抗小鼠ＴＳＣＭｃＡｂｓ定型。     

旋毛虫Ts87抗原单克隆抗体的制备及其识别肽段的研究

将原核系统成功表达的Ts87重组蛋白纯化后免疫动物,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗Ts87抗原的单克隆抗体.通过ElISA、免疫印迹、免疫组化等方法筛选出能分泌抗Ts87御抗原的抗体的阳性克隆,在1000个融合的杂交瘤细胞中,有3株融合细胞分泌的单克隆抗体(2A2,5A3,6G12)鉴定结果为阳性.这3株融合细胞分泌的抗体均能识别Ts87重组蛋白、旋毛虫成虫和幼虫的Ts87抗原以及旋毛虫幼虫组织切片.获得的抗Ts87抗原的单克隆抗体在将来的研究中可作为旋毛虫病的诊断试剂.为了进一步鉴定抗体识别的相应抗原表位和模拟抗原表位,选择了其中一株单克隆抗体5A3筛选噬菌体十二肽库.噬菌体M7展示的肽段是抗体识别Ts87抗原的线性表位,其他的噬菌体克隆展示的肽段是Ts87抗原的模拟表位.该技术为旋毛虫病多表位疫苗的构建奠定了基础.     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

Laminin和Fibronectin对周围神经中的再生轴突及非神经元细胞的作用和影响

本文用近交克隆系(Close cloned)大鼠研究了内源性Laminin和Fibronectin对周围神经的再生轴突及非神经元的雪旺氏细胞、成纤维细胞等的作用和影响。将从供体鼠获得的坐骨神中段经冷冻、加热处理后再用Laminin或Fibronectin抗血清处理;对照组则用正常兔血清处理。将处理后的神经段(10mm)分别植入三组受体鼠体内,术后不同时期取材,电镜观察。术后15天,抗Laminin组和抗Fibronectin组的轴突总数,只有对照组的50%左右。对照组和抗Fibronectin组约90%的轴突走在基底膜管内,而抗Laminin组,再生轴突似不能识别基底膜而生长在基底膜管外。轴突生长总是先于雪旺氏细胞的迁移,而后雪旺氏细胞才生长粘附并包绕轴突。成纤维细胞能够识别伴随有雪旺氏细胞的轴突,并形成神经周膜包绕这些轴突,但它们不能识别空陷的基底膜管,只有当组织中缺乏Fibronectin时,增生的成纤维细胞方在基底膜管外形成神经周膜。在缺乏Laminin的神经段内,巨噬细胞不仅大量增生,还有包随走在基底膜管外单个轴突的趋向。这些结果提示在神经再生的早期,内源性Laminin和Fibronectin不但调节再生神经纤维的生长,对在神经损伤和再生中起重要作用的巨噬细胞和成纤维细胞也有积极的影响。     

机械刺激对肝癌细胞形态及增殖周期的影响

本研究采用“四点弯曲梁加载装置” ,对培养的人肝癌细胞株SMMC 772 1施以拉伸刺激 ,通过显微计算机图像处理系统了解其形态变化 ,流式细胞仪了解其增殖行为 ,结果发现 (1)加载 2 4h后SMMC 772 1G2 -M期 8.6 3% ,对照组 15 .92 %。 (2 )加载 72h后SMMC 772 1铺展投影面积缩小。 (3)加载 2 4h后SMMC 772 1分裂指数 0 .4 6 ,对照组 0 .5 5。加载可部分抑制SMMC 772 1的生长。     

抗人IgG单克隆抗体的研究 Ⅲ.8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性分析和初步应用

本文报道8株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的血清学特性,其中4种属抗全IgG,3种是对IgG_4无反应的抗IgG,1种是对IgG_3无反应的抗IgG。各单克隆抗体之间的效价和结合抗原的能力有所差异。根据组合试验,选出A_2与B_1二种单克隆抗体进行组合,用以检测正常人血清中IgG含量,与常规抗血清相比较呈良好的相关性(r=0.90)。用以制备亲和层析柱,纯化人IgG,得率比常规抗血清高7.3倍。据此认为,研制这类单克隆抗体将为临床免疫检测提供有效的试剂。