大鼠Leydig细胞分泌的IL-1和TGF-β_1在感染时的免疫调节作用

目的:研究Leydig细胞在抗感染中的免疫调节作用。方法:SD大鼠睾丸经Ⅱ型胶原酶消化、过滤及Percoll分离获得高纯度、高活率的Leydig细胞。体外培养的Leydig细胞经解脲脲原体(UU)感染后,观察其细胞培养上清液中白介素-I(interleukin-1,IL-1)活性(四唑盐比色法即MTT法)和转移生长因子(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)含量(ELISA法)的变化。结果:UU感染可明显促进Leydig细胞分泌IL-1和TGF-β_1的能力,且与UU的感染剂量有关。结论:大鼠Leydig细胞在抗感染免疫中,可通过其分泌的IL-1和TGF-β_1发挥免疫调节作用。     

睾丸局部溶脲脲原体感染对支持细胞锌指蛋白265表达的初步研究

目的:研究睾丸局部感染后支持细胞免疫调节功能与锌指蛋白265(zinc finger protein265,ZNF265)的变化情况。方法:以溶脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)体内感染支持细胞后,分别在感染1、2、3周时间段运用RT-PCR、免疫组化和流式细胞术(FCM)方法比较感染组与对照组间ZNF265、IL-1α、IL-6、TGF-β和FasL的mRNA及蛋白水平的表达变化情况。结果:与对照组相比,体内感染处理后2周后支持细胞的ZNF-265表达下降,3周后又升高;TGF-β和FasL从感染2周开始表达上升,一直至3周仍处于上升趋势;感染2周IL-1α和IL-6表达分别上升;3周后则分别下降。结论:ZNF265在支持细胞被UU感染后会产生表达变化。     

解脲支原体宫内感染与胎膜早破关系的研究

目的 探讨解脲支原体(UU)宫内感染与胎膜早破的相关性。方法 运用培养法对妊娠晚期32例胎膜早破孕妇(试验组)和20例正常孕妇(对照组)的剖宫产术中羊水进行支原体培养检测,评价6种抗菌药物对抑制支原体的敏感性;同时运用PCR-微板核酸分子杂交法对上述羊水进行解脲支原体DNA检测。结果 试验组分离培养检测的UU感染阳性率为28.1％,对照组UU感染阳性率为5.0％(P>0.05);6种抗生素药敏试验提示氧氟沙星药物敏感性最弱;在同时进行的PCR-微板核酸分子杂交法试验中,试验组的UU检出率为46.9％,对照组的UU检出率为10.0％,两组比较差异有显著性(P<0.01)。结论 解脲支原体所致的宫内感染是部分妊娠晚期胎膜早破的原因之一。PCR-微板核酸分子杂交法联合培养法,是诊断解脲支原体宫内感染的特异、快速和准确的方法。     

溶脲脲原体感染与妊娠结局及新生儿并发症

目的 :探讨溶脲脲原体 (Ureaplasma urealyticum,UU)感染与妊娠结局及新生儿并发症的关系。方法 :对 91 5位孕妇 ,进行宫颈粘液 UU的液体培养基分离培养检测 ;对其中所产的 6 31例新生儿咽分泌物做 UU分离培养 ,并按婴儿感染与否分为感染组与未对照组。结果 :感染组 (2 93例 )较对照组 (338例 )的胎膜早破、胎儿宫内窘迫以及新生儿并发症的发生率均明显增多。新生儿并发症包括新生儿咽疱疹、新生儿发热、新生儿肺炎和新生儿结膜炎等。结论 :UU感染与不良妊娠结局密切相关 ,与新生儿并发症的关系值得进一步研究。加强孕妇的卫生保健对于降低感染率、改善不良妊娠结局和新生儿并发症有重要意义     

沙眼衣原体、溶脲脲原体感染致精浆TNF-α、IL-6升高在男女不育发病中的意义

采用聚合酶链反应技术（PCR）检测不育双方生殖道沙眼衣原体（CT）及溶脲脲原体（UU）DNA,酶标双抗体夹心法测定不育患者精浆TNF－α、IL－6含量。发现感染在不育双方呈平行性表达（P＞0．05）,并导致不育患者精浆中TNF－α、IL－6明显增高（P＜0．05）。感染致精浆细胞因子的升高可能影响精子的密度、活动率、液化程度,并参与生殖器官的炎性损伤。提示精浆炎性细胞因子及CT、UU感染参与男女不育的发病过程。     

解脲脲原体引起生殖细胞凋亡

目的:研究解脲脲原体感染对雄性大鼠生殖细胞凋亡的影响。方法:雄性大鼠人工感染解脲脲原体血清型8（T960）。光镜下观察曲细精管内和附睾腔内生殖细胞的形态变化;以荧光标记的Fas和Fas配基（PasL）多克隆抗体定位Fas和FasL;以碱性磷酸酶法进行生殖细胞和支持细胞的TUNEL染色;以KS400影像分析系统分析TUNEL染色阳性率（阳性细胞百分率）和TUNEL染色阳性区域（染色细胞占据的区域）,以琼脂糖凝胶电泳法进行DNA梯度分析。结果:解脲脲原体感染大鼠后,导致:（1）脱落的生殖细胞显著增多,在曲细精管和附睾腔内可见多核巨细胞;（2）TUNEL染色阳性细胞和阳性区域显著增加;（3）在生殖细胞和支持细胞中Fas和FasL表达升调;（4）睾丸细胞中出现离散的DNA片断。结论:解脲脲原体感染增强了雄性大鼠生殖细胞的凋亡。     

输精管结扎兔睾丸IL-1与血浆睾酮变化的研究

为了探讨输精管结扎术后睾丸IL—1的活性、来源及其与睾酮变化的关系,同步检测了结扎6、25个月家兔辜丸匀浆上清IL—1活性和血浆睾酮含量,并进行了睾丸组织IL—lmRNA的原位杂交.结果表明:(1)睾丸组织匀浆上清IL-1活性以VG6为高,与SOG6比较有显著差异(P<0.01);(2)睾丸组织IL-1mRNA的原位杂交,VG6中IL-lmRNA的杂交信号明显强于其他各组,杂交信号主要分布在曲细精管内的 Sertoli细胞和生殖细胞,也见于间质中的某些细胞中;(3)血浆睾酮含量结扎术后6个月明显降低,与对照组比有显著差异(P<0.05),IL-1活性与血浆睾酮含量呈明显的负相关关系(r=-0.595,P<0.01).故推测,结扎早期睾丸炎症所引起的巨噬细胞活化和Sertoli细胞吞噬变性精子和残余体过程增强,可能是睾丸IL-1的主要来源.输精管结扎术后IL-1活性的一过性升高可能是睾酮含量下降的原因.IL-1可能作为旁分泌调节因子抑制Leydig细胞睾酮合成.     

溶脲脲原体感染与精子密度关系的研究

目的:探讨溶脲脲原体(UU)感染与精子密度之间的关系。方法:在上海同济医院和仁济医院男科两研究中心就医,年龄在20-45岁的对象共346例,分为UU阳性和阴性两组,比较两组对象精子密度,应用混合线性模型-协方差分析,调整中心和禁欲时间计算修正均数;并构建多元线性回归模型控制混杂因素影响。结果:UU阳性对象精子密度均值为47.97×106/ml,而阴性对象为61.49×106/ml,差异有统计学意义(P<0.01)。在控制禁欲时间、研究中心、居沪年限、年龄、独用卫生间、饮酒史等因素的多元线性回归模型显示,UU感染对象的精子密度仍然较低(P<0.05)。结论:UU感染与精子密度下降有关。     

子宫内膜异位症病灶离体内膜组织IL-6的分泌量研究

目的:研究白细胞介素6（IL-6）在子宫内膜异位症（endometriosis,EM）发病中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测体外培养EM患者（12例）的异位内膜细胞和在位内膜细胞培养上清液中IL-6水平并与10例正常子宫内膜细胞作对照;以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）对异位内膜细胞分泌IL-6的影响。结果:三种内膜细胞培养上清液中IL-6水平明显不同。异位内膜细胞分泌的IL-6显著高于相应的在位内膜（P<0.01）,而后者又明显高于正常子宫内膜（P<0.05）,即IL-6分泌量异位内膜细胞>在位内膜细胞>正常子宫内膜细胞。TNF-α作用24h后可明显促进异位内膜细胞IL-6的分泌（P<0.01）。结论:异位内膜细胞可自主分泌高水平IL-6,TNF-α进一步诱导其分泌,与EM患者腹腔免疫和炎症反应相关。EM患者在位内膜细胞分泌IL-6的活性明显升高,可能导致其异位种植。     

解脲脲原体血清型3在小鼠生殖道中的致病性

目的 探讨不同浓度解脲脲原体血清型3(UU3)在小鼠生殖道中的致病性.方法 将156只昆明小鼠按完全随机设计法分为A、B、c组(每组各48只)及对照组(12只)共4组.将3种不同浓度的UU3接种至各实验组小鼠阴道内,各组的浓度分别为:A组1×107 copy/g,B组1×106copy/g,c组1×105 copy/g;对照组仅接种UU液体培养基.于接种后第1、3、7、14、21、35天每次随机处死A、B、c组各8只及对照组2只小鼠,取宫颈管分泌物,荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测各组UU3的浓度及阳性率;取宫颈、子宫内膜及输卵管组织,光镜下观察其形态,并计算致病率.结果(1)A、B、C 3组UU3总阳性率分别为63%(30/48)、50%(24/48)和17%(8/48),3组间比较,差异有统计学意义(P<0.01).接种后1、3、7、14、21、35 d小鼠的UU3阳性率,A组分别为8/8、7/8、6/8、5/8,4/8和0,B组分别为7/8、5/8、5/8、4/8、3/8和0,C组分别为3/8、2/8、2/8、1/8、0和0;对照组各时间点均为0.接种后1 d的UU3阳性率3组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);其他各时间点3组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)在UU3检测阳性者中,A、B、C组的UU3浓度在接种后1、3、7、14、21 d分别为1.70×107、3.75×106和1.45×105copy/g,8.26×10+6、2.56×106和1.07×105copy/g,4.04×106、1.37×106和5.43×104copy/g,2.86×106、6.72×105和4.68×103copy/g,2.41×105、1.12×105和0 copy/g.除接种后21 d外,接种后各时间点A、B、C 3组的UU3浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A、B组内接种不同时间点的UU3浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05);C组接种不同时间点的UU3浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)接种后7～35 d,A、B、C 3组的总致病率分别为56%(18/32)、44%(14/32)和6%(2/32),3组间比较,差异有统计学意义(P<0.01);接种后7、14、21、35 d小鼠的致病率,A组分别为5/8、5/8、4/8和4/8,B组分别为4/8、4/8、3/8和3/8,C组分别为1/8、0、1/8和0;对照组各时间点均为0.除接种后14 d外,各时间点A、B、C 3组间致病率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论在小鼠生殖道局部接种不同浓度的UU3,其致病性不同.当UU3浓度≥1×106copy/g时,其致病性明显增强.     

溶脲脲原体在抗生素临界浓度下药物敏感性研究

目的 :为了研究溶脲脲原体 (UU)在抗生素临界浓度下的药物敏感性情况。方法 :在 UU最小抑菌浓度 (MIC)的质控范围内 ,选择临床上常用抗生素的高度敏感临界值作为 UU培养基的最终浓度 ,通过代谢抑制法 ,观察 6株临床耐药菌株在这些抗生素临界浓度下生长的情况。结果 :在 4.0μg/ m L的四环素族浓度、0 .5μg/ m L的大环内酯类浓度、2 .0μg/ m L氧氟沙星浓度和 1 .0μg/ m L环丙沙星浓度下 ,这些菌株所显示的体外药物敏感性与临床实际回顾性分析的结果有较好的吻合性。结论 :确立 UU的抗生素高度敏感临界值将有助于简化临床上 UU药敏测试的操作程序     

荧光定量PCR检测解脲支原体感染与胎膜早破的关系

目的:探讨解脲支原体(UU)感染与胎膜早破的关系。方法:采用荧光定量PCR检测法分别对50例胎膜早破和50例正常妊娠非胎膜早破妇女的宫颈分泌物、胎盘母面、新生儿咽拭子进行解脲支原体检测。结果:胎膜早破组宫颈分泌物、胎盘母面、新生儿咽拭子中,UU检测率明显高于对照组,两组比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:解脲支原体感染与胎膜早破的发生关系密切。     

稽留流产与生殖道感染的关系分析

目的:探讨生殖道解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)感染与稽留流产的关系及其临床意义。方法:应用培养法分别对150例稽留流产患者(实验组)、120例正常妊娠人工流产孕妇(对照组)进行UU及CT的检测,并行统计分析。结果:实验组中UU、CT、UU+CT的感染率分别为38.00%、24.67%、17.33%,时照组中UU、CT、UU+CT的感染率分别为17.50%、13.33%、7.50%,两组间分别比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:生殖道解腺支原体和沙眼衣原体感染对稽留流产有一定的影响,是其病因之一。     

体外培养方法诱导大鼠精母细胞减数分裂

目的:探讨大鼠睾丸精母细胞在体外减数分裂、分化为精子细胞或精子的可能性。方法:取出生后20-22dWistar大鼠睾丸组织,经胶原酶消化分离细胞,分别用含2%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基(对照组)和含2%FBS的DMEM/F12培养基+多种性激素+多种细胞生长因子等(实验组)作体外培养,于培养后d3、d7、d14收集细胞,采用流式细胞技术,检测培养前后生精细胞染色体倍体的变化;RT-PCR法检测精子细胞特异性基因过渡蛋白1(TP1)mRNA的表达。结果:培养d2,可见支持细胞贴壁生长,生精细胞粘附于支持细胞表面,实验组生精细胞存活率>90%,对照组<5%;培养14d,实验组可见长有鞭毛的长形精子细胞。流式细胞检测结果显示,培养前生精细胞为二倍体和四倍体细胞群,培养d14实验组单倍体细胞占总细胞数的6.2%,对照组未见单倍体峰。RT-PCR结果显示与流式细胞技术检测结果一致:培养前生精细胞未检测到TP1mRNA的表达,培养7d后实验组可检测到该基因的表达,培养14d,其表达量显著增加。结论:采用生精细胞与支持细胞混合培养并在培养液中添加性激素、细胞生长因子等的方法,大鼠精母细胞可以在体外进行减数分裂,分化成长形精子细胞。     

溶脲脲原体与人精子膜蛋白交叉反应抗原的研究

目的 :研究溶脲脲原体 ( Ureaplasma urealyticum,UU)与人精子膜之间的交叉反应抗原。方法 :将从不育患者精液中分离、纯化等获取的 UU蛋白质与人精子膜蛋白进行十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS- PAGE) ,再将电泳条带转移到硝酸纤维素膜上 ,用兔抗人精子膜抗血清及羊抗兔 Ig G- HRP进行 Western blot反应。结果 :Western blot证实 UU中 61 k D、5 0 k D和 2 7k D蛋白质组份与精子膜蛋白具有相似抗原性。结论 :UU与人精子膜之间存在交叉反应抗原 ,这可能与临床上 UU感染不育患者血清和 /或精液中抗精子抗体 ( As Ab)阳性率明显升高相关     

中药二至天癸颗粒对控制性超排卵周期卵泡液IL-1β、IL-6以及对胚胎质量的影响

目的:探讨补肾中药二至天癸颗粒对提高控制性超排卵所获卵和胚胎质量的作用机理。方法:将66例因输卵管因素行IVF-ET的患者随机分为中药+控制性超排组(实验组,n=33)和控制性超排组(对照组,n=33)。应用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测取卵日成熟卵泡卵泡液IL-1β、IL-6水平,移植日采用形态学标准对胚胎进行评分。结果:实验组卵泡液IL-1β水平显著高于对照组(P<0.05);实验组的胚胎评分显著高于对照组(P<0.01);卵泡液IL-1β与移植日胚胎评分呈正相关(P<0.01)。结论:二至天癸颗粒能够改善控制性超排卵周期的胚胎质量,可能与调控卵泡液IL-1β水平有关。     

IL-6、TNFα对人早孕绒毛滋养层细胞胎盘生长因子表达调控的作用

目的:探讨IL-6、TNFα对原代培养人早孕绒毛滋养层细胞胎盘生长因子(PIGF)表达的调控作用。方法:对胰蛋白酶与胶原酶Ⅰ联合消化、Percoll细胞分离液纯化而得到的滋养层细胞进行原代培养,测定100 ng/mL IL-6、50 ng/mL TNFα对滋养层细胞PIGF表达的影响。结果:酶联合消化及梯度离心能较好地分离早孕绒毛中的滋养层细胞,100 ng/mL IL-6作用于滋养层细胞后PIGF分泌增加,与对照组有显著性差异(P<0.01),TNFα作用于滋养层细胞后PIGF分泌也增加,但与对照组差异不显著(P>0.05)。结论:IL-6对PIGF分泌具有促进作用,TNFα对滋养层细胞PIGF分泌的促进作用不显著,提示VEGF与PIGF可能由母胎界面不同的细胞因子所调控。     

氯化镉对大鼠睾丸波形蛋白表达的影响

目的:探讨氯化镉(CdCl2)对大鼠睾丸曲细精管和间质区波形蛋白表达的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机分为对照组与3个实验组,每组5只动物。实验组分别每天腹腔注射CdCl20.2mg/kg(低剂量组),0.4mg/kg(中剂量组)和0.8mg/kg(高剂量组),共14d,对照组注射等量生理盐水。采用免疫组化法检测睾丸波形蛋白的表达和改变。结果:波形蛋白在睾丸曲细精管支持细胞胞浆呈阳性表达。随着Cd2+剂量增加,实验组阳性支持细胞率及波形蛋白表达量与对照组的比较均显著减少(P<0.01),各实验组间比较也有显著性差异(P<0.01)。在中、高剂量组,波形蛋白向管腔伸展的辐射状部分变短,甚至消失。3个实验组的间质区波形蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CdCl2染毒可导致大鼠睾丸支持细胞和间质区的波形蛋白表达量显著下降,且损伤呈剂量效应。     

青春期大鼠受己烯雌酚持续作用对成年后睾丸波形蛋白表达的影响

目的:探讨青春期大鼠受己烯雌酚(DES)持续作用,成年后睾丸曲细精管和间质区波形蛋白表达的影响。方法:将SD大鼠,随机分成对照组与3个DES实验组,对照组注射0.3ml纯玉米油,实验组分别注射含DES2μg·kg-1·d-1(低剂量组)、10μg·kg-1·d-1(中剂量组)、50μg·kg-1·d-1(高剂量组)的玉米油0.3ml,每组6只动物。各组隔日腹腔注射,28d后采集标本。采用免疫组化法观察睾丸波形蛋白的表达和变化。结果:在睾丸曲细精管内仅见波形蛋白表达于支持细胞胞浆,生精细胞中未见表达。在支持细胞中,波形蛋白由基膜基部绕核成环状,并随胞质呈辐射状向曲细精管管腔延伸。随着DES染毒剂量的增加,其表达变弱,向管腔的辐射状部分变短、消失。与对照组相比,DES实验组波形蛋白的阳性支持细胞表达率及表达量均显著下降(P<0.01),各实验组间比较均有显著性差异(P<0.01)。波形蛋白也见表达于睾丸间质区的间质细胞胞浆与结缔组织,3个实验组中的表达量分别与对照组相比均有显著性下降(P<0.01),低剂量组波形蛋白表达量与高剂量组相比也有显著减少(P<0.05)。各组波形蛋白在间质区的表达量均显著高于支持细胞胞浆的表达(P<0.01)。结论:青春期大鼠受DES持续作用后,成年大鼠睾丸支持细胞和间质区的波形蛋白表达量显著下降,且损伤呈剂量效应。     

女性不孕症患者宫颈解脲尿原体亚群检出情况的研究

目的:比较女性不孕症患者生殖道内不同亚群解脲脲原体(UU)的检出情况。方法:采用PCR方法分别对120例门诊不孕症患者(不孕症组)和同期正常体检女性(对照组)的宫颈分泌物进行UU生物亚群分型检测,并比较其差异;采用ELISA方法检测不同UU亚群感染单核细胞后巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的表达水平。结果:1检出率:不孕症组UU1群(UU1)检出率为20.8%(25/120),对照组为18.3%(21/120),组间无统计学差异(χ~2=0.24,P0.05);不孕症组UU2群(UU2)检出率为45.8%(55/120),对照组为21.7%(26/120),具有显著统计学差异(χ~2=15.67,P0.01)。2 MIF表达:UU浓度为10~4 CCU/m L,MIF表达在UU1组、UU2组和对照组间无显著统计学差异(P0.05);UU浓度分别为10~5 CCU/m L和10~6 CCU/m L时,共培养18 h、24 h时UU2群MIF均表达增加,与UU1群和对照组比较均有统计学差异(P0.05)。结论:UU2群在不孕症患者检出率高于正常女性,且UU2群促单核细胞分泌MIF的能力高于UU1群,UU2群感染可能与女性不孕症具有一定的相关性,其潜在致病机制有待进一步研究。