碱性成纤维细胞因子对人肾成纤维细胞的影响

目的:研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对人肾成纤维细胞(KFB)增殖、分泌I型胶原、表达整合素β₁的影响。方法:体外培养KFB, 分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、ELISA法、流式细胞仪检测KFB增殖、I型胶原分泌及整合素β₁表达水平。结果:25-50μg/L的bFGF可明显促进KFB细胞增殖(P<0.05vs对照)及分泌I型胶原(P<0.05vs对照), 同时显著增加KFB整和素β₁的表达(P<0.05vs对照).结论:bFGF可通过对整合素β₁表达的上调来促进KFB增殖及分泌I型胶原, 这可能是bFGF致肾间质纤维化的作用机制。     

重组反转录病毒碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨的影响

背景：国内外有关成纤维细胞生长因子基因转染促血管和促肌肉生长的研究较多,而成纤维细胞生长因子基因促成骨的研究未见报道。 目的：观察重组反转录病毒retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨能力的影响。 方法：从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞,体外扩增纯化后分为4组：①retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组：培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子基因重组反转录病毒。②retrovirus pLXSN组：培养液中加入反转录病毒空载体。③阳性对照组：培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠。④空白对照组：不给予特殊处理。 结果与结论：经多次换液传代,人骨髓基质细胞呈均一梭形形态。处理后retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。免疫组织化学染色见retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组碱性成纤维细胞生长因子表达明显强于其他3组。retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子和阳性对照组可引起细胞碱性磷酸酶活性增高和矿化结节及骨胶原形成。提示基因重组反转录病毒成纤维细胞生长因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用。     

紫外线诱导人皮肤成纤维细胞形态改变及对基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞中端粒长度及基质金属蛋白酶(MMPs)的变化,及其在UVB诱导光老化中的作用。方法原代培养人成纤维细胞,用第5代细胞进行UVB照射处理。观察细胞形态,实时定量PCR检测COL1a1和h TERT的mRNA表达细胞端粒长度,Western blot检测MMP-3和MMP-1蛋白。结果 30 m J/cm2UVB照射人成纤维细胞24 h后,细胞逐渐变圆、皱缩和排列紊乱;COL1a1和TERT的mRNA水平表达显著升高,基质金属蛋白酶MMP-3和MMP-1蛋白水平也显著升高,端粒长度显著缩短。结论 UVB可能诱导人皮肤成纤维细胞形态改变,及MMP-3和MMP-1的表达明显升高,启动了光老化的早期进程。     

紫外线对人皮肤成纤维细胞老化损伤的影响

目的:研究紫外线对人皮肤成纤维细胞的老化损伤及c-fos、c-jun、Sirt1蛋白在UVA诱导损伤后的变化。方法:原代培养人皮肤成纤维细胞,采用MTT法测定第5代细胞经不同强度、不同作用时间UVA照射后人成纤细胞的增殖情况,采用SA-β-Gal染色法观察细胞衰老情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-Px)及金属基质蛋白酶-1(MMP-1)含量,免疫组化法观察细胞内c-fos、c-jun的表达,实时定量PCR法检测cfos、c-jun、Sirt1 mRNA的表达,Western blot检测c-fos、c-jun、Sirt1蛋白表达。结果:经5 J/cm~2、10 J/cm~2、20 J/cm~2UVA照射72 h后,人皮肤成纤维细胞的增殖能力减弱,人皮肤成纤维细胞在UVA照射下普遍被诱导成衰老状态,经SA-β-Gal染色后观察到细胞衰老明显,不同强度UVA照射能明显降低细胞内SOD、GSH-Px活性,显著提高MMP-1的含量。免疫组化结果显示c-fos、c-jun表达呈阳性,同时c-fos、c-jun、Sirt1的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。结论:UVA能诱导人皮肤成纤维细胞形态改变,这一过程与紫外线强度及作用时间相关,经照射后c-fos、c-jun、Sirt1的表达明显升高,启动了光老化的进程。     

不同强度永磁磁场对成纤维细胞的生物学活性影响研究

目的以磁源空间磁场定量计算为依据,研究正常培养条件下与缺氧培养条件下不同强度永磁磁场对人皮肤成纤维细胞的影响。方法选用人皮肤成纤维细胞,以5×104/mL密度每孔100μL种于96孔板。磁源N面中心实测磁感应强度分别为3.4、5.6、13.8、27.8、52.6、107.0、178.9、292.2 mT的8组磁源,前6组(钐钴合金)尺寸分别为Φ8.0 mm×2.0 mm,后两组(钕铁硼)尺寸分别为Φ8.0 mm×1.5 mm、Φ8.0 mm×2.5 mm,均轴向充磁,即为A、B、C、D、E、F、G、H组。将8组磁场分别作用于正常培养条件下与缺氧培养条件下的人皮肤成纤维细胞,并设对照组(加磁组与非加磁组),3 d后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别检测细胞活力,做统计学分析。结果两种培养条件下8组不同强度的加磁组人皮肤成纤维细胞的MTT数值与非加磁组的对照组相比较均有升高,正常培养中磁场强度为B、C、D、E、F、G、H组与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),且随着磁场强度的增加活性值越高;缺氧培养中磁场强度为G、H组与对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验中选取的永磁磁场对于人皮肤成纤维细胞有增殖和降低损伤的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响。方法采用细胞培养、MTT、ELISA法、氯胺T和RT—PCR法检测bFGF在不同作用剂量下对瘢痕来源的成纤维细胞生长增殖和细胞外基质（ECM）合成的影响。结果（1）MTT检测bFGF对瘢痕成纤维细胞有明确的促增殖作用，并具有剂量相关性；（2）氯胺T法显示实验组和对照组HPr含量无显著性差异，RT—PCR法显示各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达水平无明显变化；说明bFGF对瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成无促进作用；（3）ELISA法表明随着bFGF作用浓度的升高，FN的表达表现为增高趋势，且以100ng／ml浓度下作用最显著。结论bFGF可以促进创面愈合，但不引起瘢痕的过度形成。     

机械牵张对兔角膜成纤维细胞细胞外基质基因表达的影响

目的 研究机械牵张与白介素-1β（IL-1β）联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响。方法 对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15%、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶（MMPs）、基质金属蛋白酶的组织抑制剂（TIMP-1）和I型胶原α1（Collagen Iα1）mRNA表达变化水平。结果 IL-1β单独作用可以诱导角膜成纤维细胞MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达;MMP-1和MMP-3 mRNA表达随时间而降低,MMP-9、TIMP-1、Collagen Iα1 mRNA则随时间而增加;IL-1β与机械牵张联合作用使MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平上调,TIMP-1和Collagen Iα1 mRNA表达下调,且具有时间依赖。单独机械牵张使Collagen Iα1 mRNA表达下降,IL-1β与机械牵张联合作用使其表达进一步下调,且具有时间依赖性。结论 机械牵张与炎性因子联合作用可加剧角膜组织破坏,促进角膜膨隆的发生发展。     

电离辐射影响人成纤维细胞基因表达谱的数据挖掘

目的从基因表达谱水平探讨2株人成纤维细胞和低剂量电离辐射3个时间点的可能交互效应，掘其差异表达基因。方法应用Gene Sifter在线软件和Panther生物学信息数据库，对下载于NCBI的GEO（Gene Expression Omnibus）数据库的12个样品GSM（数据包含2株成纤维细胞和每株细胞3个辐照时间点）．运用混合设计二因子的Two-Way ANOVA方法进行数据挖掘，并对差异表达基因进行聚类、主成分分析、模式分类、功能归类分析，最后用GenCLiP软件进行文献挖掘。结果获得41条交互效应的差异表达基因，主成分分析示每株细胞24h时间点的特征向量明显远离其他向量，差异基因表达可分为3种模式。基因功能归类分析提示，多个生物通路如有丝分裂、细胞周期、细胞结构、细胞凋亡等被显著激活，其中参与有丝分裂和细胞周期的差异表达基因由细胞骨架基因、微管运动基因、蛋白激酶基因等构成，细胞凋亡等效应获得文献支持。结论2株人成纤维细胞和低剂量电离辐射3个时间点有交互效应，存在基因差异表达，这些基因有可能成为鉴定成纤维细胞和辐照时间交互效应的生物标记。     

力学刺激对角膜成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的研究在体及离体条件下不同力学环境对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bF-GF)表达的影响,探索力学因素在准分子激光原位角膜磨镶术(laser assisted in situ keratomileusis,LASIK)术后角膜损伤修复中的作用。方法建立不同切削量的LASIK手术动物模型,使在体角膜处于不同力学环境中,并于LASIK术后1周和1月处死实验动物提取组织蛋白。此外,采用Flexcell 4 000细胞力学加载系统对原代提取的兔角膜成纤维细胞施加频率为0.1 Hz、拉伸幅度分别为5%、10%和15%的周期性机械拉伸,并于拉伸后6 h和24 h后取细胞培养液上清。采用ELISA方法检测bFGF含量。结果 LASIK术后1周,角膜基质床残余30%组与对照组相比,bFGF含量显著增高(P<0.05);术后1月回落至正常水平,各组之间无显著性差异。不同时间点同一手术方式之间比较发现,仅30%组1周和1月有显著差异(P<0.05)。体外周期性拉伸实验表明拉伸6 h后1,5%拉伸组bFGF含量较对照组显著增高(P<0.05)2,4 h后显著性降低(P<0.05)。结论力学因素参与了早期角膜组织及角膜成纤维细胞bFGF表达的调节,bFGF在LASIK术后角膜组织修复中发挥了一定作用。     

尼古丁对人牙周膜成纤维细胞超微结构及分泌细胞因子的影响

 [摘 要] 目的:探讨尼古丁对牙周膜成纤维细胞（PDLFs）形貌、超微结构、增殖、细胞周期和细胞因子生成的影响。方法:用原子力显微镜及透射电镜观察尼古丁作用PDLFs后的细胞形貌及超微结构;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期与凋亡率;ELISA法检测培养上清细胞因子碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、胰岛素样生长因子I（IGF-I）、转化生长因子 β1（TGF-β1）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）和血管内皮生长因子（VEGF）水平。结果:尼古丁作用于PDLFs后,细胞固缩,出现大量空泡,水肿,胞核固缩崩解,粗面内质网扩张成池,线粒体嵴扩张;细胞增殖受抑制,呈时间和浓度依赖性;细胞G0/G1期比例增高,G2期和S期比例下降,凋亡率增高,周期阻滞和凋亡率随尼古丁浓度递增而增加;尼古丁作用后,PDLFs分泌bFGF和IGF-I水平下降,ICAM-1、VCAM-1、TGF-β1及VEGF水平均上升。结论: 尼古丁使PDLFs形貌及超微结构出现凋亡改变,并抑制其增殖。尼古丁可能通过调控细胞因子的分泌水平影响PDLFs的修复功能。     

人胚胎成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的作用

目的：比较人和小鼠胚胎成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的作用,为胚胎干细胞定向诱导各系统细胞应用于临床,消除异种蛋白污染打下基础。方法：分别采用人胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层细胞,支持人受精卵的培养,观察其增殖和分化情况。结果：人和小鼠胚胎成纤维细胞分别加入白血病抑制因子（hLIF）均能很好支持人胚胎干细胞生长增殖,并保持未分化状态。结论：完全可以使用人胚胎成纤维细胞支持人胚胎干细胞增殖,消除异种蛋白污染的可能性,为胚胎干细胞定向诱导分化发育应用于临床打下坚实基础。     

人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用

目的：研究人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞（EG细胞）生长的作用。方法：采用组织块体外培养法体外培养人EG细胞,不添加任何细胞因子,利用源于胚胎组织自身的成纤维细胞作为饲养层,收集培养3d和9d的上清液,用抗体夹心ABC-ELISA法定量检测其白血病抑制因子（LIF）、干细胞生长因子（SCF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量。培养的细胞用免疫细胞化学法进行SSEA-3、OCT-4的检测。结果：培养9d的上清液中3种因子均含量为LIF55．25pg／ml、SCF90．39pg／ml、bFGF26．06pg／ml．均高于培养3d相应的平均含量。培养的细胞SSEA-3、OC-4呈强阳性表达。结论：上清液中LIF、SCF和bFGF的含量与胚胎成纤维细胞的生长呈正比,胚胎成纤维细胞能分泌这些细胞因子,以维持EG细胞体外增殖并抑制其分化。     

人胚胎成纤维细胞与小鼠胚胎成纤维细胞生物学特性比较

探讨人胚胎成纤维细胞用于人胚胎干细咆体外长期培养的可行性，以含10％胎牛血清的DMEM(低糖)溶液为培养基，对人胚胎成纤维细胞的生长形态、对胰酶的敏感性、生长曲线及细胞周期进行研究，并与小鼠胚胎成纤维细胞作比较。结果显示，人胚胎成纤维细胞和小鼠胚胎成纤维细胞在体外均为贴壁生长型细胞，与小鼠胚胎成纤维细胞相比，人胚胎成纤维细胞生长更旺盛，且细胞寿命更长；在室温条件下，对0．25％胰酶更敏感，消化时间不宜超过3min。提示人胚胎成纤维细胞不仅在生长状况上与小鼠胚胎成纤维细胞类似，而且作为人胚胎干细胞体外长期培养的饲养层，在使用期限上优于后者，值得进一步研究。     

重组人内抑素对人瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及增殖的影响

目的 观察重组人内抑素(rhEndostatin)对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)增殖的影响。方法 体外培养及鉴定人KFs; 应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分别检测不同浓度rhEndostatin (6.25×10^-6、1.25×10^-5、2.50×10^-5、5.00×10^-5、1.00×10^-4mg/L)作用24h、48h、72h后对KFs增殖的影响,并同时观察其形态变化。结果 组织块接种7~8d后,其周边可见少许梭形细胞,继之细胞逐渐增多并以组织块为中心呈放射状生长;传2代培养的细胞单层排列,形态均一,呈长梭状,折光性好。细胞波形蛋白免疫化学染色显示胞质均呈棕黄色。rhEndostatin(6.25×10^-6 mg/L浓度组除外)能明显抑制KFs的增殖(P <0.05),抑制效应与rhEndostatin浓度和作用时间呈一定的依赖关系; 其中,5.00×10-⁵ mg/L 和1.00×10^-4 mg/L组rhEndostatin作用48 h后,细胞生长缓慢,体积变小,数目减少,排列紊乱。结论 重组人内抑素对人KFs增殖具有抑制作用。     

包皮成纤维细胞作为饲养层对人胚胎生殖细胞生长的影响

目的 以人包皮成纤维细胞为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞,观察饲养层对其生长的影响,并对人胚胎生殖细胞进行鉴定。 方法 分离培养4～5岁小儿包皮成纤维细胞,取P₃～P₃₀代细胞用丝裂霉素灭活后铺板备用,酶联免疫吸附测定（ELISA）双抗夹心法检测其分泌物成纤维细胞生长因子（FGF）的含量;分离培养5～11周人胚胎原始生殖细胞,在不添加任何细胞因子的人包皮成纤维细胞饲养层上培养人胚胎生殖细胞;细胞化学法检测人胚胎生殖细胞碱性磷酸酶的活性,免疫细胞化学法检测其胚胎表面特异性抗原SSEA-1及SSEA-4的表达,RT-PCR法检测Oct-4的表达。 结果 包皮成纤维细胞可以传60代以上,P₃～P₃₀代均适宜作饲养层;P₃～P₃₀代包皮成纤维细胞上清液中FGF含量在(172.09±2.66)pg/L～(245.25±1.66)pg/L之间波动。分离培养的人胚胎生殖细胞在饲养层上可形成典型的胚胎生殖细胞集落,体外连续培养超过3代,其碱性磷酸酶活性呈强阳性,集落未分化标志检测显示SSEA-l、SSEA-4呈阳性,Oct-4表达阳性。 结论 用人包皮成纤维细胞作为饲养层能支持人胚胎生殖细胞的生长并维持未分化状态。     

维生素C对培养人胚成纤维细胞LDL受体活性的影响

研究了维生素Ｃ对培养的人胚皮肤成纤维细胞低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体活性的影响。从ＬＤＬ受体饱和分析和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图以及单点分析表明，维生素Ｃ可增加细胞ＬＤＬ受体数量，但不影响受体对ＬＤＬ的亲和力。提示维生素Ｃ可通过增加ＬＤＬ受体数量而促进胆固醇的代谢，具有一定的抗动脉粥样硬化作用。     

肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响

目的:探讨肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。方法:将分离纯化的小鼠骨髓源性肥大细胞(BMMC)与眼眶成纤维细胞(OFb)共育,共育分为两组:两种细胞接触共育组和非接触共育组,眼眶成纤维细胞单独培养为对照组;应用光镜、电镜及细胞生长计数等方法研究肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。结果:与BMMC接触共育的OFb增殖活跃,呈复层生长,单位面积内细胞计数明显增加;接触共育组中OFb的增殖数分别与非接触共育组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);而非接触共育组的OFb增殖数和对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05);电镜见接触共育组OFb中粗面内质网(RER)增生扩张,BMMC与OFb紧密接触,部分BMMC有脱颗粒现象。结论:肥大细胞对眼眶成纤维细胞的生存和增殖有显著的促进作用,并使其功能活跃,这种作用主要是通过两种细胞间的紧密接触而实现的。     

肝细胞生长因子对人Tenon's囊成纤维细胞低密度脂蛋白受体表达的影响

目的:探讨人Tenon's囊成纤维细胞(HTFs)在肝细胞生长因子(HGF)刺激下,其低密度脂蛋白受体(LDLr)表达的动态变化。方法:分别以0、10、20、40、80和160μg/L的HGF刺激人Tenon's囊成纤维细胞12、24和48 h;应用MTT法检测HTFs的增殖率;real-time PCR定量分析不同增殖状态的HTFs上LDLr mRNA的表达水平;Western blot法检测不同增殖状态HTFs上LDLr蛋白表达水平的变化。结果:HTFs上LDLr mRNA及蛋白的表达水平均与HTFs的增殖率呈正相关,HGF以时间和浓度依赖的方式促进HTFs的增殖,同时以时间和浓度依赖的方式促进LDLr的表达(P0.05)。结论:在HGF刺激下,增殖活跃的HTFs上LDLr呈高表达状态,提示增殖异常活跃的HTFs上高表达的LDLr,可能成为一种新型的抗代谢药物作用靶点,尤其是在抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的研究中可能得到广泛应用。     

循环纤维细胞和人胚肺成纤维细胞的比较研究

目的 比较人循环纤维细胞与人胚肺成纤维细胞的形态学特征和合成胶原的能力.方法 体外分离、培养人循环纤维细胞,用酶水解法和天狼星红染色法分别测定培养液中的羟脯氨酸含量和细胞层中的胶原含量,比较其在不同分化阶段与培养的人胚肺成纤维细胞合成胶原的能力,同时用Western blotting分析其分泌胶原的类型.结果 循环纤维细胞在体外分化过程中,形态学特征不断变化,从圆形幼小、多聚集成"细胞岛"的纤维细胞向梭形、透明、边缘多纤毛状突起的成纤维细胞样细胞分化,在分化过程中不断合成胶原,尤其在培养的细胞层中伴有大量胶原沉积,所分泌的胶原以I型和Ⅲ型胶原为主.结论 循环纤维细胞能够在体外分化为成纤维细胞样细胞,与人胚肺成纤维细胞具有相似的胶原合成能力.     

重组人碱性成纤维细胞生长因子对人羊水细胞及其它细胞的影响*

目的：探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子（ｒｈｂＦＧＦ） 对人羊水细胞及其它细胞的影响。方法：在低血清培养基培养条件下进行人羊水细胞及Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠巨噬细胞和３Ｔ３ 成纤维细胞,采用四甲基偶氮唑盐（ ＭＴＴ） 比色法和倒置显微镜观察ｒｈｂＦＧＦ 对人羊水细胞存活的影响。结果：人羊水细胞、Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠巨噬细胞和３Ｔ３ 成纤维细胞在０－４ ％ 胎牛血清培养基培养条件下,不同浓度的ｒｈｂＦＧＦ 对羊水细胞的作用存在相关性。结论：ｒｈｂＦＧＦ 能延长羊水细胞、Ｂａｌｂ／ｃ小鼠巨噬细胞和３Ｔ３ 成纤维细胞的存活时间