肝癌病人外周血及骨髓AFP mRNA的检测及意义

目的 通过检测AFP mRNA在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC)病人外周血和骨髓中的表达，探讨AFP mRNA作为HCC微转移指标的可能性。方法 建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系（Nested-RT-PCR)，检测71例HCC、36例肝硬化、9例肝血管瘤、11例肝转移瘤、30例正常对照外周血AFP mRNA和19例HCC、15例血液病骨髓AFP mRNA。结果 71例HCC外周血中38例AFP mRNA表达阳性（53．5％），肝硬化、肝血管瘤、肝转移瘤和正常对照均为阴性。HCC外周血AFP mRNA检出率与血清AFP值无明显相关（P＞0．05），而与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移、肝外转移等临床参数有明显相关（P＜0．05）。19例HCC骨髓中9例AFP mRNA表达阳性（47．4％），15例血液病为阴性。骨髓AFP mRNA检出率与血清AFP值、肝内转移无明显相关（P＞0．05），与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝外转移明显相关（P＜0．05）。外周血和骨髓AFP mRNA的表达呈一致性（P＜0．05）。结论 血循环AFP mRNA可作为CC微转移的早期检测指标。HCC病人外周血和骨髓AFP mRNA的表达与复发转移显著相关，且HCC病人外周血和骨髓AFP mRNA的表达呈一致性，联合检测有助于提高结论的可靠性。     

外周血谷氨酰转肽酶mRNA-H亚型与AFP检测对评估原发性肝细胞肝癌病人术后预后价值的比较

目的深入探讨原发性肝细胞肝癌（HCC）病人外周血谷氨酰转肽酶（GGT）mRNA—H亚型表达与肝癌术后预后指标的关系，并与AFP比较，寻找评估肝癌预后更可靠的新指标。方法对78例HCC病人外周血应用逆转录聚合酶链反应方法检测GGTmRNA—H亚型；并运用放射免疫测定法检测AFP水平。对49例无门脉和（或）肝外转移的HCC病人进行随访研究。结果有肝内转移、门静脉癌栓及远处转移组其外周血GGT mRNA—H亚型阳性率显著高于对照组（P〈0．05）；在随访期内外周血GGTmRNA—H阳性组门脉及肝外转移的发生率比例明显高于阴性组（P〈0．05），而AFP阳性及阴性组的转移发生率相似。结论HCC病人外周血细胞GGTmRNAH亚型表达阳性者，术后出现转移的可能性高、预后差；GGTmRNAH亚型与AFP相比，有望成为评估肝癌预后更可靠的新指标。     

肝癌患者外周血AFP mRNA表达的临床意义

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)患者外周血AFP mRNA表达在血行播散中的意义.方法:抽取30例HCC患者外周静脉血5ml,应用RT-PCR对血中AFP mRNA进行扩增检测,并与各对照组比较.结果:30例HCC患者中,AFP mRNA的阳性率为46.7%(14/30);AFP mRNA的表达阳性率与肝癌TNM分期、肿瘤大小、有无门脉癌栓及有无肝外转移有显著的相关性(P＜0.05),而与血清AFP水平无关(P＞0.05).结论:AFP mRNA是反映原发性肝癌患者血中是否存在肝癌细胞的灵敏指标.     

肝癌患者不同部位血甲胎蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的 检测肝癌患者不同部位（门静脉、肝静脉及外周静脉）血甲胎蛋白（AFP）mRNA的表达,了解肝细胞肝癌血行播散的规律。方法 采用巢式逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）检测技术,测定20例肝癌患者门静脉、肝静脉及外周血AFPmRNA的表达。结果 全组病例门静脉、肝静脉血AFPmRNA阳性率（65％）高于其外周血AFPmRNA阳性率（40％－45％）,但差异无显著性（P＞0．05）。肿瘤≤5cm患者的肝静脉血AFPmRNA阳性率（70％）明显高于外周血（20％,P＜0．05）,门静脉血AFPmRNA阳性率（60％）也高于外周血（30％）,但差异无显著性（P＞0．05）。肿瘤＞5cm患者的门静脉、肝静脉血AFPmRNA阳性率接近于外周血AFPmRNA的阳性率。结论 肿瘤＞5cm的中晚期肝癌患者,其外周血中AFPmRNA的表达能较好地反映脱落癌细胞的血行播散情况;肿瘤≤5cm的患者虽然其外周血AFPmRNA阳性检出率较低,但肝静脉血的AFPmRNA明显高于外周血,提示肝内已有肿瘤播散,此时直接检测肝内门静脉或肝静脉血的AFPmRNA表达能更准确地反映癌细胞血行播散情况。     

原发性小肝癌微波消融治疗前后外周血播散癌细胞及免疫功能变化

目的研究微波消融治疗原发性小肝癌（≤5cm）对外周血播散癌细胞及细胞免疫功能影响。方法微波消融治疗19例小肝癌病人，手术切除治疗21例。于术前、术后30min、1d及7d采外周静脉血，巢式RT—PCR检测AFP mRNA，监测CD3、CD4、CD8及CD4／CD8。结果巢式RT—PCR检测外周血AFP mRNA，两组40例病人术前阳性率为40％（16／40）；微波组和手术组均有3例病人治疗前AFP mRNA阴性，术后30min转为阳性，两组之间比较无差异；微波组术后7d内外周血细胞免疫功能无明显变化，手术组降低。随访1～16个月，4例肝内复发或远处转移病人治疗前后AFP mRNA均阳性。结论与手术切除相比，微波消融治疗原发性小肝癌也可同样程度地造成癌细胞脱落人血，对外周血细胞免疫功能（7d内）无明显影响，有其自身特点；治疗前后外周血AFP mRNA均呈阳性表达（7d内）者，复发／转移的可能性增大。     

检测肝癌肝移植患者术前和术中肿瘤播散状况的临床意义

目的 探讨检测肝癌肝移植患者术前和术中肿瘤细胞播散状况的意义，观察其与肿瘤1年复发率和患者存活率的相关性。方法 2003年10月至2004年2月共为30例甲胎蛋白（AFP）阳性的肝癌患者进行肝移植，术前和术中取患者外周静脉血、外周动脉血、门静脉血和肺动脉血，采用逆转录-聚合酶链法（RT-PCR）联合荧光标记探针杂交法定量，检测血液中游离的肝癌细胞内特异AFP mRNA的表达，计算各部位血液的AFP mRNA阳性率及其拷贝数（1g值），统计患者1年肿瘤复发率及存活率。结果 30例肝癌肝移植患者术中外周静脉血、外周动脉血、门静脉血、肺动脉血中播散的肿瘤细胞内AFP mRNA阳性率与术前相比明显升高，且以肺动脉血最为敏感，阳性率为63．3％（P〈0．01）；在各相应部位的血液中，术中播散的肿瘤细胞内AFP mRNA拷贝数（1g值）也较术前明显升高（P〈0．05）；术前和术中肿瘤细胞播散的患者中，术后1年肿瘤复发率高，但患者的1年存活率与无肿瘤细胞播散者比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 RT-PCR联合荧光标记探针杂交法能够检测到肝癌患者血液中播散的肿瘤细胞，并且以肺动脉血中阳性率最高。肝移植手术操作过程中可以引起肿瘤细胞播散，其结果与肿瘤复发相关。     

围手术期检测肝细胞癌病人外周血AFP mRNA的临床意义

目的 检测围手术期肝细胞癌病人外周血AFP mRNA，通过随访评估其预后价值。方法 通过巢式RT-PCR的方法，在围手术期检测了45例肝细胞癌病人外周血中AFP mRNA的表达，并进行了1～20个月不等的随访。结果 在45例肝细胞癌病人外周血中，AFP mRNA的检出率分别是术前51．1％，术后7d24．4％，术后28d22．2％。多因素统计分析提示，术后28d外周血检出AFP mRNA是提示病人复发的独立预后因素。结论 采用巢式RT-PCR的方法检测肝细胞癌病人术后28d外周血AFP mRNA有助于预测肝癌转移复发。     

原发性肝癌患者外周血GPC-3mRNA的表达与微转移的关系

目的探讨原发性肝细胞癌（HCC）患者外周血的Glypican-3（GPC-3）mRNA检测用于诊断HCC早期微转移的可行性。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测39例原发性肝细胞癌（HCC）、19例肝炎和肝硬化、10例转移性肝癌、10例肝血管瘤患者、19例健康献血员外周血GPC-3mRNA水平。结果HCC患者外周血中，GPC-3mRNA的检出率为62％（24／39），GPC-3mRNA的检出率与肿瘤直径77％（17／22）、癌结节数目67％（19／24）、临床TNM分期76％（19／25）、门静脉癌栓90％（9／10）、远处转移100％（6／6）等临床参数密切相关。GPC-3mRNA在转移性肝癌、肝炎和肝硬化、肝血管瘤患者及健康献血员外周血中均未检出。结论巢式RT—PCR检测HCC患者外周血单核细胞GPC-3mRNA是一种早期发现原发性肝细胞癌血道播散的可靠而又敏感的实验方法。     

外周血甲胎蛋白mRNA和黑色素瘤抗原-1 mRNA联合表达与肝细胞癌术后复发转移的关系

目的 探讨外周血甲胎蛋白（AFP）mRNA和黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）mRNA联合表达在早期发现肝细胞癌患者术后复发或转移的意义。方法 应用巢式逆转录聚合酶链反应技术分别在术前、术后1周和2个月检测142例行根治性切除的肝细胞癌患者外周血中AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达，随访时间从术后至22个月，中位随访时间为15．5个月。结果 外周血中MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期呈正相关：肿瘤病期越晚，外周血中肝癌细胞的检出率越高（χ^2=17．873，P〈0．01）。AFPmRNA和Mage-1mRNA阳性率均与癌结节数目、门静脉癌栓、肝内、外转移等临床参数显著相关（χ^2=11．510，χ^2=15、149，χ^2=11．653，χ^2=6．805，均P〈0.01），而与肝癌分化程度、肿瘤直径等无相关性（χ^2=1．513，χ^2=1．343，均P〉0．05）。术后55例患者出现复发或转移，其中38例患者外周血MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA持续阳性，14例由术前阴性转为阳性。而62例由术前阳性转为术后阴性者，随访中未见复发或转移。术后外周血AFPmRNA和／或MAGE-1mRNA阳性组中，有88．1％（52／59）的患者出现复发或转移，而阴性组中复发或转移者仅占3．6％（3／83），两组比较，差异有统计学意义（χ^22=103．817，P=0．000）。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达可能早期发现肝细胞癌术后复发或转移，可以作为评估预后的指标。     

影响肝细胞癌患者肝移植后肿瘤复发及预后的相关因素

目的分析影响肝细胞癌（HCC）患者肝移植后肿瘤复发和预后的相关因素，总结HCC患者肝移植的选择标准。方法回顾性分析118例HCC肝移植受者的临床资料，应用单因素和多因素的分析方法，分析临床和病理等相关因素对HCC患者肝移植后肿瘤复发及预后的影响，筛选出影响肿瘤复发和预后的危险因素，并结合国际HCC肝移植受者选择标准运用于临床。结果HCC患者肝移植围手术期死亡8例，对存活的110例随访1～32个月，其中有41例肿瘤复发（37．3％），死亡39例（35．5％）；12、18和24个月的累积存活率分别是84．55％、70．30％和62．24％；12、18和24个月的无瘤存活率分别是69．05％、66．93％和61．38％。单因素分析结果显示癌栓形成、米兰标准、肿瘤大小、肿瘤分化程度以及pTNM分期对HCE患者肝移植后肿瘤复发有显著影响；癌栓形成、米兰标准、术前血清甲胎蛋白（AFP）水平、肿瘤分化程度以及pTNM分期对患者预后有显著影响；多因素分析显示，癌栓形成和肿瘤分化程度是肿瘤复发的独立影响因素，癌栓形成和术前AFP水平则是影响预后的独立危险因素。结论癌栓形成和肿瘤分化程度是影响HCC患者肝移植后肿瘤复发的独立因素，而癌栓形成和术前AFP水平是影响预后的独立危险因素。     

肝细胞癌切除术后早期肝内复发的危险因素及对预后的影响

目的 探讨肝细胞癌(hepatoeellular carcinoma,HCC)切除术后早期肝内复发的预测因素及复发对预后的影响.方法 收集184例HCC患者切除术后肝内复发病例的临床病理资料,回顾性分析可能与早期肝内复发有关的13项临床病理学因素以及复发时间对HCC患者复发后生存期的影响.结果 单因素分析表明术前血清AFP>100 ng/ml(P=0.009)、肿瘤直径>5 cm(P<0.001)、血管浸润(P=0.001)以及术中输血(P=0.025)与HCC切除术后早期肝内复发有关;白蛋白<35S/L(P=0.083)可能与术后早期肝内复发有关.多因素分析表明 AFP>100 ng/ml(P=0.015)、肿瘤>5 cm(P=0.001)、微血管浸润(P=0.004)是与HCC切除术后早期肝内复发的独立的预测因素.早期肝内复发组复发后中位生存期(12个月)明显低于晚期复发组(18个月)(P=0.012).结论 术前AFP、肿瘤大小和血管浸润是HCC术后早期肝内复发的预测因素.HCC术后早期肝内复发病例预后不良.     

肝细胞癌切除术后早期肝内复发的危险因素及对预后的影响

目的 探讨肝细胞癌(hepatoeellular carcinoma,HCC)切除术后早期肝内复发的预测因素及复发对预后的影响.方法 收集184例HCC患者切除术后肝内复发病例的临床病理资料,回顾性分析可能与早期肝内复发有关的13项临床病理学因素以及复发时间对HCC患者复发后生存期的影响.结果 单因素分析表明术前血清AFP>100 ng/ml(P=0.009)、肿瘤直径>5 cm(P<0.001)、血管浸润(P=0.001)以及术中输血(P=0.025)与HCC切除术后早期肝内复发有关;白蛋白<35S/L(P=0.083)可能与术后早期肝内复发有关.多因素分析表明 AFP>100 ng/ml(P=0.015)、肿瘤>5 cm(P=0.001)、微血管浸润(P=0.004)是与HCC切除术后早期肝内复发的独立的预测因素.早期肝内复发组复发后中位生存期(12个月)明显低于晚期复发组(18个月)(P=0.012).结论 术前AFP、肿瘤大小和血管浸润是HCC术后早期肝内复发的预测因素.HCC术后早期肝内复发病例预后不良.     

AFP mRNA detected in bone marrow by real-time quantitative RT-PCR analysis predicts survival and recurrence after curative hepatectomy for hepatocellular carcinoma

OBJECTIVE: To determine whether detection of hepatocellular carcinoma (HCC) cells by real-time quantitative RT-PCR targeting of alpha-fetoprotein mRNA (AFP mRNA) before or after curative hepatectomy predicts HCC recurrence and patient survival. SUMMARY BACKGROUND DATA: The presence of cancer cells in peripheral blood and/or bone marrow in patients with malignant disease has been reported to correlate with outcome. METHODS: Between July 2000 and June 2005, 136 consecutive HCC patients underwent primary curative hepatectomy. Bone marrow aspirated preoperatively, and peripheral blood samples collected before and after operation were subjected to real-time quantitative RT-PCR analysis using AFP mRNA as a target molecule. Median follow-up was 23 months (range, 6-54 months). Patient survival (PS), disease-free survival (DFS), and clinicopathologic features were compared between patients with positive and negative AFP mRNA. RESULTS: Twenty-four patients died (22 from HCC). HCC recurred in 66 patients (hepatic in 37 [56.1%]; hepatic and remote in 17 [25.8%], and remote alone in 12 [18.2%]). Bone marrow was positive for AFP mRNA in 38 patients (27.9%) and negative in 98 (72.1%). One- and 3-year PS was 96.6% and 91.4%, respectively, with negative AFP mRNA versus 86.2% and 55.5%, respectively, with positive AFP mRNA (P < 0.0001). One- and 3-year DFS were 73.2% and 44.8%, respectively, with negative AFP mRNA versus 54.5% and 25.8%, respectively, with positive AFP mRNA (P = 0.0399). Portal vascular invasion, tumor size, multiple tumors, and tumor differentiation correlated with inferior PS and DFS on univariate analysis. On multivariate analysis, positive AFP mRNA was the most important risk factor for PS (P = 0.001) and DFS (P = 0.0165). In addition, positive AFP mRNA in peripheral blood after operation tended to predict reduced DFS. CONCLUSION: AFP mRNA in the bone marrow and systemic circulation during the perioperative period predicts patient survival and recurrence after curative hepatic resection for HCC.     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫抑制肝癌病人术后复发和转移

目的 研究肿瘤抗原激活的树突状细胞（DC0在肝癌病人体内诱导的抗肿瘤免疫能否抑制肝癌术后复发和转移。方法 分离肝癌根治性切除术后病人外周血DC,以人肝癌细胞系HepG2细胞粗提物激活DC,以粒（巨噬）细胞集落刺激因子（GM－CSF）和白介素－4（IL－4）联合刺激DC,DC回输病人,检测肝癌病人外周血AFP mRNA。结果 在AFP mRNA阳性组织中,治疗组11例中仅1例AFP mRNA仍为阳性,而对照组11例中9例AFP mRNA仍为阳性;在AFP mRNA阴性组中,治疗组13例AFP mRNA仍全部为阴性,而对照组13例中4例AFP mRNA为阴性。结论 肿瘤抗原激活的DC在肝癌病人体诱导的抗肿瘤免疫能够抑制术后肝癌复发和转移。     

Genetic detection and clinical applications in patients with hepatocellular carcinoma

This paper provides a review of the known genetic diagnostic indicators of liver cancer. The correlation between the genetic diagnosis and clinical outcome in patients with hepatocellular carcinoma (HCC) has been widely reported, based on the detection of liver-specific mRNA or tumor DNA in the blood. Our results suggest that an alteration of alpha-fetoprotein (AFP) mRNA in peripheral blood from HCC patients during the perioperative period might permit the prediction of early recurrence after surgery. The presence of circulating HCC cells may be indicative of metastasis if liver-specific AFP mRNA is detected in the peripheral blood. However, some studies showed that sensitive RT-PCR might possibly give rise to false positivity because nontumor hepatocytes would also express low levels of AFP mRNA. Recently, quantification of AFP mRNA for HCC cell detection using real-time PCR or semiquantitative RT-PCR has proven useful in the prediction of metastasis/recurrence. On the other hand, circulating liver tumor DNA such as p16 and p15 methylation and mitochondrial mutations in the plasma and serum of liver cancer patients might be useful for monitoring, similar to the tumor markers. In future, HCC-specific genes and genes sensitive to radiation and chemotherapy are expected to have wide-spread clinical applications.     

巢式逆转录多聚酶链反应检测循环性肝癌细胞及其临床意义

目的应用巢式逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测血液中播散的循环性肝癌细胞并探讨其意义。方法抽取９３例肝癌患者及３７例对照组患者（１５例肝炎后肝硬变患者,１２例慢性肝炎患者,１０例健康人）周围静脉血液各５ｍｌ,应用巢式ＲＴＰＣＲ检测其周围静脉血液中ＡＦＰｍＲＮＡ。结果共有５０个肝癌血液标本被检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中无一例血液中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ,ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期（ＴＮＭ）、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显联系（Ｐ＜００５）。２１例伴有肝外远处转移的原发性肝癌血液标本均被检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（１００％）,没有远处转移的７２例肝癌血液标本中２９例检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（４０３％）。结论ＡＦＰｍＲＮＡ可以作为肝癌细胞血液转移的标志,也可作为肝癌远处转移的预测性指标之一。