I-Aβ1基因表达与小鼠膜性肾小球肾炎

目的：探讨I—Aβ1基因与实验性小鼠膜性肾小球肾炎发病之间的相关性。方法：复制并鉴定小鼠膜性肾小球肾炎动物模型，提取实验组和对照组总RNA，实时荧光定量PCR检测I—Aβ1基因mRNA表达量。结果：模型组I—Aβ1基因mRNA表达量明显高于N-BSA组、NS组和空白对照组（P〈0．01）差异有统计学意义；N—BSA组、NS组和空白对照组彼此之间的差异无统计学意义。结论：I-Aβ1基因过量表达参与了实验性小鼠膜性肾小球肾炎发病过程，可能是通过I-Aβ1基因转录、翻译活性上调使小鼠对外源性抗原反应性增强，促进了小鼠膜性肾小球肾炎发生。     

实验性膜性肾小球肾炎大鼠红细胞免疫功能的初步研究

对实验性膜性肾小球肾炎大鼠红细胞 Ｃ３ｂ 受体花环率和红细胞免疫复合物花环率进行检测。发现：膜性肾小球肾炎大鼠 Ｃ３ｂ 受体活性明显降低。结果提示红细胞免疫功能异常可能与膜性肾小球肾炎的发病有关。     

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞酸性核糖体蛋白P0表达的影响

目的筛选转染人转化生长因子β1(TGFβ1)基因的大鼠系膜细胞相关反应性基因,并观察TGFβ1对其中之一的酸性核糖体蛋白P0的影响。方法筛选经SSHPCR和反向杂交法构建的大鼠系膜细胞TGFβ1相关反应性基因cDNA消减杂交库,并进行测序及与GenBank资料作同源性比较;分别用NorthernBlot、半定量RTPCR观察TGFβ1、酸性核糖体蛋白P0基因在培养的大鼠系膜细胞和动物模型体内表达的变化。结果经筛选获得的28个反应性基因cDNA片段,长度为59～535bp,其中7个片段均和已知酸性核糖体蛋白P0基因同源性一致。在转染TGFβ1的大鼠系膜细胞中P0基因mRNA表达增强;在大鼠抗Thy1系膜增生性肾小球肾炎模型的病变肾组织中,P0基因mRNA和TGFβ1基因mRNA的上调表达趋势一致。结论酸性核糖体蛋白P0是一个与TGFβ1基因表达密切相关的基因,可能参与TGFβ1介导的肾小球肾炎和肾小球硬化的发生机制。     

家兔实验性膜性肾小球肾炎的光镜与电镜图象立体学定量分析

采用Border膜性肾小球肾炎模型作为实验组,另设正常对照组,从光镜与电镜图象立体学定量角度观察分析膜性肾小球肾炎的病理变化。结果表明:实验组上皮电子致密沉积物及肾小球各定量参数与对照组比较有显著和极显著差异性(P<0.05和P<0.001)。实验组第8周新月体(或环状体)的体密度为17.39％。对照组与实验组基底膜厚度分别为168nm和627nm(P<0.001)。     

腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎的治疗作用

目的:研究腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎的治疗作用.方法:以猪心肌肌凝蛋白免疫BALB/c小鼠,诱导自身免疫性心肌炎;实验组以腺病毒为载体转移TGF-β1基因,对照组则转移Lacz基因;采用ELISA法测定血浆TGF-β1浓度,间接ELISA法检测肌凝蛋白自身抗体,荧光酶联免疫法检测肌钙蛋白I;从心肌炎细胞浸润程度、血浆肌钙蛋白I水平、血浆肌凝蛋白自身抗体滴度评估TGF-β1转基因治疗自身免疫性心肌炎的作用.结果:实验组血浆TGF-β1浓度显著高于对照组和正常小鼠(P<0.01),对照组和正常小鼠无显著性差异;实验组小鼠心肌炎细胞浸润程度明显低于对照组,血浆中的肌钙蛋白I水平和抗肌凝蛋白自身抗体水平低于对照组(P<0.01).结论:腺病毒介导的TGF-β1基因转导对小鼠自身免疫性心肌炎有明显的治疗效果.     

TGF-β1对醛糖还原酶在大鼠系膜细胞及人肾小球肾炎中表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(tranforming growth factor-betal，TGF-β1)对其反应性基因产物醛糖还原酶(aldose reductase，AR)在大鼠系膜细胞中表达的影响及两者在人肾小球肾炎中的表达及其相互关系。方法 采用RT-PCR、Westem blot法观察外源性TGF-B1对大鼠系膜细胞中AR表达的影响；以12例肾小球轻微病变作为对照，对各种不同组织学类型的lgA肾病(15例)，膜性肾炎(14例)，局灶节段增生性肾炎(12例)，狼疮性肾炎(14例)，新月体性肾炎(9例)的人肾穿刺活检标本，应用免疫组织化学ABC方法分别观察TGF-β1和AR在肾炎组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1作用后，大鼠系膜细胞中AR的mRNA表达与蛋白水平升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。各型肾炎中TGF-β1的表达均显著高于对照组；除lgA肾病之外的各型肾炎中AR的表达均显著高于对照组，AR的表达与TGF-β1表达之间具有显著的相关性。结论 TGF-β1相关反应性基因产物AR的表达与TGF-β1的作用密切相关，其可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程。     

疏血通注射液治疗系膜增生性肾炎大鼠的实验研究

目的:探讨疏血通注射液对实验性系膜增生性肾炎大鼠的治疗效果。方法:复制大鼠系膜增生性肾炎模型,治疗组给予疏血通注射液治疗,观察其对模型大鼠蛋白尿、肾功能及血浆蛋白的影响以及对肾脏病理的改善。同时设立苯那普利治疗为对照组。结果:疏血通注射液可明显降低尿蛋白,改善功能,减轻肾小球损伤,减少肾小球系膜细胞增生,其改善作用优于对照组。结论:疏血通对大鼠具有保护肾功能的作用,它能减少肾小球系膜细胞增生,减少细胞外基质增多。     

小鼠竹叶青蛇毒素致系膜增生性肾小球肾炎模型的建立

目的：建立小鼠竹叶青蛇毒素（Habu snake venom，HSV）谤发系膜增生性肾小球肾炎（MsGN）模型。方法：动物随机分模型组和对照组。模型组小鼠注射HSV。对照组仅注射等量的生理盐水。定期测定血尿素氮（BUN）的水平，观察肾组织病理改变，并应用免疫组织化学方法测定TGF—β蛋白，作为增值指标观察系膜细胞的增生情况。结果：小鼠注射HSV1天后即BUN升高。第7天达高峰，2周后仍维持在较高的水平。肾组织病理改变表现为不同程度的系膜细胞破坏，系膜区溶解，随后肾小球内有核细胞增多，系膜细胞增生厦系膜区扩张。模型组TGF—B蛋白在肾小球的阳性表达与正常对照组相比均具有显著差异性。结论：竹叶青蛇毒素注射能引起小鼠系膜增生性肾炎的肾脏病变。     

四种原发性肾小球肾炎患者血清转化生长因子β1测定的临床意义

目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)在四种原发性肾小球肾炎患者血清中的变化规律。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定59例原发性肾小球肾炎患者治疗前与治疗后血清TGFβ1含量。结果:28例系膜增生性肾炎治疗前(47.98±5.10)μg/L,治疗后(32.87±6.12)μg/L;13例膜性增生性肾炎治疗前(46.75±5.78)μg/L,治疗后(30.17±5.92)μg/L;9例膜性肾炎治疗前(44.38±5.27)μg/L,治疗后(31.89±5.76)μg/L;9例轻微病变性肾炎治疗前(32.29±6.15)μg/L,治疗后(20.86±5.41)μg/L;四种类型原发性肾小球肾炎患者血清TGFβ1含量与对照组以及治疗前与治疗后比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:血清TGFβ1含量的测定可对原发性肾小球肾炎的病情、疗效和转归判断有重要的临床意义,是一个有用的实验指标。     

含脂氧素A4受体同源基因真核表达载体的构建与转染系膜细胞

目的构建小鼠脂氧素A4受体同源基因(LRHG)的真核表达载体,克隆后转染小鼠肾小球系膜细胞,观察LRHG编码的脂氧素A4受体样蛋白(LRLP)在系膜细胞中的表达.方法应用PCR方法,以小鼠睾丸cDNA为模板,扩增出LRHG基因片段,插入质粒pGEM-T中,转化入大肠杆菌JM109.扩增阳性重组质粒,经酶切后纯化并测序鉴定目的片段.构建含6×组氨酸(His)基因的真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,转化入大肠杆菌JM109扩增,酶切后再测序鉴定目的片段,抽提质粒后转染系膜细胞,进行Western blot鉴定LRLP的表达.结果测序鉴定表明,克隆的LRHG序列与GenBank中LRHG原序列100%符合,应用抗6×His抗体进行Western blot鉴定系膜细胞中有LR-LP的表达.结论成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,并转染了肾小球系膜细胞,获得了稳定的表达.