小鼠心室肌细胞分离方法的改进

目的:探索更简单实用和重复性好的小鼠心肌细胞分离技术。方法:实验于2005-05/09在大连大学医学院医学研究中心完成。选择8～16周龄昆明小鼠150只,雌雄不拘,体质量30～40g,由大连大学医学院动物中心提供。采用原位主动脉插管和动脉夹固定法酶解分离小鼠心室肌细胞,并在室温下进行全细胞膜片钳记录。结果:可将主动脉插管的时间控制在1.5min内,所获心室肌细胞横纹清晰,一次性复钙可获得50%～60%的耐钙细胞,分离所得细胞可在全细胞膜片钳方式下记录到一过性外向钾电流(Ito)。结论:原位主动脉插管和动脉夹固定酶解分离心室肌细胞的方法简便易行,重复性好,克服了原有方法体外心脏插管时间长,每次插管时间差异较大,分离效果不稳定的弊端。     

尿儿茶酚胺中间代谢产物测定在嗜铬细胞瘤诊断中的应用

嗜铬细胞瘤是具有分泌儿茶酚胺的功能的嗜铬组织肿瘤，主要来自肾上腺髓质、交感神经节和交感神经丛的嗜铬细胞，为常见继发性高血压的一种。患者体内产生过多的儿茶酚胺，临床症状多样，以心血管系统症状为主，兼有其他代谢紊乱症群。嗜铬细胞瘤府隋凶险，变化多端，如不及时治疗易引起心脑血管并发症而导致死亡。高血压发作期间尿肾上腺素及去甲肾上腺素的中间产物：甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素明显增高，对嗜铬细胞瘤的诊断极有帮助。     

小鼠心室肌细胞分离方法的改进

目的：探索更简单实用和重复性好的小鼠心肌细胞分离技术。 方法：实验于2005-05／09在大连大学医学院医学研究中心完成。选择8-16周龄昆明小鼠150只．雌雄不拘，体质量30～40g，由大连大学医学院动物中心提供。采用原位主动脉插管和动脉夹固定法酶解分离小鼠心室肌细胞，并在室温下进行全细胞膜片钳记录。 结果：可将主动脉插管的时间控制在1．5min内，所获心室肌细胞横纹清晰，一次性复钙可获得50％-60％的耐钙细胞，分离所得细胞可在全细胞膜片钳方式下记录到一过性外向钾电流（Ito）。 结论：原位主动脉插管和动脉夹固定酶解分离心室肌细胞的方法简便易行，重复性好，克服了原有方法体外心脏插管时间长，每次插管时间差异较大，分离效果不稳定的弊端。     

儿茶酚胺症的诊断与治疗

目的：探讨提高儿茶酚胺症的诊治水平的方法。方法：回顾分析1991--2001年经手术和病理证实的儿茶酚胺症84例患者临床资料。结果：84例均经手术治疗，良性76例，恶性8例；肿瘤位于肾上腺68例，异住嗜铬细胞瘤8例，肾上腺髓质增生8例。结论：尿VMA检查是儿茶酚胺症定性诊断的主要依据，B超、CT、MRI检查为定位诊断的主要依据，^131I-MIBG检查同时为定性及定位的主要依据。根本治疗方法为手术切除，充分的术前准备，正确的围手术期处理，术后随访十分重要。     

尿儿茶酚胺中间代谢产物测定在嗜铬细胞瘤诊断中的应用

嗜铬细胞瘤是具有分泌儿茶酚胺的功能的嗜铬组织肿瘤,主要来自肾上腺髓质、交感神经节和交感神经丛的嗜铬细胞,为常见继发性高血压的一种.患者体内产生过多的儿茶酚胺,临床症状多样,以心血管系统症状为主,兼有其他代谢紊乱症群.嗜铬细胞瘤病情凶险,变化多端,如不及时治疗易引起心脑血管并发症而导致死亡[1].高血压发作期间尿肾上腺素及去甲肾上腺素的中间产物:甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素明显增高,对嗜铬细胞瘤的诊断极有帮助[2].为了达到早期诊断嗜铬细胞瘤的目的,本文应用酶联免疫方法测定24 h尿儿茶酚胺(UCA)的中间代谢产物水平,了解其在嗜铬细胞瘤早期诊断中的价值.……     

人骨髓间充质干细胞的分离和体外培养

目的:分离培养人骨髓间充质干细胞,研究其在体外生长增殖的生物特性。方法:冲洗手术弃骨骨髓,获取骨髓间充质干细胞进行培养,倒置相差显微镜观察细胞生长情况,绘制生长曲线,免疫细胞化学法鉴定细胞表面抗原,进行染色体核型分析。观察冷冻保存细胞复苏后的生长状况。在地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C的作用下,进行成骨诱导分化。结果:原代和传代培养的细胞呈现梭形外观,具有较强的生长增殖能力;细胞CD44,CD54抗原表达阳性,CD34表达阴性。进行染色体核型分析表明是正常的人二倍体细胞。复苏细胞生物学特性无明显改变。分化细胞表现成骨细胞特性,合成碱性磷酸酶能力增强,矿化结节逐渐出现。结论:建立分离培养人骨髓间充质干细胞和研究其体外培养生物特性的方法,为通过组织工程学方法修复组织损伤奠定基础。     

儿科门诊应对手足口病的护理

肾上腺嗜铬细胞瘤是肾上腺髓质产生儿茶酚胺的嗜铬细胞所发生的肿瘤，手术切除是嗜铬细胞瘤最有效的治疗方法。传统的肾上腺嗜铬细胞瘤切除术对患者损伤重、创伤大、患者术后卧床时间长、恢复慢；Gagner于1992年首先报道了腹腔镜下肾上腺切除术（LA）。腹腔镜下肾上腺嗜铬细胞瘤切除术具有创伤小、出血少、术后血压波动小、患者恢复快的优点心。我院2003年2月-2005年5月共行经腹入路腹腔镜下肾上腺嗜铬细胞瘤切除术12例，取得满意效果，现报道如下。     

肾上腺髓质脂肪瘤23例报告

目的:探讨肾上腺髓质脂肪瘤(adrenal myelolipoma,AML)的临床特点,提高对AML的诊治水平.方法:对23例AML患者的体格检查、实验室检查、影像学检查、治疗、术后病理检查及随访资料进行数理分析.结果:23例中,伴有腰部胀痛3例.其中高血压1例,库欣综合征1例,无明显自觉症状18例.腹部检查触及上腹部包块3例,有上腹部及腰背部触叩痛5例.行B超、CT或MRI术前确诊为AML 22例(96%).经腰部11肋切口开放性手术单纯肿瘤切除18例,腹腔镜切除5例.23例患者均顺利完成手术,术后病理活组织检查均证实为AML.20例随访6个月～10年,均存活,未见肿瘤复发.结论:绝大多数AML无临床症状,影像学检查是术前诊断AML的主要手段,开放性手术或腹腔镜下单纯切除肿瘤可有效治疗该病.     

外周血内皮祖细胞分离和培养的试验研究

【目的】研究从正常健康人外周血中提取内皮祖细胞的细胞形态、成集落数量,细胞数量和活性。【方法】选择正常健康人20例,用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白（fi-bronectin）包被培养板,用加入生长因子VEGF165和bFGF的1640培基培养细胞,7d后贴壁细胞进行细胞分析。流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34和KDR;MTT比色法检测细胞的生长状态;并分析细胞形态和成集落的数量。【结果】体外培养的内皮祖细胞的数量明显增多,活性明显增强。【结论】成人外周血中提取的单个核细胞,在一定条件下可以培养成为内皮祖细胞。     

新生大鼠高纯度少突胶质前体细胞系细胞的培养与鉴定:改良振荡分离纯化法的特点

目的:观察体外培养少突胶质前体细胞的增殖和分化规律,探索其获得纯度较高细胞的实验方法.方法:实验于2004-03-01/08-01在军事医学科学院基础医学所实验室完成.取新生SD大鼠脑皮质体外培养,利用改良的振荡分离纯化法,振荡可将长于星形胶质细胞层表面的少突胶质前体细胞分离出来,差速贴壁以去除其他细胞,传代细胞分别用无血清和有血清的培养液培养,免疫组织化学法测表面抗原进行细胞鉴定.结果:可获得纯度大于95%不同发育阶段的少突胶质细胞系细胞或2型星形胶质细胞.少突胶质前体细胞祖细胞A2B5,O4阳性,不成熟少突胶质细胞O4、O1阳性,成熟少突胶质细胞髓鞘碱性蛋白阳性,2型星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白阳性.结论:改良的振荡分离纯化法是获取高纯度少突胶质细胞系细胞的有效方法.     

偏侧帕金森病样大鼠脑内微囊化牛嗜铬细胞移植实验

目的:观察偏侧帕金森病样大鼠微囊化牛嗜铬细胞脑移植后多巴胺及其代谢产物含量的变化,探讨大鼠异常旋转行为改善的可能途径。方法:实验于1999-01／12在解放军总医院老年医学研究所完成。选择 6-羟基多巴立体定向损毁右侧黑质诱发的偏侧帕金森病样雌性SD大鼠30只,随机分为2组,微囊组20只,对照组10只。微囊组大鼠水合氯醛麻醉后于右侧纹状体立体定向植入约200个以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠为材料含牛嗜铬细胞的微胶囊,对照组大鼠未做脑内移植手术。观察移植术前后阿朴吗啡(0．5 mg／kg)诱发的大鼠旋转行为。利用微透析技术采取帕金森病样大鼠脑纹状体区细胞外微透析液,用高效液相电化学层析法测定对照组大鼠在6-羟基多巴损毁右侧脑黑质后 16周时及两组大鼠在牛嗜铬细胞移植后12周时脑纹状体区细胞外液中单胺类物质含量的变化。结果:纳入偏侧帕金森病样大鼠30只,实验过程中微囊组麻醉意外、脑出血、肢体癫痫样抽搐死亡4只,对照组脑出血、不明原因死亡2 只。进入结果分析微囊组和对照维分别为16和8只大鼠。①微囊组移植后1周开始阿朴吗啡诱发的异常旋转次数明显减少,作用持续6个月以上(F=37．89,P<0．01)。②对照组帕金森病样大鼠右侧脑黑质损毁后16周时右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸和高香草酸水平较左侧明显降低(t=7．012,4．394,P<0．01),右侧脑上述物质含量仅为左侧脑的8％和12％。③移植后12周,微囊组帕金森病样大鼠右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸、高香草酸和5-羟基吲哚乙酸水平较对照组显著升高(t=4．273,4.402,6．445,P<0．01),分别提高了 3．1,5.3和2．7倍。结论:帕金森病样大鼠黑质损毁侧纹状体区多巴胺类物质含量明显降低, 移植微囊化牛嗜铬细胞后含量升高,使帕金森病样大鼠的运动功能障碍明显改善。     

偏侧帕金森病样大鼠脑内微囊化牛嗜铬细胞移植实验

目的：观察偏侧帕金森病样大鼠微囊化牛嗜铬细胞脑移植后多巴胺及其代谢产物含量的变化,探讨大鼠异常旋转行为改善的可能途径.方法：实验于1999-01/12在解放军总医院老年医学研究所完成.选择6-羟基多巴立体定向损毁右侧黑质诱发的偏侧帕金森病样雌性SD大鼠30只,随机分为2组,微囊组20只,对照组10只.微囊组大鼠水合氯醛麻醉后于右侧纹状体立体定向植入约200个以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠为材料含牛嗜铬细胞的微胶囊,对照组大鼠未做脑内移植手术.观察移植术前后阿朴吗啡（0.5 mg/kg）诱发的大鼠旋转行为.利用微透析技术采取帕金森病样大鼠脑纹状体区细胞外微透析液,用高效液相电化学层析法测定对照组大鼠在6-羟基多巴损毁右侧脑黑质后16周时及两组大鼠在牛嗜铬细胞移植后12周时脑纹状体区细胞外液中单胺类物质含量的变化.结果：纳入偏侧帕金森病样大鼠30只,实验过程中微囊组麻醉意外、脑出血、肢体癫痫样抽搐死亡4只,对照组脑出血、不明原因死亡2只.进入结果分析微囊组和对照组分别为16和8只大鼠.①微囊组移植后1周开始阿朴吗啡诱发的异常旋转次数明显减少,作用持续6个月以上（F=37.89,P＜0.01）.②对照组帕金森病样大鼠右侧脑黑质损毁后16周时右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸和高香草酸水平较左侧明显降低（t=7.012,4.394,P＜0.01）,右侧脑上述物质含量仅为左侧脑的8%和12%.③移植后12周,微囊组帕金森病样大鼠右侧脑纹状体区细胞外液中3,4-二羟基苯乙酸、高香草酸和5-羟基吲哚乙酸水平较对照组显著升高（t=4.273,4.402,6.445,P＜0.01）,分别提高了3.1,5.3和2.7倍.结论：帕金森病样大鼠黑质损毁侧纹状体区多巴胺类物质含量明显降低,移植微囊化牛嗜铬细胞后含量升高,使帕金森病样大鼠的运动功能障碍明显改善.     

人类髓核细胞分离培养方法的优化选择*

背景：关于人类髓核细胞的分离培养方法不一,所用消化酶组分及消化时间差异较大,如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的：优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法：髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人椎间盘3例。无菌条件下取突出至椎管内的急性创伤后椎间盘组织,可见到外周白色的纤维环和中心胶冻样的髓核组织。按不同混合酶组分划分为2组,Ⅰ组成分为0.2%Ⅱ型胶原酶;Ⅱ组成分为先用0.25%胰酶消化30 min,再用0.2%Ⅱ型胶原酶。每组再按消化时间分为2,4 h,过夜3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位2 mL 并计数,采用含胎牛血清的 DMEM 培养液体外培养细胞。观察不同组分酶对分离所得髓核细胞数量、活性及增殖能力的影响,采用锥虫蓝染色计数细胞总数及活细胞比值,MTT 法测定髓核细胞生长曲线。结果与结论：采用2种不同酶组分进行消化,发现消化时间2,4 h 时,Ⅱ组消化细胞较Ⅰ组多,但差异无显著性意义(P >0.05)。孵育过夜时,Ⅰ组和Ⅱ组的存活细胞率较消化2,4 h 明显降低,差异有显著性意义(P <0.05)。在作用4 h 时,组织块消失,计数细胞数量最多。提示以Ⅱ型胶原酶为主要成分的Ⅰ组对分离髓核细胞有利,消化时间以4 h 为宜,该条件具有操作简单,效率较高,成本较低等优点,可以认为0.2%Ⅱ型胶原酶消化髓核组织块4 h 为获取髓核细胞的最佳条件。     

微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞偏侧帕金森病样猴脑内移植研究

目的:观察微囊化牛肾上腺嗜铬细胞脑内移植对偏侧帕金森病样猴的行为影响、移植物的存活状况、脑组织液中单胺类物质含量的变化及纹状体区多巴胺D2受体的活动性。方法:实验于1999-01/2003-06在解放军总医院老年医学研究所完成。①右侧颈内动脉注射甲基-苯基-四氢吡啶诱发帕金森病样猴模型(n=9),随机分为微囊化牛肾上腺嗜铬细胞组6只、牛肾上腺嗜铬细胞组2只及空微囊组1只。②获取牛肾上腺嗜铬细胞,以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠为材料包裹牛肾上腺嗜铬细胞,将微囊化、非囊化牛肾上腺嗜铬细胞或空微囊分别植入微囊化牛肾上腺嗜铬细胞组、牛肾上腺嗜铬细胞组及空微囊组帕金森病样猴右侧尾状核和壳核。③观察3组帕金森病样猴移植后的行为改善、移植后14个月及28个月时移植物的状况,微囊化牛肾上腺嗜铬细胞组移植后2个月及7个月时移植区微透析液中单胺类物质变化及48个月时多巴胺D2受体的活动性变化。结果:①囊化牛肾上腺嗜铬细胞组(n=6)和牛肾上腺嗜铬细胞组(n=2)移植后1周开始帕金森病样猴左上肢活动明显增加,囊化牛肾上腺嗜铬细胞组改善时间7～48个月,牛肾上腺嗜铬细胞组一两个月,空微囊组(n=1)左侧上肢活动无改善。②囊化牛肾上腺嗜铬细胞植入28个月时仍存活于帕金森病样猴脑内。③囊化牛肾上腺嗜铬细胞组移植后2,7个月时,右侧壳核、尾状核细胞外液中多巴胺、3,4-二羟基苯乙酸和高香草酸水平较移植前明显提高(P<0.05),但仍低于左侧的水平。④囊化牛肾上腺嗜铬细胞移植48个月时移植区D2受体活性较对侧明显提高。结论:结果表明帕金森病样猴脑内移植的囊化牛肾上腺嗜铬细胞能够长期存活、产生多巴胺、改善其异常行为。     

Characterization of bradykinin-stimulated release of noradrenaline from cultured bovine adrenal chromaffin cells

Bovine adrenal chromaffin cells were purified and maintained in culture. On exposure to bradykinin they released noradrenaline. The characteristics of this stimulus secretion were compared with the response to elevated extracellular potassium. Bradykinin released noradrenaline with an EC50 of about 2 nM, with maximum release (2-3 times control incubations) less than that elicited by high potassium or nicotine. Bradykinin analogs showed the response to have characteristics of a B2 receptor. On continuous exposure to 10 nM bradykinin the rate of release was maximal in the first 1 to 3 min, with a further slower sustained rate of release. The response is mostly, but not completely, dependent on extracellular calcium, and was inhibited by cadmium in the micromolar range. Whereas the potassium-stimulated release was highly sensitive to dihydrophyridines, the bradykinin response was not attenuated by dihydropyridine calcium channel antagonists. The results are discussed with respect to stimulus-secretion mechanisms possibly involved in the bradyininin-stimulated release in the light of previous observations characterizing a phosphoinositide response to bradykinin in these cells.     

Pardaxin induces exocytosis in bovine adrenal medullary chromaffin cells independent of calcium.

Pardaxin, an excitatory neurotoxin, is a new tool for studying the machinery of neurotransmitter secretion. At noncytotoxic concentrations (< 1 x 10(-5) M), pardaxin stimulated exocytosis, as assessed by the concomitant release of catecholamines, ATP and dopamine-beta-hydroxylase from bovine adrenal medullary chromaffin cells in the presence or absence of extracellular calcium. At higher concentrations (> 2 x 10(-5) M), pardaxin was increasingly cytotoxic, as inferred from trypan blue uptake, release of lactate dehydrogenase and 51Cr (ED50 = 100 microM). The role of intracellular calcium ([Ca++]i) homeostasis in pardaxin action was investigated by using the fluorescent calcium indicator Fura-2. In the presence of extracellular calcium, addition of noncytotoxic concentrations of pardaxin yielded a steady, concentration-dependent rise in [Ca++]i (ED50 = 1 microM). Depolarization of chromaffin cells by high K+ reduced pardaxin binding and abolished the pardaxin-evoked rise in [Ca++]i. In the absence of extracellular calcium, pardaxin failed to elicit an elevation of [Ca++]i. These data suggest that, in the presence of extracellular calcium, pardaxin might cause elevations in [Ca++]i and neurotransmitter release, concomitant with inducing transmembranal Ca++ influx. However, the complex concentration dependence of [Ca++]i and the fact that pardaxin stimulated secretion without a rise of [Ca++]i suggest that the toxin, in addition to being a pore-forming molecule, might directly affect exocytosis in a Ca(++)-independent way. In proposing a pharmacological working model, we hypothesize that pardaxin might present a molecular structure which mimics an essential step in the endogenous docking mechanism between secretory granules and the plasma membrane.     

Neuropeptide Y inhibits the nicotine-mediated release of catecholamines from bovine adrenal chromaffin cells

The possible role of neuropeptide Y (NPY) in catecholamine secretion was studied by using bovine adrenal chromaffin cells. NPY produced a concentration-dependent inhibition of nicotine-stimulated norepinephrine and epinephrine release from bovine chromaffin cells with IC50 (concentration of NPY which inhibits 50% of maximum release of catecholamines) values of 1.8 x 10(-9) M and 1.7 x 10(-9) M, respectively. Catecholamine release induced by 56 mM KCl was not inhibited by NPY at these concentrations but was inhibited by high concentration (2 x 10(-6) M) of NPY. This inhibition was not affected by the concentration of nicotine used for catecholamine release or the presence of alpha, beta adrenergic and muscarinic antagonists. A structurally related peptide, human pancreatic polypeptide, showed a similar inhibitory effect on catecholamine release, but peptide YY or avian pancreatic polypeptide had little or no effect. N-propionyl[3H]NPY binds to a single class of saturable binding sites on bovine adrenal medulla membranes with a KD = 0.32 +/- 0.07 nM and Bmax = 63 +/- 16 fmol/mg of protein. The rank order of potency of NPY and other structurally similar peptides to displace N-propionyl[3H]NPY from binding is human pancreatic polypeptide greater than or equal to NPY much greater than peptide YY greater than avian pancreatic polypeptide, and is correlated with their potency to inhibit catecholamine release. These results suggest a modulatory role for NPY through a specific NPY receptor in the secretion of catecholamine from the adrenal.     

Effects of dopamine receptor agonists and antagonists on catecholamine release in bovine chromaffin cells.

Dopamine D2 receptors are known to regulate the release of catecholamines from neurons in the central and peripheral nervous systems. In the present study we have evaluated the effects of dopamine D2 agonists and antagonists on the release of endogenous norepinephrine and epinephrine stimulated by 50 microM nicotine in isolated bovine chromaffin cells in order to investigate whether isolated bovine chromaffin cells may contain functional dopamine D2 receptors. Dopamine (10(-4) and 10(-6) M), quinpirole (10(-5) M) and 2-amino-5,6-dihydroxy-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene hydrobromide (10(-5) M) had no effect on the nicotine-stimulated release of norepinephrine or epinephrine from the bovine chromaffin cells. Pergolide (10(-6) M) and apomorphine (10(-4) M) produced a significant inhibition of nicotine-stimulated release of both norepinephrine and epinephrine from the chromaffin cells. The inhibitory effect of the selective dopamine D2 agonist pergolide on catecholamine release from the chromaffin cells was not reversed by 10(-6) M concentrations of the selective dopamine D2 receptor antagonists haloperidol, domperidone, metaclopramide, fluphenazine, flupentixol, (+)- or (-)-sulpiride, the dopamine D1 receptor antagonist SCH 23390 (10(-7) M) or the alpha receptor antagonist phentolamine (10(-6) M). These data suggest that the inhibition of nicotine-stimulated release of catecholamines from the bovine chromaffin cells is not a receptor-mediated effect. Further studies showed that the inhibitory effect of pergolide on catecholamine release in the bovine chromaffin cells was correlated with an inhibition of nicotine-stimulated 45Ca++ uptake and 22Na+ uptake into these cells. It is concluded that functional dopamine D2 receptors of the classical type do not exist on isolated bovine chromaffin cells.     

一种改良人骨髓间充质干细胞分离培养的方法

背景：分离培养鼠、兔骨髓间充质干细胞的科研实践较多,而组织工程临床实践人多以同种属种子细胞的科研为基础。目的：建立一种稳定、高效,满足临床和实验审需要的人骨髓问充质干细胞分离培养方法。方法：使用骨穿针于人髂前上棘处抽取骨髓和松质侣’,用15mL培养体系冲洗松质骨并收集冲洗液,采用直接培养法,利用细胞贴壁性能初筛细胞;流式细胞仪枪测细胞表面抗原（CD29、CD34、CD44、CD45、CDl05）,分别进行成骨、成脂肪诱导分化,在诱导过程中进行细胞形态学观察对干细胞进行初步豁定。结果与结论：松质骨冲洗液直接培养法在培养第5天的时候出现细胞集落,细胞稳定表达CD29、CD44、CDl05,不表达CD34、CD45。成骨诱导20d后出现明显钙结节,茜素红染色呈红色结节。成脂诱导7d后脂滴明显形成,油红素O染色见大量脂质沉淀。结果可见采用松质骨冲洗液直接培养法可以从人松质骨中短时间内获得大量间充质干细胞,其具有良好的细胞形态,稳定表达的细胞抗原及成骨、成脂分化能力。     

微囊化牛嗜铬细胞移植对甲醛致痛大鼠镇痛作用的效应

目的:探讨微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植的镇痛作用,分析海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果。方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成。①选取清洁级成年SD大鼠96只,随机数字表法分为:空囊组、微囊化细胞组、裸细胞组,32只/组。②空囊组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL含空囊的DMEM液,每只植入600～800个海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠空囊;微囊化细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠-牛嗜铬细胞悬液,含细胞5×106个;裸细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL牛嗜铬细胞悬液,含细胞5×106个。③分别于细胞移植术后2,4,6,8周测定各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量以及脊髓后角fos蛋白表达的变化,各时间点8只/组。结果:实验选取清洁级成年SD大鼠96只,全部进入结果分析。①海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞的形态:光镜下,包裹嗜铬细胞的微囊呈规则的圆球形,表面光滑,直径为150～250μm。牛嗜铬细胞散在分布于微囊内,细胞呈圆形,清晰可见。空囊半透明状,表面光滑。②移植术后不同时间各组脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量检测结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量在移植术后2,4,6,8周均高于空囊组(P<0.05)。微囊化细胞组移植术后2周与裸细胞组基本相似(P>0.05),其余各时间点均高于裸细胞组(P<0.01)。③移植术后8周各组大鼠脊髓内fos蛋白表达的变化:大鼠注射甲醛侧脊髓灰质后角内阳性神经元个数微囊化细胞组、裸细胞组均显著低于空囊组[(39.96±4.46),(50.62±3.29),(59.70±6.93),P<0.05]。同时,微囊化细胞组脊髓组织中阳性神经元个数明显低于裸细胞组(P<0.05)。结论:微囊化牛嗜铬细胞移植可以提高脑脊液中儿茶酚胺的含量,同时抑制甲醛致痛大鼠脊髓后角fos蛋白的表达。