结核分支杆菌Ag85 B分泌蛋白基因疫苗的构建和免疫原性的研究

目的：构建编码结核分支杆菌（MTB）Ag85B分泌蛋白的重组真核表达质粒,并研究其免疫原性。方法：采用聚合酶链反应（PCR）方法从结构分支杆菌H37Ra基因组DNA中扩增出Ag85B分泌蛋白基因,用HindⅢ和EcoRⅠ消化后,与同样酶消化的pcDNA3连接,转化大肠杆菌JM109,阳性克隆用酶切鉴定;重组表达质粒肌注免疫小鼠4周后,分别用dot blotting和ELISA方法检测抗体的产生和滴度,结果：酶切监定重组表达质粒pTB30s构建成功,dot blotting检测免疫小鼠血清抗Ag85B特异性抗体阳性,ELISA检测抗体几何平均滴度为1：120。结论：应进一步研究pTB30s刺激机体的细胞免疫应答,以用于结核病（TB）的防治研究。     

分枝杆菌胞壁融合表达Ag85B-ESAT-6穿梭质粒的构建

目的　构建E coli BCG(BacilleCalmette Guerin)穿梭载体 ,在母牛分枝杆菌细胞壁融合表达结核分枝杆菌 (MTB)的分泌蛋白Ag85B ESAT 6。方法　用聚合酶链反应 (PCR)从MTB毒株H3 7Rv基因中扩增出结核分枝杆菌 190 0 0抗原 ( 19 ss)胞壁区及其上游调控元件基因 ,克隆入E coli BCG穿梭载体 pOLYG中 ,构建表达蛋白能嵌入细胞壁中的E coli BCG穿梭载体。用间接免疫荧光染色法观察该载体携带所构建的结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B和ESAT 6基因在母牛分枝杆菌宿主中的融合表达。结果　经测序证实所克隆的 19 ss基因序列正确 ,所构建的E coli BCG穿梭载体 (pCW )能完成在大肠杆菌和母牛分枝杆菌细胞之间的穿梭 ,经免疫荧光检查外源基因Ag85B ESAT 6可融合表达于分枝杆菌宿主表面。 结论　本方法可成功构建能够在分枝杆菌胞壁融合表达MTB分泌蛋白Ag85B ESAT 6的E coli BCG穿梭质粒     

分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗菌株的筛选

目的筛选获得分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组卡介苗(BCG)菌株。方法采用多聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌毒株H37Rv中扩增出热休克蛋白60(Hsp60)基因及其信号肽序列α-ss，将测序正确的hsp60和α-ss基因分别克隆人大肠杆菌(E.coli．)-BCG穿梭载体pOLYG中，构建分枝杆菌分泌表达载体pDE22，按相应的酶切位点将ag85b和esat6按照不同的连接方式联合克隆入pDE22载体，分别命名为pDE22-Ag85B-ESAT6和pDE22-ESAT6-Ag85B，将纯化的重组质粒电穿入BCG，经潮霉素抗性筛选和PCR的方法鉴定出含目的基因的重组BCG阳性克隆。收集重组BCG的培养上清液，经浓缩和透析后，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和固相化蛋白质免疫学测定(Western-blot法)分析。结果两株重组：BCG菌株的培养上清液分泌表达相对分子质量约37000的蛋白，且分别可与抗Ag85B和抗ESAT6蛋白免疫小鼠的血清有相应的结合条带。结论分泌表达Ag85B与ESAT6融合蛋白的重组BCG菌株构建成功，有望为结核病的预防提供有效的疫苗。     

结核分枝杆菌Ag85B+Rv3407融合基因自杀性DNA疫苗的构建及鉴定

目的构建表达结核分枝杆菌生长期抗原Ag85B和休眠期蛋白Rv3407的自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85B基因和Rv3407蛋白基因,再以二者的混合物为模板扩增Ag85B+Rv3407融合基因,构建真核表达载体pSCA1/Ag85B+Rv3407,以ELISA法检测其在BHK-21细胞中的瞬时表达。结果从结核分枝杆菌基因组中扩增得到Ag85B+Rv3407融合基因,片段大小为1 323bp,与预期相符。成功构建重组质粒pSCA1/Ag85B+Rv3407,该重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的蛋白(实验组P/N≥2.1)。结论成功构建结核分枝杆菌自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,该重新载体能在真核细胞中表达目的蛋白。     

结核分枝杆菌Ag85蛋白复合物的原核表达及其在血清学诊断中的应用研究

目的构建结核分枝杆菌Ag85复合物原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,评价该家族蛋白在结核病血清学诊断中的应用价值。方法以标准株H37Rv基因组为PCR模板扩增fbpA、fbpB及fbpC基因并克隆至原核表达载体,转化至C43(DE3)菌株后经诱导、表达、纯化获得重组蛋白Ag85A、Ag85B、Ag85C。分别以纯化蛋白包被酶标板,采用方阵滴定确定Ag85A、Ag85B、Ag85C蛋白间接ELISA的最佳条件,用优化的ELISA检测367份健康对照组血清及86份痰涂阳性结核病患者血清中的特异IgM、IgG抗体。结果成功构建Ag85复合物基因的重组质粒,经诱导表达获得Ag85A、Ag85B、Ag85C重组蛋白。分别以纯化的Ag85A、Ag85B、Ag85C为包被抗原,采用ELISA检测结核病人血清IgG抗体,灵敏度分别为65.1%、69.8%和41.8%,特异性分别为75.1%、78.1%和64.2%;以Ag85B+Ag85A或Ag85CIgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体的灵敏度为60.4%,特异性为86.1%。结论以Ag85B+Ag85A或Ag85C血清IgG抗体阳性为判断标准,检测血清结核分枝杆菌IgG抗体具有较好的灵敏度与特异性,可作为结核病血清学诊断方法。     

结核分枝杆菌Ag85B基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

目的体外扩增结核杆菌Ag85B基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-Ag85B,并重组耻垢分枝杆菌(Mycobacteriums megmatis mc2155)。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌Ag85B基因,克隆入pGEMT载体;构建亚克隆ps3000-Ag85B大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,电转化方法将有Ag85B基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌中。热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察Ag85B蛋白的表达,Western blot鉴定其生物学活性。结果PCR扩增结核杆菌Ag85B基因片段大小为990bp,构建的穿梭质粒ps3000-Ag85B酶切片段为990bp,与理论值相符。经Western blot检测,该重组耻垢杆菌表达蛋白能被结核病患者血清识别。结论Ag85B重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达Ag85B蛋白的重组BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。     

Ag85B核酸疫苗的免疫原性和保护性研究

扩增结核分枝杆菌的Ag85B基因并克隆于真核表达载体 pJW4 30 4 ,转染COS - 7细胞后 ,Westernblot检测表明该基因在细胞内得到了正确表达。用该质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,免疫三次后 ,用纯化的重组蛋白Ag85B检测小鼠血清中的抗体 ,抗体滴度达到 1:10 2 4 0 0 ,(γ -干扰素测定表明 ,免疫动物的干扰素含量达到 116 0 3± 10 4 pg /ml。实验结果说明Ag85B核酸疫苗在实验动物体内引起了较强的免疫应答。三次免疫后经静脉强毒攻击 ,免疫组小鼠肺脏和脾脏的细菌数比对照空载体组分别减少了 1 5和 15倍以上。本研究表明 ,该核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞和体液免疫应答并获得较高的保护效率。     

Ag85B DNA疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

由于卡介苗(BCG)的免疫效果不稳定，结核分枝杆菌(MTb)耐多药菌株的流行以及MTb与艾滋病毒联合感染病例的不断增加，结核病与艾滋病、疟疾一起被世界卫生组织(WHO)列为严重威胁人类健康的主要传染病之一，寻找一种比BCG更有效的抗MTb感染的疫苗已经成为当务之急。DNA疫苗是20世纪90年代发展起来的一种崭新的免疫接种技术，能在宿主体内表达病原体抗原，通过内源性抗原肽提呈方式有效地诱导全面的免疫应答，尤其是特异性CTL的形成。MTb Ag85B是被证实具有较强免疫保护作用的蛋白成分。本研究在已经构建Ag85B真核表达质粒并证实能在小鼠体内诱导特异性体液和细胞免疫应答的基础上，进一步研究其在小鼠体内抗MTb感染的能力。     

共表达pcIL-18/MAGE-1 DNA疫苗对JEG-3细胞HLA-G基因表达的影响

目的观察共表达基因疫苗pc IL-18/MAGE-1对绒癌JEG-3细胞株HLA-G基因表达的影响,探究pc IL-18/MAGE-1抗肿瘤作用机制。方法应用构建的共表达pc IL-18/MAGE-1 DNA疫苗免疫小鼠,同时设阴性对照组和空白对照组,免疫后分别收集脾细胞,作用于靶细胞JEG-3,应用FCM检测小鼠T细胞亚群情况及NK细胞活性,MTT法检测肿瘤特异性CTL对靶细胞的杀伤率,RT-PCR法检测HLA-G基因表达情况。结果免疫组HLA-G基因表达降低,且对JEG-3细胞杀伤活性增加,与对照组比较,差异显著(P<0.05)。免疫组NK细胞活性及CD4+/CD8+、CD8+、CD4+值均高于对照组(P<0.05)。结论共表达基因疫苗pc IL-18/MAGE-1通过降低HLA-G基因的表达,进而增加NK细胞活性以及诱导肿瘤特异性CTL直接杀伤肿瘤细胞,发挥抗肿瘤作用。     

结核杆菌Ag85B基因疫苗与结核杆菌Ag85B和细胞因子GM-CSF共表达基因疫苗在小鼠体内的免疫效应比较

目的比较结核杆菌Ag85B基因疫苗与结核杆菌Ag85B和细胞因子GM-CSF共表达基因疫苗在小鼠体内的免疫效应,为研制高效结核杆菌基因疫苗奠定基础。方法将雌性C57BL/6健康小鼠54只,随机分为3组,即结核杆菌Ag85B和细胞因子GM-CSF共表达基因疫苗(pIRES-Ag85B/GM-CSF)组、结核杆菌Ag85B基因疫苗(pIRES-Ag85B)组和空载体(pIRES)组,分别小鼠肌内注射疫苗,检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标,同时另取C57BL/6小鼠,随机分成4组,第1、2、3组免疫方法与上述各组免疫方法相对应,第4组每只小鼠背部皮下注射1×106CFU卡介苗(BCG),作为阳性对照,进行动物免疫保护性实验,比较分析两种基因疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果结核杆菌Ag85B和细胞因子GM-CSF共表达基因疫苗在小鼠体内的免疫原性和免疫保护性明显强于结核杆菌Ag85B基因疫苗。结论结核杆菌Ag85B和细胞因子GM-CSF共表达基因疫苗能增强结核病基因疫苗的免疫原性和免疫保护性。     

ag85b-卡介苗重组疫苗免疫原性研究

目的研究ag85b-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、ag85b-卡介苗重组疫苗免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体,MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果ag85b-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比,无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清,ag85b-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组均有抗Ag85B特异性抗体产生,ag85b-卡介苗重组疫苗组抗Ag85B特异性抗体水平高于卡介苗组;卡介苗、ag85b-卡介苗重组疫苗免疫后15d,抗体水平已有升高,45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞,平均刺激指数均达2.0以上。结论结核分枝杆菌ag85b基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白,刺激小鼠产生特异性抗体。     

mpt64-卡介苗重组疫苗免疫原性研究

目的研究rapt64-卡介苗重组疫苗的免疫原性。方法以生理盐水、卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫小鼠，采用ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体，MTS法分析小鼠脾淋巴细胞增殖指数。结果mpt64-卡介苗重组疫苗组小鼠体重变化与对照组相比，无显著性差异。应用不同抗原检测各组小鼠不同时间采集的血清，rapt64-卡介苗重组疫苗组有MPT64特异性抗体产生，而卡介苗组无MPT64特异性抗体产生；卡介苗、mpt64-卡介苗重组疫苗免疫后15d，抗体水平已有升高，45d达到最高水平。用不同抗原刺激实验组及对照组小鼠脾淋巴细胞，平均刺激指数均达2．0以上。结论结核分枝杆菌mpt64基因在卡介苗中能够表达特异的蛋白，刺激小鼠产生特异性抗体。     

ag85a-卡介苗重组疫苗的构建、免疫原性及抗结核作用的初步研究

目的构建结核分枝杆菌ag85a-卡介苗重组疫苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性或治疗性疫苗。方法通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原Ag85A的编码基因与穿梭质粒载体pYUB295重组,采用电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。通过ELISA法检测其免疫小鼠血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数。通过观察ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染实验动物半数死亡时间、一定时间内的死亡率、大体病变、T细胞及B细胞免疫功能等指标评价ag85a-卡介苗重组疫苗对结核分枝杆菌感染的预防效果。结果PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定、PAGE电泳表明成功地构建了ag85a基因pYUB295重组质粒,Ag85A蛋白在卡介苗中分泌表达。重组卡介苗免疫原性试验表明：ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠有Ag85A特异性抗体产生,45天时达到最高水平。脾淋巴细胞增殖试验表明刺激指数均达2．0以上,ag85a-卡介苗重组疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数与对照组无明显区别。预防试验表明：ag85a-卡介苗重组疫苗组、卡介苗组与生理盐水对照组比都能延长结核分枝杆菌感染小鼠的半数死亡时间,降低2个月内的死亡率。结核分支杆菌攻击后2个月,处死小鼠时,小鼠脏器大体病变、脏器培养、抗体检测结果及淋巴细胞增殖实验表明：各组间无显著差别。结论正确构建了ag85a-卡介苗重组疫苗,ag85a-卡介苗重组疫苗与卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用基本相同。     

结核分枝杆菌Ag85B-ESAT-6融合蛋白重组耻垢分枝杆菌对小鼠的免疫原性研究

目的 评价表达Mtb Ag85B-ESAT-6融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌（Ag85B-ESAT-6-rM.s）在小鼠中的免疫原性。 方法 6周龄BALB/c小鼠经背部皮下注射1×10⁶ CFU（colony-forming unit,菌落形成单位）的Ag85B-ESAT-6-rM.s,同时设M.s免疫组（10只）、BCG免疫组（10只）、Ag85B-ESAT-6融合蛋白免疫组（10只）和生理盐水组（10只）。接种免疫后1～6周,尾静脉采血,检测小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺ T细胞所占百分比;免疫后6周,MTS［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt］法检测小鼠脾淋巴细胞增殖和酶联免疫斑点检测（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）检测脾淋巴细胞分泌γ干扰素（interferon γ,IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）等细胞因子的水平。 结果 Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠后能够明显刺激小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺ T细胞的产生,其所占百分比［（59.6±1.5）%］明显高于BCG免疫组［(48.8±2.3)%］（t=12.252,P<0.05）和原始M.s免疫组［(45.7±1.6)%］（t=20.166,P<0.05）。Ag85B-ESAT-6-rM.s免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖指数（3.23±0.31）与BCG免疫刺激的增殖指数（2.95±0.36）相当（t=1.864,P>0.05）,但其诱生IFN-γ的能力［斑点形成细胞(spot forming cells,SFC) ］［(167.5±36.6)SFC/10.6］明显高于BCG［(98.5±26.9)SFC/10⁶ ］（t=4.804,P<0.05）。 结论 Ag85B-ESAT-6融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达能够明显提高M.s的免疫原性,并能够刺激小鼠机体产生有利于抗Mtb感染的免疫反应,作为TB新型候选疫苗具有一定的研究前景。     

Efficacy of recombinant bacille Calmette-Guérin vaccine secreting interleukin-15/antigen 85B fusion protein in providing protection against Mycobacterium tuberculosis

Protection against Mycobacterium tuberculosis not only depends on CD4+ T helper type 1 (Th1) cells but, also, on CD8+ T cells. Interleukin (IL)-15 has an important function in the maintenance of memory CD8+ T cells. In the present study, we examined the efficacy of recombinant Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guérin (rBCG) secreting fusion protein antigen (Ag) 85B murine IL-15 (rBCG-Ag85B-IL15) in providing protection against M. tuberculosis infection. The levels of major histocompatibility (MHC) class Ib (H2-M3)-binding TB2- or MHC class Ia (H-2Db)-binding MPT64-specific CD8+ T cells producing interferon (IFN)-gamma were significantly higher after immunization with rBCG-Ag85B-IL15 than after immunization with rBCG secreting Ag85B (rBCG-Ag85B). The levels of purified protein derivative- or Ag85B-specific CD4+ T cells producing IFN-gamma were also higher in mice immunized with rBCG-Ag85B-IL15 than in mice immunized with rBCG-Ag85B. Mice immunized with rBCG-Ag85B-IL15 exhibited CD8+ and CD4+ T cells responses that were stronger than those in mice immunized with rBCG-Ag85B, as well as robust protection in the lung against intratracheal challenge of M. tuberculosis. Thus, rBCG-Ag85B-IL15 vaccination capable of inducing efficient cell-mediated immunity might be used as an effective vaccine for tuberculosis.     

二甲基三十六烷基铵.卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应

目的 探讨二甲基三十六烷基铵(DDA)、卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应.方法 采用热酚法制备BCG-PSN,与DDA联合作为融合蛋白AMM(Ag85B-MPT64190-198-Mth8/4)佐剂免疫小鼠,设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂(IFA)及单独应用DDA或BCG-PSN一种佐剂的各组作为对照.应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应.结果 分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞,用特异性抗原AgSSB刺激后,AMM+DDA+BCG-PSN疫苗组、AMM+DDA组和卡介苗组小鼠每1×106个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64,均明显高于AMM+PBS组(40±4)、AMM+IFA组(10 ±3)、AMM+BCG-PSN组(132±18)和生理盐水组(8±4),差异有统计学意义(t值为2.923～7.118,均P<0.05);与单用DDA组比较,添加DDA和BCG-PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2a/IgG1较高(0.125和0.025),但γ-干扰素分泌水平没有增高.结论 AMM+DDA+BCG-PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应,DDA+BCG-PSN(尤其是DDA)具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应.     

传统BCG初免IL-12联合Ag85A DNA疫苗加强序贯免疫小鼠效果观察

目的 探讨BCG初次免疫,IL-12联合结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强免疫对小鼠的免疫效果。方法 实验小鼠随机分为7组,即PBS阴性对照组、BCG组、pcAg85A组、BCG初免pcAg85A加强免疫组、BCG初免pcAg85A联合IL-12加强免疫组、BCG初免IL-12加强免疫组、以及BCG初免pcDNA3.1加强免疫组。按BCG初免,细胞因子IL-12联合结核分枝杆菌Ag85A DNA加强的免疫程序进行免疫实验,在末次免疫后的4、6、8周通过检测小鼠血清总IgG抗体、特异性淋巴细胞增殖,细胞因子的水平,观测对小鼠的免疫效果。结果 采用BCG初免,细胞因子IL-12联合结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强的免疫策略组的小鼠与其它免疫方式组相比,IgG明显升高(P<0.05)、特异性淋巴细胞明显增殖,加强免疫后IFN-γ水平、IL-2水平、IL-4水平BCG/ Ag85A+IL-12组在3个时间段分别为128.2±20.4、190.2±16.51、244.2±39.14;146.2±17.29、271.6±16.36、419.3±28.12;68.6±6.62、96.6±5.5、117.4±10.71均高于其它各组(P<0.05)。结论 采用BCG初免,细胞因子IL-12联合结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗加强的免疫能明显增强机体体液和细胞免疫,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了依据。     

Ag85B与MPT64 DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

目的　研究Ag85B与MPT6 4DNA疫苗联合免疫对鼠结核分枝杆菌感染的免疫保护效果。方法　C5 7BL/ 6小鼠 5 4只 ,采用随机数字表法随机分为 6组 ,分别用磷酸盐缓冲液 (PBS)、pcDNA3 1( )、卡介苗 (BCG)、pcDNA/Ag85B、pcDNA/MPT6 4、pcDNA/Ag85B pcDNA/MPT6 4经肌肉注射法免疫小鼠 ,0、3、6周各 1次 ,即PBS组、pcDNA3 1组、BCG组、pcDNA/Ag85B组、pcDNA/MPT6 4组及pcDNA/Ag85B pcDNA/MPT6 4组。BCG组只在 0周予皮内注射卡介苗 1次。末次免疫后第 5周用 1×10 6CFU的H3 7Rv经尾静脉实施攻击 ,攻击后 6周处死部分小鼠 ,用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测血清总IgG、纯化蛋白衍生物 (PPD)特异性脾淋巴细胞干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )分泌水平 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定特异性脾淋巴细胞增殖 ;作脾、肺组织荷菌量和病理学检查 ,并观察小鼠存活时间。结果　PBS组肺和脾器官荷菌量分别为lg-1(7 85 4± 0 0 0 3)CFU/g和lg-1(7 190±0 0 16 )CFU/g、pcDNA3.1组分别为lg-1(7 70 0± 0 0 16 )CFU/g和lg-1(7 0 72± 0 0 6 8)CFU/g、BCG组分别为lg-1(6 4 4 9± 0 0 0 2 )CFU/g和lg-1(5 4 36± 0 0 4 2 )CFU/g、pcDNA/Ag85B组分别为lg-1(7 370± 0 0 0 2 )CFU/g和lg-1(6 4 2 96± 0 0 0 9)C