凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌化疗抵抗中的调控作用

目的探讨凋亡抑制蛋白XIAP和促凋亡因子Smac在胰腺癌细胞化疗抵抗中的作用及其分子机制。方法应用流式细胞术检测顺铂、5-FU介导的Panc-1、BXPC-3的凋亡率及胞浆染色分析细胞XIAP表达变化,Western-blot分析XIAP、Smac、Caspase-3表达水平；构建pEGFP-N1／Smac真核表达载体并转染胰腺癌Panc-1细胞,流式细胞术检测转染胞浆表达型 Smac基因对Panc-1细胞凋亡敏感性的作用。结果与BXPC-3细胞相比,Panc-1对顺铂或5-FU介导的凋亡具有较强抵抗性,Western blot分析显示Panc-1细胞高表达XIAP,在化疗药物作用下化疗敏感细胞BXPC-3胞浆内XIAP水平下降明显多于Panc-1细胞,而且凋亡的BXPC-3细胞释放入胞浆内的成熟 Smac蛋白水平明显高于Panc-1细胞。转染胞浆表达型Smac基因至化疗抵抗Panc-1细胞,可明显下调其XIAP表达水平,促进效应 Caspase-3分子活化,显著提高顺铂、5-FU诱导的细胞凋亡率。结论在化疗药物诱导的凋亡中,线粒体释放Smac下调XIAP是胰腺癌化疗敏感性的重要决定因素,而上调Smac活性蛋白的胞浆表达作为一种有效调节信号,通过拮抗XIAP的凋亡抑制作用协同化疗药物促进胰腺癌细胞凋亡。     

Smac合成肽靶向下调凋亡抑制蛋白XIAP提高胰腺癌细胞化疗敏感性

目的:探讨包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能否增强胰腺癌细胞的化疗药物敏感性及其作用机制.方法:化学合成SmacN7细胞可穿透融合多肽,共沉淀实验观察SmacN7细胞穿透肽与胰腺癌Panc-1细胞内的XIAP的相互作用,应用流式细胞术检测SmacN7细胞穿透肽与顺铂、5-FU联用对Panc-1细胞凋亡的影响,MTT法检测SmacN7细胞穿透肽应用前后Panc-1细胞的化疗药物敏感性.结果:SmacN7融合多肽能与内源性XIAP结合,明显下调Panc-1细胞XIAP表达水平,显著增强顺铂或5-FU诱导的Panc-1细胞凋亡,使其对顺铂、5-FU的药物半数抑制浓度(IC50)分别降低1.98倍、2.62倍.结论:应用包含目的蛋白功能结构域的Smac合成肽能靶向下调胰腺癌Panc-1细胞XIAP表达,显著提高其化疗敏感性,为胰腺癌的生物治疗协同化疗提供了新思路.     

细胞凋亡在胰腺癌治疗中的作用

胰腺癌（ Pancreatic adenocarcinoma ,PAC）由于发病因素多、病情隐匿不易诊断、对放化疗不敏感而导致预后极差。细胞凋亡信号通路阻断可能是导致胰腺癌对传统放化疗不敏感的关键原因。本综述拟梳理胰腺癌细胞内部凋亡失衡主要信号通路,总结细胞凋亡诱导关键信号通路等在胰腺癌治疗中的基础研究进展,以期为拓展胰腺癌细胞凋亡的理解和开发凋亡相关靶向分子治疗提供新思路。     

凋亡抑制蛋白XIAP与肿瘤化疗耐药关系的研究进展

XIAP是凋亡抑制蛋白IAP家族中的最主要成员之一,在抑制肿瘤细胞凋亡中起着重要的作用,并已在多个研究中被证实参与化疗耐药。全文总结近年来XIAP与肿瘤化疗耐药关系的研究进展,着重从XIAP抑制细胞凋亡机制,以及针对XIAP的肿瘤治疗手段方面,阐述XIAP与肿瘤化疗耐药的关系。     

凋亡相关因子 Survivin 和 Smac 在卵巢癌中的研究进展

Survivin 是凋亡抑制蛋白（IAP）家族中抗凋亡作用最强的成员。Smac 是半胱氨酸蛋白酶的第2个线粒体激活因子,可以通过与 IAP 的结合,来发挥促凋亡作用。二者在卵巢癌组织中的异常表达均与卵巢癌发生发展、治疗耐受及预后密切相关。两者有望在卵巢癌早期诊断及靶向治疗方面发挥重要作用。     

Smac的促凋亡机制及其在肺癌诊治中的作用

摘 要：Smac/ DIABLO作为线粒体蛋白中的一员可以调控细胞的凋亡。当存在凋亡信号刺激时,smac从线粒体重新定位入细胞质阻断了IAPs (抑制凋亡蛋白家族)与caspases的结合,恢复了caspases的活性。全文阐述了smac基因的结构、细胞定位和组织分布,概述其与IAP家族和另外一些凋亡蛋白之间的关联在促细胞凋亡中的作用,在肺癌的发生发展中的作用,以及在肺癌的诊断、治疗和预后判断中的意义。     

细胞凋亡相关基因bcl-2和Bax在胰腺癌中的表达及其意义

目的研究细胞凋亡相关基因bcl-2和Bax在胰腺癌中的表达及其意义.方法应用免疫组化LSAB法,以bcl-2单克隆抗体和Bax多克隆抗体检测6例正常胰腺组织和33例胰腺癌组织中细胞凋亡相关基因bcl-2和Bax的产物bcl-2蛋白及Bax蛋白的表达.结果正常胰腺与胰腺癌组织中Bax蛋白的表达率间比较差异显著(P＜0.05);高、中分化胰腺癌组分别与低分化胰腺癌组Bax蛋白和bcl-2蛋白表达率间比较差异显著(P＜0.05);Bax蛋白的表达率与患者术后生存期正相关.结论细胞凋亡相关基因bcl-2、Bax表达状态失控,使胰腺细胞凋亡过程失调,细胞寿命延长,可能与胰腺癌的发生、发展有关.对Bax蛋白的检测可以初步估计肿瘤恶性程度及预后.     

p53正向凋亡调控因子在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用

目的:研究吉西他滨对人胰腺癌AsPC-1细胞体外生长的作用机制.方法:用脂质体转染法将含有p53正向凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)反义核酸的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度为1、5、10和15 μmol/L的吉西他滨溶液中作用72 h.RT-PCR和Western印迹法检测不同组细胞经吉西他滨作用72 h后的PUMA表达水平,MTT检测细胞生长抑制情况, FCM、Hoechst 33258荧光染色和TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞中PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞增殖明显增加.结论:吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制细胞生长,其诱导细胞凋亡与上调PUMA表达有关.     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对胰腺癌细胞抗肿瘤作用的研究

Objective To investigate the antitumor effect of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)gene transfection mediated by adenovirus into human pancreatic carcinoma cell line Panc-1, and the mechanisms involved in this effect. Methods TRAIL gene was transfected into pancreatic cancer cell line Panc-1 by an adenovirus vector (Ad-TRAIL).Level of TRAIL mRNA expression was determined using RT-PCR, and TRAIL protein synthesis was evaluated with Western blot. Cell-growth activities were determined by MTT assay. The bystander effect was observed by co-culturing the Panc-1cells with the transfected TRAIL gene at different ratios. Apoptosis in pancreatic cancer cells was detected by flow cytometry.Procaspase-8 and procaspase-3 were determined by Western blot. Results The stable overexpression of TRAIL was detected in Panc-1 cells transfected by Ad-TRAIL. Ad-TRAIL significantly inhibited of cell viability of Panc-1 cells. Furthermore,co-culture of cancer cells transfected with TRAIL with that nontransfected resulted in the cell death of both cells by bystander effect. Moreover, the percentage of apoptotic cells was significantly higher in the Ad-TRAIL-treatment group compared to the control groups (P ＜ 0.01). And there was a diminished amount of procaspase-8 and procaspase-3 after infection with Ad-TRAIL. Conclusion The overexpression of TRAIL gene in Panc-1 cells by Ad-TRAIL exerts its antitumor effects, and themechanisms involved in this effect may be proapoptosis and bystander effect.     

TFPI-2基因在调控胰腺癌细胞凋亡中的作用

背景与目的：组织因子途径抑制物2（tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2）是新近发现的一种丝氨酸蛋白酶抑制物,与多种肿瘤发生发展有关。本实验研究将外源性TFPI-2基因转入对胰腺癌细胞株Panc-1观察TFPI-2对该细胞细胞增殖及凋亡的影响。方法：TFPI-2基因真核表达载体、空载体分别转染Panc-1细胞,并命名为Panc-1-TFPI-2,Panc-1-V细胞与未转染的对照细胞Panc-1分别测定细胞生长曲线,DNA片段化实验检测细胞凋亡,并用流式细胞仪分析3组细胞的细胞增殖、细胞周期情况。结果：Panc-1-TFPI-2细胞同Panc-1-V和Panc-1细胞相比,细胞生长缓慢,细胞生长受到抑制,被阻滞于G0-G1期;DNA片段化实验显示Panc-1-TFPI-2细胞呈现凋亡细胞特有的“梯状”条带,而Panc-1-V和Panc-1细胞无明显“梯状”条带;流式细胞仪分析显示早期Panc-1-TFPI-2细胞凋亡率（6.9±0.5）%较Panc-1-V和Panc-1细胞凋亡率[（3.0±0.4）%,（3.5±0.4）%]增加（P〈0.05）,统计学差异有显著性。结论：外源性TFPI-2基因能够抑制胰腺癌细胞生长、诱导胰腺癌细胞凋亡,可能具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

Disturbed balance of expression between XIAP and Smac/DIABLO during tumour progression in renal cell carcinomas

Dysregulation of apoptosis plays an important role in tumour progression and resistance to chemotherapy. The X-linked inhibitor of apoptosis (XIAP) is considered to be the most potent caspase inhibitor of all known inhibitor of apoptosis-family members. Only recently, an antagonist of XIAP has been identified, termed Smac/DIABLO. To explore the relevance of antiapoptotic XIAP and proapoptotic Smac/DIABLO for tumour progression in renal cell carcinomas (RCCs), we analysed XIAP and Smac/DIABLO mRNA and protein expression in the primary tumour tissue from 66 RCCs of all major histological types by quantitative real-time PCR, Western blot and ELISA. X-linked inhibitor of apoptosis and Smac/DIABLO mRNA expression was found in all RCCs. Importantly, the relative XIAP mRNA expression levels significantly increased from early (pT1) to advanced (pT3) tumour stages (P=0.0002) and also with tumour dedifferentiation (P=0.04). Western blot analysis confirmed the tumour stage-dependent increase of XIAP expression on the protein level. In contrast, mRNA and protein expression levels of Smac/DIABLO did not significantly change between early and advanced tumour stages or between low and high tumour grades. Consequently, the mRNA expression ratio between antiapoptotic XIAP and proapoptotic Smac/DIABLO markedly increased during progression from early (pT1) to advanced (pT3) tumour stages. Moreover, RCCs confined within the organ capsule (pT1 and pT2) exhibited a significantly lower XIAP to Smac/DIABLO expression ratio when compared with RCCs infiltrating beyond the kidney (pT3; P=0.01). Thus, our investigation demonstrates that the delicate balance between XIAP and Smac/DIABLO expression is gradually disturbed during progression of RCCs, resulting in a relative increase of antiapoptotic XIAP over proapoptotic Smac/DIABLO, thereby probably contributing to the marked apoptosis resistance of RCC.     

康莱特注射液对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖和凋亡影响的实验研究

目的：通过康莱特注射液作用于人胰腺癌细胞株 PANC-1,观察其对 PANC-1细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。方法倒置显微镜及电镜观察80μL·mL -1康莱特注射液作用 PANC-1细胞72 h 后细胞形态改变;采用 MTT 比色法检测不同浓度（10、20、40、60、80、100μL·mL -1）康莱特注射液对PANC-1细胞生长增殖抑制作用的影响;同时采用流式细胞术检测不同浓度（10、20、40、60、80、100μL·mL -1）康莱特注射液对 PANC-1细胞周期的影响。结果细胞形态学检查发现80μL·mL -1康莱特注射液处理 PANC-1细胞72 h 后细胞生长稀疏,细胞质透亮度下降,线粒体等细胞器功能障碍,细胞核功能上受到一定的抑制;不同浓度康莱特注射液作用于 PANC-1细胞株不同时段（24、48、72 h）后肿瘤细胞生长受到了一定的抑制且呈现时间和剂量依赖性;不同浓度康莱特注射液处理 PANC-1胰腺癌细胞72 h 后 PANC-1细胞周期均阻滞于 G2/ M 期,康莱特注射液可剂量依赖性的诱导 PANC-1细胞凋亡。结论康莱特注射液能够有效抑制人胰腺癌细胞株 PANC-1在体外的生长,其机制可能是通过抑制细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡而实现,有望成为胰腺癌的有效治疗药物。     

UpIb启动子-Smac重组体促膀胱癌细胞凋亡的实验动物研究

目的: 探讨携带Smac基因的膀胱癌细胞特异性表达质粒pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac用脂质体包裹后注射到实验动物瘤体内的表达及促癌细胞凋亡的效应。 方法: 将人膀胱癌细胞株BIU-87注射到Balb/c-nu/nu雄性裸鼠的皮下,构建膀胱癌皮下移植瘤模型。当移植瘤长至直径约0.5cm时,用脂质体将pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac包裹后隔天1次连续3次注射到瘤体内,间隔1天后,连续3天瘤体内注射适量丝裂霉素C诱导凋亡。设三组对照:单用脂质体质粒组、单用丝裂霉素C组和空白组。RT-PCR检测瘤组织Smac mRNA的表达,免疫组织化学法检测瘤组织Smac蛋白的表达,苏木素伊红染色镜检、DNA Ladder带凝胶电泳分析和TUNEL-荧光标记检测观察瘤组织癌细胞的凋亡情况。 结果: 膀胱癌裸鼠移植瘤模型构建成功。瘤体内注射脂质体包裹的pcDNA3.1-UpIbpro-moter-Smac后,与未注射脂质体质粒的对照组比较,Smac的表达增强约2.1倍;先注射脂质体质粒后丝裂霉素C处理和单用丝裂霉素C处理的瘤组织均可见典型的凋亡细胞,但前者的凋亡率为49.8%,显著高于后者的23.5%(P<0.01)。 结论: 膀胱癌裸鼠移植瘤模型瘤体内直接注射脂质体包裹的pcDNA3.1-UpIb promoter-Smac后,所携带的Smac基因能够在瘤组织中有效表达,并对丝裂霉素C诱导的瘤细胞凋亡有显著的促进作用。该质粒配合丝裂霉素C等凋亡诱导药物的应用,可望为膀胱癌的靶向基因治疗提供一新的治疗模式。     

X染色体连锁凋亡抑制蛋白与恶性肿瘤

X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的重要一员,XIAP通过抑制半胱天冬酶途径及参与其他细胞凋亡途径抑制细胞的凋亡,在肿瘤的发生的过程中起者重要作用.近年来,以此为靶点,通过下调XIAP的表达,达到肿瘤治疗目的研究成为新的研究热点,同时以Ⅺ-AP作为肿瘤的恶性度指标及预后指标的可行性正在探讨中.     

SOX2在胰腺癌干细胞干性和化疗耐药中的作用及机制研究

[目的]探究性别决定相关基因簇2(SOX2)对胰腺癌干细胞干性与化疗耐药性的影响及影响机制。[方法]将培养至指数生长期胰腺癌干细胞随机分为SOX2抑制组、空白对照组与SOX2组,其中SOX2抑制组细胞与SOX2组细胞分别给予SOX2基因敲除与SOX2基因高表达处理,检测各组细胞SOX2 mRNA、八聚体结合转录因子4(OCT4)mRNA与谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)mRNA表达水平;观察各组细胞增殖、侵袭及各组细胞对顺铂的耐药程度及在不同浓度顺铂处理下的凋亡情况。[结果] SOX2组细胞SOX2 mRNA与OCT4 mRNA表达水平明显高于SOX2抑制组与空白对照组细胞(P均=0.001);SOX2抑制组细胞增殖率与侵袭率明显低于空白对照组与SOX组(P<0.001);空白对照组细胞增殖率与侵袭率明显低于SOX2组(P<0.001);SOX2组细胞SOX2顺铂半数抑制浓度明显高于SOX2抑制组与空白对照组细胞(P<0.001);各浓度顺铂处理下的SOX2组细胞凋亡率均明显小于SOX2抑制组与空白对照组(P<0.001);SOX2组细胞GPX3 mRNA表达水平明显高于SOX2抑制组与空白对照组细胞(P<0.001)。[结论] SOX2能促进OCT4与GPX3表达,上调胰腺癌干细胞干性与化疗耐药性。     

羟基喜树碱对SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的：探讨羟基喜树碱（HCPT）体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖并诱导其凋亡的作用。方法：体外培养的胰腺细胞以不同浓度的HCPT处理20至24h后,用MTT法测定细胞增殖,以Annexin V早期凋亡检测试剂盒,电子显微镜,流式细胞仪和原位末端标记分析以及bcl-2免疫细胞化学标记分析检测细胞凋亡情况,结果：MTT细胞增殖,在浓度为3．125ug/ml-100ug/ml各组,药物作用24h,后,肿瘤细胞的增殖抑制率显著高于对照线。（2）原位末端标记及流式细胞仪检测,在0．05mg./ml浓度下,作用20h后,肿瘤细胞的凋亡率在13．2－15．3％之间,在0．1mg/ml浓度下,作用20h后,凋亡率在26．1－30．4％之间。（3）电镜及Annexin V荧光检测：在0．05mg/ml浓度下,凋亡以早期表现为主,早期凋亡率约为15％,（4）bcl-2免疫细胞化学表达：经0．05mg/ml浓度作用24h后,bcl-2表达较对照组明显减少,结论：HCT在体外可抑制SW1990细胞的增殖,部分作用机制是诱导细胞凋亡,可作为细胞凋亡诱导剂用于胰腺癌治疗。     

凋亡抑制蛋白Livin在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变表达

[目的]探讨凋亡抑制蛋白Livin在宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈癌中的表达及意义。[方法]采用免疫组织化学SP法检测81例宫颈癌、74例CIN和20例正常宫颈组织中Livin的表达情况。[结果]Livin在正常宫颈组织中不表达,在CIN和宫颈癌中表达上调,阳性率分别为31.08%（23/74）和67.90%（55/81）。Livin在CINⅢ组织中的阳性率高于CINⅠ～Ⅱ。Livin表达与肿瘤临床分期、分化程度及淋巴结转移有关（P〈0.05）,而与病理类型、肿块生长类型无相关性（P〉0.05）。[结论]Livin过表达可能与CIN和宫颈癌的发生发展有关,提示肿瘤的恶性程度及不良预后。     

siRNA干扰Id1表达增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

[目的]探讨体外DNA结合抑制因子（inhibitor of DNA bindingor differentiation,Id）的表达对卵巢上皮癌SKOV3对顺铂化疗敏感性的影响。[方法]构建靶向Id1基因siRNA慢病毒载体并转染SKOV3细胞,筛选出稳定转染的SKOV3细胞克隆。实验分为4组：实验组（Cell＋LvshRNA-Id1）、阴性对照组（Cell＋Lv-shRNA-NC）、病毒对照组（Cell＋Lv-control）与空白对照组（Cell group）。CCK8检测各组SKOV3细胞不同时间增殖活性以及暴露于不同浓度顺铂（0.1、0.2、0.5、1、2、5、10μg/ml）48h后顺铂对各组SKOV3细胞的半数抑制浓度,分析沉默Id1基因后卵巢癌细胞对顺铂化疗敏感性的影响。[结果]三组对照组细胞增殖活性随着时间增加显著,而实验组则增加缓慢。在48h和72h时,实验组细胞增殖活性值分别为0.449±0.072μg/ml、0.885±0.232μg/ml,与三组对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）;实验组顺铂对SKOV3细胞的半数抑制浓度为1.5±0.71μg/ml,明显低于对照组（P〈0.01）。[结论]抑制Id1基因表达可以增加顺铂对卵巢癌细胞的生长抑制作用,为临床进一步提高卵巢癌的疗效提供了研究基础。     

Novel therapeutic targets in lung cancer: Inhibitor of apoptosis proteins from laboratory to clinic

Lung cancer is the leading cause of cancer death worldwide. Despite the introduction of new agents and schedules, chemotherapy still obtains unsatisfactory overall response rates, rare complete remissions and responses of relatively short duration. The inhibitor of apoptosis proteins (IAPS) are a family of caspase inhibitors that selectively bind and inhibit caspases-3, -7, and -9. As caspase activation is central to apoptosis, novel therapeutic drugs that target IAPs enabling apoptosis to occur have potential as a treatment of malignancy. Several agents that target core components of the apoptotic signalling pathway are currently at an early stage of development. This review reports the progress being made in characterising the IAP family, with a focus on the available data relevant to the treatment of lung cancer.