滤光片对细胞核DNA含量检测的影响

目的探讨滤光片对图像分析仪测量DNA含量的影响。方法选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片,Feulgen染色和天青B染色,显微镜与摄像机之间分别插入400 nm、560 nm、590 nm、600 nm、626 nm、670 nm带通滤光片和中灰滤光片,利用TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的积分光密度（IOD）与平均光密度（AOD）和面积。结果肝细胞核在Feulgen染色法中呈紫红色,天青B染色法呈蓝色。Feulgen染色和天青B染色分别采用560 nm和600 nm的带通滤光片时,能够测得最大的IOD值,不同倍体肝细胞核间的比值接近2、4,CV值最低。与天青B染色方法相比,Feulgen染色法中不同倍体间的比值更接近2、4,CV值更低。结论适宜的滤光片可提高细胞核DNA含量测量结果的精确性和准确性。Feulgen染色测量结果精确性和准确性明显高于天青B染色,应作为首选的染色方法。     

染色质浓缩对细胞核DNA含量检测的影响

目的利用三种不同方法制备小鼠肝细胞涂片，探讨染色质浓缩对图像分析仪测量DNA含量的影响。方法本文选取10只成年健康雄性小鼠，采用传统涂片、液基制片法和甲醛固定后液基制片法制备小鼠肝细胞涂片。Feulgen染色。TIGER细胞图像分析仪分别测量三种涂片内肝细胞核的积分光密度、平均光密度和面积。结果三种涂片内肝细胞核分布均匀，轮廓清晰，呈紫红色。与传统涂片法相比。液基法内肝细胞核面积明显减小。类色质高度浓缩；相同倍体的肝细胞核在传统涂片中面积最大，平均光密度最低，各倍体间的比值最接近2和4，积分光密度CV值最低（〈3．5）。固定法和液基法平均光密度明显升高，各倍体间比值明显偏离2和4。积分光密度CV值〉6。结论不同制片方法可导致同一类型、处于相同功能状态的细胞核染色质浓缩程度产生明显差异，染色质浓缩可导致平均光密度值升高，积分光密度值降低，测量结果的精确性和准确性降低。     

组织切片对细胞核DNA含量检测的影响

目的探讨组织切片对图像分析仪测量细胞核DNA含量的影响。方法选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片和肝组织切片,肝组织切片分成两部分,分别用于Feulgen染色和石蜡包埋,包埋后的组织采用垂直切片,图像分析仪测量切片实际厚度,依据切片机标识厚度和测量厚度分别分组,TIGER细胞图像分析仪分别测量肝细胞涂片和组织切片内肝细胞核的积分光密度(IOD)。结果肝细胞涂片内各DNA含量倍体肝细胞核IOD间的比值接近2和4,IOD之变异系数(CV值)<3.5,肝组织切片IOD间比值明显偏离2和4,IOD之CV值均>6;切片机标识厚度为4、6、8和10μm组织切片平均测量厚度分别为6.75、7.18、6.96和7.59μm,测量厚度最大值为9.25μm,最小值为4.62μm;依据切片机标识厚度分组中不同切片厚度相同DNA含量倍体肝细胞核的IOD值差异均无统计学意义;依据测量厚度重新分组后5、6微米组与7、8、9微米组IOD值间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论组织切片的实际厚度与切片机标识厚度间存在明显差异,本实验方法可较准确地判断组织切片厚度;厚组织切片测量结果优于薄组织切片,但与细胞涂片相比,厚组织切片仍难...     

不同水解温度、时间对细胞核产物与DNA含量检测的影响

目的探讨水解产物变化趋势与染色效果的相关性以及两种不同染色方法达到最佳染色效果的水解时间,为科研和临床的应用提供有价值的参考。方法选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织,一部分制成恒定细胞数的肝细胞滴片,5N HCL水解后,紫外分光光度计扫描产物的最大吸收峰波长,并检测该产物OD值的变化; 另一部分肝组织制成肝细胞涂片,分别在室温和60℃温度下水解不同时间,应用改良和快速两种Feulgen法染色,图像分析仪检测和分析单个细胞核的DNA含量与倍体。结果（1）肝细胞滴片水解产物扫描在260 nm处有最大吸收波峰; （2）紫外分光光度计在室温和60℃水解温度下测得水解产物的量随着时间的延长逐渐增加; （3）同一大鼠在相同水解温度下,经过不同时间水解,同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下,IOD（5-7 min）〉IOD（9-15 min）〉IOD（1 min,20 min）,室温水解温度下,IOD（50 min）〉IOD（20-30 min,70-90 min）〉IOD（5-10min,100 min）。结论HCL对细胞核的水解作用使DNA双链中糖苷键断裂,醛基暴露,碱基脱至HCL中,且量逐渐增加; HCL水解时间与染色的效果不成正比,两种Feulgen染色法存在各自较佳染色效果的时间段,分别为：快速法5-7 min,改良法20-90 min。     

显微图像分析系统测量细胞核DNA含量误差的研究

检测显微图像分析系统测量细胞核ＤＮＡ含量的误差对于判断肿瘤细胞ＤＮＡ倍体分析的准确性具有重要意义。本文检测了ＴＩＧＥＲ显微图像分析仪的系统噪声、聚焦变化、光源亮度与光谱差异、背景光强度分布不均匀的测量误差。结果显示，（１）尽管实现了Ｉｏ和Ｉ在同一空间位置的测量，但是，它们仍给测量结果引入了测量误差，以背景光强度分布不均导致ＩＯＤ的测量误差最大；（２）应根据目标细胞的大小和密度，选择适当的物镜倍率，样品制备应使ＡＯＤ达到一定的密度值以上，才能最大限度地降低测量误差；（３）鸡红细胞核是综合检测和评价显微图像分析系统测量细胞光密度性能的良好生物学标准。     

两种染色方法在细胞核DNA含量检测中的应用及比较

目的 探讨改良、快速两种Feulgen染色方法达到最佳染色效果的水解时间段，为科研和临床的应用提供方法学指导。方法 选取5只成年健康雄性SD大鼠的肝组织，制成肝细胞涂片，分别在室温和60℃温度下水解不同时间，应用改良和快速两种方法染色，TIGER图像分析仪检测和分析单个肝细胞核的DNA含量。结果 （1）不同大鼠肝细胞涂片在同一水解温度、时间作用下，相同DNA倍体含量肝细胞的DNA含量大致相同，CV值均小于10％；（2）二、四、八倍体肝细胞核的DNA含量比值均接近2或4；（3）同一大鼠相同水解温度不同水解时间，同一倍体的肝细胞核DNA含量存在差异：60℃水解温度下，IOD（5-7min）〉IOD（9-15min）〉IOD（1min,20min），室温水解温度下，IOD（50min）〉IOD（20-30min,70-90min）〉IOD（5-1min,100min）。结论 HCL水解肝细胞涂片时间过长或过短均不能理想的染色，快速法和改良法Feulgen染色达较佳染色效果的时间段分别为：快速法5—7min，改良法20-90min。     

应用图像分析测定55例胃癌细胞核DNA含量

本文使用图像分析技术测定55例胃癌的核DNA相对含量。按照DNA组方图的弥散程度,将DNA倍体类型分为三种。Ⅰ型:二倍体或近二倍体区域有一明确的峰值;Ⅱ型:主要峰值位于四倍体或近四倍体处:Ⅲ型:广泛弥散无明确峰值出现。研究结果提示:弥漫型胃癌主要为Ⅰ型,而肠型胃癌则往往为高异倍体型。早期与进展期胃癌的倍体类型无明显差别,早期胃癌病例的DNA含量并不比进展期胃癌高。这个结论提示:肿瘤倍体类型在肿瘤发展早期即已决定,并不随肿瘤演进而改变。同时我们还发现DNA分布类型与肿块大小、淋巴结转移均无关。     

测定肿瘤细胞DNA含量和倍体中需斟酌的两个问题

随着图像分析技术的发展与普及 ,在化学成分定量分析中越来越多地使用图像分析仪。我们在实际应用图像分析仪测定肿瘤细胞ＤＮＡ含量和倍体时 ,发现有某些需斟酌的问题 ,现举其中两个与同道讨论 ,希望能起到抛砖引玉之效。1 图像内组织、细胞的吸光度 (Ａ)测量 :吸光度 (Ａ ,旧称光密度ＯＤ) ,是表示单色光通过细胞和组织时被吸收的程度。图像分析仪定量分析的依据———Ｌａｍｂｅｒｔ -Ｂｅｅｒ定律可表述如下 :Ａ(Ｘ ,Ｙ) =Ｌｏｇ[ＩＯ(Ｘ ,Ｙ) /Ｉｔ(Ｘ ,Ｙ) ](1)=Ｋ·Ｃ(Ｘ ,Ｙ)ｂ(Ｘ ,Ｙ) (2 )=Ｋ·Ｍ(Ｘ ,Ｙ) /Ｓ(Ｘ ,Ｙ) (3)Ａ为吸…     

影响肿瘤细胞核DNA含量分析的若干因素

采用静态细胞分析法(图像分析)和流式细胞分析法比较研究了影响肿瘤细胞核DNA含量分析正确结果的3种因素：分析方法、流式细胞分析所用的标本和同一肿瘤不同部位取材作流式细胞分析。结果表明：(1)同一肿瘤静态细胞分析与流式细胞分析DNA指数相关性好，但流式细胞分析DNA可能会遗漏接近二倍体的DNA异常。(2)同一肿瘤冷冻标本和石蜡标本分别行流式细胞分析，其DNA指数相关性良好，S期细胞百分数相关性稍差，用冷冻标本行流式细胞分析有较石蜡标本高的DNA异倍体检出率。(3)同一肿瘤不同部位取材DNA倍体水平结果相似，但DNA指数有差异。肿瘤细胞DNA含量异质性并不严重影响DNA异倍体的检出。     

应用流式细胞分析仪检测神经母细胞瘤石蜡包埋组织的DNA含量

神经母细胞瘤系儿童常见的恶性实体肿瘤,其疗效及预后与发病年龄、临床分期、生物学行为等因素有关。近年来,应用流式细胞分析仪(Flowcytometry,FCM)检测肿瘤细胞核的DNA含量,对深入了解肿瘤细胞生物特征及临床关系提供了重要信息。随着新鲜肿瘤标本检测方法的完善,Hedley于1983年首先将FCM技术应用于石蜡包埋肿瘤组织中DNA含量检测,提供了回顾性研究     

细胞DNA图像分析技术的应用方法

本文结合多年软件开发和图像分析仪的应用实践,介绍了利用图像分析仪进行细胞DNA含量的定量分析的具体步骤, 对照明光源不稳、照射视场不匀、系统吸光度线性不好带来的误差,提出切实可行的减少误差的办法。通过对鸡红细胞核、肝细胞核DNA含量的定量结果,得到了其二、四、八倍体的倍体关系直方图。     

IL-4、紫杉醇对Lewis肺癌细胞核形态、DNA含量及AgNORs的影响

目的　探讨 IL - 4、紫杉醇对 lewis肺癌的抑制作用。方法　将 L ewis肺癌细胞 (1.2 5× 10 6 个 /鼠 )接种于 C5 7BL/ 6小鼠皮下。将 40只小鼠随机分为 、 、 、 组 ,接种后第 5天起分别给予生理盐水、IL - 4、紫杉醇、IL - 4 紫杉醇。第 18天处死动物。利用图像分析仪对肿瘤细胞核形态、DNA含量及 Ag NORs计数进行测量。结果　 组核的面积为 37.0 37± 7.0 2 7μm2 ,周长为 2 2 .76 2± 4.312μm ,平均直径为 (3.136± 0 .35 1) μm,积分光密度为 (4 .2 94± 0 .992 ) ,Ag NORs计数为 (7.6 35± 1.16 0 ) ; 组核面积 (2 4.2 0 2±5 .0 12 )μm2 、周长 (18.6 2 5± 4.180 )μm、平均直径 (2 .6 42±0 .2 91) μm、积分光密度 (3.412± 0 .910 )、Ag NORs计数(5 .313± 0 .82 0 )比 组小 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ; 组核面积 (18.373± 4.833)μm2 、周长 (16 .5 2 2± 2 .5 18)μm、平均直径 (2 .40 1± 0 .2 88) μm、积分光密度 (3.0 96± 0 .771)、Ag NORs计数 (2 .6 70± 0 .40 1)比 组小 ,差异均有高度显著性 (P<0 .0 1) ; 组核面积 (16 .6 6 4± 4.6 71) μm2 、周长(15 .90 1± 2 .70 0 ) μm、平均直径 (2 .2 83± 0 .30 8) μm、积分光密度 (2 .70 7± 0 .80 7)、Ag NORs计数 (1.5     

应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性

目的探讨应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性。方法选取10只成年健康雄性小鼠，制备肝细胞涂片，Feulgen染色和天青蓝染色，TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的DNA含量与倍体。结果涂片内肝细胞核分布均匀，轮廓清晰；Feulgen染色法中肝细胞核呈紫红色，天青蓝染色法呈蓝色；作为参比的Feulgen染色涂片中不同倍体间IOD的比值比天青蓝染色标本更接近倍体数的比值，其CV值也低于天青蓝染色法。结论小鼠肝细胞涂片可应用于评估显示DNA染色方法的可靠性。     

应用显微分光光度计检测大肠癌及大肠其它病——DNA含量与发病学关系的研究

应用显微分光光度计分别对大肠癌、癌旁组织、慢性结肠炎、腺瘤性息肉和几种非腺瘤性息肉标本进行DNA定量分析。结果显示所有大肠癌标本DNA含量明显高于正常粘膜、慢性结肠炎、腺瘤(伴轻、中度不典型增生)和几种非腺瘤性息肉。DNA含量在腺瘤中随不典型增生程度的加重而明显增加,支持关于“腺瘤——癌演续”的理论,且表明这一演续过程为多步骤性。而其它几种非腺瘤性息肉则未发现与大肠癌之间有明显发病学关系。     

神经胶质瘤的DNA定量及核形态参数的自动图像分析

目的　应用自动图像分析系统 ,探讨神经胶质瘤的DNA定量及核形态参数与其肿瘤分级的关系。方法　收集 4 8例胶质细胞瘤 ,5例脑膜瘤 ,全部肿瘤标本的组织切片经Feulgen染色 ,采用本院自行设计的MIPS -Ⅲ型图像分析仪进行DNA检测。结果　胶质瘤Ⅲ -Ⅳ级肿瘤与Ⅰ-Ⅱ级比 ,10项指标均有差异 ,Ⅰ -Ⅱ级与Ⅱ -Ⅲ级 ,以及Ⅱ -Ⅲ与Ⅲ -Ⅳ级比 ,DI指数 >5c %、异倍体率和峰形有明显差异 ;脑膜瘤与Ⅰ -Ⅱ级胶质瘤比较 ,6项指标显示有差异 ;本研究也提供国人各级胶质瘤细胞核的各项形态学参数。结论　利用计算机图像DNA指数分析 ,可作为胶质瘤分级的参考指标。     

VEGF在甲状腺癌及转移淋巴结中的表达及与DNA倍体、AgNOR的关系

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）在甲状腺癌及其转移淋巴结中的表达及与癌细胞DNA倍体、核仁形成区（AgNOR）的关系。方法应用免疫组织化学SABC法检测136例甲状腺癌及淋巴结中VEGF的表达，同时进行细胞DNA含量及AgNOR自动图像分析检测，10例正常甲状腺组织作对照。结果10例正常甲状腺组织VEGF（一），136例甲状腺癌组织中VEGF阳性表达72．79％（99／136），淋巴结中VEGF阳性表达97％（132／136）。DNA倍体平均值及AgNOR计数5年以上生存组病例明显低于5年以内死亡组（P＜O．01，P＜O．05）。结论检测VEGF、DNA倍体及Ag－NOR有助于评估甲状腺癌的生物学行为及预后。     

乳腺癌细胞核DNA含量不同分析方法的比较

目的:比较组织原位分析乳腺癌细胞核DNA含量的不同方法。方法:收集30例乳腺癌标本的归档蜡块,4m和相邻8m切片各一张,Feulgen染色,采用TIGER细胞图像分析仪测量每个癌巢的以单个完整细胞核体积为单位计算的DNA指数和以细胞核切面面积为单位计算的DNA指数,它们均以同一病例正常上皮细胞核作内参照。结果:(1)同一病例的VIOD分布直方图比IOD更集中;(2)30例标本的90个样本中,以VIOD为单位所测得的DI值比以IOD为单位测得的DI值高。结论:使用细胞图像分析仪对组织切片内细胞核DNA含量进行定量分析时,应以单个完整细胞核体积的DNA含量为单位,计算DI值。     

肝癌患者癌旁组织DNA倍体,SPF,AFP和病理分级同步检测的临床意义

为探讨肝癌癌旁组织ＤＮＡ倍体、Ｓ期细胞比率（ＳＰＦ）、甲胎蛋白（ＡＦＰ）和病理分级等指标与患者肿瘤恶性度及预后的关系。对４２例肝癌患者癌旁组织倍体和ＳＰＦ、血清ＡＦＰ及肿瘤病理分级进行同步检测。结果显示患者癌旁组织异倍体检出率为５９．５％。癌旁组织倍体、ＳＰＦ、ＡＦＰ和病理分级之间均密切相关。根据患者对４项指标反应的不同分为预后不同的５级。这样，从Ⅰ级至Ⅴ级患者肿瘤恶性度越来越高，预后越来越差。其５ａ生存率和生存期分别为１００％、８５．７％、５５．６％、４４．４％、０和７５．９个月、６５．１个月、４７．４个月、４４．２个月、８７个月。认为肝癌癌旁组织ＤＮＡ倍体、ＳＰＦ、ＡＦＰ和病理分级等指标综合判断肿瘤恶性度和预后在临床上有重要意义