中药靶向微小RNA-21防治糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)是一类由糖尿病(Diabetes mellitus, DM)引起的慢性肾脏疾病,发病机制复杂,受多种因素调控。研究已证实微小RNA(microRNAs, miRNAs)与DN发展密切相关,尤其是微小RNA-21(MicroRNA-21,miR-21)在参与调控DN发病过程中占有重要作用。课题组前期研究也发现,miR-21与细胞自噬和肾纤维化通路存在密切联系,但尚未进行深入研究且目前相关的研究性论文报道相对较少。故本文以miR-21与DN的关系及靶向miR-21的中药为切入点,探讨miR-21在DN中的作用机制,以期为防治DN寻求新靶点,研发新药物,及为后续实验研究提供一定的理论支撑。     

三氧化二砷与化疗交替治疗初治急性早幼粒细胞白血病缓解后的疗效观察

目的:探讨三氧化二砷与化疗交替治疗初治急性早幼粒细胞白血病诱导分化缓解后的临床疗效。方法:选择25例患者使用三氧化二砷与化疗交替治疗初治诱导分化缓解后急性早幼粒细胞白血病,并与25例初治急性早幼粒细胞白血病缓解后单用化疗的疗效比较,治疗后3年随访临床疗效以及并发症。结果:观察组3年随访复发例数显著少于对照组(P<0.05),无病生存例数和存活例数显著多于对照组(P<0.05),两组治疗期间的并发症差异无统计学意义(P>0.05)。结论:三氧化二砷与化疗交替巩固治疗急性早幼粒细胞白血病其临床疗效确定,且不良反应少,值得临床推广应用。     

细胞内砷浓度与三氧化二砷治疗敏感性的关系

 目的 研究几种白血病和实体瘤细胞内三氧化二砷（As₂O₃）浓度对其治疗敏感性的影响。方法 将几种白血病细胞株和原代细胞及实体瘤细胞株分别给予特定浓度和时间As₂O₃干预后，原子荧光法测定细胞内砷浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 一定浓度和时间As₂O₃干预后，不同细胞内药物浓度不同。NB4细胞株＞APL原代＞K562细胞株＞CML原代＞HL60细胞株＞AML-M2原代＞HeLa细胞株＞肝癌腹水H₂₂细胞株＞胃腺癌SGC-7901细胞株＞喉癌Hep-2细胞株。在最低促凋亡浓度水平以上的低浓度、长时间持续干预比短期高浓度干预的细胞内砷浓度高，凋亡率大。结论 细胞内砷浓度不同可能是As₂O₃治疗敏感性不同的原因之一。     

三氧化二砷抑制骨髓间质干细胞活性的实验研究

目的评估不同浓度三氧化二砷(ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间质干细胞(BMMSCs)生长活性的影响。方法 96孔板培养CML患者第四代BMMSCs 24 h后培养体系中加入终浓度分别为1,2.5,5μmol/L ATO,培养48 h后倒置显微镜下观察各浓度组细胞生长情况及细胞形态,采用3-(4,5-二甲基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(MTT)法检测BMMSCs存活情况,并计算生长抑制率。结果 ATO明显抑制BMMSCs的生长,随ATO浓度升高BMMSCs细胞密度降低,高浓度组细胞变圆、脱落明显;2.5和5μmol/L组生长抑制率高于1.0μmol/L组(P<0.05),5μmol/L组抑制率较2.5μmol/L组高但无统计学意义(P>0.05)。结论 ATO显著抑制BMMSCs生长活性,起效浓度为1μmol/L,其抑制作用呈现浓度相关性。     

三氧化二砷联合全反式维甲酸治疗急性早幼粒细胞白血病的意义研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）与全反式维甲酸（ATRA）联合治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的临床意义。方法 对80例急性早幼粒细胞白血病患者进行回顾性分析, 将患者分为ATRA组和ATRA联合As₂O₃（联合）组, 观察比较两组完全缓解（CR）率、早期病死率、外周血血红蛋白及血小板恢复时间、不良反应发生率等。结果 对初发患者, 联合组与ATRA组CR率分别为91.7%和87.5%, 差异无统计学意义（P>0.05）;联合组达CR时间、血红蛋白及血小板恢复时间分别为（28.0±7.8）天、（22.36±8.72）天和（19.38±9.52）天, 而ATRA组分别为（47.7±10.9）天、（28.40±8.95）天和（28.03±7.29）天, 联合组较ATRA组明显缩短;联合组早期病死率为7.1%, 较ATRA组的13.2%有降低趋势（P>0.05）;两组不良反应发生率差异无统计学意义（P>0.05）。结论 ATRA与As₂O₃联合使用治疗初发APL患者, 较单用ATRA治疗有其优势, 有望降低早期病死率, 且联用不加重不良反应。     

三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗白血病的疗效机理。该当以ＨＬ－６０细胞株为体外模型，终浓度为０．２０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３作用２４、４８ｈ后，用ＰＩ／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ双标记，流式细胞术观察Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０细胞凋亡及其对细胞株端粒酶活性的影响。结果：Ａｓ２Ｏ３作用于ＨＬ－６０细胞后ＰＩ阴性／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ细胞性细胞增多，提示细胞发生凋亡，ＤＮＡ周期分析显示主要作用在     

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞微小RNA-146a表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)微小RNA-146a(miRNA-146a)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法:选用健康雌性Wistar大鼠,随机分为造模组、正常对照组(10只,简称正常组),造模组采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。再选取造模成功大鼠50只随机分为模型组(10只)、MTX组(10只)、温化蠲痹方低剂量组(n=10,简称中药1组)、温化蠲痹方中剂量组(n=10,简称中药2组)、温化蠲痹方高剂量组(n=10,简称中药3组)。中药1、2、3组分别给予温化蠲痹方22.9 g/kg·d、45.8 g/kg·d、68.7 g/kg·d灌胃,模型组灌胃生理盐水,均每天1次,MTX组按0.78 mg/kg剂量灌胃MTX混悬液,每周1次,连续30 d。采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度。给药结束后,提取各组大鼠外周单个核细胞,采用实时定量PCR法检测miRNA-146a表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P0.01);与MTX组比较,中药1、2、3组大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P0.05);与治疗前比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠PBMC miRNA-146a表达明显升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,中药1、2、3组和MTX组大鼠PBMC miRNA-146a表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与MTX比较,中药1、2、3组大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P0.05);中药1、2、3组比较,大鼠PBMC miRNA-146a表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达升高。中药温化蠲痹方下调CIA大鼠PBMC miRNA-146a表达无剂量依赖性,其可能通过下调miRNA-146a表达,而调节免疫细胞分化、信号转导等达到治疗CIA的作用。     

隐丹参酮对白血病细胞伊马替尼敏感性和P-糖蛋白表达作用的研究

隐丹参酮是丹参中主要的脂溶性活性化合物之一,对白血病等多种恶性肿瘤有显著的抑制作用,并可有效提高伊马替尼的化疗效果,但其发挥功能的分子机制仍未阐明.该文利用白血病细胞K562及其伊马替尼耐药株K562-R,系统研究了隐丹参酮对细胞伊马替尼的敏感性和P-糖蛋白表达的影响.利用MTT法检测隐丹参酮对伊马替尼增殖抑制功能的影响,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测细胞凋亡调控蛋白Caspase-3,Caspase-9,PARP的活性变化情况;梯度浓度的隐丹参酮处理细胞后,Western blot和流式细胞仪检测细胞中P-糖蛋白的表达水平变化,高效液相色谱法检测伊马替尼的胞内药物浓度的变化.结果隐丹参酮预处理后,显著增强了伊马替尼对K562和K562-R细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,细胞的促凋亡蛋白Caspase-3,Caspase-9,PARP的降解产物表达水平显著提高,与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).而隐丹参酮对白血病细胞中P-糖蛋白表达和伊马替尼胞内药物积累没有影响.结果表明隐丹参酮可提高CML细胞对伊马替尼的化疗敏感性,其作用机制不依赖于对P-糖蛋白表达的抑制和胞内药物浓度的提高.     

益气活血固肾颗粒对db/db小鼠肾脏的保护作用及对smad3介导miR-NA-21、miRNA-29s表达的影响

目的 观察益气活血固肾颗粒对db/db小鼠肾脏保护作用及肾脏组织miRNAs表达的影响,进一步确定其改善糖尿病肾病的药效及作用机制.方法 选用db/db糖尿病肾病小鼠模型,共分为6组.正常对照组(db/m),模型组(db/db),阳性对照组(盐酸二甲双胍),益气活血固肾颗粒高、中、低剂量组(292.5、585、1 17...     

三氧化二砷对急性淋巴细胞白血病原代细胞的作用

探讨三氧化二砷（As2O3）对急性淋巴细胞白血病（ALL）原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据。方法：采用MTT法检测As7O3,对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;采用细胞形态学和DNA琼脂糖凝胶电泳技术,观察As2O3在体外诱导ALL原代白血病细胞的凋亡作用;采用流式细胞术检测原代白血病细胞在As2O3,处理前后的Caspase-3活性水平变化及Bcl-2表达水平。结果：①As2O3浓度为1．0—10．0μmol／L的As20,可以明显抑制ALL原代白血病细胞的生长,并呈时间与浓度依赖性。②As2O3作用于ALL原代白血病细胞出现典型细胞凋亡形态学改变、DNA出现了特征性“阶梯形”条带和细胞凋亡峰。③16例ALL患者BMMNCCaspase-3活性水平为4．11±1．93;经As2O3作用后Caspase-3活性水平为26．39±8．36,明显高于对照组11．54±2．78,P〈0．001。④本组患者治疗有效者9例,As2O3作用前后Caspase-3活性水平为4．83±0．98、29．67±7．93;无效者7例Caspase-3活性水平为3．19±2．50、20．59±4．63;As2O3作用后治疗有效组Caspase-3活性明显升高,P〈0．05。⑤16例ALL患者BMMNCBcl-2表达水平为28．08±6．35,其中治疗有效组为26．32±5．79,无效组为32．63±5．47,P〈0．05。⑦As2O3作用前后Bcl-2高表达组Caspase-3活性水平分别为4．07±1．26、22．10±5．64;而Bcl-2低表达组分别为4．14±2．41、32．63±5．47。As2O3作用后两组cas—pase-3活性水平上升程度明显不同,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Ass2O3在体外对ALL原代白血病细胞生长具有抑制作用,呈现明显的剂量及时间依赖性关系。As2O3能通过激活Caspase-3途径诱导ALL原代白血病细胞凋亡,而Bcl-2可在一定程度上抑制As2O3激活Caspase-3诱导ALL原代白血病细胞凋亡。     

Clinical Implementation of Arsenic Trioxide

Introduction of arsenic trioxide (ATO, As2O3) to the treatment of acute promyelocytic leukemia in the 1970s enlightened an effective treatment approach for the disease. Decades later, knowledge on this agent’s further functions has rapidly advanced so that it has entered common use in hematology and oncology. In addition, As2O3 reportedly induces DNA and chromosomal damage, inhibits DNA repair, and alters DNA methylation in mammalian cells. The compound is becoming increasingly reasonable as a treatment modality to rectify genetic blood disorders and other cancer types. Nevertheless, limitations of As2O3 typically emerged from drug resistance, adverse effects and secondary tumors, which may result in a myriad of outcomes. Though prolonged exposure to As2O3 ensues poisons and genome alternations that do not permanently change the DNA sequence, other synergistic alterations should be considered as replacement. In this review, we recollect the discovery and clinical implementation of As2O3, describe its advantages and shortcomings for leukemia and solid cancer treatment, and consider future prospects for engendering useful impacts.     

三氧化二砷对哮喘小鼠肺内树突状细胞作用的研究

目的:研究哮喘小鼠肺内树突状细胞(DC)分布、募集的特点及三氧化二砷(As_2O_3)对其的影响。方法:将 BALB/c 小鼠30只随机分为3组,即对照组、模型组和 As_2O_3组。采用免疫组织化学染色技术检测小鼠肺、气道 DC;计算机图像分析技术对 DC 进行定量检测。结果:对照组小鼠整个肺组织包括气管、支气管、肺泡和脏层胸膜构成了一个非淋巴样树突状细胞(NLDC)-145~+DC 网络,NLDC-145~+DC 密度从大气道到小气道分别为(500±50)个/mm~2到(60±10)个/mm~2上皮面积(P<0.05);模型组小鼠肺内 NLDC-145~+DC 分布与对照组相似,但密度较对照组显著增加(P<0.01);As_2O_3组小鼠肺内 NLDC-145~+DC 分布与模型组相似,但密度显著下降(P<0.01)。结论:树突状细胞在整个肺组织构成了一个完整的 NLDC-145~+DC网络;下调肺内 DC 密度,而不影响其肺内分布,可能是 As_2O_3治疗哮喘的一个重要机制。     

三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤肺转移作用的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）对小鼠B16黑色素瘤肺转移的抑制作用。     

三氧化二砷与刺五加合用诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷与刺五加合用对癌细胞生长的抑制作用及其机理。方法以HeLa细胞的生长抑制情况,流式细胞仪PI单染法检测药物诱导细胞的凋亡状况。结果两药合用24 h组细胞变小变圆,脱落情况都较其他组明显,该组细胞生长抑制率明显高于单用组,合用24 h组细胞的凋亡率明显高于合用16 h和8 h组(P<0.01)。结论刺五加可以作为三氧化二砷的抗癌增效剂,两药合用有很强的抗癌活性,其作用机理与抑制癌细胞生长、诱导其凋亡有关。     

三氧化二砷对豚鼠心室肌细胞钾电流的影响

 目的研究三氧化二砷(arsen ic trioxide,As₂O₃)对豚鼠心室肌细胞钾电流的影响,旨在探讨As₂O₃诱导QT间期延长的离子靶点。方法酶解法分离豚鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术深入研究As₂O₃对豚鼠单个心室肌细胞动作电位时程(APD)、延迟整流钾电流(IK)和内向整流钾电流(I_K1)的影响。结果As₂O₃50和100μmol·L^-1分别使APD50从对照组的(273±78)m s增加到(456±35)m s(P<0.01)和(513±41)m s(P<0.01),使APD90从对照组的(286±82)m s增加到(468±36)m s(P<0.01)和(524±40)m s(P<0.01);实验电压为+70 mV时,50和100μmol·L^-1As₂O₃分别使I_K从对照组的(6.7±1.7)pA/pF减少至(4.9±1.6)pA/pF(P<0.05)和(4.5±1.8)pA/pF(P<0.05);在实验电压为-120 mV时,As₂O₃50和100μmol·L^-1分别使IK1从对照组的(-20±5)pA/pF减少至(-13±3)pA/pF(P<0.05)和(-11±2)pA/pF(P<0.05)。结论As₂O₃诱导QT间期延长的离子机制可能与其扰乱了心肌细胞膜离子通道间的平衡,抑制I_K和I_K1,从而导致APD延长有关。     

三氧化二砷对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3)对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡的影响及其作用机制。方法：豚鼠30只随机分为3组，即对照组、哮喘组和As2O3(2mg/kg)治疗组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿嘧啶缺口末端标记（TdT-mediated dUTP nick end labelling,TUNEL)技术原位标记细胞凋亡；计算机图像分析技术对气道壁EOS浸润和EOS凋亡进行定量测定。结果：对照组豚鼠气道壁EOS计数（4．4±2．5）个／HP，EOS凋亡指数为（0．42±0．08）％；与对照组比较，哮喘组豚鼠气道壁EOS浸润显著增加（P＜0．01），EOS凋亡指数显著下降（P＜0．01）；As2O3治疗组，气道壁EOS浸润显著下降（P＜0．01），EOS凋亡指数显著增加（P＜0．01），EOS凋亡指数显著下降（P＜0．01）；As2O3治疗组，气道壁EOS浸润显著下降（P＜0．01），EOS凋亡指数明显增加（P＜0．01），并且气道壁EOS浸润数量与EOS凋亡指数之间呈显著性负相关（r=-0.949,P<0.01)。结论：EOS凋亡异常是支气管哮喘的一个重要的发病机制；As2O3通过促进肺内EOS凋亡，下调EOS浸润数量，从而减轻了哮喘气道炎症；小剂量As2O3治疗哮喘既有效又相对安全，具有潜在的应用价值。     

川芎嗪联合三氧化二砷对人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞增殖的影响

目的 探讨川芎嗪(TMP)联合三氧化二砷(As2O3)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60增殖的影响及其治疗APL的作用机制.方法 采用HL-60和脐带内皮细胞系ECV-304两种细胞株,分为空白组、TMP组、As2O3组、TMP+ As2O3组,每组设4个复孔,经TMP单独或联合As2O3作用后,应用噻唑蓝(MTT)实验测定HL-60细胞增殖变化;检测HL-60细胞血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白表达;台盼蓝染色计数绘制ECV-304细胞生长曲线;流式细胞仪检测ECV-304细胞早期凋亡率;倒置显微镜观察ECV-304细胞贴壁情况.结果 TMP能明显抑制HL-60、ECV-304细胞增殖,且能加强As2O3抑制增殖的作用;VEGF mRNA和蛋白表达在TMP与As2O3联合处理后明显减少;TMP与As2O3均能诱导ECV-304细胞早期凋亡,降低细胞贴壁能力,联合作用后效果均明显增强.结论 TMP联合As2O3抑制APL HL-60细胞增殖作用增强,抗血管新生是其治疗APL的可能机制.