氯通道阻滞剂抑制人肾小球系膜细胞增殖

目的研究氯通道阻滞剂对肾小球系膜细胞增殖的作用。方法细胞计数和3H-TdR参入量测定确定细胞增殖,应用流式细胞术检测细胞周期时相。结果同对照组相比,氯通道阻滞剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸5-nitro-(3-phenylpropylamino)-benzoicacid,NPPB、尼氟灭酸使人肾小球系膜细胞数和3H-TdR参入量明显减少(P<0·01,n=8),并呈剂量依赖关系,但不增加系膜细胞乳酸脱氢酶释放量(P>0·05,n=8)。NPPB和尼氟灭酸均使细胞周期停滞在G0/G1期(n=3)。结论氯通道阻滞剂NPPB、尼氟灭酸对人肾小球系膜细胞增殖具有抑制作用。     

醛固酮及其受体拮抗剂对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 研究醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SPI)对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响.方法 应用MTT法检测系膜细胞增殖,用流式细胞术检测细胞周期各时相的百分比.结果 MTT结果显示,ALD抑制肾小球系膜细胞增殖(与对照组比较P＜0.01),并具有一定的剂量依赖和时间依赖性,SPI能拮抗其作用.流式细胞术结果显示,ALD作用于系膜细胞24 h,G1期细胞数增多,S期细胞数减少(与对照组比较,P＜0.01).结论 ALD通过调控细胞周期抑制肾小球系膜细胞增殖.     

肝素对大鼠肾小球系膜细胞增殖和核因子κB的抑制作用

<正>肾小球系膜细胞增殖在肾小球肾炎的发生发展中起重要的病理作用。有研究表明,核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)与系膜细胞增殖密切相关[1,2]。近年来有不少体外、体内试验证实肝素能抑制系膜细胞增殖,减轻肾脏病变[3,4],但其是否能通过NF-κB起作用,目前还没有明确报道。本研究通过研究肝素对大鼠肾小球系膜细胞NF-κB的作用及其对系膜细胞增殖的影响,旨在探讨肝素抑制系膜细胞增殖的细胞内机制。     

他克莫司对人肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨他克莫司对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖的影响及可能机制。方法采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的他克莫司处理后系膜细胞的增殖情况;用流式细胞仪检测不同浓度的他克莫司作用48、72h后系膜细胞细胞周期的改变;用流式细胞仪检测不同浓度的他克莫司作用72h后系膜细胞发生凋亡的情况。结果①浓度为1μmol/L的他克莫司对系膜细胞的增殖无明显抑制作用;作用24、48和72h后,浓度为5～20μmol/L的他克莫司能显著抑制系膜细胞的增殖;随着他克莫司浓度的增大,抑制作用更显著,呈一定的剂量—效应关系;随着他克莫司作用时间的延长,抑制作用更显著,呈一定的时间—效应关系。②5μmol/L的他克莫司作用48、72h,G0/G1期的系膜细胞百分比增高,S期的系膜细胞百分比降低,细胞周期阻滞于G0/G1期。③5μmol/L的他克莫司作用72h,对系膜细胞的凋亡无明显影响。结论他克莫司显著抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖,且呈剂量和时间依赖性;其可能机制是使系膜细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期。     

冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的:研究冬虫夏草对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的影响。结果:冬虫夏草抑制脂多糖刺激的大鼠系膜细胞增殖(P<0.05)。结论:冬虫夏草对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖有抑制作用。     

冬虫夏草对离体人肾小球系膜增殖的影响

目的 :观察冬虫夏草对离体人肾小球系膜增殖的疗效 ,并探讨其机制。方法 :利用体外培养的人肾小球系膜细胞 ,采用检测 3H胸腺嘧啶掺入量的方法 ,研究北冬虫夏草和天然冬虫夏草对低密度脂蛋白 (L DL )引起系膜细胞增殖的影响。结果 :2组冬虫夏草组的 3H掺入率均明显低于 L DL对照组 (P<0 .0 1) ,而 2组冬虫夏草之间同一浓度相比无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :冬虫夏草明显抑制 L DL引起的系膜细胞增殖 ,北冬虫夏草与天然冬虫夏草作用相似。其机制可能是由于冬虫夏草间接抑制了系膜细胞增殖过程中 DNA的合成。     

甲泼尼龙苯丁酸氮芥及二者联合对人系膜细胞增殖和细胞周期的影响

肾小球系膜细胞（glomemlar mesangial cell,MC）是反应最活跃的肾小球固有细胞,MC增殖的直接结果是细胞外基质（ECM）蛋白的过度合成及肾小球硬化。系膜细胞的增殖是慢性肾脏病进展到。肾小球硬化和纤维化的关键环节．最后发展为终末期肾功能衰竭、尿毒症。研究表明,甲泼尼龙和各种免疫抑制剂联合使用对系膜细胞的增殖起到有效的抑制作用。但在临床上会出现很多不良反应,如何能将药物的不良反应降低,而同时发挥最大的治疗作用,是我们目前研究的课题。甲泼尼龙作为一线药物用于原发性和继发性肾小球疾病的治疗。苯丁酸氮芥是治疗增殖性肾小球肾炎常用的免疫抑制剂。     

系膜细胞增殖与细胞周期调节蛋白

<正>系膜细胞增殖是多种肾小球疾病的共同特征,包括免疫介导的肾小球疾病如IgA肾病、膜增殖性肾小球肾炎、狼疮肾炎;代谢性肾病如糖尿病肾病;血流动力学异常介导的肾病如5/6肾切除等。继发于系膜细胞增殖的细胞外基质(ECM)增多和肾小球滤过功能下降是慢性肾脏病(CKD)进展的重要原因。因此,调控系膜细胞增殖具有重要的意义。针对不同类型的损伤,肾脏的各种固有细胞可表现为增殖、肥大、凋亡、分化等,而不同细胞的不同反应决定了这种肾小球损伤的组织病理学和临床表现特征。这些细胞反应乍看上去毫不相关,实际上,细胞的最终命运是在细胞周期水平由共同的调控者——细胞周期调节蛋白决定的。     

狼疮性肾炎肾小球系膜细胞增殖中HMGB1的作用机制研究

目的 分析高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在狼疮性肾炎（LN）中的促炎表达及其肾小球系膜细胞（HMC）增殖机制。方法 选取我院收治的Ⅳ型狼疮性肾炎患者35例,提取入选者癌旁远端正常组织样本作为对照组,提取入选者肾组织肾穿样本为观察组,实施免疫荧光和免疫组织化学分析法分别检测入选者肾小球细胞HMGB1和IκBα蛋白含量,以重组人HMGB1为介质刺激HMC增殖并运用BrdU标记法检验细胞增殖情况,采用Westernblot法测定IκBα、p65蛋白水平。结果 观察组肾小球细胞中HMGB1水平明显高于对照组,且IκBα蛋白水平低于对照组（P<0.05）;观察组100μg·L^-1、200μg·L^-1重组人HMGB1蛋白刺激8 h、12 h后,HMC细胞增殖水平明显升高（P<0.05）,但与对照组比较差异不明显（P>0.05）;与对照组比较,观察组p65蛋白水平升高明显,且IκBα水平大幅下降（P<0.05）。结论 以活化NF-κB信号通路进而加快狼疮性肾炎患者肾小球系膜细胞增殖速度可能是高迁移率族蛋白B1促炎机制的一种表达形式...     

氯通道阻断剂和白头翁皂苷的协同溶血作用

目的研究氯通道阻断剂对白头翁皂苷溶血的影响。方法用细胞图像软件记录并分析白头翁皂苷的溶血过程,检测红细胞溶血率,并观察氯通道阻断剂对白头翁皂苷溶血的影响。结果白头翁皂苷药物引起人红细胞溶血,溶血作用呈浓度依赖性,在0.5～2 mmol.L-1范围内,随药物浓度增高,溶血率越高,且红细胞发生溶血所需时间越短。氯通道阻断剂NPPB、tamoxifen可以促进白头翁皂苷的溶血作用,与单用白头翁皂苷组比较,在相同作用时间条件下,联合应用白头翁皂苷与氯通道阻断剂(NPPB、tamoxifen)时,溶血率明显提高,且发生红细胞全部溶血所需的时间明显缩短。结论白头翁皂苷溶血作用呈浓度依赖性,氯通道阻断剂与白头翁皂苷有协同溶血作用。     

氯通道阻断剂对大鼠主动脉环收缩和舒张反应的影响

目的　观察氯通道阻断剂DIDS和呋塞米(furosemide)对苯肾上腺素 (phenylephrine,PHE)引起的收缩反应和ATP引起的内皮依赖性舒张效应的影响。方法　采用内皮完整和去内皮的大鼠离体主动脉环 ,进行等长张力实验。结果　DIDS(1～ 30 0 μmol·L-1)和furosemide(10～ 32 0μmol·L-1)均浓度依赖性抑制PHE引起的收缩反应 ,但对内皮完整的血管环抑制率和去内皮的血管环抑制率不同 ,DIDS的IC50 分别为 (12 0± 8 0 ) μmol·L-1和 (2 8 3± 7 3)μmol·L-1;furosemide的IC50 分别为 (17 9± 6 6 ) μmol·L-1和 (41 0± 15 6 ) μmol·L-1。DIDS(10 0 μmol·L-1)对 10μmol·L-1和 10 0 μmol·L-1的ATP舒张无影响 ,但可增加 1mmol·L-1ATP引起的舒张效应 (P <0 0 5 ) ;furosemide(2 0 0μmol·L-1)对 10 μmol·L-1的ATP舒张无影响 ,但可使 10 0μmol·L-1ATP和 1mmol·L-1ATP引起的舒张效应增强 (P<0 0 5 )。结论　DIDS和furosemide可抑制PHE引起的收缩 ,且对带内皮血管环的抑制率均大于去内皮血管环的抑制率 ,并可增加ATP引起的内皮依赖性舒张。     

1,25（OH）2D3对人肾小球系膜细胞增殖及PCNA表达的影响

目的探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25（OH）₂D₃]对人肾小球系膜细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）表达及细胞增殖的影响。方法体外培养人肾小球系膜细胞,取传代培养至3⁸代细胞随机分为4组:正常对照组（加含5%胎牛血清DMEM培养基）,增殖对照组（EGF组,加10μg/L的EGF）,一般干预组[VD组,加10^-8mol/L 1,25（OH）₂D₃],增殖干预组[EGF+VD组,加10μg/L EGF及10^-8mol/L1,25（OH）₂D₃],均作用48 h。流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot检测各组PCNA表达的情况。结果 （1）细胞周期。与正常对照组相比,EGF组G₁期细胞明显减少,S、G2/M期细胞增多,增殖指数（PI）较高;VD组G₁期细胞明显增多,S、G₂/M期细胞减少,PI较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组G₁期细胞增多,S、G₂/M期细胞减少,PI较低,差异均有统计学意义。（2）系膜细胞中PCNA蛋白的表达。与正常对照组相比,EGF组PCNA的表达较高,VD组PCNA的表达较低;与EGF组相比,VD组和EGF+VD组PCNA的表达较低。结论 1,25（OH）₂D₃通过阻滞细胞周期、抑制PCNA的表达,从而抑制人肾小球系膜细胞的增殖。     

氯通道阻断剂对KCl、5-HT引起的兔脑椎基底动脉血管环收缩效应的影响

目的　探讨不同种类氯通道阻断剂在不同激动剂引起的脑血管平滑肌收缩反应中的作用。方法　记录离体兔脑椎基底动脉环收缩反应。结果　①氯通道阻断剂DIDS、Furosemide及NPPB均浓度依赖性抑制高K+ 及 5 HT引起血管环收缩反应 ,DIDS、Furosemide及NPPB对 5 HT引起收缩的抑制作用明显强于对KCl的作用 ;②在 5 HT引起血管收缩反应中 ,给予SK&F96 36 5引起血管最大舒张的基础上 ,DIDS、Furosemide及NPPB均可引起血管进一步舒张。结论　氯通道可能参与了由高K+ 去极化和 5 HT引起的兔脑椎基底动脉环收缩反应     

氯通道阻断剂对H_2O_2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的观察氯通道阻断剂对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响,探讨氯通道在RIN-mβ细胞凋亡中的作用。方法采用H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡模型,观察氯通道阻断剂(DIDS、NPPB和NFA)对细胞存活率、形态学变化、凋亡的影响。结果氯通道阻断剂单用时对胰岛RIN-mβ细胞活力无明显影响,但能明显提高H2O2处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率。与模型对照组相比,氯通道阻断剂DIDS、NPPB和NFA对抗组细胞存活率明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论氯通道阻断剂对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

Cl~-通道阻断剂对5-HT和CPA引起的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞Ca~(2+)内流的影响

目的　在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反应的影响 ,以探讨脑血管平滑肌细胞中 5 HT引起Ca2 + 内流的特性、Cl-通道与Ca2 + 内流的关系。方法　采用生物荧光双波长影像分析系统瞬即测定单细胞胞质[Ca2 + ]i 技术。结果　① 5 HT和CPA均能诱导平滑肌细胞[Ca2 + ]i 呈双相升高 ,并且 5 HT诱导的Ca2 + 释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 + 池的一部分 ;②尼莫地平对 5 HT和CPA触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而SK&F963 65可阻止二者触发的Ca2 + 内流 ;③Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB呈浓度依赖性抑制Ca2 + 内流 ,在SK&F963 65最大限度抑制Ca2 + 内流后 ,DIDS、NPPB可进一步抑制Ca2 + 内流 ;而Ca2 +内流被DIDS、NPPB分别最大抑制后 ,SK&F963 65也可进一步抑制Ca2 + 内流。结论　 5 HT引起的Ca2 + 内流是经SK&F963 65敏感的非VDC ,其中包含Ca2 + 释放引起的Ca2 + 内流 (CRAC)成分与非CRAC成分 ,并且这两部分Ca2 +内流均与DIDS、NPPB敏感的Cl-通道开放有关     

Adrenalectomy potentiates the antinociceptive effects of calcium channel blockers

Calcium channel blockers can modulate the nociceptive threshold. However, the underlying mechanism(s), especially the role of hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis, on this effect has not yet been clarified. In the present study we investigated the analgesic effect of verapamil, diltiazem and nimodipine in intact and adrenalectomized (ADX) male rats and also measured the effect of these drugs on HPA function. The tail-flick and hot-plate tests were used to assess the nociceptive threshold before and 15, 30, 60 and 120 min after drug administration. Corticosterone level was measured by radioimmunoassay as a marker of HPA function. Our results showed that these drugs could elicit antinociceptive effects which were more prominent in the hot-plate than in the tail-flick tests. Following the exclusion of adrenal glands these drugs showed stronger analgesic effects. Acute administration of verapamil, diltiazem and nimodipine produced significant decrease in plasma corticosterone level that was more prominent by nimodipine. In conclusion, the results of our study show that the HPA function has an important role in the antinociceptive effect of calcium channel blockers.     

Inhibitory effects and mechanism of 25-OH-PPD on glomerular mesangial cell proliferation induced by high glucose

ObjectiveTo investigate the protective effects and potential mechanism of the compound 25-OH-PPD (PPD) on the glomerular mesangial cells (GMC) under high glucose condition.MethodsThe hypertrophic GMC cells were established by DMEM containing glucose and randomly divided into five groups, including the normal control group (Control), the high glucose model group (HG, 25 mmol L⁻¹), the PPD low dose group (1 μmol L⁻¹, PPD-L), the PPD middle dose group (5 μmol L⁻¹, PPD −M) and the PPD high dose group (10 μmol L⁻¹, UCN-H). The GMC were incubated for 48 h under different treatment factors. Total protein content was determined by Lowry method. The diameter of the single GMC and volume were measured by computer photograph analysis system. The GMC cell viability was analyzed by MTT assay. The level of malondialdehyde (MDA), the content of glutathione (GSH) and superoxide dismutase (SOD) activity were measured by ELISA. [Ca²⁺]_і transient was measured by Till image system and by cell-loading Fura-2/AM. The expression of COX-1 and COX-2 were also determined using ELISA method.ResultsThe viability of GMC and the total protein content were decreased in HG group, different dosage PPD group could increase these indexes (P < 0.05). The level of MDA was increased, the content of GSH and SOD was decreased in HG group, while PPD could reduce the MDA and enhance GSH and SOD (P < 0.05). Following treatment with different dosage (PPD-L, PPD-M or PPD-H), the [Ca²⁺]_і transient was reduced (P < 0.05 or P < 0.01). Moreover, the expression of COX-1 was decreased while COX-2 expression was increased in different dosage PPD groups.ConclusionThe protective effects of PPD on GMC from HG-induced hypertrophy may be associated with the inhibition of [Ca²⁺]_і transient and decreasing expression of COX-1 via the oxidative-stress injure pathway.