西藏小型猪细胞色素b基因序列的比较

目的观测犬心心腔主要结构,为心脏比较解剖学积累一定的资料。方法10％甲醛固定犬心45例,一周后解剖并观测二尖瓣复合体、三尖瓣复合体、肺动脉瓣环、主动脉瓣环、肺静脉、前后腔静脉、冠状窦和卵圆窝,统计学处理后与人的心脏进行比较分析。结果①犬心左心室呈圆锥形,分为左心室流入道及左心室流出道,其流入道主要结构为二尖瓣复合体。二尖瓣环周径为49．16±10．00mm,腱索总数为16．72±2．76条。左心室流出道主要结构为主动脉瓣、主动脉窦、主动脉口。主动脉瓣环周径为34．55±8．00mm;②犬心右心室主要结构有三尖瓣复合体、肺动脉瓣、假腱索、隔缘肉柱等。三尖瓣环周径为71．03±14．02mm,肺动脉瓣环周径为35．97±8．17mm;③犬心左右心房的主要结构有前后腔静脉、肺静脉、冠状窦和卵圆窝。前腔、后腔静脉口径分别为43．91±10．17mm、37．67±10．54mm。肺静脉平均为29．44±12．71mm。冠状窦口径平均为14．12±4．00mm。其中冠状窦口呈圆形的占89．7％,唇形的占10．3％。卵圆窝发现率为100％。结论犬心的主要结构与人类相似,但大小及假腱索、腱索总数有一定差异。     

亚热带气候环境下西藏小型猪部分血液生理生化指标的比较

目的比较研究西藏小型猪在亚热带气候环境下的部分血液生理生化指标。方法常规方法测定原代和F1代西藏小型猪血液的9项生理和9项生化指标,比较两代之间以及雌、雄之间的不同,并与其他实验动物及人类的同类指标进行对比分析。结果在生化指标中,原代雌雄之间AST差异显著;F1代雌雄之间TG、ALB有差异,BUN、CHOL有显著性差异。在生理指标中,原代雌、雄间无差异,F1代雌雄间MONO有显著性差异。结论西藏小型猪已经基本适应亚热带地区的环境。与其他实验动物相比西藏小型猪许多生理生化指标更接近人类,非常适合替代犬、猴用于生物医学研究。     

西藏小型猪GH基因部分序列的SNP分析

目的：对西藏小型猪GH基因（部分序列）进行SNP分析,筛选体型较小的基因型。方法采用PCR产物直接测序法对108头西藏小型猪GH基因5′端部分片段进行单核苷酸多态性（ SNP）分析。结果通过比对发现GH基因共有5个变异位点,其中T45 C位点的多态信息含量最高。不同基因型生长性状比较的结果显示：在GH基因中T45C突变位点上TC基因型6～8月龄的西藏小型猪的腹围值较小,G84A突变位点上AA基因型3～5月龄的西藏小型猪的体重、体长值较小,G93A突变位点上GG基因型6～8月龄的西藏小型猪的体长、体高值较小。结论在GH基因中T45C、G84A、G93A位点突变的TC、AA、GG基因型可能与体型较小有关。同时发现西藏小型猪在以上位点遗传变异程度大,具有较高的杂合度和遗传多样性,可以为选育工作提供比较丰富的素材。     

西藏小型猪MSTN基因分子克隆及序列分析

目的扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。方法提取西藏小型猪肝脏组织的RNA,反转录成为c DNA,利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD19-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。结果西藏小型猪MSTN基因编码区全长1128bp,编码375个氨基酸,氨基酸序列同源性分析表明,与版纳微型猪MSTN氨基酸序列相似性最高,为99%。结论 MSTN基因西藏小型猪除了与鸡和斑马鱼亲缘关系较远外,与人、犬、版纳微型猪、绵羊、山羊、牛、马、黑猩猩、大鼠、小鼠的关系都较为接近,其中与版纳微型猪的亲缘关系最为接近。     

西藏小型猪与人血液流变学指标的比较分析

目的 探讨西藏小型猪与人血液流变学指标间的变化规律.方法 采集成年西藏小型猪和人的血液样品,分别检测其WBV(高、中、低切变率)、PV、HCT、ESR及Fi等5项血液流变学指标.结果 (1)雄性西藏小型猪的150s-1、30s-1、5s-1、1s-1WBV值和Fi含量均显著低于雌性(P<0.05, P<0.01, P<0.05, P<0.01, P<0.01);(2)在人的血液流变学指标中男性的WBV值(1s-1)和HCT值显著高于女性(P<0.05,P<0.01);(3)西藏小型猪的HCT值和Fi含量与人相比存在显著差异(P<0.01),其余指标均无显著性差异(P>0.05).结论 西藏小型猪除HCT和Fi两指标与人有差异外,其余指标均与人基本接近.     

西藏小型猪与人血液流变学指标的比较分析

目的探讨西藏小型猪与人血液流变学指标间的变化规律。方法采集成年西藏小型猪和人的血液样品,分别检测其WBV（高、中、低切变率）、PV、HCT、ESR及Fi等5项血液流变学指标。结果（1）雄性西藏小型猪的150s-13、0s-15、s-11、s-1 WBV值和Fi含量均显著低于雌性（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）;（2）在人的血液流变学指标中男性的WBV值（1s-1）和HCT值显著高于女性（P〈0.05,P〈0.01）;（3）西藏小型猪的HCT值和Fi含量与人相比存在显著差异（P〈0.01）,其余指标均差异无显著性（P〉0.05）。     

西藏小型猪10种猪病血清学调查

目的对西藏小型猪进行10种猪病(猪瘟、伪狂犬病、篮耳病、猪流感、圆环病毒感染、细小病毒病、乙型脑炎、弓形体病、衣原体病和布氏杆菌病)的血清学调查。方法采用ELISA或凝集试验方法对10头已注射猪瘟疫苗的原代(F0代)母猪和40头20日龄乳猪、50头第一代(F1代)3～5月龄猪进行10种猪病的血清学检测。结果猪瘟病毒、细小病毒和乙型脑炎病毒抗体阳性率分别是母猪为80.0%、80.0%、70.0%;20日龄乳猪为45.0%、25.0%、45.0%;3～5月龄猪为4.0%、76.0%、80.0%。圆环病毒抗体阳性率母猪为60.0%,20日龄乳猪为5.0%。3～5月龄猪为0%;篮耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、弓形体、衣原体、布氏杆菌在不同年龄西藏小型猪中抗体阳性率均为0%。结论不同年龄西藏小型猪未受篮耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪流感病毒、弓形体病、衣原体病、布氏杆菌病感染。     

西藏小型猪肾脏应用组织学特点

目的 研究西藏小型猪肾脏的组织结构,为其在生物医药领域中的应用提供形态学依据.方法 取西藏小型猪肾脏标本投入10%中性福尔马林溶液固定24 h以上,修块,冲洗,脱水,透明,包埋,常规石蜡切片,HE染色,光镜观察拍照.结果 西藏小型猪的肾与人肾一样呈长而扁的菜豆形,是表面光滑的多乳头肾,肾的表面有致密的结缔组织构成的被膜,肾实质可分为皮质和髓质,由数百万个肾单位和泌尿小管组成,其间由少量结缔组织、血管和神经等构成肾间质.结论 西藏小型猪的肾脏结构比犬和猴更接近于人类,在异种器官移植、药物临床前安全性评价等生物医药领域中具有重要应用前景.     

广州地区西藏小型猪的繁殖行为学表现

目的对广州地区西藏小型猪的繁殖性能和繁殖行为进行了观察研究。方法以广州地区雌雄西藏小型猪为研究对象,根据其繁殖卡的详细资料进行分类统计。结果雄性西藏小型猪阴茎首次伸出日龄为(39.50±2.63)d,此时体重为(3.26±0.87)kg;其射精日龄为(65.22±3.69)d,体重为(5.34±1.03)kg。雌性西藏小型猪初情日龄为(142±5.3)d,成年母猪发情周期为(20.35±0.72)d,发情持续期(4.2±0.31)d;其妊娠期约为114 d左右。初产雌性西藏小型猪产仔数为(2.30±0.82)头,2月龄断乳存活率为86.5%;而经产雌性西藏小型猪产仔数为(5.70±1.00)头,其2月龄断乳存活率为91.4%。哺乳期雌性西藏小型猪母性强,护仔行为强烈。结论广州地区西藏小型猪生长发育繁殖正常,产仔率和2月龄存活率等繁殖性能指标与原产地一致。     

西藏小型猪与高原藏猪的血液生理生化值的比较

目的 比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异.方法 采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标.结果 藏猪与西藏小型猪之间,红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异有显著性,谷草转氨酶、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、肌酸激酶指标的测定差异极显著.其中红细胞、白细胞、谷草转氨酶、肌酸激酶的值藏猪高于西藏小型猪,而血小板计数、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、总胆固醇、血清甘油三酯的值藏猪低于西藏小型猪.结论 不同的生活环境、气候条件和营养水平会对动物的血液生理、生化值的测定造成一定的影响.     

蕲蛇药材及其市售混淆品的Cyt b基因序列与分析

目的分析蕲蛇药材正品及其市场收集样品的Cyt b基因序列,为蕲蛇药材分子鉴别提供依据。方法利用Cyt b基因,对蕲蛇药材及其市场收集样品进行了序列测定和分析。结果蕲蛇药材存在着混杂现象;蕲蛇药材正品与其市售混淆品的Cyt b基因序列有着显著差异,该序列在蕲蛇种内差异率为0%~0.91%,与混淆品间的差异率为18.57%~23.78%。结论Cyt b基因序列是一种鉴别蕲蛇药材与其混淆品较好的分子遗传标记。     

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。     

西藏小型猪IGF-1基因的克隆测序分析

目的 克隆西藏小型猪的肝脏组织中的IGF-1基因的cDNA序列,并与pubmed中查询到的猪cDNA进行比对分析。方法 本研究提取了西藏小型猪肝脏组织的总RNA,应用RT-PCR技术扩增了IGF-1基因的cDNA序列,将扩增出的片段克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒pMD18-T-IGF-1,进行测序分析。结果 首次克隆出了西藏小型猪肝脏组织中的IGF-1的cDNA序列,获得了大小为567bp长的片段,编码了186个氨基酸,与pubmed中查询到的猪（NM_214256.1）的IGF-1基因高度同源,比对序列发现,在440bp、455bp处发生了G→A、C→T的突变,该位点的突变引起相应编码氨基酸的变化,分别由组氨酸变成了精氨酸、亮氨酸转变成了丝氨酸。结论 本研究为西藏小型猪的生长发育机制研究提供了分子学依据,两个位点的突变引起的氨基酸的改变是否是导致西藏小型猪矮小的原因,需要进一步论证。     

大鼠学习记忆能力与特定脑区某些氨基酸含量的相关性

目的探讨不同学习记忆能力大鼠的不同脑区一些氨基酸含量的差异,以揭示学习记忆能力与特定脑区某些氨基酸含量的关系。方法 Wistar大鼠在MG-2型三等分辐射式迷宫中进行学习记忆能力的检测后,根据学习记忆能力分为两组(学习记忆能力均好者为Ⅰ组;学习记忆能力均差者为Ⅱ组)。将大鼠立即断头处死,分别测定大脑皮层、小脑、纹状体、海马、下丘脑五个脑区Asp、Glu、Ala、Gly、GABA、Tau的含量。结果 学习记忆能力均差的大鼠与学习记忆能力均好的大鼠比较:海马、纹状体Asp含量显著降低(P<0.05);皮层、海马、纹状体Glu含量显著降低(P<0.05);皮层、小脑、海马、纹状体Tau含量显著降低(P<0.05和P<0,01);皮层、纹状体Gly含量显著降低(P<0.05);而纹状体GABA含量则显著升高(P<0.05);各脑区Ala含量在两组间无显著性差异(P>0.05)。结论海马、皮层、小脑、纹状体内氨基酸水平和比例与学习记忆密切相关。     

妊高征患者分娩前后血清游离氨基酸含量的变化

目的探讨妊高征患者分娩前后血清游离氨基酸含量的变化及意义.方法采用高效液相色谱法测定妊高征组(均为中重度,共28例)和正常妊娠组(30例)的血清氨基酸含量.结果①妊高征组产前血清游离谷氨酸、缬氨酸、亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸均明显高于正常妊娠组,产后下降,两组比较差异无显著性;②妊高征组产前血清精氨酸含量明显低于正常妊娠组,产后升高达到对照组产前及产后水平;③妊高征组产前甘氨酸含量明显高于对照组产前含量,产后含量无明显降低.结抡中重度妊高征患者存在着血清游离氨基酸含量的异常,可能与妊高征的病理生理改变有关,临床上对于有妊高征倾向及妊高征患者应慎用某些复合氨基酸制剂.     

乙酰半胱氨酸对脑死亡状态下巴马小型猪支气管肺泡灌洗液蛋白含量及肺超微结构的影响

目的:观察脑死亡状态下巴马小型猪支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量的变化及肺组织超微结构改变以及乙酰半胱氨酸(NAC)干预处理对它们的影响.方法:15只巴马小型猪随机分为脑死亡组(B组)、NAC处理组(N组)及对照组(C组),每组5只.C组持续麻醉维持24 h,不建立脑死亡模型;B组应用缓慢间断颅内加压法建立脑死亡模型,呼吸、循环支持维持实验动物脑死亡状态24 h;N组于建立脑死亡模型后静脉给予NAC 24 h.脑死亡后24 h取肺脏组织,测定各组动物24 h后BALF蛋白含量,观察肺组织常规及超微结构.结果:C、B、N组BALF蛋白含量分别为(1.14±0.21)g/L,(6.34±1.22)g/L,(2.45±0.36)g/L,B组、N组BALF蛋白含量均高于C组,但N组BALF蛋白含量低于B组(P均＜0.05).B组动物肺组织光镜下见肺间质弥漫性水肿,肺泡间隔增宽,肺泡腔有渗出液,局灶性肺不张,肺泡萎陷,肺毛细血管充血,肺微血管中有嗜中性粒细胞聚集附壁,肺组织中有淋巴细胞浸润.电镜下可见肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体肿胀,线粒体嵴存在排列紊乱、消失,微绒毛缺失,板层小体数量减少、脱颗粒,结构有破坏,毛细血管内皮细胞表面有吞饮小泡.N组光镜及电镜下有轻微病理改变,C组未见明显的损伤性变化.结论:脑死亡状态可导致BALF蛋白含量增加,肺组织出现损伤性改变,NAC干预处理可降低BALF蛋白含量,减轻肺组织损伤.     

一种具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白的纯化与N端氨基酸序列分析

目的分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白,分析其对胰蛋白酶的抑制活性、抑制机制与N端氨基酸序列。方法采用以胰蛋白酶为配体的亲和色谱和Sephadex G-50凝胶过滤法,从半夏蛋白粗提液的40%(NH_4)_2SO_4沉淀中分离纯化活性半夏蛋白;采用12%SDS-PAGE鉴定其纯度,并估算其相对分子质量;采用Ed-man降解法分析其N-端氨基酸序列。结果纯化的活性半夏蛋白经SDS-PAGE检测呈现单一条带,相对分子质量为1.4×10～4;比活力为1059.012U/mg,活力回收率为24.40%;对胰蛋白酶的质量抑制比为1:4.72,抑制常数(Ki)为7.17×10～(-6)mol/L;其N端前6个氨基酸残基顺序为DPVVDG。结论该活性半夏蛋白是一种丝氨酸蛋白酶抑制刺,为胰蛋白酶的竞争性抑制剂。     

脓毒症患儿氨基酸谱变化及临床意义研究

【摘要】 目的 观察脓毒症患儿氨基酸水平的变化,为脓毒症患儿合理的全静脉营养（TPN）配比提供理论依据。方法 将2014年12月~2015年9月入住成都市妇女儿童中心医院儿童重症监护病房(PICU)的132例脓毒症患儿,在入院24h内行手指采血,用串联质谱仪分析血片中氨基酸谱及其浓度。按患儿白蛋白水平分为血清白蛋白正常组和低白蛋白组,再根据患儿结局分为存活组和死亡组,分别比较两组间氨基酸水平变化情况。结果 脓毒症患儿在血清白蛋白正常组和低白蛋白组间,患儿的小儿危重症评分（PCIS）、需要机械通气、死亡率比较,差异均有统计学意义（P＜005）;低蛋白组中患儿血丙氨酸（Ala）、天冬氨酸(ASP)、精氨酸(Arg)、缬氨酸(Val)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、组氨酸(His)、甲硫氨酸(Met)、瓜氨酸(Git)、甘氨酸(Glu)、鸟氨酸(Orn)、苏氨酸(Thy)、脯氨酸(Pvo)均存在不同程度的下降,其中丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、组氨酸与白蛋白正常组比较,差异有统计学（P＜005）;脓毒症死亡组中患儿瓜氨酸、精氨酸、谷氨酰胺下降,苯丙氨酸（Phe)升高,与存活组比较,差异统计学意义（P＜005）。结论 脓毒症患儿可出现多种氨基酸含量不同程度降低,死亡组中瓜氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺水平低于存活组,苯丙氨酸水平高于存活组,这些氨基酸水平可能与脓毒症患儿预后有关。