单羧酸转运蛋白4(MCT4)在前列腺癌中的表达及调控研究

目的 探讨单羧酸转运蛋白4（monocarboxylate transporters 4,MCT4）在前列腺癌组织及细胞系中的表达情况,明确其在前列腺癌细胞中的调控作用。方法 应用免疫组织化学方法检测MCT4蛋白在前列腺癌（prostate cancer,PCa）、良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）及癌旁组织（para-carcinoma tissues,PCT）中的表达,分析其与前列腺癌Gleason评分及淋巴结转移的关系。免疫印迹（Western blotting）法检测不同前列腺癌细胞系中MCT4蛋白表达差异,分析抑制MCT4蛋白表达对N-cadherin、E-cadherin及pERK1/2的调控作用。结果 免疫组化检测显示,MCT4蛋白在前列腺癌、前列腺增生及癌旁组织中均有表达;但PCa中MCT4表达水平明显高于BPH及PCT（P=0.003）。另外,MCT4蛋白表达与前列腺癌是否有淋巴结转移密切相关,转移组显著高于非转移组（P=0.022）。Western blotting检测结果显示,在前列腺正常上皮细胞及激素依赖性前列腺癌细胞LNCap中MCT4表达较弱,而在恶性程度较高的去势抵抗性前列腺癌细胞PC3及DU145中表达明显增强。抑制PC3细胞中MCT4表达可以使N-cadherin及pERK1/2的蛋白表达下降,而使E-cadherin蛋白表达水平升高。结论 单羧酸转运蛋白4可能参与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）进程及ERK1/2通路的调控,促进前列腺癌的进展和转移,对前列腺癌的临床诊断和治疗有重要意义。     

CXCR4在前列腺癌组织中的表达与意义

目的:探讨趋化因子受体在前列腺癌组织中的表达及其意义.方法:采用酶标记免疫组织化学方法检测45例前列腺癌及10例前列腺增生组织中趋化因子受体CCR1、CCR3、CXCR4和CCR5的表达情况,应用ELISA双抗体夹心方法检测相应患者血清中趋化因子SDF-1的含量,并应用免疫发光方法检测相应患者血清中前列腺特异性抗原PSA的含量.结果:在前列腺癌组织上检测到趋化因子受体CXCR4的表达(表达率55.5%),PSA＞20 ng/ml与PSA＜20 ng/ml的前列腺癌组织上CXCR4的表达率分别为61.2%和42.8%,而前列腺增生组织中未发现这4种趋化因子受体的表达;与前列腺增生患者相比,在前列腺癌患者血清中SDF-1含量明显升高[(567.9±90.73)vs(169.1±46.01)pg/ml,P＜0.01].结论:在前列腺癌组织上发现有趋化因子受体CXCR4的表达,其表达可能在前列腺癌的发生、发展和转移中起重要作用.     

Bmi1在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨Bmi1蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对前列腺癌(65例)和良性前列腺增生(15例)标本中Bmi1蛋白表达进行检测,将Bmi1染色结果与临床病理参数进行对照研究。结果 Bmi1在前列腺癌组织中的表达较良性增生组织明显增加(P <0.01);Bmi1的表达与Gleason评分具有相关性(P <0.01),与危险分级(P=0.013)相关,与前列腺癌复发进展相关(P <0.05),但Bmi1表达和前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)浓度之间无明显的相关性。结论 Bmi1蛋白在前列腺癌组织中的表达增加,其表达与肿瘤的低分化、高风险和不良预后明显相关。     

雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选

目的:探讨雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞差异表达膜蛋白的筛选方法。方法:提取雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer, ADPC) 细胞株LNCaP 和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independentprostate cancer, AIPC) 细胞株PC-3 膜蛋白作为抗原,采用免疫共沉淀方法,与ADPC 和AIPC 患者的血清各3 例交叉孵育,行Western 印迹检测,比较、识别杂交后差异表达蛋白条带,串联质谱分析鉴定,细胞免疫荧光和组织免疫组织化学方法验证。结果:共获得11 个差异表达的膜蛋白(Neural-Cadherin precursor,ER60 precursor, Claudin-4 等);细胞免疫荧光结果显示Claudin-4 在LNCaP 和PC-3 细胞存在明显差异,在ADPC 组织中阳性表达率(34.3%) 低于AIPC 组织中阳性表达率(72.4%, P<0.05)。结论:本研究所采用的方法筛选前列腺癌差异表达膜蛋白具有可行性;Claudin-4 可能在雄激素非依赖性前列腺癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

ARNT2在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨人胃癌中芳香烃受体核易位蛋白2(ARNT2)的表达及临床意义。 方法 运用qRT-PCR和Western blotting检测ARNT2在正常胃细胞株及多种胃癌细胞株中的表达。通过免疫组织化学检测61例胃癌组织及相应癌旁胃黏膜组织中ARNT2的表达。 结果 ARNT2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃细胞株。胃癌组织中ARNT2的阳性表达率显著低于癌旁胃黏膜组织(32.79% vs 80.33%,P<0.05),与细胞株的检测结果一致。并且,胃癌中ARNT2的表达水平与肿瘤的分化程度显著相关(P<0.05)。 结论 ARNT2在胃癌细胞及组织中低表达,并且其表达水平与胃癌的分化程度相关,提示其可能参与胃癌的发生与发展。     

干扰TAZ基因对舌鳞癌细胞CAL27增殖凋亡的影响及其机制

目的 探讨干扰TAZ基因后对舌鳞癌细胞CAL27增殖和凋亡的影响以及可能的分子调控机制。 方法 实验分为干扰组和对照组,将稳定干扰TAZ基因的慢病毒载体转染至舌鳞癌细胞CAL27中作为干扰组,并以非特异性序列转染CAL27细胞作为对照组。利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blotting检测干扰效率,CCK-8细胞活力实验及EdU染色法检测转染后细胞增殖能力的改变,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,Western blotting检测与周期及凋亡相关蛋白的表达情况。 结果 干扰TAZ基因后,RT-PCR和Western blotting检测结果显示,TAZ mRNA和蛋白表达水平明显降低;CCK-8细胞增殖活力检测及EdU染色法显示细胞增殖能力降低;细胞早期凋亡和晚期凋亡比例均增多; G0/G1期细胞比例增多,而G2/M期细胞减少。同时,干扰TAZ基因后,周期相关蛋白CYCLIN D1、CDK4和CDK6等表达水平降低;而凋亡相关蛋白Bax、cleaved Caspase9表达水平均升高,Bcl-2表达水平降低。 结论 干扰TAZ基因可以通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白的表达,来影响舌鳞癌细胞的增殖和凋亡。     

胞内转运对根尖牙乳头干细胞表面CXC趋化因子受体4表达的影响

目的:探讨胞内转运途径受到抑制后,根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla, SCAP)表面CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4, CXCR4)表达的变化,为了解SCAP迁移机制提供实验依据。方法:采用免疫荧光共染色方法和原位邻近连接技术(proximity ligation assay, PLA)检测SCAP胞内CXCR4与细胞胞内转运相关细胞器标记蛋白的共定位,检测指标包括早期胞内体标记蛋白Rab5、循环胞内体标记蛋白Rab11A、溶酶体标记蛋白Lamp1。分别采用80 μmol/L的内吞抑制剂Blebbistatin、80 μmol/L的内吞抑制剂Dyanasore对SCAP进行预处理1 h,流式细胞分析方法检测表面阳性表达CXCR4的SCAP所占百分比,使用单因素方差分析进行统计学分析。结果:免疫荧光共染色结果显示,CXCR4在SCAP胞内的表达位置与早期胞内体标记物Rab5、循环胞内体标记物Rab11A的表达位置重合,小部分与溶酶体标记物Lamp1的表达位置重合。PLA结果显示,CXCR4在SCAP胞内与Rab5、Rab11A、Lamp1均存在共定位。阴性对照组SCAP CXCR4阳性表达的细胞为 0.13%±0.10%, 经Blebbistatin、Dynasore抑制内吞后,表面CXCR4阳性表达的SCAP显著增多,分别为13.34%±1.31%、4.03%±0.92%,差异有统计学意义(F=161.762,P<0.001), 且Blebbistatin组多于Dynasore组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:采用内吞抑制剂抑制CXCR4的胞内转运途径,可使表面表达CXCR4的SCAP增多,提升了SCAP迁移的潜能。     

JAK1在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 检测酪氨酸激酶1(JAK1)在喉鳞状细胞癌组织中的表达,并分析其与临床病理特征的相关性,探讨JAK1的临床意义。方法 应用RT-qPCR检测mRNA表达和Western Blot检测蛋白表达, 同时采用免疫组织化学技术检测其在喉鳞癌组织及癌旁组织中的表达,根据免疫组化评分分析其与临床病理特征的关系。结果 与癌旁组织相比,喉鳞癌组织JAK1mRNA明显增高,P<0.01;与癌旁组织相比,喉鳞癌组织JAK1蛋白表达明显增高,P<0.01;JAK1表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等因素密切相关,P<0.05。结论 JAK1在喉癌组织中表达升高,在喉癌发生、发展及转移过程中起重要作用。     

趋化因子轴CXCL16/CXCR6在人前列腺癌转移中的作用

目的 探讨趋化因子轴CXCL16/CXCR6在人前列腺癌转移机制中的作用.方法 采用免疫组织化学技术分析CXCL16/CXCR6蛋白在人前列腺癌和骨组织的表达;逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学技术分析CXCR6在人前列腺癌细胞系PC3和LNCap中的表达;迁移、侵袭试验分析外源性CXCL16对Pc3和LNCap细胞体外侵袭能力的调节作用.结果 人前列腺癌组织表达CXCR6蛋白,不表达CXCL16蛋白;正常骨组织表达CXCL16蛋白;PC3和LNCap细胞在基因和蛋白水平表达CXCR6,其mRNA相对转录水平分别为0.38±0.054、0.41±0.019;经过外源性CXCL16处理后,PC3和LNCap的体外迁移、侵袭能力明显提高(侵袭细胞数分别为211.50±5.60、89.25±3.31).且CXCL12或CXCR4中和抗体不能阻断CXCL16的促侵袭作用.结论 CXCL16/CXCR6可能是前列腺癌骨转移的另一种独立趋化因子轴.     

核糖体蛋白L37在前列腺癌中的表达及临床意义

目的:研究人核糖体蛋白L37（RPL37）在前列腺癌中的表达及其临床意义。方法:应用real-time qPCR（RT-qPCR）和Western blot检测64例前列腺癌组织及癌旁组织中RPL37 mRNA和蛋白的表达情况,分析其与前列腺癌患者临床病理特征及生存状况之间的关系。结果 :RT-qPCR和Western blot结果表明,前列腺癌组织中RPL37 mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.05); RPL37 mRNA的表达增高与患者血清中的PSA水平增加、高Gleason评分及肿瘤的临床分期有关(P＜0.05),与患者的年龄、淋巴结转移、精囊侵犯及手术切缘无关(P＞0.05)。生存分析表明,前列腺癌患者中RPL37 mRNA高表达组的总生存期显著低于低表达组（P=0.006）。结论:RPL37mRNA的表达增高与前列腺癌的发生、发展相关;RPL37可以初步判断前列腺癌患者的预后。     

核小体结合蛋白1在前列腺癌中的表达和意义

目的 通过检测核小体结合蛋白1（NSBP1）在正常前列腺（NP）、良性前列腺增生（BPH）、前列腺癌（PCa）组织中的表达,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系。方法 采用Western印迹方法检测NSBP1在10例NP组织、15例PCa组织中的蛋白表达差异;采用免疫组织化学方法检测19例NP组织、26例BPH组织、40例PCa组织中NSBP1的表达水平。结果 NSBP1在PCa组织中蛋白表达高于在NP组织中的表达,差异有统计学意义（t=37．308,P〈0．01）。3种组织中NSBP1的阳性及弱阳性表达率为56．5％（48／85）,其中NP、BPH、PCa组织中分别为36．8％（7／19）、34．6％（9／26）、80．0％（32／40）。PCa组织中NSBP1表达水平明显高于NP及BPH组织（t=-3．569,-4．152,P〈0．01）。在PCa中NSBP1的表达水平与PCa病理分期、Gleason评分（GS）、血清前列腺特异抗原（PSA）均不相关（P=0．911,0．666,0．779）。结论 NSBP1在PCa中高表达,并可能参与了PCa的发生发展过程。     

Rb和MCM2蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义

目的：探讨视网膜母细胞瘤易感基因（Rb）和微染色体维持蛋白2（MCM2）在前列腺癌发病机制中的作用及其临床意义。方法：应用免疫组化EliVision^TMplus二步法,检测49例前列腺癌（PCa）组织,20例良性前列腺增生（BPH）及10例正常前列腺组织（NP）中pRb蛋白与MCM2的表达。结果：pRb在PCa,BPH与NP组织中的阳性表达率分别为44．90％,80％,90％,PCa中pRb的水平明显低于BPH（P〈0．05）及NP（P〈0．05）,且与PCa病理分级（P〈0．05）和临床分期（P〈0．05）呈负相关。MCM2在PCa,BPH与NP组织中的阳性表达率分别为67．35％,25％和10％,PCa中MCM2的水平明显高于BPH（P〈0．05）及NP（P〈0．05）,且与PCa病理分级（P〈0．05）和临床分期（P〈0．05）呈正相关。MCM2表达与pRb表达呈负相关（rs=-0．596,P〈0．01）。结论：Rb基因参与了前列腺癌的发生、发展过程,检测Rb基因和MCM2有助于判定前列腺癌恶性程度及预后。     

E2F-3,pRb蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨细胞周期调控因子E2F-3和pRb蛋白在前列腺癌发病机制中的作用及其临床意义。方法应用免疫组化E liV isionTMp lus二步法检测49例前列腺癌(prostate cancer,PCa)标本,20例良性前列腺增生(ben ign prostatichyperp lasia,BPH)及10例正常前列腺组织(norm al prostate,NP)中E2F-3与pRb蛋白的表达。结果E2F-3在PCa、BPH与NP中的阳性表达率为63.27%(31/49),20%(4/20)和10%(1/10),PCa中E2F-3的水平明显高于BPH(P<0.05)及NP(P<0.05),且与PCa病理分级临床分期呈正相关(rs分别为0.487、0.517,P<0.05)。pRb中在PCa,BPH与NP中的阳性表达率为44.90%(22/49),80%(16/20),90%(9/10),PCa中pRb的水平明显低于BPH及NP(P<0.05),且与PCa病理分级、临床分期呈负相关(rs分别为-0.401、-0.468,P<0.05)。E2F-3表达与pRb表达呈负相关(rs=-0.617,P<0.01)。结论E2F-3对PCa的发生发展发挥有重要的作用,且其表达与pRb蛋白的异常表达密切相关。     

微管相关蛋白1A在前列腺癌中的表达与其临床特征的关系

目的 探讨微管相关蛋白1A（microtubule associated protein 1A,MAP1A）在前列腺癌中的表达与其临床特征的关系。方法 通过免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色检测人前列腺癌组织和非癌前列腺组织中MAP1A蛋白质的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测MAP1A基因在前列腺癌与正常前列腺组织中mRNA的表达差异,进一步使用癌症基因信息数据库（the Cancer Genome Atlas,TCGA）统计分析MAP1A基因表达水平与前列腺癌患者的临床病理学特征之间的关联。结果 免疫组化染色结果分析显示,与癌旁正常组织相比,前列腺癌组织中MAP1A的蛋白表达显著降低[免疫组化染色评分（immunoreactive score,IRS）：前列腺癌组织为4.08±1.58,癌旁正常组织为4.91±1.46（P<0.001）]。MAP1A在前列腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为58.6%和82.7%,两者差异具有统计学意义（χ²=12.225,P=0.001）。使用RT-qPCR检测MAP1A mRNA表达,发现其在前列腺癌中表达显著低于正常前列腺组织（P=0.019）。通过对TCGA数据库进行分析,笔者发现MAP1A在不同临床特征的肿瘤组织中的表达差异具有统计学意义,如患者Gleason评分（P<0.001）,临床病理分期（P=0.009）,是否转移（P=0.008）,总体生存率（P=0.049）。结论 MAP1A在前列腺癌中表达下调且与肿瘤组织的分期有关,分期越晚,MAP1A的表达越低,这提示其可能参与了前列腺癌的发生、发展。     

Clusterin和Survivin在前列腺癌中的表达及意义

目的研究Clusterin和Survivin在前列腺癌中的表达及意义。方法采用SP免疫组化检测Clusterin、Survivin在9例正常前列腺组织（NP），12例增生前列腺组织（BPH），43例前列腺癌组织（PCa）中的表达。结果Clusterin在NP、BPH、PCa中的阳性表达分别为1例（11．2％）、3例（25．0％）、37例（86．0％），3种组织中Clusterin的阳性表达有极显著性差异（P〈O．01）；Survivin在NP、BPH、PCa中的阳性表达分别为0例、2例（16．7％）、40例（93．0oA），3种组织中Survivin的阳性表达有显著性差异（P〈0．05）。43例PCa中Clusterin和Survivin表达与Gleason评分、临床分期均呈正相关。Clusterin与Survivin在PCa中的表达呈协同作用（r=0．578，P〈0．001）。结论Clusterin和Survivin均与前列腺癌的发生、发展、转移等生物学行为有密切的关系。     

前列腺癌E2F3蛋白的表达及临床意义

目的探讨前列腺癌组织中E2F3蛋白的表达及临床意义。方法应用免疫组化EliVisionTMplus二步法,检测49例前列腺癌(prostate cancer,PCa),20例良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)及10例肾移植正常前列腺组织(nor-mal prostate,NP)中E2F3蛋白的表达,分析其表达与肿瘤分级、分期及血清PSA和预后间的关系。结果前列腺癌中E2F3的水平明显高于BPH(P<0.05)及NP(P<0.05),且与PCa病理分级和临床分期与血清PSA及预后有密切的联系。结论 E2F3可作为PCa新的标志物,检测E2F3有助于判定PCa恶性程度及预后。     

增殖和凋亡基因ki-67、bcl-2、bax在前列腺增生、前列腺癌组织细胞中的表达及相关性

目的探讨前列腺癌(PCa)、良性前列腺增生(BPH)和正常前列腺(NP)组织中增殖细胞ki-67核抗原与细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的临床意义及相关性。方法收集36例PCa、20例BPH和11例NP,应用免疫组织化学S-P法检测增殖相关基因ki-67核抗原、bcl-2、bax的表达。结果ki-67细胞增殖指数(PI)在PCa组织中表达明显高于BPH和NP(P<0.01),ki-67的PI与PCa分级有关,随着肿瘤分级增高而呈正相关(P<0.01),PCa和BPH中bcl-2阳性表达率高于NP(P<0.05),随着肿瘤分级增高而呈正相关(P<0.05),PCa、BPH和NP中bax阳性表达率差异无显著性。结论前列腺细胞增殖的增强、细胞凋亡的减少与PCa、BPH发生和发展有关,ki-67与bcl-2的检测对鉴别前列腺良、恶性病变有参考意义。     

卵巢癌SOX4介导TGF-β1诱导的上皮间质转化对侵袭转移能力的影响

目的 探讨SOX4(SRY-related HMG-box4)在卵巢癌中的表达、调控及其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导卵巢癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)能力的影响。方法 通过对TCGA、GEO等数据库中卵巢癌样本表达谱数据进行分析,探讨SOX4在卵巢癌中的表达情况,及其与EMT相关标志物的相关性。利用shRNA技术敲降卵巢癌SKOV3细胞系中SOX4的表达;利用Western blotting和qRT-PCR技术检测SOX4敲降对上皮标志物ZO1及间质标志物Vimentin和Slug表达的影响;利用Transwell技术检测SOX4敲降对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;使用TGF-β1(10 ng/mL)处理SKOV3细胞72 h,然后通过 Western blotting 和qRT-PCR技术,检测TGF-β1对SOX4表达的调控情况,以及SOX4敲除对TGF-β1诱导EMT能力的影响。结果 SOX4在卵巢癌中的表达显著上调,并与EMT间质标志物呈显著正相关;敲除SOX4可显著下调卵巢癌SKOV3细胞的EMT水平及其侵袭转移能力;TGF-β1可显著上调卵巢癌SKOV3细胞中SOX4的表达水平,而SOX4敲除可显著抑制TGF-β1诱导卵巢癌EMT的能力。结论 SOX4在卵巢癌中表达上调,通过激活EMT促进其侵袭转移能力;并且,作为TGF-β1下游靶蛋白,SOX4介导了TGF-β1对卵巢癌EMT的诱导过程。因此,SOX4是一个干预卵巢癌转移的重要靶点。     

N-MYC下游调节基因-2蛋白在前列腺肿瘤组织中的表达

【目的】N-MYC下游调节基因-2(NDRG2)在前列腺癌及前列腺增生中的表达与临床病理特征和生物学行为的关系【方法】前列腺肿瘤标本51例,其中前列腺增生标本9例,前列腺癌标本42例,均为存档石蜡切片,应用免疫组织化学(S-P法)研究NDRG2表达。【结果】NDRG2在前列腺增生组织表达为82.35%,在前列腺癌组织为32.69%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。NDRG2表达水平同Gleason评分呈负相关(r=-0.5197),在不同临床TNM分期间、在血清PSA浓度≤20 ng/ml与PSA浓度>20 ng/ml组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】NDRG2表达在前列腺癌组织低于前列腺增生组织,且表达与Gleason评分呈负相关。表明NDRG2有可能参与了前列腺癌的发生及发展过程。