UBQLN1诱导上皮-间质转化促进食管鳞癌细胞的迁移和侵袭

目的分析泛醌蛋白1（UBQLN1）及上皮-间质转化（EMT）标志分子在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达及其相关性,探讨UBQLN1对ESCC细胞迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和western blot检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达;RT-qPCR检测ESCC癌组织及对应癌旁组织中EMT标志分子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA表达;构建UBQLN1 siRNA和过表达重组质粒,分别转染ESCC细胞系EC9706、HET-1A和TE-1;采用划痕试验和Transwell试验检测各细胞的迁移和侵袭能力;RT-qPCR和western blot检测各组EC9706细胞中EMT标志分子的mRNA和蛋白表达。结果 ESCC癌组织中UBQLN1的mRNA和蛋白表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC癌组织中E-cadherin mRNA的表达低于癌旁组织（P<0.05）,而N-cadherin和Vimentin mRNA的表达均高于癌旁组织（均P<0.05）;ESCC组织中UBQLN1与E-cadherin的mRNA表达呈负相关（r=-0.517 3,P<0.001）,而与N-cadherin和Vimentin的mRNA表达呈正相关（r=0.780 3、0.685 6,P<0.001）。下调UBQLN1表达增加EC9706、HET-1A和TE-1细胞中E-cadherin的表达,降低N-cadherin和Vimentin的表达,抑制其迁移和侵袭,而过表达UBQLN1下调E-cadherin的表达,上调N-cadherin和Vimentin的表达,促进细胞迁移和侵袭。结论 UBQLN1能诱导EMT,促进ESCC细胞的迁移和侵袭。     

DCLK1敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究双皮质素样激酶1（doublecortin-like kinase 1,DCLK1）的敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其潜在的作用机制。方法 使用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除食管鳞癌细胞（Kyse450,Kyse70）的DCLK1基因。通过细胞划痕实验和Transwell实验评估DCLK1敲除对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blotting法检测DCLK1敲除细胞系中上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关转录因子的表达变化。通过癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atla,TCGA）数据库进一步分析食管鳞癌患者（n=95）中DCLK1表达和EMT相关转录因子之间的相关性。结果 CRISPR/Cas9基因编辑技术能够有效地敲除食管鳞癌细胞系DCLK1基因并影响其表达。DCLK1缺失显著抑制食管鳞癌细胞的体外迁移和侵袭能力（P<0.05）,并上调上皮标志物E-cadherin的表达,下调间质标志物如Vimentin、ZEB1、Slug和Snail的表达（P<0.05）。另外TCGA数据库分析显示食管鳞癌患者中DCLK1与EMT相关转录因子存在相关性。结论 DCLK1敲除可通过抑制EMT进程影响食管鳞癌细胞的迁移和侵袭。     

DJ⁃1通过促进EMT进程增强辐照诱导下食管鳞癌细胞的侵袭性

目的：探究敲低DJ?1/PARK7表达及联合辐照对食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法：利用短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）稳定转染食管鳞癌细胞kyse150和kyse450,敲低DJ?1表达。Western blot检测细胞转染效率。Transwell迁移实验检测梯度辐照（0、4、6、8 Gy）下食管鳞癌细胞的迁移能力。将转染空病毒的对照组（shRNA?Control）与 DJ?1敲低组（shRNA?DJ?1）细胞进行 6 Gy X线辐照,细胞划痕实验及Transwell迁移侵袭实验检测各组食管鳞癌细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测上皮细胞?间充质转化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）途径相关蛋白上皮型钙黏蛋白（E?cadherin）、神经型钙黏蛋白（N?cadherin）、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）的表达变化。结果：敲低DJ?1后,食管鳞癌细胞kyse150和kyse450内DJ?1蛋白表达水平明显降低。Transwell迁移实验显示,6 Gy剂量辐照诱导食管鳞癌细胞kyse150和kyse450的迁移能力最强。细胞划痕实验及Transwell迁移侵袭实验显示,在6 Gy辐照条件下敲低DJ?1后kyse150和kyse450细胞迁移和侵袭能力减弱。Western blot显示,敲低DJ?1联合辐照后E?cadherin表达上升,N?cadherin表达下降,MMP2表达下降。结论：敲低DJ?1表达可以降低辐照诱导的食管鳞癌细胞kyse150和kyse450的迁移和侵袭能力,其机制可能与通过上调E?cadherin、下调N?cadherin和MMP2蛋白表达从而抑制细胞EMT进程有关。     

CCL20通过ERK通路促进食管鳞癌细胞迁移和侵袭

目的 研究趋化因子配体20(CCL20)对食管鳞癌细胞迁移、侵袭和增殖的影响,并初步探讨其分子机制.方法 转染CCL20表达质粒和干扰质粒至食管鳞癌细胞,用G418筛选稳定转染细胞,Western blot或实时定量PCR实验评估过表达和干扰效果.采用Transwell和CCK8实验检测CCL20对食管鳞癌细胞迁移、侵...     

干扰整合素转接激酶表达对口腔鳞癌细胞迁移侵袭影响研究

目的 研究干扰整合素转接激酶(ILK)表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 以口腔鳞癌SCC-25细胞为研究对象,细胞转染小干扰RNA阴性对照(siRNA control)和ILK小干扰RNA(ILK siRNA)分别记为si-NC组和ILK siRNA组,同时以没有转染的SCC-25细胞作为对照组。RT-PCR和Western blot法检测转染效果;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 si-NC组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目以及细胞中的MMP-9、MMP-2蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ILK siRNA组ILK mRNA水平和蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移率、细胞侵袭数目和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显低于对照组和si-NC组(P<0.05)。结论 干扰ILK能够下调口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

MTP18在口腔鳞癌细胞迁移与侵袭中的作用

  目的  探讨线粒体蛋白18(mitochondrial protein 18,MTP18)在口腔鳞癌转移中的调控作用。  方法  (1) 采用生物信息分析44例正常口腔黏膜与520例口腔鳞癌组织中MTP18的表达。(2)siRNA干涉MTP18表达后,用qRT-PCR与Western blotting实验检测干涉效果,用划痕与Transwell实验检测对细胞迁移与侵袭能力的影响。(3)siRNA下调MTP18表达后,用qRT-PCR实验分析对细胞上皮间质转化的影响。  结果  (1) 口腔鳞癌中MTP18表达显著上调(P＜0.001),尤其在高级别与淋巴转移的肿瘤组织中。(2)siRNA显著下调了MTP18表达(P＜0.001)。干涉MTP18可显著抑制口腔鳞癌SCC9细胞的迁移(siCtrl vs.siMTP18#1 vs. siMTP18#2为1.00±0.07 vs. 0.43±0.04 vs. 0.44±0.03,F=102.241, P＜0.001)与侵袭(siCtrl vs. siMTP18#1 vs. siMTP18#2为1.00±0.07 vs. 0.43±0.04 vs. 0.44±0.03,F=97.017, P＜0.001)。(3)干涉MTP18上调了上皮细胞标志分子的表达(P＜0.001),而下调了间质细胞标志分子的表达(P＜0.001)。  结论  MTP18通过诱导上皮间质转化促进口腔鳞癌细胞的迁移与侵袭。      

CLDN1上调MMP1的表达促进食管鳞癌细胞TE10侵袭及转移

目的：研究紧密连接蛋白-1（tight junction protein 1,CLDN1）在食管鳞癌细胞TE10中的生物学功能及机制。方法：体外构建CLDN1过表达病毒,按感染复数（multiplicity of infection,MOI）=20的比例感染食管鳞癌细胞TE10。通过蛋白质印迹（Western blot）检测CLDN1过表达效果。分别采用细胞增殖及毒性检测试剂（cell counting Kit-8,CCK-8）检测细胞增殖能力,肿瘤细胞迁移及侵袭实验（Transwell）检测细胞迁移及侵袭能力变化。通过基因芯片分析过表达CLDN1对TE10基因表达谱的影响,分析下游靶基因并通过Western blot和回复实验研究CLDN1对MMP1的表达调控。结果：与NC组相比,过表达组TE10细胞中基质金属蛋白酶1（matrix metallopeptidase-1,MMP1）蛋白表达为（2.68±0.10）,明显升高（P<0.05）;CCK-8实验结果表明,过表达组细胞在24、48、72 h时的吸光度明显高于阴性对照组（P<0.05）;迁移实验结果显示过表达组TE-10细胞迁移细胞数明显高于阴性对照组[（54.8±3.4） vs. （24.6±2.1）];侵袭实验结果显示,过表达组TE-10细胞侵袭数目高于阴性对照组[（34.5±2.6） vs. （11.5±1.6）（P<0.05）。信使核糖核酸（messenger RNA,mRNA）芯片分析发现,过表达CLDN1后TE10细胞的MMP1基因表达明显升高（P<0.05）,定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）及Western blot证实CLDN1能够促进MMP1的表达;功能回复实验结果显示,干扰MMP1能够抑制CLDN1对TE10细胞的增殖和侵袭转移能力的促进作用。结论：CLDN1可通过上调MMP1的表达促进食管鳞癌TE10细胞的增殖和侵袭转移,发挥癌基因的功能。     

RNA干扰抑制人食管鳞癌细胞PLK1基因的表达

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术,研究Polo样激酶l（PLK1）基因特异的siRNA对人食管鳞癌细胞Eca-109 PLKl基因表达的影响.方法将PLKI基因特异性siRNA转染入人食管鳞癌细胞Eta-109,采用RT、-PCR和Western-blot技术检测siRNA处理前后Eca-109细胞PLK1基因表达变化,并构建PI.K1基因特异性siRNA质粒表达载体.结果转染R后T-PCR和Western-blot结果均显示Eca-109细胞PLK1基因的表达明显下降,PLKI基因特异性siRNA质粒表达载体构建成功.结论 PLKl特异性siRNA对Eca-109细胞PLK1基因的表达有抑制作用.     

沉默环状RNAhsa_circ_0076535表达对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探究circRNA hsa_circ_0076535在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的作用.方法 选取ESCC患者肿瘤组织及相匹配的癌旁组织、ESCC细胞(Het-1A、Eca109、KYSE170)进行研究.实时荧光定量聚合酶链反应检测hsa_circ_0076535在ESCC组织及细胞内的表达水平;利用siRN...     

miR-21对人喉鳞癌细胞Hep2迁移侵袭能力的影响

目的：探讨微小RNA‐21（miR‐21）对人喉鳞癌细胞Hep2迁移、侵袭能力的影响。方法用脂质体Lipofectami‐neTM2000将miR‐21抑制剂和miR‐21NC转入人喉鳞癌细胞Hep2中,48h后,运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）／磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）的激活情况,以及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9与伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白（RECK）的表达。结果与miR‐21NC比较,miR‐21抑制剂能明显降低Hep2细胞活力[（0．688±0．043）vs．（0．375±0．012）],抑制细胞迁移能力[（6．57±0．02）μmvs．（20．49±2．18）μm]及细胞侵袭能力[（100．7±10．2）vs．（46．8±4．3）],差异均有统计学意义（P＜0．01）;同时miR‐21抑制剂能明显下调PI3K、MMP2及MMP9的表达（P＜0．01）,降低Akt的磷酸化水平（P＜0．01）,并上调PTEN及RECK的表达（P＜0．01）。结论miR‐21抑制剂能明显抑制人喉鳞癌细胞Hep2的迁移、侵袭能力,可能与PTEN／PI3K／Akt信号通路有关。     

多配体蛋白聚糖1对舌鳞状细胞癌CAL27细胞迁移、侵袭和细胞周期的调控作用

目的:研究舌鳞状细胞癌CAL27细胞中过表达多配体蛋白聚糖1(SDC1)对细胞迁移、侵袭、细胞周期和细胞中活性氧(ROS)水平的影响,阐明SDC1在舌鳞状细胞癌发生发展中的潜在作用机制.方法:前期实验中成功构建的稳定高表达ptt5-SDC1的人舌鳞状细胞癌CAL27细胞作为实验组,稳定转染ptt5空载体的CAL27细胞...     

STMN1在食管鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用及其预后意义

目的：研究 STMN1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其在食管鳞状细胞癌侵袭和转移中的作用。方法应用免疫组织化学法检测150例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中 STMN1的表达水平,分析其与临床病理特征的关系。将 STMN1 siRNA 通过瞬时转染于食管鳞状细胞癌 TE-1细胞,使用 qPCR 和 Western blot 实验检测转染效果,通过划痕实验、Millicell 小室侵袭和转移实验观察转染 STMN1 siRNA 对 TE-1细胞侵袭和转移能力的影响。结果STMN1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中高表达,且与 TNM 分期和淋巴结转移之间显著相关,STMN1表达阳性者预后显著差于表达阴性者。siRNA 干扰 STMN1的表达可明显抑制 TE-1细胞的侵袭和转移能力。结论STMN1促进了食管鳞状细胞癌侵袭和转移的发生并且对食管鳞状细胞癌患者的预后判断具有重要意义。     

转录因子Yin Yang 1(YY1)在食管癌中的表达及其对食管癌细胞功能的影响

目的:探讨转录因子Yin Yang 1(YY1)在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管癌发生发展中的作用?方法:免疫组化染色检测15例正常食管组织,39例食管癌旁组织和88例食管癌组织样品中YY1蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测食管鳞癌细胞(TE-1细胞)增殖和生长变化;蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1和p21表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测TE-1细胞迁移?侵袭能力的变化?结果:与正常食管组织和食管癌旁组织相比,YY1 蛋白在食管鳞癌组织样品中的表达显著提高?此外,转染了YY1过表达载体后明显抑制TE-1细胞生长,而干扰YY1表达则可促进细胞的生长;同时伴随着YY1靶基因p21(也称p21WAF1/Cip1)的变化?TE-1细胞转染YY1过表达载体后,细胞的侵袭?迁移能力增强?结论:食管鳞癌组织中YY1表达显著上调,YY1可调节细胞的生长和转移侵袭能力?因此,YY1有望成为食管癌诊断和发展的分子标志物,也有可能是食管癌基因治疗的一个潜在靶点?     

CREM-1蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:研究环磷酸腺苷反应元件调节蛋白(Cyclic AMP response element modulator 1,CREM-1)在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达情况,结合临床病理资料初步探讨CREM-1的表达水平与食管鳞癌发生转移和侵袭的相关性。方法:采用免疫组化二步法测定98例食管鳞癌癌标本CREM-1的表达水平。Western blot检测4组转移性与非转移性食管鳞癌新鲜标本中CREM-1的蛋白表达水平。结果:Western Blot结果显示CREM-1在转移性食管鳞癌中表达明显低于非转移性癌组织,与上皮标记物E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达趋势一致。免疫组化结果显示CREM-1蛋白在转移性的食管鳞癌中低表达,在非转移性癌组织中高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。统计学分析显示CREM-1的表达高低与与肿瘤分期相关(P<0.05)。生存分析显示CREM-1高表达的患者预后不良(P<0.05)。Cox模型多因素分析提示CREM-1是独立的预后指标(P<0.05)。结论:CREM-1在转移性食管鳞癌中低表达,可能参与调控食管鳞癌转移及侵袭的发生发展过程。     

保罗样激酶1和p53在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的:探讨保罗样激酶1(PLK1)和p53蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学法分别检测87例食管鳞状细胞癌、53例癌旁组织及42例正常食管黏膜组织中PLK1及p53蛋白的表达,并分析两者的表达水平与临床病理因素的关系.采用χ2检验进行统计学分析.结果:PLK1蛋白在食管鳞状...     

CAPN4与食管鳞形细胞癌增殖和迁移关系的体外研究

 目的 探讨钙蛋白酶小亚基1(calpain small subunit 1,CAPN4)在食管鳞形细胞癌细胞系中的表达水平,分析其与食管鳞形细胞癌细胞增殖和迁移能力的相关性。 方法 挑选人正常食管上皮细胞系HEEC及食管鳞形细胞癌细胞系EC109与KYSE510,应用Western blot检测细胞系中CAPN4蛋白质水平,应用RNA干扰下调EC109与KYSE510中CAPN4的表达水平,通过CCK-8与Transwell实验分别检测细胞增殖与迁移能力的变化。同时用Western blot检测细胞系中增殖和迁移相关蛋白质水平。结果 CAPN4在EC109与KYSE510中的蛋白质水平显著高于HEEC,下调EC109与KYSE510中CAPN4蛋白质水平后,细胞增殖与迁移能力均显著降低(P<0.05),MMP-2蛋白质水平下调。 结论 CAPN4在食管鳞形细胞癌中高表达,促进食管癌增殖和迁移,并与下游分子MMP-2的表达水平密切相关。     

食管鳞状细胞癌组织中Stathmin蛋白及mRNA的表达

目的：检测食管鳞状细胞癌组织中Stathmin蛋白及mRNA的表达。方法：应用免疫组化SP法和原位杂交技术检测40例食管鳞状细胞癌组织和40例正常食管黏膜组织中Stathmin蛋白及mRNA的表达,并分析二者与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系。结果：①正常食管黏膜组织中Stathmin蛋白和mRNA的阳性表达率均为12.5%,食管鳞状细胞癌组织中Stathmin蛋白和mRNA的阳性表达率均为80.0%,2组间相比,差异均有统计学意义（蛋白：χ2=21.806,P〈0.001;mRNA：χ2=20.485,P〈0.001）。②伴有淋巴结转移组的食管鳞状细胞癌组织中Stathmin蛋白和mRNA阳性表达率高于无淋巴结转移组（P均=0.005）;随着浸润深度的增加,Stathmin蛋白和mRNA的阳性表达率逐渐增高（P均=0.010）。结论：食管鳞状细胞癌组织中Stathmin蛋白及mRNA异常表达可能与食管鳞状细胞癌的发生发展及浸润转移有关。     

食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA表达

目的:检测食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA的表达.方法:应用免疫组化SP法和原位杂交方法检测49例食管鳞癌组织及其相应的30例癌旁不典型增生组织和49例正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白及其mRNA的表达.结果:①正常食管黏膜组织中Syndecan-1蛋白和mRNA均为阳性表达.食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA阳性表达率均低于癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织(P均＜0.05).②淋巴结转移者食管鳞癌组织与不典型增生组织中Syndecan-1蛋白和mRNA阳性表达率均低于无淋巴结转移组(P均＜0.05).③浸润至外膜的食管鳞癌组织及不典型增生组织中Syndecan-1蛋白和mRNA的阳性表达率分别低于深肌层及浅肌层(P均＜0.05).结论:人食管鳞癌组织中Syndecan-1蛋白及mRNA均呈低表达,Syndecan-1与食管鳞癌的发生发展及浸润转移有关.