刺梨果多糖对肺腺癌A549 细胞增殖、凋亡的作用及机制研究

目的 探讨刺梨果多糖对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法 在0、2、4、6、8、10 g·L^-1刺梨果多糖干预A549细胞24、48、72 h后,采用CCK-8法检测A549细胞增殖情况。在0、2、6、10 g·L^-1刺梨果多糖干预A549细胞24、48 h后,采用细胞划痕实验测定A549细胞的迁移情况;Transwell实验测定A549细胞侵袭情况。在0、2、6、10 g·L^-1刺梨果多糖干预A549细胞48 h后,采用流式细胞术(PI单染法)测定A549细胞周期;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)测定A549细胞的凋亡情况;Real-Time PCR法测定A549细胞的周期、凋亡相关基因表达水平;Western Blot法测定A549细胞的周期、凋亡相关蛋白表达水平。结果 (1)干预24、48、72 h后,与对照组(0 g·L^-1)比较,刺梨果多糖2、4、6、8、10 g·L^-1组的A549细胞生长受到显著抑制,细胞的存活率显著降低(P...     

平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞的杀伤作用

目的:研究中药复方平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及诱导细胞凋亡的作用。方法:采用CCK-8比色法和磷脂酰丝氨酸外翻分析法分别检测平肺浸膏对人肺腺癌A549细胞增殖和细胞凋亡的作用。平肺浸膏(1 g.mL-1)由中日友好医院药学部提供,实验前经定性滤纸粗滤,0.22μm滤膜过滤后分装。人肺腺癌A549细胞常规复苏、培养及传代,处于对数生长期开始用于实验。实验分为空白对照、生药终浓度1,5,10 g.L-1共4组。细胞以7×104/mL接种于96孔培养板,24 h细胞贴壁后加不同浓度平肺浸膏,对照组只换液不加药。分别于加药后24,48,72 h用CCK-8法检测细胞增殖情况。将细胞以3×104/mL接种于6孔培养板,5 h细胞贴壁后加不同浓度的平肺浸膏。药物作用17 h后收获细胞,应用磷脂酰丝氨酸外翻分析法,于流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:平肺浸膏生药5,10 g.L-1在体外作用24 h以上表现出对A549细胞增殖的抑制作用,与常规对照组相比存在统计学差异(P<0.05),且这种抑制作用随时间和药物浓度增加而增强。生药10 g.L-1可诱导早期细胞凋亡,与常规对照组相比存在统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方平肺浸膏能够抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡。     

莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨莪术油对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用。方法体外培养肺腺癌细胞A549,MTT比色法测定莪术油对A549细胞作用24、48、72 h后抑制率;流式细胞术分析莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测莪术油对A549细胞作用24 h后细胞凋亡与坏死情况。结果莪术油对A549细胞增殖的抑制率随时间延长明显升高,随药物浓度增加抑制作用增强;莪术油对A549细胞作用24 h后,细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期;细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死比例随着莪术油浓度的增加而增加,且坏死细胞的比例高于凋亡细胞。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期及诱导凋亡和坏死来实现的。     

平肺复方对人肺腺癌A549细胞PPAR-γ信号通路的影响

目的研究平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖及过氧化物酶体增长因子活化受体（peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR）-γ信号通路的影响。方法运用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）比色法检测平肺复方对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,并添加PPAR-γ特异性阻断剂GW9662,观察PPAR-γ通路阻断后平肺复方对A549细胞生长的影响。结果平肺复方生药5 mg/ml和10 mg/ml在作用24小时、48小时和72小时表现出对A549细胞增殖的抑制作用（P〈0.05）;单纯加入GW9662对细胞的生长并未产生影响;加入GW9662的平肺复方仍可对细胞生长产生抑制作用（P〈0.05）,但这种抑制作用明显弱于平肺复方（P〈0.05）。结论平肺复方的抗肿瘤作用机制可能部分涉及到PPAR-γ信号通路,但并不完全是通过这一条信号通路在发挥作用。     

益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探究益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法选取15只大耳兔分别给予高剂量益肺方、低剂量益肺方和生理盐水连续灌胃14天处理,采心脏血液并取其血清,并在体外培养的肺癌A549细胞株中加入上述益肺方含药血清。使用MTT法检测肺腺癌A549细胞增殖能力,使用Annexin V/PI法检测细胞凋亡、使用Westen Bolt和RT-PCR定性、半定量检测Bcl-2、Bax、P-mTOR、P-AMPK、caspase-3、caspase-9的表达量。结果MTT比色结果显示,相比空白对照组,低剂量组和高剂量组细胞抑制率显著升高(P0.01),相比低剂量组,高剂量组的抑制率显著提高(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组含药血清caspase-3、caspase-9表达量显著增加,相比低剂量组,高剂量组caspase-3、caspase-9表达量显著增加(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01),相比低剂量组,高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01)。结论:益肺方含药血清可以抑制肺腺癌A549细胞增殖,同时可以通过调控AMPK/mTRO信号通路促进结直肠癌细胞的凋亡。     

羟基喜树碱对A549人肺腺癌细胞增殖的影响

目的观察羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞增殖的影响。方法采用细胞培养及MTT比色法检测羟基喜树碱对体外A549人肺腺癌细胞的抑制作用。结果低浓度羟基喜树碱作用24h对A549人肺腺癌细胞没有明显影响,当药物浓度达到50μg/mL时,抑制作用明显增强,抑制率达44.17%,药物浓度达到100μg/mL时抑制率达50.28%;随着药物作用时间的延长,抑制更明显,100μg/mL药物组作用48h抑制率达70.98%。结论羟基喜树碱具有抑制A549人肺腺癌细胞增殖的作用,抑制作用具有明显的浓度和时间依赖性。     

姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对A549细胞存活率的影响。运用吖啶橙染色方法,观察细胞形态变化。利用TUNEL染色,检测DNA断裂情况。采用Western blot技术,检测P53蛋白表达变化。结果：姜黄素显著抑制A549细胞增殖。吖啶橙和TUNEL染色显示姜黄素可以诱导A549细胞凋亡。Western blot结果显示姜黄素提高了A549细胞中P53蛋白的表达。结论：姜黄素通过激活P53蛋白,抑制A549细胞增殖和诱导A549细胞凋亡。     

杨梅树皮提取物体外抗人肺腺癌A549作用的实验研究

目的:分离筛选出杨梅树皮中具有抗人肺腺癌A549的有效部位。方法:采用系统溶剂提取分离法,从杨梅树皮中分离出有效成分,通过~3H-TdR掺入法观察各提取物体外对A549细胞的抑制作用,确定抑瘤效果最好杨梅树皮提取物。结果:各杨梅树皮提取物对A549细胞均有很好的抑制作用,其中杨梅树皮醇提取物和氯仿萃取层部位对人肺腺癌A549的抑制作用最明显,抑制率分别为3.5%～97.0%、38.7%～99.4%,并且具有较好的量效关系。结论:杨梅树皮提取物体外对人肺腺癌A549具有很好的抑制作用。     

槐耳清膏对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响及顺铂耐药逆转作用

目的:探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞和A549/DDP细胞增殖的抑制影响及其顺铂耐药细胞A549/DDP的逆转作用。方法:以体外培养的人肺腺癌A549及A549/DDP细胞为实验模型,采用MTT法测定不同浓度槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖抑制率,并运用流式细胞术检测顺铂联合槐耳清膏对A549/DDP细胞的变化,以及增敏作用效应。结果:槐耳清膏对A549细胞及A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,随着药物浓度的增加,其抑制率逐渐增加,具有明显的量-效关系(P0.05)。顺铂40μmol/L作用于A549及A549/DDP细胞48 h后,其凋亡率分别为(27.61±3.45)%和(17.93±1.73)%,两组间有统计学差异(P0.01)。槐耳清膏1 mg/m L作用于人肺腺癌A549和A549/DDP细胞40 h后,再以相同浓度顺铂诱导,A549细胞凋亡率为(32.35±2.68)%,A549/DDP细胞凋亡率为(30.01±3.65)%,两组间无统计学意义,但与单独DDP作用相比,差异具有显著意义(P0.01)。结论:槐耳清膏能显著抑制人肺腺癌A549及A549/DDP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,还可以增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

β-榄香烯联合高温对肺腺癌A549细胞作用的实验研究

目的:观察榄香烯联合高温对人肺腺癌A549细胞的协同杀伤作用。方法:用MTT法检测高温处理或常温处理细胞对榄香烯的敏感性。采用15μg/mL榄香烯或60μg/mL榄香烯联合42℃高温处理1.5h或常温处理,使用流式细胞仪检测细胞周期,透射电镜观察细胞形态学改变。结果:高温作用后,榄香烯对A549细胞的IC50从35.43μg/mL降低至28.68μg/mL;MTT法检测显示低浓度榄香烯联合高温对A549细胞具有明显的协同杀伤作用,细胞呈现凋亡形态,可见凋亡小体,同时有细胞坏死。结论:低浓度榄香烯联合高温对A549细胞有协同细胞毒效应。     

没食子儿茶素没食子酸酯对小鼠Lewis肺癌增殖以及A549与Calu-3肺癌增殖的抑制作用

 目的 观察没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate,EGCG）对小鼠Lewis肺癌增殖的抑制作用,并在细胞水平比较没食子儿茶素没食子酸酯对A549与Calu-3两种肺癌细胞增殖和凋亡的影响,初步分析可能的机制。方法 利用C57BL/6J Lewis肺癌自发转移模型研究没食子儿茶素没食子酸酯 （12.5、25、50 mg·kg^-1口服给药,21 d）对Lewis肺癌增殖的抑制作用。采用WST-8方法检测5、10、50、100 μmol·L^-1的没食子儿茶素没食子酸酯对人源非小细胞肺癌Calu-3细胞及A549细胞增殖的抑制作用。利用TUNEL细胞凋亡检测试剂盒以及PI染色方法观察没食子儿茶素没食子酸酯对Calu-3细胞和A549细胞（Ki-Ras突变）的促凋亡作用。结果 没食子儿茶素没食子酸酯剂量依赖性地抑制皮下移植Lewis肺癌的增殖;采用WST-8检测法观察到没食子儿茶素没食子酸酯对Calu-3细胞增殖呈剂量依赖性的抑制,而对A549细胞抑制作用较弱;TUNEL方法研究结果显示,没食子儿茶素没食子酸酯通过促凋亡作用抑制Calu-3细胞增殖;细胞计数结果表明,给予不同剂量的没食子儿茶素没食子酸酯之后,Calu-3细胞数呈剂量依赖性减少,A549细胞数目无显著性变化。结论 没食子儿茶素没食子酸酯能够抑制Lewis 肺癌增殖,并剂量依赖性的抑制Calu-3细胞的增殖,而对A549细胞增殖无明显抑制作用。
     

荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及其机制初探

 目的 探讨荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549的增殖抑制作用并对其作用机制进行研究。方法 MTT比色法检测荷包牡丹碱在不同浓度及不同时间对人肺癌细胞A549的增殖抑制作用。利用TUNEL法探讨荷包牡丹碱诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡效果;流式细胞术（FMC）测定荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞周期的分布;比色法测定荷包牡丹碱对半胱天冬酶（caspase）-3蛋白活性的影响。结果 荷包牡丹碱对人肺腺癌细胞A549增殖抑制作用随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强;荷包牡丹碱对A549肿瘤细胞具有明显的凋亡效应;荷包牡丹碱与A549肿瘤细胞作用后,发生S期阻滞（P<0.05);荷包牡丹碱促使caspase-3蛋白活化(P<0.05)。结论 荷包牡丹碱能有效抑制人肺腺癌细胞A549的生长,使细胞周期阻滞在S期,进一步诱导其凋亡,并使caspase-3蛋白活化。caspase-3蛋白的激活可能在荷包牡丹碱诱导A549细胞凋亡过程中起重要作用。     

地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制

目的:观察地参多糖(LLP)的体外抗肿瘤活性及机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测LLP(0,5,10,15,20 g·L-1)对A549细胞不同作用时间(24,48,72 h)的增殖抑制作用;采用细胞划痕,transwell实验检测LLP(10,20 g·L-1)作用24,48 h后A549细胞的迁移侵袭能力;碘化丙啶(PI)单染法检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞周期的影响;异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI凋亡试剂盒检测LLP(10,20 g·L-1)诱导A549细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),细胞周期依赖性激酶-1(CDK-1),细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LLP对A549细胞中Caspase-3,Caspase...     

重组TRAIL诱导肺腺癌细胞系细胞凋亡的实验研究

 目的研究重组可溶性TRAIL作用于人肺癌系A549细胞培养物后,细胞凋亡的形态变化和凋亡率测定。方法MTT比色法测定重组TRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制率。TRAIL处理前后细胞核、质的形态学变化。经不同浓度重组TRAIL处理后A549细胞的双色荧光变化。定量重组TRAIL与亚毒性浓度的CDDP联合使用,对肺腺癌A549细胞生长抑制率和凋亡率的影响。结果重组TRAIL对A549细胞生长有明显的抑制作用,TRAIL100μg·L^-1作用24h后,抑制率达到41.6%。细胞形态学观察显示,A549肺腺癌细胞经50μg·L^-1 TRAIL处理24h后,可观察到典型的细胞凋亡特点。3.3mg·L^-1的CDDP与50μg·L^-1重组TRAIL合用,A549细胞凋亡率高达75.2%。结论重组TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用;化疗药物CDDP能加强重组TRAIL的抗肿瘤活性。     

大黄素对体外人肺腺癌细胞增殖抑制作用的影响

目的探讨大黄素对人肺腺癌Anip973细胞(简称肺癌细胞)作用的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和生长曲线测定比较不同浓度的大黄素在不同作用时间内对体外培养的肺癌细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测细胞凋亡率,并对此进行电镜分析。结果在一定范围内,大黄素的浓度越大、作用时间越长对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,60μmol／L大黄素处理肺癌细胞72h后增殖抑制率达90％。结论大黄素可明显抑制肺癌细胞的增殖,其抑制作用具有时效和量效关系。     

番荔枝内酯对肺腺癌A549细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨番荔枝内酯 Bullatacin 诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用 MTT 法检测不同浓度（6.25、12.5、25、50、100μg/mL）Bullatacin对A549细胞的抑制增殖作用,依照MTT结果取浓度25μg/mL Bullatacin作用于A549细胞0、12、24、48 h,流式细胞仪分析其对A549细胞增殖周期的影响,观察其对细胞凋亡的干预作用。Western Blot 检测不同实验组 ERK、JNK、p38磷酸化与总蛋白的表达。结果不同浓度Bullatacin作用于A549细胞后,呈明显的剂量依赖性;25μg/mL Bullatacin能将A549细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡;与空白组比较,P-ERK、P-JNK、P-p38的蛋白表达均明显增强。结论 Bullatacin明显抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡,其机理与Bullatacin通过磷酸化各蛋白激酶而激活MAPK通路有关。     

芦荟苦素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究芦荟苦素诱导人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC) A549细胞发生凋亡,从而抑制其增殖的作用机制。方法:取对数生长期的A549细胞,用细胞计数试剂(cell counting kit,CCK-8)检测考察不同浓度的芦荟苦素(0,2,4,8,16,32,64,128μmol·L~(-1))对A549细胞增殖的影响,5μmol·L~(-1)的顺铂作为阳性对照。用结晶紫染色测定芦荟苦素(0,16μmol·L~(-1))对A549细胞克隆形成的数目以及克隆形成的大小的作用;磷脂酰丝氨酸结合蛋白V/碘化丙啶(annexin V/propidium iodide,PI)凋亡试剂盒染色检测芦荟苦素对A549细胞凋亡的影响;赫斯特(Hoechst)染色检测细胞凋亡核固缩现象;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测芦荟苦素对A549细胞中的B细胞淋巴瘤-特大型蛋白(B-cell lymphoma-extra large,Bclxl),B细胞淋巴瘤-特大型/B细胞淋巴瘤-2联合死亡促体(Bcl-xl/Bcl-2 associated death promoter,Bad),裂解半胱天冬酶-3[cleaved-Caspase3,cl-Caspase-3(Asp175)],半胱天冬酶-3(Caspase-3),裂解核糖聚合酶(cleaved-poly ADP-ribose polymerase,clPARP),核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)凋亡相关蛋白表达的影响。体内实验将5周龄裸鼠皮下接种2×106个A549细胞,并随机分为用药组和空白组,连续4周每天分别进行芦荟苦素或生理盐水腹腔注射,每周测量裸鼠肿瘤体积和小鼠体质量,并观察裸鼠的外观表现(精神、毛发、食欲、睡眠等)。结果:芦荟苦素呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖及克隆形成的数量和大小(P 0. 05)。经芦荟苦素处理后,A549细胞凋亡的数量以及细胞发生核固缩的现象明显增加(P 0. 01),同时,芦荟苦素还明显下调了凋亡相关蛋白Bcl-xl的表达(P 0. 05),增加Bad蛋白表达(P 0. 01),同时还明显升高了cl-PARP(P 0. 01)和cl-Caspase-3(P 0. 05)表达水平。此外,在体内,芦荟苦素可明显缩小小鼠皮下肿瘤的体积,减轻肿瘤质量,并且小鼠外观表现优于空白组。结论:芦荟苦素可能通过诱导A549细胞凋亡从而达到抑制NSCLC的作用,并且用药安全。