中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究

目的: 探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果: ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用, 具有时间依赖性. ICA处理后, HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化, G0/G1期升高, S期减小, 与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56% vs 49.68±1.34%, 19.95±1.24% vs 28.02±1.03%;P<0.01). ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78 vs 0.27, 0.54 vs 0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加, AFP下降, Tf水平升高, 与对照组相比均有显著性意义(7.09% vs 0.59%, 156±46 mg/L vs 285±58 mg/L, 152.1±26 mg/L vs 67.1±24 mg/L;P＜0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期, 减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27 mRNA和Tf水平, 下调FLIP mRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.     

HBx基因下调p21对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的:构建转基因细胞模型HepG2/HBx,观察HBx基因对HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响, 探讨细胞周期蛋白P21在其中的作用和意义.方法:应用脂质体转染和G418筛选构建稳定表达HBx的转基因细胞HepG2/HBx,RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.分别以四唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测HepG2/HBx细胞及对照组HepG2与HepG2/pcDNA3.1细胞(转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞)的增殖、周期和凋亡.另半定量RT-PCR检测各组细胞中细胞周期蛋白P21与抑癌基因p53mRNA的表达.结果:HepG2/HBx细胞中有HBx mRNA和蛋白的表达.HepG2/HBx细胞生长速度加快.HepG2/HBx中G0/G1期细胞比例较对照组显著减少(43.34%±3.11%vs57.69±4.28%,P<0.01),S期细胞比例明显增加(28.69%±1.17%vs22.41%±1.99%,P<0.05),同时还发现与对照组相比其凋亡率也显著降低(1.19%±0.06%vs 5.43%±0.42%, P<0.001).细胞周期蛋白p21 mRNA在HepG2/HBx细胞中的表达较对照组细胞显著降低(0.16±0.05vs0.78±0.15,P<0.001),而p53表达则无显著变化.结论:HBx基因可下调细胞周期蛋白P21mRNA的表达,可能参与HBx基因加速HepG2细胞周期进程、促进细胞增殖以及抑制细胞凋亡的作用.     

黄芩甙体外对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化作用

目的:探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系 分化的影响.方法:应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,MTT实验和软琼脂克隆形成实验观察黄芩甙对肝癌细胞增殖的作用.光镜、电子显微镜观察细胞形态、超微结构.酶促反应试剂盒检测细胞浆中碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性,放免法检测细胞甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)分泌量和细胞内环核苷酸(cAMP)含量,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化染色检测细胞AFP表达.结果:黄芩甙能明显抑制肝癌细胞增殖,对肝癌细胞形态及超微结构的观察显示黄芩甙作用后细胞趋于成熟分化,实验组AFP在胞质内均匀分布,呈黄色,着色较淡.黄芩甙作用后γ-GT比活力明显低于对照组(135±10 nkat/g vs 2432±15 nkat/g,P<0.05),ALP比活力明显高于对照组(6635±1350 nkat/g vs 5872±450 nkat/g,P<0.05),ALP耐热型同工酶即胎盘型ALP活性显著低于对照组,黄芩甙组AFP分泌量较对照组细胞显著性降低,ALB分泌显著升高,细胞内cAMP含量增加.随黄芩甙浓度的增加和作用时间的延长肝癌细胞G1/G0期比例逐步增高,S期细胞减少.结论:黄芩甙能诱导肝癌细胞分化.与细胞周期调节密切相关.     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响

目的:通过观察丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响,探索其抗肝纤维化的可能机制.方法:♂SD大鼠55只,体质量180-220g,随机分为正常组、模型组、预防组.除正常组外,其余均采用四氯化碳、高脂饮食及乙醇复合因素复制肝纤维化模型,造模同时预防组每日一次予以0.8 g/kg丹芍化纤自来水悬液灌胃,模型组、正常组予以等体积自来水灌胃,持续8 wk.造模结束后肝组织HE染色病理检查,免疫组化检测肝组织PDGFR-β、蛋白印迹检测肝组织p-ERK1/2在各组表达,生化法检测各组血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP),计算白球比(A/G).结果:造模8 wk后经病理学证实模型大鼠形成典型的肝纤维化,模型成功.与正常组相比,模型组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著升高,ALB、A/G显著降低(PDGFR-β:184.6±8.5 vs 89.6±5.8,P<0.05;p-ERK1/2:360.0±14.5 vx 15.4±2.1,P<0.05;HA:517.5±91.5μg/L vs 254.4±33.1μg/L,P<0.05;LN:58.4±11.3μg/L vs 37.3±9.8μg/L,P<0.05:PⅢP:36.9±5.6μg/L vs 4.7±1.5μg/L,P<0.05;ALB:27.4±4.9 g/L vs 42.1±1.6 g/L,P<0.05;A/G:0.89±0.08 vs 1.38±0.09,P<0.05);与模型组相比,预防组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著降低,ALB、A/G显著升高(PDGFR-β:91.1±6.3 vs 184.6±8.5,P<0.05;p-ERK1/2:253.8±18.2 vs 360.0±14.5,P<0.05;HA:322.9±41.4μg/L vs 517.5±91.5μg/L,P<0.05;LN:46.0±9.4μg/L vs 58.4±11.3μg/L,P<0.05;PⅢP:14.5±2.4μg/L vs 36.9±5.6μg/L,P<0.05;ALB:37.2±2.8g/L vs 27.4±4.9g/L,P<0.05;A/G:1.18±0.13 vs 0.89±0.08,P<0.05).结论:PDGFR-β及p-ERK1/2在肝纤维化形成中起重要作用,丹芍化纤胶囊具有良好的预防肝纤维化形成的作用,其降低PDGFR-β及p-ERK1/2在肝组织的表达可能是其作用机制之一.     

转基因细胞模型L02/HBx的构建及HBx对细胞周期的影响

目的:构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.方法:运用脂质体转染和G418筛选获得L02/ HBx阳性克隆,并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增殖、凋亡和细胞周期.结果:RT-PCR和Western blot分别检测到L02/ HBx细胞中HBx mRNA和蛋白的表达.MTT比色试验显示L02/HBx生长速度加快,流式细胞仪检测发现L02/HBx凋亡率低(0.09%±0.13% vs 3.74%±1.29%,P<0.05),G1期细胞比例减少(61.35%±0.82% vs 67.80±6.84%,P<0.05),S期细胞比例相应增加(36.59%±2.54% vs 22.37%±2.17%,P<0.05).经阿霉素(ADM)培养后,L02/HBx的凋亡率显著增加(34.91%±5.85% vs 0.09%±0.13%,P<0.05),G1期细胞比例明显增加但低于对照组(82.81%±6.48% vs 61.35%±0.82%,P<0.05;82.81%±6.48% vs 87.19%±1.92%,P<0.05),S期细胞比例降低但较对照组高(13.84%±6.16% vs 36.59%±2.54%,P<0.05;13.84%±6.16% vs 2.22%±1.26%,P<0.05).结论:L02/HBx构建成功,HBx能促进细胞周期进程,加快细胞的生长并抑制细胞的凋亡;转染HBx基因的肝细胞凋亡更易受凋亡因子所触发,表明HBx可能会增加正常肝细胞对诱导凋亡因素的敏感性.     

乙型肝炎病毒对HepG2细胞IL-17R信号通路的影响

目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)重组腺病毒对HepG2细胞的IL-17R和接头蛋白Act1表达的影响,以及HBV对IL-17诱导NF-B活化的影响.方法:采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测HepG2细胞的IL-17、IL-17R和Act1的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测IL-17R和Act1的蛋白表达;免疫荧光检测NF-B核移位;ELISA检测上清的IL-17含量.结果:各组HepG2细胞培养上清液中均未检测到IL-17且亦未检测HepG2细胞有IL-17的mRNA表达;HBV重组腺病毒组的IL-17R mRNA和蛋白的表达明显低于相应浓度对照组(0.68±0.02vs0.89±0.03,0.33±0.06vs0.81±0.01,0.12±0.01vs0.86±0.05,P<0.05;蛋白:0.84±0.12vs1.01±0.13,0.56±0.09vs1.01±0.08,0.24±0.08vs0.98±0.05),且呈剂量和时间依赖性.但HBV重组腺病毒组与对照组比较,对HepG2细胞接头蛋白Act1的mRNA和蛋白表达水平无明显影响;同时HBV重组腺病毒能抑制IL-17R诱导Hep G2细胞的NF-B活化.但HBV重组腺病毒与对照组比较,对接头蛋白Act1在mRNA和蛋白表达水平上影响无明显变化;同时HBV重组腺病毒能抑制IL-17R诱导Hep G2细胞的NF-B活化.结论:HBV重组腺病毒可降低HepG2细胞的IL-17R mRNA和蛋白的表达,抑制IL-17R诱导Hep G2细胞的NF-B活化,对HepG2细胞的IL-17R信号通路发挥抑制作用.     

0.2-0.4T静磁场对肿瘤细胞生长和黏附功能的影响

目的:研究0.2-0.4 T中强静磁场对肿瘤细胞生长和黏附的影响.方法:用0.2-0.4 T静磁场对SMMC-7721、HepG2和MCF-7细胞曝磁处理后,用噻唑蓝(MTT)法检测中强磁场对SMMC-7721、HepG2和MCF-7细胞生长增殖的影响.通过结晶紫染色检测细胞对FN黏附能力的变化,并应用流式细胞技术检测中强磁场对肿瘤细胞周期的影响.结果:中强磁场影响SMMC-7721、HepG2和MCF-7细胞的生长和黏附功能.中强磁场对不同的肿瘤细胞有不同的效应,对SMMC-7721的生长没有明显的影响,但降低SMMC-7721黏附能力(1.847±0.342 vs 1.094±0.33,P=0.012).与对照组相比SMMC-7721细胞周期的G2/M的百分比降低(12.05%±1.14% vs3.74%±0.87%,P=0.018).而对于MCF-7细胞,中强磁场促进细胞的增殖,增强细胞对FN的黏附能力(1.094±0.076 vs 2.177±0.474,P=0.017),使其G2/M的百分比降低(4.42%±1.23% vs 12.04%±1.65%,P=0.004).HepG2细胞在中强磁场中,细胞的增殖受到抑制,对FN的黏附能力没有明显的变化(0.305±0.076vs 0.394±0.089,P=0.467),但G2/M的百分比有所升高(1.90%+0.79% vs 0.24%±0.15%,P=0.0461.结论:0.2-0.4 T中强静磁场对不同的肿瘤细胞有不同的影响.     

共轭三烯酸抑制肝癌细胞体外增殖和凋亡诱导的作用

目的: 探讨共轭三烯酸抑制肝癌细胞体外增殖的作用机制.方法:采用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、Brdu掺入实验(20 g/L, 12 h)研究共轭三烯酸对人正常肝细胞L-02, 人肝癌细胞系SMMC-7721和鼠肝癌细胞系Hepa1-6的体外增殖抑制作用;Hoechst33342荧光染色, 流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布.结果: 共轭三烯酸处理后, 肿瘤细胞增殖活性降低(SMMC-7721: 1.5±2.6 vs 1.9±12.3, P<0.05;Hepa1-6: 1.0±1.5 vs 1.2±9.7, P<0.05), 克隆形成下降(SMMC-7721: 149.3±3.1 vs 191.7±5.8, P<0.05;Hepa1-6: 32.7±3.1 vs 61.3±4.2, P<0.05), Brdu标记指数降低(SMMC-7721: 42.3%±1.5% vs 63.6%±0.7%, P<0.05;Hepa1-6: 59.5%±0.7% vs 79.6%±1.6%, P<0.05), 凋亡细胞增多(SMMC-7721: 48.9%±0.7% vs 9.9%±0.4%, P<0.05;Hepa1-6: 65.1%±1.1% vs 15.9%±0.7%, P<0.05);凋亡指数升高(SMMC-7721: 16.3%±0.7% vs 3.3%±0.4%, P<0.05;Hepa1-6: 21.7%±1.1% vs 5.3%±0.4%, P<0.05), G0/G1期细胞数增加(SMMC-7721: 48.4%±1.8% vs 38.0%±2.1%, P<0.01;Hepa1-6: 53.4%±2.1% vs 41.1%±0.7%, P<0.01), S期细胞数减少(SMMC-7721: 32.2%±2.9% vs 37.2%±1.9%, P<0.05;Hepa1-6: 28.3%±0.9% vs 39.9%±0.9%, P<0.01).结论:共轭三烯酸对肿瘤细胞的增殖有显著抑制作用, 其作用机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成, 诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞.     

姜黄素对缺氧条件下HepG2细胞VEGF表达的影响

目的:研究姜黄素对缺氧条件下人肝癌细胞HepG2中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:姜黄素(0、1、2、5、10.mol/L)处理缺氧条件下的HepG2细胞6 h后,采用四唑盐(MTT)法观察HepG2细胞活性的变化,Western blot观察VEGF的蛋白水平变化,RT-PCR检测VEGF mRNA表达水平变化.结果:HqaG2细胞经1、2、5、10 μmol/L的姜黄素处理后,VEGF蛋白和mRNA水平与对照组(0μmol/L姜黄素处理)比较明显降低(蛋白:2.12±0.23,1.59±0.13,0.82±0.11,0.33±0.05 vs 2.85±0.37,P<0.05或P<0.01:mRNA:0.60±0.05,0.54±0.04,0.16±0.02,0.06±0.01 vs 0.81±0.07,均P<0.01),且降低程度随着姜黄素处理浓度的增加而变大.结论:姜黄素可抑制HepG2细胞中VEGF的基因表达.     

二甲双胍对非酒精性脂肪性肝病细胞模型线粒体途径凋亡及氧化应激的影响

目的探讨二甲双胍对非酒精性脂肪性肝病细胞模型线粒体途径凋亡及氧化应激的影响。方法体外用0.6 mmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积建立非酒精性脂肪性肝病细胞模型,将HepG2细胞分为对照(Con)组、油酸(OA)组、二甲双胍低剂量组(1 mmol/L)、二甲双胍高剂量组(10 mmol/L)。用油红O染色检测细胞内脂滴分布,试剂盒检测培养上清液丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶的水平。用DCFH-DA法检测HepG2细胞活性氧的生成量;用双染流式细胞技术检测HepG2细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、B淋巴细胞淋巴瘤相关蛋白、B淋巴细胞淋巴瘤2、细胞质细胞色素C蛋白的表达。数据组间比较采用单因素方差分析。结果油酸可诱导HepG2细胞内脂滴明显增加,低、高剂量二甲双胍均可减少细胞内脂滴堆积,二甲双胍高剂量组比二甲双胍低剂量组作用更加明显;OA组HepG2细胞内天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶明显升高,分别为(43.41±7.11)U/L、(29.56±4.11)U/L;二甲双胍低、高剂量处理后细胞内天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶明显降低,分别为(32.44±4.08)U/L、(19.31±3.03)U/L和(26.00±3.11)U/L、(15.11±4.11)U/L,差异均有统计学意义(P值均<0.05);DCFH-DA法检测结果提示油酸组细胞活性氧荧光强度为41.21%±4.23%,二甲双胍低、高剂量组细胞活性氧荧光强度均降低,分别为27.44%±3.91%和17.55%±5.11%,组间差异均有统计学意义(P值均<0.05);流式细胞术检测分析结果显示,OA组细胞凋亡率明显高于Con组(12.12%±0.72%比3.04%±0.57%,P<0.05),二甲双胍低、高剂量处理HepG2细胞后凋亡均明显降低(8.71%±0.71%,5.71%±0.61%,P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果提示与Con组相比,OA组B淋巴细胞淋巴瘤相关蛋白、细胞色素C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达均增加,而B淋巴细胞淋巴瘤2降低(P值均<0.05),低、高剂量二甲双胍处理HepG2细胞后B淋巴细胞淋巴瘤相关蛋白、细胞质细胞色素C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达均降低,而B淋巴细胞淋巴瘤2增加(P值均<0.05)。结论二甲双胍可有效缓解非酒精性脂肪性肝病细胞模型脂肪变性,改善HepG2功能,其作用机制可能与减轻氧化应激损伤、调节线粒体凋亡途径相关蛋白表达而抑制细胞凋亡有关。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.