糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的表达与白血病细胞黏附和侵袭性的关系

目的 比较髓性白血病细胞K562、HL-60和THP-1黏附、迁移能力以及糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI-PLD)的表达,探讨GPI-PLD表达与不同白血病细胞黏附性、迁移性的关系.方法 采用黏附实验和体外穿膜实验比较3种不同白血病细胞的黏附性和侵袭性;半定量RT-PCR检测这些白血病细胞GPI-PLD和uPAR mRNA的表达水平;免疫印迹法检测细胞GPI-PLD的表达;流式细胞术检测细胞膜uPAR的表达.结果 THP-1细胞中GPI-PLD和uPAR的mRNA及蛋白质表达水平均明显高于K562和HL-60细胞.THP-1细胞对Fn的黏附率显著高于K562、HL-60细胞;THP-1与HL-60细胞体外穿膜侵袭能力显著高于K562细胞.结论 THP-1细胞较K562和HL-60细胞具有较高的黏附和侵袭能力,与其GPI-PLD和锚定蛋白uPAR表达有关.     

齐墩果酸对白血病HL-60细胞PI3K、Akt、Cav-1表达的影响

目的：研究齐墩果酸（Oleanic add,OA）对人白血病HL-60细胞PDK、Akt、Cav-1表达的影响.方法：OA作用HL-60细胞后,采用透射电镜观察细胞形态,RT-PCR法检测HL-60细胞PDK、Akt、Cav-1的mRNA表达.结果：OA作用于HL-60细胞后,细胞形态改变明显,出现凋亡小体,且PI3K、Akt、Cav-1的mRNA表达下调（P＜0.01）.结论：OA可抑制肌-60细胞增殖,这可能与其下调HL-60细胞中PI3K、Akt、Cav-1的表达有关.     

MRP1和XIAP基因在急性髓系白血病及细胞株中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因在急性髓系白血病(AML)患者及K562、K562/ADM细胞株中的表达,探讨其在AML发生及多药耐药中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测81例AML患者与20例正常人骨髓细胞(对照组),以及K562、K562/ADM细胞株中MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达.结果 K562/ADM细胞MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白水平明显高于K562细胞(P＜0.05).AML患者初治组和复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平明显高于初治组(P＜0.05).结论 MRP1、XIAP基因的异常表达与白血病发病及复发密切相关,可能通过诱导白血病细胞耐药及抑制细胞凋亡的途径发挥作用,其表达水平的高低对评估AML患者预后及治疗效果有重要意义.     

多药耐药相关蛋白-2在白血病耐药细胞株K562/A02的表达

目的:研究多药耐药相关蛋白-2（MRP-2）与白血病细胞耐药的关系,并探讨其在白血病多药耐药中的意义。方法：应用RT-PCR方法检测白血病细胞株K562与耐药细胞株K562/A02中MRP-2 mRNA的差异表达,然后将MRP-2反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染至耐药细胞株K562/A02,采用MTT法、流式细胞术及RT-PCR法检测转染后细胞内阿霉素的荧光强度、耐药指数及MRP-2 mRNA的表达情况。结果：耐药细胞株K562/A02中MRP-2 mRNA表达水平明显高于白血病细胞株K562（P<0.05）。MRP-2反义寡核苷酸片段转染后耐药细胞株K562/A02细胞内的阿霉素浓度升高,耐药指数较未转染细胞明显降低（P<0.05）;转染后耐药细胞株K562/A02细胞MRP-2 mRNA表达水平较未转染细胞下降了67.5%,两者比较差异具有显著性（P<0.05）。结论：MRP-2的高表达导致白血病耐药细胞内化疗药物浓度降低,可能是其导致白血病多药耐药的机制之一。     

survivin mRNA表达水平与高三尖杉酯碱诱导恶性血液病细胞凋亡的相关性研究

目的：研究survivin mRNA在细胞株MUTZ-1、K562、Jurkat、RPMI、HL60的表达水平与高三尖杉酯碱（HHT）诱导的凋亡率的关系。方法：应用流式细胞仪技术，研究HHT诱导人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1、人急性红白血病细胞株K562、人淋巴瘤细胞株Jurkat和人骨髓瘤细胞株RPMI，以及人急性粒细胞白血病细胞株HL60细胞凋亡。用半定量逆转录酶-多聚酶链式反应，检测上述细胞株及HHT作用MUTZ-1细胞后凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP的表达。结呆：细胞株MUTZ-1、K562、Jurkat、RPMI、HL60均表迭survivin、XIAP mRNA，HHT能诱导各细胞株凋亡，HHT诱导的凋亡率与细胞株survivin mRNA表达呈负相关。结论：survivin在细胞中的表达水平可能直接影响细胞对化疗药物的敏感性，可作为预测细胞耐药的指标之一，同时也可能将成为肿瘤治疗的新靶向。     

干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用

[目的]探讨细胞因子干扰素α（INFα）和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷（5-AZA-CdR）对白血病细胞HL-60和K562的作用机制。[方法]1000U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位（Δψm）和细胞凋亡的情况。[结果]INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR（5μmol/L）的作用最明显;XIAP mRNA表达无变化。INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达,不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl。INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加。除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xaf1 mRNA、Bcl-2家族成员以及Δψm无协同作用。[结论]INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调Xaf1 mRNA的表达,下调Bcl-2（Bcl-xl）/Bax和降低线粒体膜电位有关。     

干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用

 [目的]探讨细胞因子干扰素α（INFα）和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷（5-AZA-CdR）对白血病细胞HL-60和K562的作用机制。[方法]1000U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位（Δψm）和细胞凋亡的情况。[结果]INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR（5μmol/L）的作用最明显;XIAP mRNA表达无变化。INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达,不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl。INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加。除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xaf1 mRNA、Bcl-2家族成员以及Δψm无协同作用。[结论]INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调Xaf1 mRNA的表达,下调Bcl-2（Bcl-xl）/Bax和降低线粒体膜电位有关。     

原位逆转录PCR检测千细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性.方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达.结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性.结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR.     

铁树叶提取液对白血病细胞株K562、HL—60增殖抑制作用的实验研究

目的观察铁树叶在白血病细胞株K562及HL-60中的作用.方法细胞培养液中分别加入铁树叶(实验组1和实验组2)及P.B.S(对照组1和对照组2),观察集落细胞数、死活细胞计数及细胞蛋白质含量.实验组和对照组比较,死活细胞计数和细胞蛋白含量P值均＜0.05,集落细胞计数实验组抑制率50%.结果实验组和对照组比较,死活细胞计数和细胞蛋白含量P值均＜0.05,集落细胞计数实验组抑制率＞50%.结论铁树叶提取液对白血病细胞株K562及HL-60细胞的增殖有明显抑制作用.     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

白血病血细胞中葡萄糖转运体SLC2A的表达及意义

目的探讨葡萄糖转运体SLC2A1~9在K562细胞、正常人与白血病患者血细胞中的表达差异,分析其在白血病发生发展中的作用。方法通过培养收集人慢性髓原白血病细胞(K562细胞)、正常人和白血病患者血细胞,采用反转录PCR和电泳技术检测SLC2A1~9mRNA的表达量。结果 K562细胞可见SLC2A1、3、4、6、8、9mRNA表达,正常人血细胞可见SLC2A3、6、8mRNA表达,白血病患者血细胞可见SLC2A3、6、8、9mRNA表达;白血病患者组SLC2A6、9mRNA的表达水平均明显高于正常人组(P<0.05),而SLC2A3mRNA的表达水平则明显低于正常人组(P<0.01),SLC2A8mRNA的表达则两组间无显著差异(P>0.05)。结论 SLC2A6、9在白血病中高表达,可能成为白血病基因诊断的分子标志物和抗癌治疗新靶点。     

STUDY ON EFFECTS OF QUERCETIN ON PML GENE AND PROTEIN IN LEUKEMIA CELL LINES

Objective To investigate the effect of quercetin on PML gene and protein expression andlocalization in leukemia cell lines. Methods Cell morphology was assayed by Wright's stain and fluorescence stain, and PML mRNA expression by RT-PCR , PML protein localization by immuno-fluorescence. Results NB4 and HL-60 cells differentiated morphologically after treatment with all-trans-retinoic acid (ATRA) while K562 cells did not differentiate. Typical apoptosis was found in each cell line after treatment with quercetin. Immuno-fluorescence analysis showed , after treatment with ATRA , the fusion protein disappeared in NB4 cells and PML protein relocated , while HL-60 and K562 cells had no difference from control cells. After treatment with quercetin, the fusion protein disappeared in NB4 cells, PML protein relocated, then degraded. In HL-60 cells and K562 cells, PML protein also located and then degraded . The expression of PML mRNA was not changed in all three cell lines after treatment with ATRA or quercetin. C     

5-AZA-CdR联合EGCG对HL-60和K562的影响

目的 探讨细胞因子INFα和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-AZA-CdR)能否诱导HL-60和K562 Xaf1表达,以及Xafl表达诱导剂联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有协同抗癌作用.方法 (1)1000U/mlINFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48 h.通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达并比较差异.(2)最佳Xaf1表达诱导剂联合EGCG作用于白血病细胞,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位和细胞凋亡的情况.结果 (1)随5-AZA-CdR剂量增加,HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,INFα也能诱导Xaf1表达,以5-AZA-CdR(5 μmol/L)的作用最强;ISFα和5-AZA-CdR均不影响XIAP mRNA的表达.(2)5-AZA-CdR和EGCG可改变HL-60和K562细胞Bcl-2(Bcl-x1)和Bax的表达,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,二者联合作用被加强.结论 (1)INFα和5-AZA-CdR能诱导HL-60和K562 Xaf1 mRNA的表达,且5-AZA-CdR的作用具有剂量依赖性.(2)5-AZA-CdR和EGCG在体外能诱导白血病细胞凋亡,并具有协同效应.     

Tiam1、P~（53）在胃癌中的表达及其相关性研究

目的：研究胃癌组织及正常胃黏膜中Tiam1、P53的表达情况,及其与临床病理学之间的关系。方法：应用免疫组化SABC法。结果：胃癌组织Tiam1蛋白及P53蛋白阳性表达率高于正常胃黏膜组织（P〈0.05）;随着胃癌浸润深度的增加、分化程度的降低、淋巴结转移的出现,Tiam1及P53阳性表达率升高（P〈0.05）;在胃癌组织中,Tiam1及P53的表达呈正相关（rs=0.390,P〈0.05）。结论：Tiam1、P53均参与胃癌的发生和发展,两者可成为判断胃癌恶性程度有价值的指标,也可成为预后评估的指标。     

小分子酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖凋亡的影响

目的探讨酪氨酸激酶抑制剂AG-490对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞的增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法观察AG-490在体外对人慢性髓系白血病急变细胞株K562细胞增殖的影响,光学显微镜下观察AG-490对K562细胞形态的变化,流式细胞术检测AG-490对K562细胞凋亡及细胞周期的影响,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时荧光定量PCR技术检测AG-490作用后K562细胞bcr/abl融合基因及凋亡相关基因c-myc mRNA的表达水平。结果 AG-490可明显抑制K562细胞的增殖,并随药物作用时间的延长和浓度的增加,抑制作用越明显（P〈0.05）;AG-490可使细胞周期阻滞于G1期,促使其凋亡（P〈0.05）。AG-490作用于K562细胞48 h后bcr/abl融合基因的表达无明显改变（P〉0.05）,而c-myc的表达水平明显降低（P〈0.05）。结论 AG-490可能通过阻断JAK2信号通路而下调c-myc的表达,使K562细胞阻滞于G1期,从而抑制K562细胞增殖,促使其凋亡。     

MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及对混合淋巴细胞反应的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。方法流式细胞仪检测MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析CD80和CD86mRNA表达情况;75Gy照射MG132诱导的HL-60细胞后,用CCK-8检测提高共刺激分子表达后,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果MG132上调HL-60细胞表达CD86,高浓度的MG132对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,对健康人单个核细胞起增殖作用。结论MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,促进对健康人单个核细胞的增殖作用。     

Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究

目的研究RNA干扰Survivin基因表达对HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的影响。方法采用PCR扩增以及定向克隆技术重组构建shRNA的表达载体pshRNA-Survivin,使用脂质体介导转染至HL-60细胞,分为6组：①空白实验组;②阿糖胞苷（Ara-C）组;③阳性质粒组;④阴性质粒组;⑤阳性质粒＋Ara-C组;⑥阴性质粒＋Ara-C组。采用RT-PCR技术检测HL-60细胞内Survivin及其mRNA表达,运用流式细胞仪进行细胞凋亡率改变的检测。结果与空白实验组比较,阳性质粒组的mRNA表达抑制率为57.7%,表达下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;阳性质粒组细胞凋亡率为5.87%,阳性质粒＋Ara-C组细胞对Ara-C敏感性明显提高,细胞凋亡率为12.4%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Survivin siRNA能够高效特异的抑制HL-60细胞内Survivin基因的表达,诱导细胞凋亡,并提高了HL-60细胞对Ara-C的敏感性,这有助于白血病基因治疗的进一步发展。     

罗格列酮经PPARγ受体介导HL-60细胞成熟分化

目的：研究人过氧化物酶体增殖物激活受体1（PPARγ）在白血病HL-60细胞分化中的作用．方法：采用Li—pofectamine2000脂质体进行HL-60细胞质粒转染．实验分单纯HL-60细胞培养组,空载体pIRES2-EGFP转染组,10μmol／L罗格列酮干预组和10μmol／L罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组．荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达．流式细胞仪检测转染效率,并对转染细胞成熟粒．单细胞特异性标志CD11b和CD14的表达进行分析．结果：转染的HL-60细胞可见绿色荧光表达,phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染效率为55％．流式细胞仪检测结果表明,罗格列酮干预组和罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组的CD11b＋和CD14＋细胞检出率均显著高于未转染细胞组与空载体转染组（P〈0．05）,且罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染具有协同效应;而未转染细胞组与空载体转染组2种表型细胞百分率差异均无统计学意义（P〉0．05）．结论：罗格列酮可通过激活PPARγ促进HL-60细胞向粒-单细胞成熟分化,有望成为治疗白血病的候选药物．     

亚砷酸对白血病K562/A02细胞的作用及机制

目的研究亚砷酸对白血病多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用及对多药耐药基因1（mdr1）、P糖蛋白（P-gp）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨亚砷酸逆转白血病多药耐药（MDR）的作用机制。方法将K562/A02细胞与不同浓度的亚砷酸（0、0.5、2.0、5.0μmol/L）共同孵育,分别在24、48、72h时,用Wrights染色法观察K562/A02细胞形态,流式细胞术（FCM）检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖活性,RT-PCR法检测mdr1mRNA的表达,免疫组织化学法观察P-gp表达,并用ELISA法检测VEGF的浓度。结果随着亚砷酸作用浓度和时间的增加,K562/A02细胞的数目减少,并出现凋亡形态学改变,FCM显示随着作用浓度和时间的增加,细胞凋亡率逐渐上升;从作用48h组开始,mdr1mRNA及P-gp的表达出现显著降低（P〈0.05）,mdr1mRNA条带颜色较空白对照组明显变浅,mdrl/GAPDH灰度比值下降,此时,P-gp的灰度值上升,且随亚砷酸作用浓度和时间的增加,mdr1mRNA条带颜色进一步变浅,表达水平进一步下降;ELISA法检测表明从0.5μmol/L作用24h组开始,VEGF浓度即下降至405.02pg/mL（P〈0.05）,相同作用时间下以5.0μmol/L组较其它浓度组下调VEGF的作用最为显著。结论亚砷酸呈药物浓度-时间依赖性抑制K562/A02细胞增殖,诱导其凋亡,下调VEGF表达,有效抑制了mdrlmRNA的产生和P-gp的合成。     

脐血CD3AK细胞诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :探讨脐血CD3AK细胞诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡的作用。方法 :用细胞形态学观察、DNA琼脂糖电泳、原位末端标记法检测K5 6 2、HL 6 0细胞。结果 :K5 6 2细胞自然凋亡率 (3.5 0± 0 .97) % ,脐血CD3AK诱导的K5 6 2细胞凋亡率 (2 7.40± 4.6 4) % ;HL 6 0细胞自然凋亡率 (4.10± 1.10 ) % ,脐血CD3AK诱导的HL 6 0细胞凋亡率(2 1.10± 3 .82 ) % ,均有显著性差异。结论 :脐血CD3AK细胞能诱导K5 6 2、HL 6 0细胞凋亡 ,而且诱导K5 6 2凋亡的能力更强。