miR-485-5p对结肠癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨miR-485-5p通过PI3K/Akt-PAK1信号通路对结肠癌细胞顺铂耐药的影响。方法:构建LoVo/DDP细胞株,将建LoVo/DDP细胞株分为NC组(未做转染处理)、miR-485-5p mimics组(转染miR-485-5p mimics)、miR-485-5p inhibitors组(转染miR...     

miR-7靶向调控KLF4对结肠癌干细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小核糖核酸7(miR-7)靶向调控Krüppe样因子4(KLF4)对结肠癌干细胞生物学行为的影响。方法 体外传代培养结肠癌干细胞。取传15代、对数生长期、生长状态良好的结肠癌干细胞,随机分为对照组、NC mimics组、miR-7 mimics组,NC mimics组和miR-7 mimics组分别转染空载质粒、miR-7 mimics质粒,对照组不予转染。采用RT-qPCR法验证转染效率。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用改良Boyden小室法检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。通过TargetScan在线网站预测miR-7与KLF4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-7对KLF4的靶向调控作用。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测KLF4 mRNA和蛋白表达。结果 miR-7 mimics组miR-7相对表达量高于对照组和NC mimics组（P均<0.05）,而对照组与NC mimics组比较差异无统计学意...     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...     

miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子基因表达的靶向调控作用

目的探讨miR-9对人胃癌细胞株活化白细胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule,ALCAM)基因表达的靶向调控作用。方法运用生物信息学方法预测靶向调控ALCAM的miRNA;应用SYBR Green荧光定量PCR检测各个人胃癌细胞株中ALCAM mRNA的表达情况,确定实验细胞株;通过PCR扩增合成含有miR-9结合位点的ALCAM mRNA 3'端非编码区(ALCAM 3'UTR)片段和在miR-9结合位点进行突变的ALCAM-mut mRNA 3'UTR,测序鉴定后将其克隆至报告基因载体psi CHECK-2质粒,分别命名为psi CHECK-2-ALCAM和psi CHECK-2-ALCAM-mut;分组转染重组质粒和miRNA,双荧光素酶报告基因系统检测各实验组中细胞荧光素酶的表达,SYBR Green荧光定量PCR和Western blotting检测ALCAM mRNA及蛋白表达水平。结果生物信息学分析筛选发现miR-9可能靶向调控ALCAM; ALCAM mRNA在各胃癌细胞株中的表达量明显高于人正常胃黏膜GES-1细胞株,且SGC-7901细胞株ALCAM mRNA的表达量最高(P 0. 05),确定为实验细胞株;测序验证ALCAM 3'UTR和ALCAM-mut3'UTR经PCR扩增合成成功; psi CHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-9 mimics细胞组的相对荧光素酶活性较psi CHECK-2-ALCAM质粒共转染miR-NC、miR-9 inhibitor细胞组或空白对照组明显降低(P 0. 05),且该组细胞ALCAM mRNA和蛋白的表达明显降低(P 0. 05);而psi CHECK-2-ALCAM-mut质粒共转染miR-NC、miR-9 mimics或miR-9 inhibitor细胞组的相对荧光素酶活性与空白对照组相比,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论在SGC-7901中,miR-9通过与ALCAM mRNA 3'UTR结合而负性调控ALCAM基因的表达。     

miR-346及分泌型卷曲相关蛋白4在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的作用

目的检测结肠癌组织及细胞中miR-346及人分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)的表达,观察其对结肠癌细胞增殖的作用及可能的机制。方法选取30例经手术切除的结肠癌组织及其相应的癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5cm),另选取结肠癌细胞株及正常结肠上皮细胞株,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot)方法检测组织及细胞中的miR-346、SFRP4mRNA及蛋白的表达,采用Pearson rank检验miR-346与SFRP4的相关性,采用Target Scan及Find Tar软件预测两者的靶向调节作用。转染miR-346拟似物(mimics)或抑制物(inhibitor)以上调或下调miR-346的表达,MTT法检测结肠癌细胞的增殖,qRT-PCR及Western blot检测SFRP4mRNA和蛋白的表达。结果 miR-346在结肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(t=12.871,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌组织中的表达低于癌旁正常组织(t=8.609,P0.001;t=20.892,P0.001)。miR-346在结肠癌细胞株(SW480、SW620、HCT116、CaCo-2、LoVo、HT29)中的表达高于正常结肠上皮细胞株FHC(F=10.17,P0.001)。SFRP4mRNA及蛋白在结肠癌细胞株中的表达低于正常结肠上皮细胞株(F=39.01,P0.001;F=16.25,P0.001)。结肠癌组织中miR-346与SFRP4mRNA的表达呈负相关(r=-0.55,95%CI:-0.757～-0.230,P=0.001 8)。与miRNA阴性对照(miR-NC)组比较,给予miR-346mimics后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率升高(t=3.484,P0.05;t=5.868,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达下降(t=2.267,P0.05;t=5.889,P0.01);给予miR-346inhibitor后,MTT显示在72h、96h时间点miR-346组细胞存活率下降(t=4.400,P0.001;t=3.591,P0.001),SFRP4mRNA及蛋白表达升高(t=4.495,P0.01;t=7.130,P0.01)。结论 miR-346在结肠癌中高表达,SFRP4低表达,miR-346通过靶向作用于SFRP4来调控结肠癌细胞的增殖。     

miR-125b靶向Smad4调控非创伤性股骨头坏死骨髓基质干细胞成骨分化与增殖的相关性

目的探讨miR-125靶向Smad4调控对非创伤性股骨头坏死骨髓基质干细胞成骨分化与增殖的影响。方法培养人骨髓基质干细胞系HMSC-bm,将miR-125b模拟物(mimics)、miR-125b抑制物(inhibitor)和对照(miR-NC)转染到细胞内,qRT-PCR和Western印迹检测过表达对Smad4表达的影响,构建野生型和突变型的Smad4的3'-UTR荧光素酶报告载体,分别命名为Wt-Smad4和Mut-Smad4,将构建好的质粒做三组共转染,即Wt-Smad4与miR-125b mimics、Mut-Smad4和miR-125b mimics以及miR-NC与miR-125b mimics,检测荧光素酶的活性;BMP-2诱导HMSC-bm分化,将miR-125b mimics和si-Smad4转染到分化的细胞内,以不转染的细胞作为参照,检测miR-125b靶向Smad4对细胞分化的影响;将miR-125b mimics、miR-125b inhibitor和miR-NC转染到对数生长期的HMSC-bm细胞系,胆囊收缩素(CCK)8检测过表达对细胞增殖的影响;将miR-125b mimics与pc DNA3.1-Smad4质粒共转染;miR-125b mimics;miR-NC组;miR-NC与pc DNA3.1-Smad4组转染到HMSC-bm细胞系,检测miR-125b靶向Smad4对细胞增殖和分化的影响。结果转染miR-125b mimics组Smad4的相对表达量显著低于miR-125b NC组,转染miR-125b inhibitor组Smad4的相对表达量显著高于miR-125b NC组(P<0.01),Western印迹的检测结果与其一致,荧光素酶结果显示,Wt-Smad4与miR-125b mimics组荧光素酶活性显著低于miR-NC与miR-125b mimics组(P<0.01),结果证实Smad4是miR-125b的靶基因;miR-125b mimics和si-Smad4组Runx2和Osterix mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01);CCK8检测结果显示,miR-125b mimics组在24 h、48 h、72 h 3个时间点细胞的增殖率显著高于对照组(P<0.01),miR-125b inhibitor组在3个时间点的细胞增殖率显著低于对照组(P<0.01);miR-125b靶向Smad4对细胞增殖分化的影响试验结果显示,miR-125b mimics组细胞增殖显著高于miR-NC组(P<0.01),miR-125b mimics与pc DNA3.1-Smad4质粒共转染组细胞增殖显著高于miR-NC(P<0.05),miR-NC与pc DNA3.1-Smad4组细胞增殖显著低于miR-NC组(P<0.05),miR-125b mimics组和miR-125b mimics+pc DNA3.1-Smad4组细胞中Runx2和Osterix的mRNA相对表达量显著高于miR-NC组(P<0.01);miR-NC+pc DNA3.1-Smad4组细胞中Runx2和Osterix的mRNA相对表达量显著低于miR-NC组(P<0.01)。结论 Smad4是miR-125b的靶基因,上调miR-125b促进细胞增殖,下调miR-125b减弱细胞增殖,miR-125b靶向Smad4调控HMSC-bm细胞增殖和分化。     

微小RNA对内皮细胞炎性反应过程中血管内皮细胞黏附分子1表达的影响

目的研究微小RNA(miRNA,miR-126)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达,探讨miR-126对内皮细胞炎性反应过程中VCAM-1表达的影响。方法 HUVEC培养后分6组,空白对照组,模型组,miR-126mimic组,miR-126inhibitor组,A组和B组,后4组用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-126mimic、miR-126inhibitor及miRNA mimics control、miRNA inhibitor control 24h后,加脂多糖1μg/ml刺激,在8h时,用实时荧光定量PCR检测miR-126、VCAM-1 mRNA表达;Western blot法测VCAM-1蛋白表达,并进行比较。结果模型组miR-126mRNA较空白对照组降低,为(0.056±0.004)倍(P0.01),而VCAM-1mRNA较空白对照组升高(12.50±2.55)倍(P0.01),VCAM-1蛋白表达明显升高(P0.01)。miR-126mimic组miR-126mRNA相对表达较A组升高(51.18±2.30)倍(P0.01),VCAM-1mRNA相对表达为A组(0.81±0.04)倍(P0.01),VCAM-1蛋白表达较A组明显降低(P0.01);miR-126inhibitor组miR-126mRNA表达较B组降低(0.032±0.011)倍(P0.01),VCAM-1mRNA水平较B组高(1.42±0.10)倍(P0.05),VCAM-1蛋白表达较B组明显升高(P0.05)。结论过表达miR-126在8h时下调VCAM-1的表达,提示miR-126可能通过抑制VCAM-1的表达,参与抑制脂多糖诱导的HUVEC的炎性反应。     

miR-626下调HepG2细胞载脂蛋白(a)的表达

目的筛选高效调控LPA基因表达的miRNA。方法用在线预测工具预测作用于LPA基因3'UTR的miRNA,RT-PCR和Western blot检测转染预测所得miRNA mimic后HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]mRNA和蛋白表达水平。实验分为对照组、miR-626 mimic组、miR-626 mimic+miR-626 inhibitor组和miR-626 inhibitor组共4组。使用荧光素酶报告系统进行miR-626靶标验证实验。结果可作用于LPA基因3'UTR的miRNA有9个。mimic转染组与对照组相比,Apo(a)的mRNA表达水平差异不显著,但miR-626能显著下调Apo(a)蛋白的表达。使用miR-626 inhibitor后,miR-626对Apo(a)蛋白的下调作用减弱。转染miR-626后细胞裂解液的荧光强度显著下降。结论miR-626能显著下调Apo(a)蛋白表达水平,其通过与LPA mRNA 3'UTR序列结合,抑制LPA mRNA翻译实现的。     

微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测：采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA，观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化，选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察：取对数生长期HCT116细胞分为3组，1组细胞顺序转染miR-144模拟物（miR-144 mimics）和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR...     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

干扰Sema4D基因表达对胰腺癌细胞生物学特征的影响

目的探讨干扰Sema4D基因的表达对胰腺癌细胞生物学的影响。方法设计合成Sema4D-siRNA,转染到人胰腺癌细胞系中,将实验分为3组,转染siRNA组、阴性对照组(即转染非特异性对照组)﹑空白对照组(未经任何处理的胰腺癌细胞)。转染48 h后利用RT-q PCR检测转染前后Sema4D mRNA表达的变化,转染72 h后利用Western-Blot的方法检测转染前后Sema4D蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝显色法观察转染后细胞生长变化;Transwell小室侵袭试验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变;采用流式细胞技术检测肿瘤细胞凋亡的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析比较,进一步两两比较采用LSD-t检验法。结果转染Sema4D-siRNA 48 h后,转染siRNA组Sema4D mRNA的表达明显低于阴性对照组和空白对照组,3组比较差异有统计学意义(F=421.990,P<0.001)。转染Sema4D-siRNA 72 h后,转染siRNA组Sema4D蛋白明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(F=27.074,P=0.002 3)。转染siRNA组48、72、96 h的细胞生长速度明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异均有统计学意义(F值分别为15.314、62.255、223.493,P值分别为0.004、<0.001、<0.001)。转染siRNA组穿膜细胞个数明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义(42.0±5.9 vs 60.0±6.1 vs 61.0±4.6,F=37.21,P=0.000 4]。转染siRNA组穿膜细胞凋亡率明显低于阴性对照组和空白对照组,3组间比较差异有统计学意义[(16.57±0.31)%vs(9.50±0.45)%vs(9.90±0.61)%,F=26.75,P=0.007 4]。结论 siRNA能够下调Sema4D基因在胰腺细胞中的表达,可以抑制胰腺癌细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力明显下降,凋亡率下降。     

MicroRNA-196a抑制序列对人胰腺癌PANC1细胞株HOXB8基因表达的影响

目的 观察microRNA-196a(miR-196a)抑制序列转染胰腺癌细胞株PANC1后对其HOXB8基因表达的影响.方法 将PANC1细胞分为对照组、miR-196a抑制序列组和siRNA对照组.采用脂质体法将miR-196a抑制序列及对照siRNA分别转染PANCI细胞.应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染细胞miR-196a及其下游靶基因HOXB8 mRNA和蛋白的表达.结果 转染miR-196a抑制序列后,PANC1细胞miR-196a表达量较siRNA对照组显著减少(0.050±0.054比0.839±0.025,t=3.12,P＜0.05);HOXB8 mRNA表达量较siRNA对照组增高1.57倍(2.20 ±0.07比1.29±0.10,t=3.86,P＜0.05);HOXB8蛋白表达量也显著增强(0.90±0.03比0.40±0.10,t=3.11,P＜0.05).结论 miR-196a可以下调HOXB8基因的表达.     

miR-214对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞中微小RNA-214(miR-214)的表达对瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其机制。方法 采用RT-qPCR法检测MM细胞株IM-9、U266、Lp-1、H929及人正常浆细胞中miR-214的表达。取U266细胞，随机分为miR-214 mimics组和mimics-NC组，分别转染miR-214 mimics和mimics-NC至两组U266细胞，RT-qPCR法检测转染后两组细胞miR-214的表达差异采用平板克隆形成实验、CCK-8实验、流式细胞术分别检测转染后两组细胞集落形成数目，24、48、72、96 h时OD值以及凋亡率和细胞周期占比的差异，Western blotting法检测转染后两组细胞中FOXM1蛋白表达差异。结果 miR-214在IM-9、U266、Lp-1、H929细胞中的表达低于正常浆细胞(P均<0.05)。转染后，与mimics-NC组相比，miR-214 mimics组U266中miR-214表达升高(P<0.05)，集落形成数目下降(P<0.05),24、48、72、96 h时OD值降低(P均&l...     

miR-16通过靶向调控YAP1基因表达影响肺癌细胞的增殖

目的探讨miR-16通过靶向调控Yes相关蛋白(YAP) 1基因表达影响肺癌细胞的增殖。方法采用RT-PCR法检测miR-16在不同肺癌细胞株及人正常胚肺细胞中的表达。脂质体LipofectamineTM3000将miR-16 mimics和miR-16NC转入肺癌细胞中,RT-PCR检测miR-16表达,MTT法检测细胞活力,软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆数目,Ho-echst33258检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western印迹检测细胞中YAP1蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果 miR-16在A549、H1050、H1299、NCI-H520、NCI H596及MIRC-5中的表达分别为(0. 38±0. 03)、(1. 35±0. 01)、(1. 10±0. 11)、(1. 43±0. 14)、(1. 56±0. 15)、(2. 38±0. 25);与MIRC-5比较,肺癌细胞中miR-16表达量下调(P<0. 01),且在A549细胞中表达量最低,因此选为后续实验研究对象。与miR-16 NC组比较,miR-16 mimics组miR-16表达量显著提高(P<0. 01);且转染24、48、72 h后,细胞活力均下降(P<0. 01);转染48 h后,细胞克隆形成数目减少(P<0. 01),细胞凋亡率提高(P<0. 01),细胞周期阻滞于G1期(P<0. 01);同时,miR-16 mimics能够靶向调控YAP1,下调YAP1蛋白及mRNA表达(P<0. 01)。结论 miR-16 mimics通过靶向下调YAP1表达进而抑制A549细胞增殖。     

具核梭杆菌通过调控miR-181b在结肠癌细胞中形成炎性微环境的机制

背景:具核梭杆菌(Fn)是口腔常见的致病菌,研究发现Fn与结直肠癌的发生、发展密切相关,尤其是炎症相关性结直肠癌。目的:探讨Fn感染在结肠癌细胞中形成炎性微环境的机制。方法:构建Fn感染Caco-2细胞的炎症模型,行miRNA测序。将miR-181b mimics或inhibitor转染Fn感染的Caco-2细胞。以qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测TNF-αmRNA和蛋白表达,ELISA法检测上清液中TNF-α含量,Transwell小室法检测穿膜淋巴细胞数。结果:Fn组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著高于对照组(P0.05),上清液中TNF-α含量显著升高(P0.05),穿膜淋巴细胞数量明显增多(P0.05)。miRNA测序和qRT-PCR结果均显示,Fn组miR-181b表达较对照组显著降低(P0.05)。与对照组相比,miR-181b mimics+Fn组TNF-αmRNA和蛋白表达显著降低(P0.05);而miR-181b inhibitor组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著升高(P0.05)。生物信息学工具和双荧光素酶检测证实TNF-α可能为Caco-2细胞中miR-181b的靶基因。结论:Fn通过抑制Caco-2细胞中miR-181b表达而上调TNF-α表达,募集淋巴细胞形成炎性微环境。     

miR-30b对血管平滑肌细胞迁移能力的影响

目的探究microRNA-30b(miR-30b)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)迁移能力的影响。方法体外分离培养大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组(未进行转染)、miR-对照组(转染miR-NC,浓度为50 nmol/L)、miR-30b mimics组(转染miR-30b mimics,浓度为50 nmol/L)。采用实时荧光定量PCR实验检测miR-30b及钙黏附蛋白E-Cadherin的表达情况;采用划痕愈合实验检测VSMC的迁移率;采用Transwell实验检测VSMC的迁移能力;采用Western blot技术检测E-Cadherin蛋白的表达。结果①miR-30b mimics组与正常对照组和miR-对照组比较,miR-30b表达水平升高(P0.05)。②划痕愈合实验结果显示,与正常对照组和miR-对照组相比,miR-30b mimics组VSMC的划痕修复率明显降低(P0.05)。③Transwell实验可见,miR-30b mimics组VSMC的迁移能力较正常对照组和miR-对照组明显减弱(P0.05)。④miR-30b mimics组E-Cadherin mRNA和蛋白的表达较正常对照组和miR-对照组明显增强(P0.05)。结论 miR-30b上调E-Cadherin的表达,从而抑制大鼠VSMC的迁移。     

miR-152靶向下调DNMT1表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响北大核心CSCD

目的研究miR-152靶向下调DNA甲基化转移酶1(DNMT1)表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-152在宫颈癌细胞株Siha及人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达水平;体外培养Siha细胞,随机分为对照组、miR-152 mimics阴性对照组、miR-152 mimics组,分组转染后采用CCK-8试验检测细胞增殖情况,采用Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞侵袭转移情况,采用qRT-PCR检测miR-152及DNMT1 mRNA水平,采用Western blot检测DNMT1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与HUCEC细胞相比,miR-152在Siha细胞中[(0.43±0.08)比(1.02±0.25)]表达水平明显下降(P<0.05);与对照组相比,miR-152 mimics组细胞miR-152[(2.61±0.47)比(1.00±0.21)]和E-cadherin表达水平[(0.85±0.16)比(0.42±0.07)]显著升高(均P<0.05),相对生存率[(45.53±10.15)%比(100)%]、迁移细胞数[(28.86±4.91)个比(387.75±56.43)个]、侵袭细胞数[(108.54±19.53)个比(273.68±47.36)个]、DNMT1 mRNA[(0.46±0.09)比(1.01±0.23)]及DNMT1[(0.28±0.05)比(1.01±0.22)]和Vimentin蛋白表达[(0.12±0.03)比(0.94±0.15)]水平均显著降低(均P<0.05)。miR-152 mimics阴性对照组细胞各指标均无显著变化(均P>0.05)。结论 miR-152在宫颈癌细胞株Siha中低表达,上调其表达可下调DNMT1表达,抑制癌细胞的增殖,降低癌细胞的侵袭转移能力。     

miR-152靶向下调DNMT1表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响

目的研究miR-152靶向下调DNA甲基化转移酶1(DNMT1)表达对宫颈癌细胞株Siha侵袭转移的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-152在宫颈癌细胞株Siha及人正常宫颈上皮细胞HUCEC中的表达水平;体外培养Siha细胞,随机分为对照组、miR-152 mimics阴性对照组、miR-152 mimics组,分组转染后采用CCK-8试验检测细胞增殖情况,采用Transwell侵袭试验和细胞划痕试验检测细胞侵袭转移情况,采用qRT-PCR检测miR-152及DNMT1 mRNA水平,采用Western blot检测DNMT1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平。结果与HUCEC细胞相比,miR-152在Siha细胞中[(0.43±0.08)比(1.02±0.25)]表达水平明显下降(P0.05);与对照组相比,miR-152 mimics组细胞miR-152[(2.61±0.47)比(1.00±0.21)]和E-cadherin表达水平[(0.85±0.16)比(0.42±0.07)]显著升高(均P0.05),相对生存率[(45.53±10.15)%比(100)%]、迁移细胞数[(28.86±4.91)个比(387.75±56.43)个]、侵袭细胞数[(108.54±19.53)个比(273.68±47.36)个]、DNMT1 mRNA[(0.46±0.09)比(1.01±0.23)]及DNMT1[(0.28±0.05)比(1.01±0.22)]和Vimentin蛋白表达[(0.12±0.03)比(0.94±0.15)]水平均显著降低(均P0.05)。miR-152 mimics阴性对照组细胞各指标均无显著变化(均P0.05)。结论 miR-152在宫颈癌细胞株Siha中低表达,上调其表达可下调DNMT1表达,抑制癌细胞的增殖,降低癌细胞的侵袭转移能力。     

miR-1306-5p在AML患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对HL60细胞增殖凋亡和迁移侵袭调控作用观察

目的 观察微小RNA-1306-5p(miR-1306-5p)在急性髓系白血病（AML）患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对人白血病细胞株HL60增殖凋亡和迁移侵袭调控作用。方法 分别提取初诊AML患者和再生障碍性贫血（AA）患者骨髓组织单个核细胞，采用qRT-PCR法检测单个核细胞miR-1306-5p；(2)取HL60细胞，分别转染过表达和敲低miR-1306-5p质粒（mimics control、miR-1306-5p mimics、inhibitor control、miR-1306-5p inhibitor，计为1、2、3、4组），转染48 h后采用CCK8法检测各组细胞OD值，流式细胞术和Transwell法分别检测各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数。结果 AML患者和AA患者miR-1306-5p相对表达量分别为0.27±0.07、1.00±0.08，两者比较，P<0.05。与mimics control组比较，miR-1306-5p mimics组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数降低，凋亡率升高（P均<0.05）；与inhibitor control组比较...     

介孔二氧化硅介导的微小RNA-24转染对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探究介孔二氧化硅纳米颗粒(MSN)搭载的微小RNA-24(miR-24)纳米载体复合物对过氧化氢(H_2O_2)诱导的早期心肌细胞凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组单纯加入100μl PBS;H_2O_2组单纯加入终浓度为100μmol/L H_2O_2处理24h;miR-24类似物(miR-24mimics)组、miR-24抑制剂(miR-24inhibitor)组在H_2O_2处理前预先加入功能化后的MSN(F-MSN)搭载的200nmol/L寡核苷酸预转染24h。用聚乙烯亚胺对MSN表面进行功能化修饰形成F-MSN,再通过静电吸附作用与miR-24结合形成基因载体复合物F-MSN-miR-24,体外转染后通过荧光定量PCR、Western blotting等评估其对新生大鼠心室肌细胞目的基因及Bcl-2蛋白相互作用的细胞死亡调解子(Bim)的作用,进一步评估其对心肌细胞凋亡的影响。结果 F-MSN可将miR-24高效转入至心肌细胞内,经计数染色阳性细胞得出转染效率可达72%以上。与对照组比较,H_2O_2组miR-24表达量降低(P0.05)。与H_2O_2组比较,miR-24 mimics组的表达量显著提高、miR-24inhibitor组的表达量显著降低,miR-24mimics组蛋白Bim的表达量显著降低、miR-24inhibitor组蛋白Bim的表达量显著提高,差异有统计学意义(P0.05)。miR-24mimics组心肌细胞存活率显著高于H_2O_2组[(78.80±1.49)%vs(67.40±1.63)%,P0.05]。结论MSN搭载的miR-24转染可以将目的基因高效转入至靶细胞,其发挥的生物学效应可以显著抑制H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡,促进心肌细胞存活,为MSN用于心血管疾病的基因治疗提供了新思路。