白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用

目的建立一种新的快速诊断巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的方法并初步用于肾移植受者。方法采用抗ＣＭＶ抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素－生物素标记法对外周血白细胞核中ＣＭＶ抗原（即刻早期抗原和早期抗原）进行染色，诊断ＣＭＶ感染。结果共检测肾移植受者７２例，ＣＭＶ活动性感染率为４７％（３４／７２），ＣＭＶ病发病为１８％（１３／７２）。ＣＭＶ抗原阳性细胞数在ＣＭＶ活动性感染者中平均为１１．５／５万ＷＢＣ，在ＣＭＶ病者为２０．５±１７．８／５万ＷＢＣ。同时检测１０名健康人，结果均为阴性。结论该法具有快速、简便、成本低等优点，且能达到定量检测的目的，可用于临床对ＣＭＶ感染的早期快速诊断。     

白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用

目的 建立一种新的快速诊断巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的方法并初步用于肾移植受者，方法 采用抗ＣＭＶ抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素－生物素标记法对外周血白细胞核中ＣＭＶ抗原（即刻早期抗原和早期抗原）进行染色，诊断ＣＭＶ感染。结果 共检测肾移植受者７２例，ＣＭＶ活动性感染率为４７％（３４／７２），ＣＭＶ病发病为１８％（１３／７２），ＣＭＶ抗原阳性细胞数在ＣＭＶ活动性感染者中平均为１１．５／５万ＷＢ     

异基因造血干细胞移植后人类疱疹病毒6型感染及其与巨细胞病毒感染的相关性

为了解人类疱疹病毒6型（human herpesvirus 6，HHV-6）在中国接受异基因造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）的人群中感染现状及其与巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的相关性，对72例接受HSCT的患者HHV-6DNA血症进行连续监测。收集HSCT患者移植前和移植后1-12周EDTA抗凝的外周血标本共680份，采用巢式聚合酶链反应检测外周血单个核细胞中HHV-6DNA，并利用Hind Ⅲ限制性内切酶对HHV-6进行基因分型，同时采用免疫荧光法检测CMV抗原血症。结果显示，HSCT后62．5％（45／72）的患者至少1次出现HHV-6DNA血症，首次检出的中位时间为14（7-63）天；除1例患者检出HHV-6A型以外，其余所有HHV-6阳性患者均为HHV-6B型感染。65.3％（47／72）的移植后患者至少1次发生CMV抗原血症，首次检出的中位时间为43（14-105）天。HHV-6与CMV共感染（CMV^＋／HHV-6^＋）的发生率为52．8％（38／72）．HHV-6DNA血症的首次检出时间早于CMV抗原血症（P〈0．0001）。HHV-6DNA血症阳性患者CMV抗原血症检出率显著高于HHV-6血症阴性患者[84．4％（38／45）vs33.3％（9／27），P=0．0001]。HSCT后的疱疹病毒感染相关疾病中出血性膀胱炎（HC）发生率较高[23.6％（17／72）]，其中88．2％（15／17）的HC发生于HHV-6血症阳性患者．82.3％（14／17）发生于CMV^＋／HHV-6^＋患者。结论：HSCT后HHV-6感染以及HHV-6与CMV共感染状态普遍存在，且发生于移植后早期的HHV-6感染与发生时间相对较晚的CMV感染之间可能存在相关性。     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的:建立一种新的快速诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的人巨细胞病毒pp65抗原进行标记识别.结果:检测61例肾移植受者中,HCMV pp65抗原阳性36例,活动性感染率为59%(36/61),有症状的HCMV 20例,占所有受者33%(20/61),平均抗原指数(98±31)个/2 ×105 WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)个/2×105 WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论:该法敏感、简便,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

尿毒症患者活动性巨细胞病毒感染的发生状况及其对肾移植的影响

目的 :了解肾移植患者术前活动性巨细胞病毒 (CMV)感染的发生状况及其对术后的影响。方法 :自2 0 0 2年 6月至 2 0 0 3年 12月 ,检测 196例肾移植患者术前外周血CMV pp65抗原血症 ;肾移植后则每 2～ 4周检测 1次 ,共为期 6个月 ;分析术前CMV pp65抗原血症状况对术后患者CMV pp65抗原血症强度和CMV病发生率的影响 ;另于同期内检测 2 9例健康成人CMV pp65抗原血症作对照。结果 :2 9例健康成人CMV pp65抗原血症均为 (-) ;肾移植前有 11 2 % (2 2 / 196)的尿毒症患者CMV pp65抗原血症为 (+ ) ;这类患者肾移植后发生高活动性CMV感染 (即CMV pp65抗原血症指数 >10 0 )和CMV病的发生率均明显高于移植前CMV pp65抗原血症为 (-)的患者 ;肾移植后6个月内有 87 8% (172 / 196)的肾移植受者CMV pp65抗原血症为 (+ )。结论 :肾移植前活动性CMV感染为11 2 % ;肾移植后 6个月内活动性CMV感染高达 87 8% ;术前活动性CMV感染是导致肾移植后发生高活动性CMV感染和CMV病的重要原因。     

肾移植术后巨细胞病毒感染诊断、预防与治疗

目的:探讨肾移植术后巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染的诊断、治疗与预防方法。方法:回顾性分析28例肾移植患者临床资料,检测手术前、后血中CMV抗原和CMV抗体及肾脏穿刺标本组织中CMV抗原的表达,并采用静脉注射更昔洛韦进行预防与治疗。结果:11例发生CMV感染,均为无临床症状的CMV感染,均治愈。结论:积极预防、早期治疗肾移植术后CMV感染至关重要,CMV抗原检测和免疫组织化学检测共同应用能够对CMV感染作出早期诊断,更昔洛韦能有效治疗CMV感染。     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的 推广一种肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的实验室诊断方法.方法 运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒低基质磷蛋白65(pp65)单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的HCMV pp65抗原进行标记识别.结果 检测61例肾移植受者中HCMV pp65抗原阳性36例(59%),有症状的20例(33%),平均抗原指数(98±31)/(2×105)WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)/(2×105)WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论 该法简便、敏感,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

酶联免疫斑点法诊断结核感染的阈值

目的：分析确定本实验室条件下酶联免疫斑点法（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）诊断结核感染的阈值以及活动性结核与非活动性结核外周血 ELISPOT 分界阈值。方法对确诊为活动性结核病患者、经有效抗结核治疗后非活动性结核患者和健康者进行 ELISPOT 检测。结果以早期分泌抗原靶6000蛋白（early secretary antigenic target 6000 protein,ESAT-6）作为刺激源时,外周血 ELISPOT 诊断结核感染的阈值为26斑点形成细胞（SFCs）／106,敏感度90．3％,特异度88．7％,阳性预测值82．3％,阴性预测值94．0％;以培养滤液10000蛋白（culture filtrate protein,CFP-10）作为刺激源时诊断阈值为18 SFCs／106,敏感度80．6％,特异度86．8％,阳性预测值78．1％,阴性预测值88．4％,两种抗原 ELISPOT 斑点形成细胞之和为441 SFCs／106时,其诊断活动性结核感染敏感度为87．1％,特异度为80．6％。结论在本实验室条件下 ESAT-6-ELISPOT 诊断结核感染的阈值为26 SFCs／106, CFP-10-ELISPOT 诊断结核感染的阈值为18 SFCs／106,该阈值诊断结核感染的敏感度较高,但特异度较结核低流行国家偏低;以 ESAT-6和 CFP-10两种抗原 ELISPOT 斑点形成细胞之和441 SFCs／106作为鉴别活动性结核与非活动性结核的阈值,可以为临床工作提供参考。     

肾移植术后HCMV感染诊断方法研究进展

人巨细胞病毒（human cytomegalovims,HCMV）感染是肾移植术后早期最常见的感染之一,严重影响肾移植术后患者人／肾存活率。肾移植后由于大量免疫抑制剂的应用导致早期活动性巨细胞病毒（CM-V）感染高达60％～80％,且15％～30％为有症状的CMV病。由于机体抵抗力的过度下降,HCMV和免疫细胞相互作用,     

荧光定量PCR法在检测246例小儿巨细胞病毒感染中的应用

目的探讨FQ-PCR在诊断小儿巨细胞病毒感染的临床应用价值。方法分别应用血清抗体检测和荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）的方法对患者进行血液和尿液病毒的检测，并对确诊的患者进行母乳CMV病毒的检测。结果在怀疑为活动性CMV感染的169例患儿中，PCR法的阳性检出率为75．1％，血清IgM法为52．1％，两种方法的阳性符合率为86．4％；18例尿液CMV-DNA阳性的患者查出母亲乳汁中CMV-DNA，含量为1．7×10～4．5×10^3copies／ml。结论FQ-PCR可以准确检测患儿体液及血液中的CMV含量，提示体内复制情况，对于临床的诊断和治疗有一定的指导意义。     

肾移植受者巨细胞病毒即刻早期信使核糖核酸检测及其临床意义

目的:探讨肾移植术后巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染的早期、快速、准确的诊断方法.方法:应用核酸基础序列扩增法(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)检测55例肾移植术后受者外周血CMV的即刻早期信使核糖核酸(immediate early messenger ribonucleic acid,IE-mRNA),同时检测CMV的PP65抗原,并比较其结果.结果:55例中29例抗原指数阳性,发生CMV病10例,未发生CMV病19例,发生CMV病组与未发生CMV病组比较,其抗原指数值差异有统计学意义(P＜0.01).IE-mRNA阳性20例,IE-mRNA阳性者的CMV抗原指数值显著高于IE-mRNA阴性者,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后首次检测到IE-mRNA的时间显著早于首次检出PP65抗原的时间(P＜0.05),经抗病毒治疗后两者转阴时间无差异.结论:应用NASBA检测IE-mRNA能早期诊断CMV活动性感染,对肾移植术后抗CMV治疗具有指导意义.     

外周血白细胞HCMV PP65抗原检测结果分析

目的 分析外周血白细胞巨细胞病毒（HCMV）PP65抗原检测结果，总结儿科常见疾病的HCMV感染情况及HCMV感染所致临床疾病的分布情况。方法 采用间接免疫荧光法检测了1016例儿童外周血白细胞HCMV PP65抗原，对检测结果及阳性病例进行分析。结果 所有送检标本总阳性检出率为25．2％，以肝炎、婴儿肝炎综合征组患儿阳性检出率最高，分别为37．8％、32．4％。CMV感染可累及全身各个系统，引起疾病多样，但以婴儿肝炎综合征最多见（37．1％），其次为高胆红素血症（12．9％）、急性呼吸道感染（10．9％）、腹泻（9．4％）、发热待查（6．6％）．肝炎（5．5％）等。结论 HCMV感染临床上常见，症状多样，临床医生对可疑病例应及早作相应的实验室检查，以助于早期临床诊断，并指导有效的治疗。     

pp67检测对器官移植术后巨细胞病毒活动性感染的诊断价值

目的：评价检测器官移植术后患者外周血中巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV)的信使核糖核酸编码的晚期基质表层蛋白（pp67)对移植术一CMV感染的诊断价值，以建立一种快速、客观的CMV活动性感染的新诊断方法。方法：采用核酸基础序列扩增法（nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)测定50例器官移植术后患者外周血中的pp67，并与CMV即刻早期抗原（pp65)检测结果作比较。结果：50例中，26例pp65阳性，其中同时检出pp67阳性者16例（两者符合率62％）；有症状的CMV病患者9例，其pp65与pp67均为阳性；pp67阴性34例无1例发展为CMV病；pp67的灵敏度为100％、特异度为82％、阳性预测值为56％、阴性预测值为100％。结论：pp67检测是快速、实用、客观诊断MV感染的方法，能准确反映CMV的活动状况。     

小儿巨细胞病毒PP65抗原血标本凝血原因及对策

巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）在我国人群中感染率高，约为60％～100。CMV具有潜伏一活化的生物学特性，早期、快速诊断CMV感染活动状态对患者的及时治疗至关重要。检测CMV—PP65抗原血症对CMV感染是一种敏感、特异、快速的诊断方法，不仅能早期诊断，其量化结果还有助于评价感染状态与判断预后，也是观察治疗效果的有效检测手段。但在临床上为小儿采集CMV—PP65血标本时，常发生肉眼不易察觉的血凝块或血标本凝固，使得检验结果不准或需要重新抽血。     

巨细胞病毒定量PCR与pp65抗原测定监测异基因造血干细胞移植巨细胞病毒感染的比较

本研究比较巨细胞病毒（CMV）定量PCR检测和CMV—pp65抗原检测在异基因造血干细胞移植CMV感染中的诊断价值。以84例异基因造血干细胞移植患者为研究对象,自预处理开始每周对患者EDTA抗凝外周血血标本进行CMV—pp65抗原及cMV定量PCR动态检测,直至出院,比较观察两者在诊断CMV感染中的作用。结果表明：84例移植患者的732份系列血标本中,26例移植后检出CMV定量PCR阳性,检出率30．95％,其中9例为cMV血症,13例为cMV病,检出中位时间为37．1（7—105）天;22例CMVpp65抗原检测阳性,检出率26．19％,检出中位时间为46．6（10—128）天;所有CMV—pp65抗原检测阳性患者CMV定量PCR均为阳性,4例CMV定量PCR阳性但CMV—pp65抗原检测阴性患者均未发展为CMV病。CMV病多出现于CMV定量PCR中等至高拷贝数或中等至高水平病毒血症（CMV—pp65抗原）病例中。治疗后CMV定量PCR转阴中位时间为17．5（11—28）天。CMV—pp65抗原转阴中位时间为10．0（7—21）天。结论：CMV定量PCR和CMV—pv65抗原检测均能作为异基因造血干细胞移植CMV感染早期诊断的有效手段,CMV定量PCR更敏感,CMV—pp65抗原检测更特异,两者同时使用能更有效地提高CMV感染诊断水平,监控其发生发展。     

早期抗原荧光灶检查快速诊断巨细胞病毒感染

巨细胞病毒(CMV)可引起新生儿与免疫抑制患者的严重感染.常规的细胞培养对诊断往往太迟,影响患者的治疗.检测早期抗原荧光灶是诊断CMV感染的一种方便且快速的方法.作者对CMV常规培养法与商品单克隆抗体早期检测病毒抗原的方法进行了比较.方法:收集69例常规随访肾移植患者的保存在CMV输送液中的尿标本,经1000×g离心10分钟,     

肾移植受者巨细胞病毒感染的早期快速诊断与防治

进修医生教授，肾移植受者为什么特别要注意巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的防治？教授目前，肾移植日益增多，新免疫抑制药不断出现，排斥反应明显减少但感染增加，尤其是CMV感染，CMV感染是肾移植术后早期常见的并发症和主要的死亡原因之一。肾移植后患者因免疫功能低下较易感染CMV，其活动性CMV感染率为２０％～７５％，其中１０％～３０％的患者可发展成有临床症状的CMV病，CMV病一旦发生，治疗较困难，严重的CMV病合并有其他细菌、真菌感染者病死率高达６５％，而需要辅助呼吸者高达９０％。CMV病患者移植肾的３…     

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的　比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法　收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果　pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论　pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。     

ELISA法检测呼吸道合胞病毒抗原、抗体方法学评价

目的：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法。对早期呼吸道感染患者进行呼吸道合胞病毒（respiratory syneytial virus，RSV）抗原、抗体检测，评价ELISA法对RSV感染早期临床诊断意义。方法：对325例怀疑呼吸道合胞病毒感染的患者采用ELISA法进行抗原、抗体（IgA、IgG）检测，并对检测结果进行对比分析。结果：以患者本人急性期和恢复期RSV-IgG血清效价升高4倍者作为RSV近期感染的确诊依据，325例患者确诊RSV感染的患者为54例（16．62％），其中检出RSV-Ag阳性20例、RSV-IgA阳性34例，与确诊阳性符合率分别为83．33％和80．95％。结论：ELISA法检测RSV-Ag、RSV-IgA符合率高，检测结果快速、准确、可靠，两者同时检测，可作为临床早期诊断依据，ELISA法可作为检测呼吸道感染的主要方法。     

肾移植受者巨细胞病毒感染及免疫抑制剂的影响

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒（CMV）感染率及免疫抑制剂对其的影响。方法214例肾移植受者术后静滴甲基泼尼松龙（Mp）、抗淋巴细胞球蛋白（ALG）作为诱导期免疫抑制治疗；基础免疫抑制剂治疗为环孢素A、泼尼松和硫唑嘌呤；急性排斥反应时静滴Mp治疗，无效时给予ALG或OKT3。采用免疫细胞化学法测定外周血白细胞CMV抗原，术后头3个月每周1次。结果214例肾移植受者中，126例（61.7％）术后发生CMV感染；70例（32．7％）发生急性排斥反应，其中52例（74．3％）发生CMV感染，明显高于无急性排斥反应患者的51．4％（P〈0．01）。在126例CMV感染和88例无CMV感染的肾移植受者中，诱导期免疫抑制剂ALG平均剂量分别为（14．1±1.3）支和（13．2±0．9）支（P〉0.05），平均疗程分别为（4．7±1．3）d和（4．4±0．9）d（P〉0．05），急性排斥反应发生率分别为42．3％和20．5％（P〈0．01），其中需使用ALG治疗例数分别为23例、6例（P〈0．05），需OKT3治疗例数为15例和1例（P〈0．05）。结论肾移植受者术后CMV感染率高；术后短期的ALG诱导治疗可能不增加CMV感染发生率；急性排斥反应后免疫抑制剂尤其是ALG或OKT3的使用与CMV感染密切相关。