虫草多糖脂质体对实验性大鼠肝纤维化Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响

目的:探讨虫草多糖脂质体(CPL)对CC14大鼠肝纤维化的预防作用及可能机制。方法:采用虫草多糖脂质体(CPL)预防CC14大鼠肝纤维化,运用免疫组和Northern杂交化检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因的表达。结果:CPL预防组肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较模型对照组明显减少(P值分别<0.01);CPL预防组大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达量明显下降,与模型组大鼠比较差异有显著性(P值分别<0.05)。结论:虫草多糖脂质体可以预防大鼠肝纤维化,其抗纤维化作用是通过在转录水平抑制肝脏胶原合成而实现的。     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、2及工、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子-1、2(TIMP-1、TIMP-2)及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理.方法制备大鼠肝纤维化模型,并给予软肝缩脾丸治疗;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP-1、TIMP-2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达.结果CC14模型组TIMP1、TIMP-2,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组.正常组大鼠肝组织无一例阳性.结论TIMP-1、TIMP-2与肝纤维化形成密切相关,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP-1、TIMP-2的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化作用.     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、2及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的　观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶组织抑制因子 -1、2 (TIMP -1、TIMP -2 )及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响 ,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理。方法　制备大鼠肝纤维化模型 ,并给予软肝缩脾丸治疗 ;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP -1、TIMP -2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达。结果　CCl4模型组TIMP -1、TIMP -2 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无一例阳性。结论　TIMP -1、TIMP -2与肝纤维化形成密切相关 ,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP -1、TIMP -2的表达 ,从而增强间质胶原酶的活性 ,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 ,产生抗肝纤维化作用。     

复方红景天干预大鼠肝纤维化作用的实验研究

目的：从血清、组织、分子等水平探讨复方红景天抗大鼠肝纤维化的作用及其可能的机制，为抗肝纤维化研究提供新的选择。方法：用四氯化碳皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型，同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗，观察大鼠肝功能，血清纤维化相关酶活性ALT、AST、β-NAG、MAO，血清肝纤维化指标PCⅢ、CIV、HA以及肝组织羟脯氨酸含量和病理学变化，同时检测复方红景天对大鼠肝组织TGF β1、I型前胶原mRNA表达水平的影响。结果：口服复方红景天可改善大鼠肝功能，降低血清PCⅢ、CⅣ、HA水平，抑制β－NAG、MAO的活性，降低肝组织羟脯氨酸含量，明显改善大鼠肝组织病理变化，并降低大鼠肝组织TGFβ、I型前胶原mRNA的表达水平。结论：复方红景天可能通过抑制TGF β1、I型前胶原mRNA的表达从而减少胶原合成、保护肝细胞等机制有效干预CC14诱导的大鼠肝纤维化，值得深入研究。     

虫草多糖脂质体对大鼠肝纤维化的胶原酶mRNA影响的研究

采用小剂量虫草多糖脂质体(虫草多糖量为15mg/100g,隔日一次)治疗CCI_4大鼠肝纤维化10周。运用地高辛自由引物法标记的1.7kb胶原酶探针行点渍印迹杂交检测大鼠肝组织中的胶原酶mRNA含量。结果表明:小剂量虫草多糖脂质体治疗组的大鼠肝组织中胶原酶mRNA含量非常显著高于非治疗组(P<0.01)。提示小剂量虫草多糖脂质体通过增加肝组织胶原酶mRNA的表达、促使Ⅰ,Ⅲ型胶原降解可能是抗纤维化的主要机制之一。     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP—1、2及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察软肝缩脾丸对纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白质酶组织抑制因子－1、2（TIMP－1、TIMP－2）及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRAN及蛋白表达的影响,从胶原降解的角度探索中药抗肝纤维化的可能机理。方案 制备大鼠纤维化模型,并给予软肝缩脾丸治疗;用原位杂交和免疫组化的方法分别测定TIMP－1、TIMP－2及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRAN和蛋白表达。结果 CCl4模型组TIMP－1、TIMP2,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无一例阳性。结论 TIMP－1、TIMP－2与肝纤维化形成密切相关,软肝缩脾丸可以抑制纤维化肝脏TIMP－1、TIMP－2的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化作用。     

复方861对大鼠肝星状细胞胶原合成及降解干预作用的体外研究

目的深入研究中药复方861抗肝纤维化的机理。方法向传一代肝星状细胞培养液中加入终浓度为10mg／ml的复方861作用48小时,收获细胞培养液观察Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原及TGFβ1的分泌量并测定胶原酶活性;收获肝星状细胞并提取总RNA,斑点杂交法检测胶原、胶原酶及其抑制TIMP1mRNA水平的变化。结果复方861可明显抑制肝星状细胞Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原及TGFβ1mRNA的表达及相应蛋白的分泌,同时可提高间质性胶原酶的活性并抑制TIMP1mRNA的表达。结论复方861在抑制胶原过度合成的同时,又可促进胶原的降解,从而使二者间的失衡得以纠正,达到抗肝纤维化的目的。     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠胶原及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的从mRNA水平观察三七总皂苷对肝纤维化大鼠Ⅰ型前胶原及TGF-β1的影响。方法用四氯化碳复合因素诱导大鼠肝纤维化模型。同时给予三七总皂苷治疗,秋水仙碱治疗组作对照,病理HE染色观察纤维化程度分期,用RT-PCR进行Ⅰ型前胶原mRNA和TGF-β1mRNA的半定量检测。结果三七总皂苷能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ型前胶原及TGF-β1的合成表达,减轻肝纤维化程度。结论三七总皂苷具有抗肝纤维化作用,干预大鼠肝纤维化可能与减少TGF-β1含量有关。     

奥曲肽对肝星状细胞胶原合成及TIMP-1、MMP-2表达的影响

目的研究奥曲肽(OCT)对体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)胶原分泌及TIMP-1mRNA、MMP-2mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠HSC,HSC随机分为4组,分别加入不同浓度的OCT,用ELISA法检测细胞上清液中的Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,半定量RT-PCR法检测OCT对HSC中MMP-2、TIMP-1 mRNA表达的影响。结果应用OCT干预后,HSC合成Ⅰ、Ⅲ型胶原减少,TIMP-1 mRNA的表达较少,而MMP-2 mRNA表达明显增加,差异有显著性(P<0.05)。结论OCT可以抑制HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,增强MMP-2mRNA的表达,抑制TIMP-1mRNA的表达,这可能是OCT发挥抗肝纤维化作用的途径之一。     

肝纤维化大鼠肝星状细胞和肝细胞胶原表达特征的实验研究

目的:探讨肝星状细胞和肝细胞在肝纤堆化时过量合成肝脏胶原的作用、特征及中药抗纤复方减少胶原生成的作用机理。方法:以二甲基亚硝胺(DMN)复制大鼠肝纤维化动物模型,采用胶原酶消化法经门静脉灌注0.05％Ⅳ型肢原酶灌流液消化肝脏,分散肝脏细胞。分别以18％(w/v)Nycodenz和49.2％(V/V)淋巴细胞分离液为介质行密度梯度离心,分离正常大鼠和造模大鼠肝脏星状细胞和肝细胞,按TRIzol试剂盒提供的方法抽提大鼠肝脏组织和细胞总RNA,经甲醛变性凝胶电泳,转印至尼龙膜,以地高辛标记的α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)、α_1(Ⅳ)前肢原探针行Northern印迹分子杂交,检测星状细胞、肝细胞和肝脏组织α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)和α_1(Ⅳ)前肢原mRNA的表达特征。对造模大鼠以抗纤复方药液灌胃,以秋水仙碱治疗对照组大鼠,治疗后再分离星状细胞和肝细胞行肢原基因表达检测。结果:正常大鼠肝脏α_1(Ⅰ)、α_1(Ⅲ)和α_1(Ⅳ)首胶原mRNA均有少量表达,造模组大鼠肝脏前胶原mRNA表达量明显增加,α_1(Ⅰ)与α_1(Ⅲ)前胶原mRNA表达量接近,α_1(Ⅳ)前肢原mRNA稍低。正常组大鼠肝星状细胞3种前胶原mRNA少量表达,Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达量接近,Ⅳ型首肢原mRNA较少。造模组大鼠星状细胞3种前胶原mRNA表达增加,其中以Ⅰ型mRNA表达稍多,Ⅲ型mRNA次之,Ⅳ     

复方益气活血化瘀中药对大鼠肝纤维化组织中胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型,研究以黄芪、丹参、三七为主的益气活血化瘀复方中药抗肝纤维化的作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药干预组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型;根据病理学检查评价各组动物肝纤维化程度;应用RT-PCR检测各组肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平;应用免疫组化检测各组肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达。结果中药干预组大鼠肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA水平,以及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原和TGF-β1的阳性表达均分别较模型组显著减轻与下降。结论益气活血化瘀复方中药能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1表达是其抗肝纤维化的部分机制。     

冬虫夏草与秋水仙碱抗肝纤维化的对照研究

目的:以秋水仙碱为对照,观察冬虫夏草对实验性肝纤维化的治疗效果,并探讨其机理。方法:用CCl_4诱导大鼠肝纤维化,分别以生理盐水、秋水仙碱、冬虫夏草各24只进行治疗。实验第4,8,12,14周分批处死动物,测量血清Ⅲ型前胶原含量,取肝组织进行病理观察,并用免疫组化技术观察肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原,结蛋白阳性细胞的动态变化。结果:两种药物均能明显降低血清Ⅲ型前胶原含量,并减轻肝组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原的沉积,最终防止肝假小叶及肝硬化形成。动物经药物治疗后肝组织内结蛋白阳性细胞数均明显低于生理盐水组。结论:冬虫夏草与秋水仙碱均有良好的抗肝纤维化作用,它们能抑制肝内储脂细胞(结蛋白阳性细胞)的增殖和转化,从而减少胶原合成及在肝窦周沉积。冬虫夏草无毒副作用,可能是一种有前途的抗肝纤维化药物。     

促肝细胞DNA合成刺激因了对大鼠肝纤维化的影响

目的：观察促肝细胞ＤＮＡ在刺激因子（ＨＤＳＳＦ）抗肝纤维化作用，探讨其可能的作用柚是。方法：采用复合病因法构建大鼠肝纤维化模型，以ＨＤＳＳＦ作为治疗药物，实验第１０周末取各组大鼠肝组织；（１）病理检查；（２）测肝纤维内羟脯氨酸含量；（３）Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｍＲＮＡ水平。结果：ＨＤＳＳＦ可明显改善肝组织的变性、坏死及纤维化程度、可使肝组织Ｈｙｐ含量明显下降，并可在减少Ⅰ     

芪参益气滴丸对肝纤维化大鼠肝脏胶原表达的影响

目的：应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型，研究芪参益气滴丸对纤维化肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法：70只大鼠随机分为正常对照组、模型组、芪参益气滴九干预组、模型对照组及芪参益气滴丸治疗组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型。按6期分类法评价各组大鼠肝纤维化程度。应用RT—PCR法检测各组大鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平；应用免疫组织化学技术检测各组动物肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果：芪参益气滴丸干预组与治疗组大鼠的肝纤维化程度、肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA水平及肝组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的阳性表达，均分别较模型组与模型对照组显著减轻与下降。结论：芪参益气滴丸能明显减轻肝组织病理改变和肝纤维化程度．抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达是其抗肝纤维化的机制。     

氯沙坦抗大鼠肝纤维化的研究

目的 :研究血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂氯沙坦对二甲基亚硝胺 (DMN)诱导的肝纤维化大鼠模型的疗效及可能的机制。方法 :制备DMN诱导的大鼠肝纤维化模型 ,同时应用氯沙坦灌胃 ,共 8周。肝组织进行常规HE及Masson三色染色。测定血清肝功能及透明质酸 (HA)。大鼠肝组织Ⅰ型胶原 (ColⅠ )、Ⅲ型胶原 (ColⅢ )及转化生长因子 βl(TGF β1)mRNA的水平用RT PCR方法检测。结果 :氯沙坦可明显改善肝纤维化的程度 ,降低血清ALT及HA的水平 (P <0 .0 1)。同时模型组ColⅠ、ColⅢ及TGF β1mRNA的水平明显高于正常对照组 ,氯沙坦治疗组明显低于模型组 (P <0 .0 0 1)。结论 :氯沙坦具有良好的抗肝纤维化作用 ,且能够抑制肝组织ColⅠ、ColⅢ及TGF β1mRNA的水平 ,从而发挥其抗肝纤维化的作用。     

牛磺酸对大鼠贮脂细胞、肝细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的:研究牛磺酸对大鼠贮脂细胞、肝细胞增殖及胶原基因表达的影响,为应用牛磺酸防治肝纤维化提供实验依据。方法:分离、培养大鼠贮脂细咆和肝细胞:采用~3H-胸腺嘧啶和~3H-脯氨酸掺入测定细胞增殖及胶原合成:用原位杂交检测I、Ⅲ型前胶原mRNA含量:结果:在5～80mmol/L浓度范围内。牛磺酸能显著抑制贮脂细咆、肝细胞的增殖及胶原合成,并呈时间、剂量依赖性关系:20mmol/L牛磺酸可显著抑制I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结论:牛磺酸在体外具有抗肝纤维化作用,其对于防治肝纤维化可能有一定的临床意义和应用前景。     

排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨排钱草总生物碱对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:采用逆转录定量PCR方法测定不同剂量排钱草总生物碱对大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的相对表达值。结果:高、中剂量组大鼠肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达显著低于模型组,P<0.05。与正常对照组相比差异无显著性意义。结论:排钱草总生物碱能显著降低猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。     

牛磺酸抑制实验性肝纤维化大鼠细胞外基质沉积

目的研究牛磺酸抗肝纤维化作用。大法用四氯化碳（ＣＣＩ４）制备肝纤维化模型;免疫组化检测肝Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原和透明质酸、层粘连素沉积;Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交检测肝Ⅰ、Ⅲ型前胶原、组织金属蛋白酶抑制因子－１（ＴＩＭＰ—１）ｍＲＮＡ含量。结果ＣＣＩ４肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅵ型胶原、透明质酸和层粘连素染色明显增多;Ⅰ、Ⅲ型前胶原、ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ显著增加。牛磺酸处理的大鼠,上述各指标的阳性染色明显减少,并可明显抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达,而对ＴＩＭＰ—１ｍＲＮＡ却无明显影响。结论牛磺酸对ＣＣＩ４诱导的大鼠肝纤维化具有保护作用,可明显抑制纤维生成与沉积。提示它对防治肝纤维化有一定的临床意义。     

丹参抗CCl4及DMN诱导的大鼠肝纤维化的研究

目的:探讨丹参防治肝纤维化的效果和机理。方法:分别采用四氯化碳(CCl_4)及二甲基亚硝胺(DMN)诱导的大鼠肝纤维化模型,以秋水仙碱作对照,观察肝组织病理学,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组化,检测肝组织Hyp、MDA、SOD及血清肝功能。结果:丹参和秋水仙碱在两种模型实验中皆显示有良好的抗肝纤维化效果。其中丹参有显著的提高肝SOD活性,降低MDA含量的作用。结论:丹参抗脂质过氧化的作用是其抗肝纤维化的重要机理,对胶原代谢也有直接的作用。     

人参皂苷Rg1对纤维化肝脏肝细胞超微结构及其表达基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的影响

基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1随肝纤维化病情的发展表达增强,与基质金属蛋白酶(MMP)-1特异性结合,使间质胶原酶活性下降,造成细胞外基质(ECM)沉积增加,促进肝纤维化进一步发展.三七可以增强胶原酶活力,降解肝内的Ⅰ、Ⅲ型胶原,其发挥作用的主要成分为三七总甙~([1]);而三七总甙是一种混合物,含人参皂苷共7种,人参皂苷Rgl为其中主要成分之一.前期研究表明,人参皂苷Rg1对肝纤维化有明显的治疗作用~([2]).本研究通过RT-PCR检测人参皂苷Rg1对CCl_4所致肝纤维化模型大鼠肝组织TIMP-1mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响,以探讨其抗肝纤维化的可能机制.