短发夹状RNA对胃癌细胞株血管内皮生长因子mRNA表达的影响

RNA干扰已成为当前肿瘤基因治疗的新策略，我们设计了针对血管内皮生长因子（VEGF）短发夹RNA（shRNA），观察其对人胃癌细胞血管VEGF表达的影响。     

Ki67基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用

目的研究针对Ki67基因的短发夹状RNA(shRNA)表达载体pSilencer-Ki67对人肾癌细胞生长的抑制作用。方法将pSilencer-Ki67转染人肾癌786-0细胞,24、48、72、120、144 h后分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Ki67 mRNA、蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,原位末端标记法检测细胞凋亡。结果pSilencer-Ki67转染后48 h 786-0细胞Ki67mRNA表达(34．1±1．7)%、蛋白表达(42．6±1．7)%降低最明显,与空质粒对照组[(97．7±0．9)%、(97．3±1．6)%]比较差异均有统计学意义(P＜0．01)。pSilencer-Ki67处理后48 h细胞增殖抑制率(76．7±3．2)%最高,72 h凋亡细胞阳性率(74．3±5．9)%最高,与空质粒对照组[(7．0±0．5)%、(8．4±1．1)%]比较差异有统计学意义(P＜0．01)。pSilencer-Ki67的这些作用可持续144 h。结论pSilencer-Ki67能有效、持续抑制人肾癌786-0细胞生长,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

hTERT基因短发夹状RNA表达载体对肾癌细胞生长的抑制作用

目的观察针对hTERT基因的短发夹状RNA（shRNA）表达载体pSilencer-hTERT对人肾癌细胞及移植瘤生长的抑制作用。方法（1）pSilencer-hTERT转染人肾癌Kerr-3细胞，1、3、5、7d后逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白印迹技术检测hTERTmRNA、蛋白表达，MTT法检测细胞增殖，原位末端标记法检测凋亡。（2）BALB／C-nu裸鼠接种Ketr-3细胞成瘤，瘤内分别注射pSilencer-hTERT（50μg）、空质粒pSilencer1．0-U6（50μg）及等体积（100μg）生理盐水，隔日1次，共7次。治疗结束后第3天处死小鼠，取瘤组织检测肿瘤体积，免疫组织化学染色检测hTERT表达。结果（1）pSilencer-hTERT转染3d后Ketr-3细胞hTERTmRNA表达（43．2±4．4）％、蛋白表达（42．6±5．6）％最低，细胞增殖抑制率（37．3±6．6）％、凋亡细胞阳性率（30．5±4．7）％最高，分别与空质粒对照组[（98．8±4．7）％、（98．0±3．7）％、（3．3±0．9）％、（10．4±2．4）％]比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（2）pSilencer-hTERT处理组小鼠肿瘤体积（62．4±36．5）mm^3减小，hTERT表达率（65．7±4．7）％降低，分别与空质粒对照组（83．2±38．7）、（90．7±4．2）％比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论pSilencer-hTERT能有效、持续抑制人肾癌Ketr-3细胞及裸鼠肾癌移植瘤生长。     

STAT3基因短发卡RNA表达质粒的构建及其对胃癌细胞生长和侵袭的抑制作用

目的 构建信号传导及转录活化因子3(STAT 3)基因短发夹RNA(shRNA)表达质粒,探讨STAT 3抑制后对胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 根据STAT 3 Mrna 编码序列,设计RNA干扰靶点,构建STAT 3基因的特异性小RNA干扰质粒(psiRNA-H1/STAT 3),使用脂质体转染MKN-45细胞,实验分为对照组、psiRNA-H1转染组和psiRNA-H1/STAT 3转染组.通过RT-PCR和Western blot检测STAT 3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT 3 Mrna和蛋白表达的影响; MTT比色法检测细胞的生长抑制率; 采用流式细胞术检测转染后对MKN-45细胞凋亡的影响; 采用Boyden小室侵袭实验检测转染后MKN-45细胞侵袭力的变化.结果 成功转染重组体的MKN-45细胞中STAT 3 Mrna和蛋白表达明显下降(P＜0.05).psiRNA-H1/STAT 3转染组各时相均明显抑制MKN-45细胞生长,且MKN-45细胞凋亡率为34.26%,相比对照组(3.75%)和psiRNA-H1转染组(4.43%)明显升高(P＜0.01).另外,psiRNA-H1/STAT 3转染组MKN-45细胞侵袭力较另外2组明显减弱(P＜0.01).结论 成功构建了针对STAT 3基因的shRNA表达载体,通过转染MKN-45细胞,在体外能有效抑制人胃癌细胞STAT 3 Mrna和蛋白表达,细胞增殖、侵袭能力减弱并且促进细胞凋亡,为STAT 3基因靶向治疗提供一定的实验依据.     

RNA干扰沉默c-myc基因对胶质瘤血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察c-myc癌基因在体外对胶质瘤细胞血管内皮生子因子(VEGF)表达的影响。方法 构建以c-myc基因为靶向的shRNA干扰质粒pCMYC,同时构建pHK质粒作为阴性对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中c-myc及VEGF mRNA水平的表达变化,采用免疫细胞化学法及Western blot法分别检测3组细胞中c-myc及VEGF蛋白的表达。结果 (1) IN500Δ-pCMYC细胞组c-myc与VEGF mRNA表达降低(0.273±0.028,0.443 ±0.048),与IN500Δ细胞组(1.185±0.145,1.116±0.072)及IN500Δ-pHK细胞组(1.098±0.128、1.208±0.133)比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。(2)免疫细胞化学染色结果显示,IN500Δ-pCMYC细胞组c-myc与VEGF阳性细胞表达率均显著降低,为(24.52 ±4.39)％及(23.52±3.44)％,与IN500Δ及IN500Δ-pHK细胞组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。(3)Western blot法检测结果显示IN500Δ-pCMYC细胞中c-myc与VEGF的蛋白表达降低(0.221±0.041、0.284±0.025),与IN500Δ细胞组(1.821±0.191、1.531±0.213)及1N500Δ-pHK细胞组(1.650±0.110、1.820±0.122)比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。结论 沉默c-myc基因能够抑制胶质瘤中VEGF的表达,从而降低肿瘤组织内的血管生成。     

短发卡状RNA特异性抑制表皮生长因子受体对大肠癌细胞凋亡的影响

目的体外构建编码人类表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)的质粒表达载体,观察其对结肠癌LoVo细胞EGFR的特异性抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法体外合成EGFR的DNA模板引物和Pgenesil-1质粒构建编码shRNA的表达载体。应用脂质体Lipofectamine2000转染人结肠癌LoVo细胞,转染成功后以G418筛选4周,实时荧光定量RT-PCR(realtime RT-PCR)和Western-blot检测EGFR的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功的构建了针对EGFR的质粒表达载体。质粒载体成功转染后,EGFR mRNA表达下降了(81.3±2.8)%,蛋白表达下降了(73.4±2.3)%,细胞凋亡增加了(10.1±0.4)%,和对照质粒载体比较差异有统计学意义。结论我们构建的针对EGFR的质粒表达载体可以显著抑制其在人结肠癌LoVo细胞的表达,诱导细胞凋亡,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路。     

RNA干扰靶向抑制胃癌细胞血管内皮生长因子C表达的实验研究

目的 构建针对血管内皮生长因子C（VEGF-C）的RNA干扰质粒表达载体pSIH1-H1-copGFP,并评价其转染胃癌细胞后对VEGF-C表达的抑制作用.方法 设计并合成针对VEGF-C基因mRNA序列的3条短发夹RNA及1条阴性对照序列,克隆到pSIH1-H1-copGFP载体,重组构建RNA干扰质粒,并将其转染胃癌细胞（SGC7901）,采用RT-PCR分析转染后VEGF-C基因的表达情况.结果 重组构建pSIH1-H1-copGFP载体经双酶切及插入片断序列分析,表明其成功插入设计位点,并且序列完全一致.3种siRNA质粒表达载体的转染效率均为60%～70%,对VEGF-C mRNA表达的抑制率分别为35.4%、33.8%和81.5%.结论 RNA干扰质粒表达载体介导对VEGF-C基因的RNA干扰可明显抑制胃癌细胞中VEGF-C的表达,可能成为抑制胃癌淋巴管生成的一种有效手段.     

靶向Survivin基因的短发卡RNA对U251细胞生长和凋亡的影响

目的观察Survivin基因特异性短发卡RNA（shRNA）对人脑胶质母细胞瘤U251细胞体外生长和细胞凋亡的影响。方法对U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞。分别采用细胞计数法绘制生长曲线和平板克隆形成实验观察各组细胞的体外生长情况；采用流式细胞术（FCM）定量测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量；采用HE染色、Hoechst染色和原位末端标记（TUNEL）方法观察各组细胞形态学特征。结果与U251和U251-P细胞相比，U251-SR细胞生长明显减缓（P〈0．01），细胞克隆形成明显减少（P〈0．01）；U251-SR细胞G1期细胞增多，S期细胞减少，凋亡细胞增加至20．9％，并呈现典型的细胞凋亡形态学改变。结论靶向Survivin基因的特异性shRNA能够在体外明显抑制U251细胞的生长并诱导其发生大量凋亡。     

反义基因转染对人膀胱癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的观察以腺相关病毒为载体(rAAV)的血管内皮细胞生长因子(VEGF)反义基因对人膀胱癌细胞中VEGF表达的影响。方法通过用不同量(0、20、100μl)的以腺相关病毒为基因载体的反义VEGF基因转染人膀胱癌细胞T24,采用免疫组织化学和Western blot方法,检测转染前后人膀胱癌T24细胞中VEGF的表达变化。结果免疫组织化学图像分析VEGF平均灰度值分别为364．40±30．31、460．25±36．34、494．18±38．82,Western blot蛋白条带灰度分别为 65 800±13 824、52 470±10 589、31 069±8 642。结果均表明随着转染的反义VEGF基因量的增多, T24细胞中VEGF的表达显著减少。结论反义VEGF基因的转染能显著抑制人膀胱癌T24细胞中VEGF的表达,有望成为膀胱肿瘤基因治疗的一种新方法。     

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

目的 构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用.方法 根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSE shRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P<0.01)、82.6%(P<0.01)、81.9%(P<0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P<0.01)、85.9%(P<0.01)、83.3%(P<0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P<0.01)、44.6%(P<0.01)、43.8%(P<0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P<0.01)、76.6%(P<0.01)、80.5%(P<0.01).结论 成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力.     

转染人Endostatin基因对胰腺癌SW1990细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察转染人Endostatin（hEndostatin）基因对胰腺癌细胞株SW1990增殖、凋亡及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法携带hEndostatin基因的复制缺陷型重组腺病毒载体体外转染SW1990细胞，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，实时荧光定量PCR和ELISA分析检测hEndostatin和VEGF的表达。建立裸鼠胰腺癌模型，随机分为3组（n=8），瘤体内分别注射磷酸盐缓冲液（PBS组）、报告基因LacZ重组腺病毒（Ad—LacZ组）、hEndostatin重组腺病毒（Ad—bEnd组）100山，隔日1次，共4次。4周后免疫组织化学染色检测肿瘤组织中hEn．dostatin、VEGF、增殖性细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果体外转染hEndostatin基因不影响SW1990细胞的增殖和凋亡（P〉0．05），但下调VEGF的表达（P〈0．01），下调作用第5天最大，在mRNA和蛋白水平的抑制率分别为84．67％和81．41％。体内转染4周后，Ad．bend组VEGF、PCNA阳性表达率分别为（36．3±7．1）％、（38．2±3．9）％，显著低于Ad．LacZ组的（81．2±6．6）％、（93．2±4．9）％和PBS组的（78．4±6．2）％、（90．1±5．7）％（P〈0．01）；肿瘤细胞凋亡率为（31．2±5．4）％，显著高于Ad—LacZ组的（9．4±4．9）％和PBS组的（8．5±3．7）％（P〈0．01）。结论hEndostatin基因转染抑制SW1990细胞的体内增殖并促进凋亡；下调SW1990细胞内源性VEGF的表达可能是抗肿瘤的作用机制之一。     

重组腺病毒介导血管内皮生长因子基因对血管生成的治疗作用

经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄率高；支架术后再狭窄率仍高达15％～54％。采用血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗的方法以质粒、重组病毒作为VEGF基因载体经心外膜下或心内膜下心肌内注射。我们用携带人VEGF165基因重组腺病毒(Ad-VEGF165)，在猪慢性心肌缺血模型体内进行了血管生成的实验研究。     

RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究

目的:构建前列腺癌血管内皮生长因子(VEGF)RNA干扰(RNAi)真核表达载体,并研究RNAi对前列腺癌VEGF表达的影响。方法:合成VEGFRNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;RNAi表达载体转染人前列腺癌PC-3细胞,Western印迹法检测VEGFRNAi表达载体对VEGF蛋白表达的影响,MTT法检测转染VEGFRNAi表达载体对细胞生长的抑制作用。结果:成功构建VEGFRNAi真核表达载体;VEGFRNAi组VEGF蛋白的表达明显降低,显著低于空载体组和未转染的对照组;前列腺癌PC-3细胞24、48、72h的生长抑制率分别为23.5%、33.5%、40.8%。结论:VEGFRNAi可以抑制前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达和抑制细胞生长,为前列腺癌的生物治疗提供一定的实验基础。     

血管内皮生长因子基因沉默抑制人胶质瘤裸鼠移植瘤生长及血管生成的研究

目的 观察靶向血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中VEGF基因表达的抑制作用.方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型.将成功造模的30只裸鼠随机分为A、B、C 3组(每组10只),分别给予不同处理.观察肿瘤生长.免疫组织化学检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(MVD)改变.结果 治疗5周后,VEGF shRNA组(A组)的肿瘤体积为654.0 mm~3、抑瘤率达65.2%,与空质粒组(B组)1790.4 mm~3、4.7%或PBS组(C组)1880.3 mm~3、0%比较,差异有统计学意义(P<0.05).A组荷瘤组织中VEGF和MVD分别为9.52、22.02,与B组17.18、43.58或C组17.82、45.32比较,差异有统计学意义(P<0.05).VEGF蛋白表达与MVD间存在正相关性(r=0.721,P<0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人脑胶质瘤细胞株U251裸小鼠移植瘤的生长.     

血管内皮生长因子及其受体靶向治疗在胆道恶性肿瘤中的研究进展

胆道恶性肿瘤（BTC）根据解剖部位分为胆囊癌、肝内胆管癌、肝外胆管癌,其发病隐匿、早期诊断困难,患者预后差,手术治疗作为唯一可以根治的治疗方式效果却不理想,化疗对于此类患者效果较差且安全性难以保证。靶向治疗是近年来新兴的治疗手段,可以靶向针对患者肿瘤细胞中的特定位点,在疗效、安全性方面都比传统治疗手段有较大幅度的提升。血管内皮生长因子及其受体是多种实体肿瘤中表达的抗肿瘤靶点之一,在BTC中也有较高水平的表达。二者相互结合后,通过多条信号传导通路将生物学信号传入细胞内进而调控肿瘤的血管生成、血管转移。针对血管内皮生长因子及其受体的靶向治疗在BTC中已有一定成效。贝伐珠单抗是第一种应用于临床的血管内皮生长因子抑制剂,其联合以吉西他滨为基础的系统化疗方案、免疫检查点抑制剂（ICI）或酪氨酸激酶抑制剂（TKI）都在BTC中收获了较好的效果,但部分仍未达预期,需更多临床试验进一步探索。雷莫卢单抗是一种血管内皮生长因子受体抑制剂,在BTC中研究较少,目前只在联合系统化疗、ICI方面有一定应用。而针对血管内皮生长因子及其受体的TKI目前种类繁多,如仑伐替尼、索拉非尼、阿帕替尼、安罗替尼。仑伐替尼无疑是当前肝胆系统恶性肿瘤中研究的重点,作为一种多靶点TKI,仑伐替尼联合ICI和系统化疗在BTC患者中取得了令人鼓舞的疗效,在大幅度改善患者预后的同时安全性也得到了保障。这为未来的综合治疗手段指明了方向。其他TKI如安罗替尼、阿帕替尼在BTC中也有较为广泛的应用。多种靶向药物在BTC中已开展了广泛的临床研究,其中不乏某些药物为单一靶点抑制剂,这便提示临床工作者,在给予患者靶向药物前,应充分考虑到患者体内目标靶点的表达情况,这样才能做到精准治疗、精确治疗,最大程度提升治疗效果。未来的研究应以精准治疗和系统治疗并重,以改善患者生存、提高其生活质量为唯一目的。     

Survivin基因对膀胱癌细胞体内生长的影响

目的探讨通过RNA干扰下调Survivin基因对膀胱癌细胞在体内生长的抑制作用。方法构建Survivin基因shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivin,转染人膀胱癌细胞T24并获得稳定的单克隆细胞。观察裸鼠皮下移植瘤内注射靶向Survivin的siRNA及稳定转染pR- NAT-U6.1/neo—survivin对膀胱癌细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,肿瘤组织行免疫组织化学检测Survivin蛋白表达。结果经鉴定成功构建靶向Survivin的shRNA真核表达载体pRNAT-U6.1/neo-survivivn,稳定转染重组质粒的T24细胞Survivin mRNA表达下调达92.86%;瘤内注射50 mg siRNA-Survivin能够明显抑制肿瘤生长,与对照比较差异有统计学意义(P<0.01);未转染组在20 -29 d均发展为体积超过2000 mm3的肿瘤,转染组在43 d时形成3个体积不超过62.5 mm3肿瘤;免疫组织化学显示转染组肿瘤Survivin蛋白表达明显降低。结论裸鼠移植瘤内注射siRNA-sur- vivin明显抑制了肿瘤的生长;靶向Survivin的shRNA持久地抑制了膀胱癌T24细胞在体内的生长; Survivin基因可作为膀胱癌基因治疗的良好靶点。     

血管内皮生长因子对骨重建的影响

骨重建是一个有多种细胞及各种生长因子共同参与的复杂过程.新生血管形成在骨修复中起着重要作用.近年来的研究证明,内源性血管内皮生长因子(VEGF)在软骨内成骨和膜内成骨中均可促进血管生成和骨形成.外源性VEGF在骨折、外伤等造成的骨缺损治疗中可增加血管数量、促进局部血供.外源性VEGF联合基因治疗是近年研究的重点,单独应用或与各种材料联合应用已取得满意效果,但目前仅限于动物模型研究,其安全性、技术问题有待解决.     

血管内皮生长因子-C反义寡核苷酸对胰腺癌淋巴管及血管生成的影响

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)-C反义寡核苷酸对胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型淋巴管及血管生成的影响。方法建立人胰腺癌细胞株panc-1裸鼠原位种植瘤模型,将动物随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(A组)、错义对照组(B组)和反义VEGF-C干预组(C组),每组10只,寡核苷酸用量为每次10 mg/kg体重,隔日1次,每周3次,共3周。建模4周后,处死动物,留取血清和瘤体标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学染色法检测反义VEGF-C干预对VEGF-C分泌水平及种植瘤淋巴管和血管生成的影响。结果A、B和C组血清VEGF-C的蛋白表达水平分别为(237．5±41．5)、(221．5±52．3)、(108．6±14．9)ng/L,C组较A、B组明显为低(P＜0．01)；3组种植瘤内淋巴管密度分别为13．8±2．1、12．4±1．9和4．2±1．6,C组较A、B组显著减少(P＜0．01)；3组种植瘤内微血管密度分别为27．5±8．7、25．9±4．2和19．4±5．6,组间差异无统计学意义(P＞0．05)。结论反义寡核苷酸干预可以显著降低胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型VEGF-C的表达水平,并对其淋巴管生成具有抑制作用。     

人反义血管内皮生长因子基因表达对肾癌细胞的影响

目的　探讨人反义血管内皮生长因子 (VEGF)基因对肾癌细胞VEGF表达及生长的影响。　方法　采用RT PCR方法将VEGF基因克隆于 pcDNA3.1反义真核表达载体 ,构建VEGF的pcDNA3.1反义真核表达载体 ,酶切鉴定。转染人肾癌 780 0细胞 ,G4 18筛选阳性克隆。免疫组化法检测VEGF表达 ,MTT法测生长曲线。　结果　pcDNA3.1 (antisense)VEGF组VEGF蛋白表达阳性细胞率 (10 .3% )明显低于 780 0 PC组 (92 .8% )和 780 0组 (96 .6 % ) ,P <0 .0 1;VEGF反义真核表达载体抑制肾癌 780 0细胞生长 ,在培养的第 4、5、6天 ,抑制率分别为 2 6 .38%、4 1.78%和 37.6 4 %。　结论　VEGF的 pcDNA3.1反义真核表达载体可明显降低肾癌细胞VEGF的表达 ,明显减慢肾癌细胞生长。     

血管紧张素Ⅱ1型受体的短发夹环RNA抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究

目的　探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1R)的短发夹环RNA(shRNA)质粒 (pAT1R shRNA)对大鼠血管平滑肌细胞增殖变化的影响并探讨其发生机制。方法　构建pAT1R shRNA质粒转染入鼠血管平滑肌细胞中 ,应用逆转录聚合酶链反应及Westernblot检测血管平滑肌细胞 (VSMC)AT1R的mRNA和蛋白表达的变化 ;倒置相差显微镜观察VSMC形态学的变化 ;锥虫蓝染色法和MTT法检测VSMC增殖的变化等。结果　构建的质粒经测序鉴定验证与预期相符。转染细胞后逆转录聚合酶链反应的吸光度值比值结果pAT1R shRNA1和pAT1R shRNA2 组分别为 1 37± 0 15和 1 4 5± 0 12 ,与对照组 2 0 9± 0 2 6相比差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;Westernblot吸光度值比值结果两质粒转染组分别为 1 12± 0 0 4和 1 2 0± 0 0 7,与对照组 3 17± 0 2 1相比差异有显著性意义 (P <0 0 1) ,提示两质粒均能明显降低AT1R的mRNA和蛋白表达。转染质粒同时加血管紧张素Ⅱ组的细胞计数结果两质粒转染组分别为 5 4 8± 0 4 4和 5 5 5± 0 4 5 ,与对照组 8 13± 0 4 1相比均减少、差异有显著性意义 (P <0 0 1) ,MTT法结果两质粒转染组吸光度值分别为 0 36 5± 0 0 2 4和 0 30 7± 0 0 2 5 ,与对照组 0 4 85±0 0 11相比均降低、差异有显著性意义