烟雾吸入性损伤大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶通路的变化

目的 了解烟雾吸入性损伤大鼠肺组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及炎性细胞因子含量的变化,探讨其损伤机制. 方法建立密闭舱内烟雾吸入性损伤模型,将30只SD大鼠分为烟雾吸入性损伤后1、6、24、72 h及7 d组,另设正常对照组(6只).取各组大鼠肺组织行病理学观察,检测肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)和白细胞介素1β(IL-1β)含量,用蛋白质印迹法检测肺组织p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及各酶磷酸化水平.收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),检测TNF-α、MIP-2、IL-1β含量并行粒细胞分类、计数. 结果烟雾吸入使大鼠产生急性肺损伤样病理改变.伤后1 h组大鼠肺组织及BALF中TNF-α和IL-1β含量均高于正常对照组(P<0.01).各组肺组织MIP-2水平与正常对照组接近(P>0.05),伤后1 h组BALF中MIP-2水平高于正常对照组(P<0.01).各致伤组p38MAPK、ERK1/2、JNK水平接近正常对照组,但此3种酶的磷酸化水平在伤后不同时相组有高表达.伤后1 h组大鼠BALF粒细胞总数为(0.36±0.08)×106个/L,较正常对照组(0.61±0.09)×106个/L明显减少(P<0.05),伤后7 d组粒细胞总数[(1.71±0.67)×106个/L]却高于正常对照组(P<0.05).伤后6 h～7 d组中性粒细胞数多于正常对照组(P<0.05).伤后1 h组巨噬细胞数少于正常对照组(P<0.05),但6 h～7 d组逐渐增多.各组大鼠淋巴细胞数量接近(P>0.05).结论 密闭舱室内非金属材料燃烧释放的毒性气体能诱导肺组织产生明显的炎性反应,激活细胞MAPK通路中重要激酶的表达,这可能是毒性混合气体导致肺损伤的重要机制之一.     

犬同种异体左侧单肺移植模型的建立

目的建立稳定、简单、易行的犬同种异体左侧单肺原位移植模型。方法随机选取12对家犬，组成供受体。供体左肺的获取时，通过左肺动脉主干灌注0—4℃的LPD液。切除受体左全肺后，通过吻合供体与受体的左支气管，供体与受体的左肺动脉主干，供体左房袖与受体左心耳，植入供体左肺。通过血气分析监测受体左全肺切除后及供体犬肺植入后1、2h受体的动脉血氧分压（PaO2）和动脉血二氧化碳分压（PaCO2）的变化；受体左全肺切除前后及供体犬肺植入后1、2h受体气道峰压（Paw）的变化，记录供体肺脏植入手术时间。结果手术无1例失败，均存活。供体肺脏植入时间平均（35．92±1．73）min。受体左全肺切除后的PaO2、PaCO2和Paw与植入后1、2h的PaO2比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；供体植入后1h与2h的PaO2和Paw比较，差异有统计学意义（P〈0．05），而供体植入后Ih与2h的PaCO2比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论本模型建立简洁，稳定，特别是左房袖与左心耳的吻合，使手术操作更加简单快捷。     

肺外科中单侧肺缺血-再灌注损伤的研究

目的 通过建立新西兰白兔肺外科单侧肺缺血-再灌注损伤动物模型,观察其缺血-再灌注损伤特点.方法 将96只健康新西兰兔随机分成3组:Ⅰ组为对照组(n=36);Ⅱ组为单纯阻断肺动脉组(n=30);Ⅲ组为阻断肺循环组(n=30).术中监测动物血流动力学指标;分别于开胸时(Ⅰ组)、缺血1小时和再灌注1、2、4、6 h(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组)取肺组织检测MDA;取肺组织作病理学观察,并测定手术侧肺湿/干比.结果 各组动物术中血流动力学指标平稳;在缺血1 h和再灌注1、2、4、6 h,Ⅲ组与Ⅱ组比较,肺湿/干比及肺组织中MDA含量的差异均无统计学意义(P＞0.05),Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组比较差异有统计学意义(P＜0.05).在相同的时间点,Ⅱ、Ⅲ组呈现相似的肺损伤病理改变,且较为明显的肺损伤均出现在再灌注4h,再灌注6h肺损伤均呈恢复趋势.结论 肺外科中肺动脉阻断和肺循环阻断所致肺缺血一再灌注损伤特点相似,肺外科中肺血管阻断1h是安全的.     

大鼠肺缺血再灌注损伤长期存活模型的建立

目的 建立一种简单、稳定的大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)长期存活模型.方法 将84只健康SD大鼠随机分为2组:Ⅰ组为假手术组,Ⅱ组为肺缺血再灌注组(每组n=42只).两组分别于开胸后、缺血1 h后再灌注0、2、4h、1、3、7 d取肺组织行髓过氧化物酶(MPO)活性、肺湿干比(W/D ratio)检测和肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的电镜超微结构评价;取支气管肺泡灌洗液检测肺通透性指数(LPI).结果 手术成功率达100%.Ⅱ组与Ⅰ组比较,缺血再灌注后2、4 h、1 d的MPO、LPI、W/D比差异均有统计学意义(P<0.01),开胸后、再灌注后0 h、3、7 d两组比较差异无统计学意义(P>0.05).ATⅡ的超微结构显示,再灌注4 h后损伤最严重,再灌注1 d即出现明显的修复过程,再灌注7 d基本恢复正常结构水平.结论 本模型简单、可靠,LIRI后相关肺损伤指标和ATⅡ超微结构损伤变化特点吻合.     

大鼠常温体外肺灌注评估肺损伤模型的建立

目的:构建一套大鼠临床体外肺灌注(EVLP)系统并评估多种缺血条件下供肺体外肺功能。方法:24只大鼠心脏停搏后,供肺或3 h冷缺血(C3 h组, n＝6),或1 h热缺血后2 h冷缺血(W1 h组, n＝6),或2 h热缺血后1 h冷缺血(W2 h组, n＝6)。供肺均在体外常温灌注...     

肺表面活性物质气道内灌注治疗重度吸入性损伤

目的 通过外源性肺表面活性物质(Pulmonary surfactant,PS)的临床应用,探讨其临床效果和可行性。方法2例烧伤伴重度吸人性损伤(Inhalation injury,InI)的病人,应用猪肺PS10ml每2h一次气道内注人,并予辅助机械通气治疗,观察患者氧合和相关肺力学指标,判断治疗效果。结果应用外源性PS24h后,氧合相关指标PaO和PaO2／FiO2有明显升高,(A—a)DO2和RI明显降低,PaCO2变化不大;肺力学相关指标吸气时的△V／△P呈逐步增高。结论 外源性PS气道内注入,并予辅助机械通气治疗,能改善Inl患者的氧合和肺顺应性,患者对外源性PS有良好的耐受性。     

应用肺表面活性物质治疗重度吸入性损伤六例

笔单位1998～2003年治疗重度吸人性损伤患6例，其中治愈4例，死亡2例，现将治疗体会报告如下。     

氟碳溶液部分液体通气对烟雾吸入伤大鼠肺静态顺应性的影响

目的:探讨氟碳溶液部分液体通气对烟雾吸入伤大鼠肺静态顺应性的影响。方法:在大鼠烟雾吸入伤模型上建立部分液体通气和机械通气方法,肺总静态顺应性(C_(2.94))和低容量肺顺应性(C_(0.94))用水检压计法测定,同时计算肺扩张指数(EI)。结果:烟雾吸入伤6小时C_(2.49)、C_(0.49)和EI明显低于正常对照组(P<0.01),机械通气治疗对C_(2.94)、C_(0.49)和EI无明显影响(P>0.05);与吸入伤和机械通气组相比,部分液体通气明显增加C_(2.94)、C_(0.49)和EI(P<0.05,P<0.01)。结论:氟碳溶液部分液体通气能明显改善烟雾吸入伤大鼠的肺静态顺应性。     

Sclerosis therapy of bronchial artery attenuates acute lung injury induced by burn and smoke inhalation injury in ovine model

Introduction

In burned sheep, we showed more than a 10-fold increase in bronchial blood flow following smoke inhalation. It was previously reported that sclerosis of the bronchial artery prior to smoke exposure reduces the pathophysiology of the inhalation insult. We hypothesized that sclerosis of the bronchial artery after insult attenuates smoke/burn-induced acute lung injury.

Methods

Through an incision at the 4th intercostal space, a catheter was placed via the esophageal artery into the bronchial artery such that the bronchial blood flow remained intact. Acute lung injury was induced by a 40% total body surface area, 3rd degree cutaneous burn and smoke inhalation. Adult female sheep (n = 18, 35.6 ± 1.0 kg) were divided into three groups following the injury: (1) sclerosis group: 1 h after injury, 4 mL of 70% ethanol was injected into bronchial artery via bronchial catheter, n = 6; (2) control group: 1 h after injury, an equal dose of saline was injected into bronchial artery via the bronchial catheter, n = 6; (3) sham group: no injury and no treatment, n = 6. The experiment was conducted in awake animals for 24 h.

Results

Bronchial blood flow, measured by microspheres, was significantly reduced after ethanol injection in the sclerosis group. Pulmonary function, evaluated by measurement of blood gas analysis, pulmonary mechanics, and pulmonary transvascular fluid flux, was severely impaired in the control group. However, pulmonary function was significantly improved by bronchial artery sclerosis.

Conclusion

The results of our study clearly demonstrate a crucial role of enhanced bronchial circulation in thermal injury-related morbidity. Decreasing bronchial circulation using pharmacological agents may be an effective strategy in management of burn patients with concomitant smoke inhalation injury.     

N-乙酰半胱氨酸对烟雾吸入性肺损伤氧化应激的影响

目的　研究N -乙酰半胱氨酸 (NAC)对烟雾吸入性肺损伤氧化应激及抗氧化能力的影响。　方法　采用烟雾吸入性肺损伤大鼠模型 ,检测吸入伤后肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞数(WBC)、肺组织髓过氧化物酶 (MPO)活性、过氧化氢 (H2 O2 )含量、谷胱甘肽 (GSH)含量及总抗氧化能力(TAO)。　结果　NAC治疗可显著降低吸入伤后BALF中WBC数 ,降低肺组织MPO活性及H2 O2 含量 ,并显著提高肺组织GSH含量及TAO水平。　结论　NAC治疗可减轻吸入伤后肺脏氧化应激程度 ,提高肺脏抗氧化应激能力     

N-乙酰半胱氨酸对吸入性损伤肺表面活性物质结合蛋白A的影响

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对烟雾吸入性损伤肺表面活性物质结合蛋白A(SPA)表达及功能活性的影响。方法采用烟雾吸人性损伤的大鼠模型，观察NAC治疗后SPA mRNA表达情况，并检测静态肺顺应性、肺泡灌洗液表面张力及Ⅱ型细胞板层体形态。结果 经NAC治疗后SPA mRNA表达增强，静态肺顺应性增加，肺泡灌洗液表面张力特征恢复正常，Ⅱ型细胞板层体恢复至正常形态。结论 NAC治疗可促进烟雾吸入伤后SPA mRNA表达，并对SPA相关功能活性具有改善作用。     

氯喹、地塞米松对烟雾吸入伤大鼠早期肺水肿形成的抑制作用

目的　探讨氯喹、地塞米松对烟雾吸入伤大鼠早期肺水肿的抑制作用。　方法　将健康Wistar大鼠随机分成正常对照组 ,烟雾吸入后 1、3、6、12、2 4h组 ,地塞米松治疗 6、12h组以及氯喹治疗 6、12h组。对大鼠肺组织含水量、肺血管通透性及肺出血量进行测定。　结果　烟雾吸入伤后大鼠肺组织含量和13 1I-白蛋白渗出量明显增加 ,伤后 6h达峰值 ,并持续到伤后 2 4h(P <0 0 1) ;氯喹、地塞米松治疗 6h组肺含水量和13 1I -白蛋白渗出量均明显低于吸入伤 6h组 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;烟雾吸入伤后肺出血量明显增加 ,以伤后 1h组最明显 ,伤后 2 4h仍明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ,氯喹和地塞米松治疗 6h组肺出血量明显低于吸入伤 6h组 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;氯喹、地塞米松治疗 12h组对上述各值无明显影响 (P >0 0 5 )。　结论　氯喹和地塞米松均能不同程度地降低吸入伤大鼠肺微血管通透性和肺水含量 ,对烟雾吸入伤早期肺水肿的发生具有一定的防治作用     

家兔烟雾吸入性损伤早期肺表面活性物质存在形式的改变及意义

目的　观察肺表面活性物质 (PS)存在形式 (大聚体和小聚体 )的改变对吸入性损伤早期PS活性下降的影响。　方法　将家兔随机分为烟雾吸入性损伤前及伤后 0 .5、2 .0、6 .0、1 2 .0h共 5组 ,每组 8只。收集各组支气管肺泡灌洗液 ,离心后分别留取上清液 (小聚体 )和沉淀物 (大聚体 ) ,测定PS组织成分中总磷脂、磷脂酰胆碱、总蛋白、白蛋白在上述两种形式中的含量。　结果　伤前组家兔小聚体中总磷脂、磷脂酰胆碱、总蛋白、白蛋白含量及磷脂酰胆碱占总磷脂的百分含量分别为 (2 .2 3± 0 .4 0 )、(1 .5 4± 0 .1 1 )、(1 6 .6 7± 1 .34)、(3.6 5± 0 .1 5 )g/L和 (77.2± 3.7) %,伤后 6h组的小聚体中以上指标各为 (3 1 5± 0 .30 )、(1 .77± 0 .0 8)、(1 0 6 .5 9± 5 .5 0 )、(1 1 .2 1± 0 .92 )g/L和 (5 7.2± 3.5 ) %。与伤前组比较 ,伤后各组PS组分在大聚体中差异无显著性意义 (P >0.0 5 )。在小聚体中 ,白蛋白、总蛋白含量在较伤前显著增多 (P <0.0 1),并随时间的延长呈上升趋势 ;磷脂酰胆碱占总磷脂的百分含量随时间延长呈下降趋势。　结论　小聚体与大聚体之间的比值显著增高 ,可能是引起吸入性损伤早期PS活性下降并导致急性肺损伤的一个重要因素。     

烟雾吸入性损伤对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及炎细胞凋亡的影响

目的 探讨烟雾吸人性损伤对大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及炎细胞凋亡的影响。方法 选用54只Wistar大鼠，取其中6只作为正常对照组，其余48只制成烟雾吸人伤模型，作为吸人伤组。吸人伤组分别于致伤后2、6、12、24h及2、3、4、5d行支气管肺泡灌洗，获取肺泡巨噬细胞。观察(1)肺泡巨噬细胞体外对鸡红细胞吞噬功能的动态变化；(2)利用髓过氧化物酶(MPO)染色法观察肺泡巨噬细胞的染色阳性率；(3)利用流式细胞仪观察支气管肺泡灌洗液中炎细胞凋亡的动态变化。结果 (1)烟雾吸人伤早期(2～6h)肺泡巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能受损，吞噬率下降，12h后逐渐恢复正常。(2)肺泡巨噬细胞MPO染色阳性率在吸人伤后逐渐升高，24h达峰值，2～5d逐渐下降。(3)支气管肺泡灌洗液中细胞凋亡率在3．02％～12．95％之间，以伤后24h凋亡率最高。结论 气管肺泡灌洗液中炎细胞凋亡增加，中性粒细胞凋亡及肺泡巨噬细胞吞噬凋亡细胞参与了烟雾吸人伤大鼠恢复期肺内炎症消散的过程。     

Cutaneous burn diminishes beneficial effect of intravenously administered mesenchymal stem cells on acute lung injury induced by smoke inhalation in sheep

ObjectiveTo investigate effects of intravenously administered allogeneic mesenchymal stem cells (MSCs) on burn/smoke-induced lung injury.MethodsSheep were subjected to 40%, third-degree flame skin burn and smoke inhalation under deep anesthesia and analgesia. One-hour after injury, PlasmaLite A (control) or 200 million MSCs (treatment) were intravenously administered. Pulmonary oxygenation index, PaO₂/FiO₂ ratio, lung–lymph flow, and bloodless lung wet-to-dry weight ratio were measured. Distribution of MSCs and stromal cell-derived factor-1 (Sdf-1) protein level were determined in lung and skin tissues. Effects of burn exudate on MSCs migration were characterized.ResultsMSCs did not attenuate pulmonary dysfunction. The number of MSCs was significantly higher in lungs of sheep with smoke inhalation compared with those with burn/smoke injury. In contrast, number of MSCs was significantly higher beneath burned skin in sheep with burn/smoke than in unburned skin of sheep with smoke inhalation only. Expression of Sdf-1 protein was increased in the burned skin compared to unburned skin. Effects of burn exudate on cultured MSCs proliferation differed depending on collection time.ConclusionSkin burn diminishes beneficial effects of MSCs on smoke-induced lung injury, by promoting migration of MSCs from the pulmonary tissue to the injured skin area, possibly via expression of Sdf-1 protein.