青少年肥胖非酒精性脂肪肝患者血清外泌体源性miRNA表达谱的初步研究

目的分析非酒精性脂肪肝(NAFLD)与单纯肥胖对照者血清外泌体微小RNA(miRNA)表达谱的差异,为筛选外泌体源性miRNA作为NAFLD早期诊断标记物提供依据。方法选择5例NAFLD患者(NAFLD组)和5例单纯肥胖患者(对照组),采集外周血血清,使用高通量测序方法测定外泌体源性miRNA表达谱,并通过实时荧光定量PCR验证部分差异性表达的miRNA,预测靶基因及功能分析。结果NAFLD组与对照组相比差异表达的外泌体源性miRNA共30种(P<0.05),当倍比值>2且P<0.05的差异性miRNA有9种,其中5种表达上调(miR-122-5p,miR-3591-3p,miR-335-5p,let-7g-3p和miR-27a-5p),4种表达下调(miR-6753-3p,miR-129-2-3p,miR-6760-5p,miR-6516);对miR-122-5p、miR-335-5p、miR-27a-5p进行实时荧光定量PCR,结果与测序结果一致。差异表达miRNA的功能分析结果提示涉及葡萄糖稳态、脂质代谢、肝脏发育等。结论NAFLD组血清外泌体源性miRNA表达谱与对照组有明显差异,miR-122-5p、miR-335-5p、miR-27a-5p可能参与了NAFLD的发病机制,可以作为NAFLD早期诊断的标记物。     

不同碘水平下甲状腺结节患者血清外泌体中miRNA生物学标志物的筛选* "(1., b.流行病学教研室,济南250000;2.,山东成武274200;3.泰安市中心医院a.甲状腺外科, b.检验科,山东泰安271000;4.山东第一医科大学第二附属医院a.甲状腺外科,b.检验医学科,山东泰安271000)

摘要:目的比较不同碘水平下甲状腺结节患者与健康人血清外泌体微小核糖核酸( microRNA, miRNA)表达谱的差异,分析其共同点,为筛选不同碘水平下甲状腺结节早期诊断标志物提供参考依据。方法收集10例不同碘水平下甲状腺结节患者及体检健康者的外周血样本,采用砷饰催化分光光度法测定各组血清碘水平;提取外泌体miRNA,利用高通量测序技术测定血清miRNA的表达水平;预测差异靶基因,并进一步进行CO( Gene ontology)分析和KECG(Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes)分析。结果在不同碘水平的甲状腺结节患者与健康人群中存在6个表达下调的miRNA,分别为 miR-324-5p.miR-6511b-3p, miR-9903 ,miR-550a-3p、miR-50O1-3p、miR-3688-3p。差异表达的外泌体 miRNA可调控MAPK信号通路、PI3K-AKT信号通路、VEGF信号通路及NF-KB信号通路。结论筛选出6个差异表达miRNA,有望作为不同碘水平下甲状腺结节早期诊断的生物学标志物。     

HBV相关肝脏纤维化患者血清miRNA差异表达谱建立及筛选

目的：分析并筛选HBV相关肝脏纤维化患者血清中差异表达miRNA。方法：选择2019年3月至2020年3月进入我院确诊为肝纤维化S2~S3期患者10例,以10例健康人作为对照,以血清作为研究样本。采用Illumina miRNA深度测序分析血清miRNA的表达。比较两组间差异表达的miRNA,对序列读数进行分析,以评估统计学意义。采用R平台进行分层聚类分析,以发现肝纤维化特异性表达的候选miRNA。采用qRT-PCR验证候选miRNA在各组中的表达,采用2-ΔΔCT分析miRNA的相对表达量。预测差异表达miRNA的靶基因,对靶基因进行GO分析。结果：在肝纤维化组和健康组之间,共筛选出78个表达具有显著性差异的miRNA。与健康组相比,肝纤维化组中表达上调的miRNA有30个,表达下调的miRNA有23个。其中,miR-505-3p、miR-197-3p、miR-500a-3p和miR-139-5p下调水平最高,miR-1273g-5p、miR-33a-5p 、miR-3960上调水平最高。选择表达变化最显著的miRNA进行qRT-PCR验证,结果与Illumina miRNA测序结果一致。结论：肝纤维化患者血清中miRNA的表达具有特异性,表达差异显著的miRNA有望成为新的肝纤维化临床诊断标志物。     

2型糖尿病肾病患者尿液外泌体中miRNA的表达谱分析研究

目的研究2型糖尿病肾病(DN)患者尿液外泌体中miRNA的表达谱。方法采用miRNA芯片技术,分别检测8例健康受试者(对照组)、8例2型糖尿病(T2D)患者(T2D组)、8例2型DN患者(DN组)的尿液来分析期内外泌体的miRNA的表达谱。并用实时定量荧光PCR进行验证;挑选表达差异最大的miRNA与微量蛋白尿进行相关分析。结果 DN组与对照组、T2D患者比较,存在16个miRNA表达异常(大于2倍),其中14个miRNA(miR-320c、miR-6068、miR-1234-5p、miR-6133、miR-4270、miR-4739、miR-371b-5p、miR-638、miR-572、miR-1227-5p、miR-6126、miR-1915-5p、miR-4778-5P和miR-2861)表达上调,而2个miRNA(miR-30d-5p和miR-30e-5p)表达下调。miRNA miR-320c和miR-6068在DN组尿液外泌体中表达最多。尿液外泌体miR-320c表达上调与肾小球滤过率预计值的增加呈负相关(筛选序列:R~2=0.23,P=0.11;确认序列:R~2=0.61,P=0.004)。DN组尿液外泌体miR-320c的水平与肾小球滤过率预计值在筛选队列和确认队列中都没有显著相关性(筛选队列:R~2=0.08,P=0.55;确认队列:R~2=0.01,P=0.87),但与尿清蛋白肌酐比值成显著正相关(R~2筛选队列:R~2=0.69,P=0.02;确认队列:R~2=0.94,P=0.005)。结论 DN组与T2D组尿液外泌体中miRNA水平有差异,表达异常的miR-320c可能通过靶蛋白血小板反应蛋白1(TSP-1)对转化生长因子(TGF)-β信号转导通路产生影响,miR-320c有望作为DN的一种新候选标志物,用于在今后研究中评估疾病进展。     

探讨miRNA表达比在多发性骨髓瘤中的预测作用

目的探讨miRNA(微小RNA)表达比在多发性骨髓瘤患者血浆中的预测作用。方法收集24例MM患者及30例正常对照的血浆标本,运用高通量芯片的方法将差异表达的miRNA进行筛选;对分析结果进行qRT-PCR验证;用ROC曲线分析了miRNA表达比,找出最具预测潜能的组合型标志物。结果与正常血浆标本相比,基因芯片检测出178个差异表达的miRNA,选取其中4个miRNAs在24例MM血浆标本和30例正常血浆标本进行验证。其中miR-21在多发性骨髓瘤中比在正常人中有明显的高表达,而miR-199a-5p,miR-16和miR-125a-5p在多发性骨髓瘤中则是低表达;miR-21/miR-199a-5p的表达比表现出很高的灵敏度和特异度,可以作为诊断多发性骨髓瘤的组合型生物标志物。结论 miR-21/miR-199a-5p表达比或许可以成为预测多发性骨髓瘤的生物标志物。     

微小RNA在肝癌耐药Bel-7402/5-FU细胞中的表达分析

目的:通过对比肝癌亲本Bel-7402细胞及其5-FU耐药Bel-7402/5-FU细胞中微小RNA(microRNA, miRNA)的表达差异,探讨miRNA在肝癌细胞多药耐药中的作用。方法:体外培养Bel-7402细胞及其耐药株Bel-7402/5-FU细胞,MTT法检测Bel-7402/5-FU细胞对不同化疗药物的敏感性,miRNA表达芯片检测Bel-7402细胞和Bel-7402/5-FU细胞miRNA的差异表达,qPCR验证差异表达的miRNA。结果:Bel-7402/5-FU细胞对不同的化疗药物均具有耐药性;miRNA芯片检测结果发现,耐药株Bel-7402/5-FU细胞与亲本Bel-7402细胞中,差异表达的miRNA有29个,其中上调14个,下调15个;qPCR验证结果发现,和亲本Bel-7402细胞比较,耐药株Bel-7402/5-FU细胞中miR-10a-5p、-371a-3p、-371a-5p、-372,-373-3p、-146-5p、-6723-5p显著下调,miR-4497、-3148显著上调。结论:肝癌多药耐药的发生与miRNA表达异常有关。     

利用芯片技术筛选肝癌早期复发密切相关的microRNA

目的:应用miRNA芯片技术筛选肝癌早期复发密切相关的miRNA,为进一步深入探讨miRNA在介导肝癌高侵袭性及术后早期复发中的作用打下基础。方法:从本院肝癌标本库中选取10例肝癌患者进入本研究,其中早期复发组(术后第1年出现肝内复发病灶)和非早期复发组(术后2年以上未出现肝癌复发或转移)各5例,抽提总RNA并分离出小分子RNA进行Cy3荧光标记,将标记的小分子RNA与miRNA芯片进行杂交反应,分析差异表达的miRNA。结果:相对于非早期复发组,早期复发组肿瘤标本中有miR-602、miR-451、miR-144和miR-486-5p等4个miRNAs表达显著上调(上调倍数>2.0);有miR-551b、miR-96和miR-502-3p等3个miRNAs表达显著下调(下调倍数<0.5)。结论:筛选得到肝癌早期复发的miRNA差异表达谱,其可能与肝癌的早期复发发生发展有关。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病中miRNA表达谱的改变及分析

目的 通过基因芯片检测新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型中差异性表达miRNA,构建HIE中miRNA及其靶基因调控网络。方法 将7 d龄新生SD大鼠12只随机分为HIE组及假手术对照组,每组6只。采用Rice法建立新生大鼠HIE模型,造模24 h取新生大鼠海马组织,基因芯片检测HIE组和假手术对照组海马组织中差异性表达的miRNA,采用生物信息软件分析相关miRNA调控的靶基因及信号通路。结果 筛选出差异性表达的miRNA共22个,其中表达上调9个(mmu-miR-215-5p, mmu-miR-1249-3p, mmu-miR-3072-5p, mmu-miR-324-3p, mmu-miR-690,mmu-miR-874-5p, 11＿10767,11＿10888,13＿12928＿star)、表达下调共13个(mmu-miR-141-3p, mmu-miR-182-5p, mmu-miR-183-5p, mmu-miR-190a-3p, mmu-miR-200a-3p, mmu-miR-200b-3p, mmu-miR-200c-3p, mmu-miR-429-3p, mmu...     

氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达 circRNA的筛选及功能分析

目的：探究氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达共价闭合、单链环状RNA(circRNA)及功能分析。方法：通过构建氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型,取癫痫大鼠及对照大鼠海马组织通过Illumina高通量测序平台进行转录组测序,并通过EdgeR包对circRNA进行差异分析、通过R语言进行GO及KEGG信号通路富集分析,通过Targetscan与miRanda软件进行circRNA与miRNA互作分析寻找circRNA核心调控靶标。结果：对照组及癫痫组大鼠海马的circRNA进行差异分析获得的262个差异表达circRNA,信号通路富集分析发现与胞蛋白修饰过程、蛋白质变性过程、树突形态调控、神经元分化调节、离子跨膜转运的调节等生物过程相关。并进一步确定了可能与circRNA存在互作的核心调控miRNA,包括miR-322-5p、miR-322-3p、miR-323-5p、miR-323-3p、miR-301a-5p、miR-301a-3p、miR-324-5p、miR-324-3p等。结论：本研究筛选了氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠与正常大鼠脑组织差异circRNA,系统地分析了其可能...     

脓毒症及脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征患儿外周血单个核细胞miRNA表达谱分析

目的 筛选脓毒症、脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)患儿及健康儿童外周血单个核细胞差异表达miRNA,探讨其可能参与的信号通路。方法 5例脓毒症并发ARDS患儿为ARDS组,5例脓毒症患儿为脓毒症组,同期5例健康儿童为对照组。3组取全血分离外周血单个核细胞,应用高通量测序技术筛选差异表达miRNA。采用生物信息学方法选择3组间均存在显著差异表达的miRNA进行靶基因预测,对候选靶基因进行基因本体(gene ontology, GO)分类功能注释分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)通路富集分析。结果 与对照组比较,ARDS组差异表达miRNA有33个,其中7个表达上调,26个表达下调;脓毒症组差异表达miRNA有24个,其中17个表达上调,7个表达下调。与脓毒症组比较,ARDS组差异表达miRNA有37个,其中4个表达上调,33个表达下调。miR-424在3组间均存在显著差异表达。预测的miR-424靶基因数目有132个,...     

胸部放疗患者血浆外泌体中miR-7-5p与miR-17-5p的表达及临床意义

目的　检测胸部放疗患者放疗50Gy 血浆外泌体中miR-7-5p 与miR-17-5p 较放疗前表达的差异，探讨其预测放射性肺损伤（radiation-induced lung injury，RILI）中的价值。方法　选取在南通市肿瘤医院行胸部放疗并发放射性肺炎的80 例患者为研究对象，按照美国肿瘤放射治疗协作组和欧洲肿瘤治疗研究协作组（RTOG/EORTC）诊断分级标准，分为≥ 3 级RILI 患者组16 例和<3 级RILI 患者组64 例，检测患者放疗前和放疗50Gy 预留血浆外泌体差异，深度测序筛查出放疗50Gy 时差异表达明显的miRNA，qRT-PCR 方法检测放疗前，放疗50Gy 血浆外泌体miR-7-5p 与miR-17-5p 表达量，利用ROC 曲线分析血浆外泌体 miR-7-5 与miR-17-5p 预测≥ 3 级RILI 的临床意义。结果　放疗50Gy 后外泌体标志蛋白CD9，CD63 和TSG101 表达较放疗前明显升高，而Albumin 较放疗前明显下降，差异均具有统计学意义（t=5.714~20.159，均P < 0.05）。两组患者放疗50Gy 后，miR-7-5p 与miR-17-5p 表达丰度显著升高，且≥ 3 级RILI 组升高幅度高于<3 级RILI 患者，差异均具有统计学意义（t =8.652~11.233，均P < 0.05）。miR-7-5p 的曲线下面积（AUC）为 0.705（95％置信区间:0.618~0.795），灵敏度和特异度分别为0.762 和0.681。miR-17-5p 的曲线下面积（AUC）为0.683（95％置信区间:0.585~0.764），灵敏度和特异度分别为0.708，0.715。结论　放疗至50Gy，血浆外泌体中miR-7-5p 与miR-17-5p 高表达可能是预测与诊断严重RILI 的重要生物学标志。     

大鼠背根神经节持续压迫后miRNA差异表达谱的分析及功能研究

摘要 目的：对大鼠背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）持续压迫后所致神经病理性疼痛（neuropathic pain, NP）模型的DRG组织进行miRNA测序,应用生物信息学技术分析差异表达的miRNA及其靶基因在疾病中的定位与功能。 方法：采用随机分组法将大鼠分为2组,每组12只,分别为假手术组、CCD背根神经节持续压迫（chronic compression of the dorsal root ganglion, CCD）模型组,术后进行行为学检测。确定痛觉敏感的天数后重复造模,取材后进行miRNA转录组测序。利用生物信息学手段筛选具有显著性差异的miRNA,预测相关靶基因并对其GO功能及KEGG富集情况进行分析,使用在线数据库对miRNA与靶基因之间的属性关系建立miRNA-靶基因的调控网络。最后,通过qPCR验证差异最为显著的4条miRNA在CCD模型DRG组织中的表达情况。 结果：CCD造模7天后,大鼠痛觉最为敏感。重复造模,在第7天取材并进行miRNA转录组测序。将差异表达的miRNA以|log2（fold change）|>1且P<0.05为阈值,筛选符合要求的miRNA,与假手术组相比,有57种miRNA在CCD模型组表达上调,有17种miRNA在CCD模型组表达下调。差异表达的miRNA对应的靶基因主要富集在外泌体、细胞质、细胞膜、线粒体、内质网等结构,在细胞固有免疫、炎症信号传导、氧化应激等生物学过程中发挥重要作用,在PI3K-AKT、MAPK、JAK-STAT、钙信号等通路上均存在富集。经实验验证,miR-21-3p、miR-675-5p、miR-487b-5p、miR-3585-3p的表达与测序结果一致。 结论：在大鼠背根神经节慢性压迫所致NP模型的DRG组织中,异常表达的miRNA及其富集的相关信号通路可为NP诊断和治疗的新靶点提供新的思路。     

藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱的差异

目的检测并比较藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱。方法分别采集246例藏族健康人和128例汉族健康人血浆样本,用Taq Man低密度芯片技术对50例藏族和50例汉族组成的2组人混合血浆中的754种miRNA进行检测,随机选取存在miR-130a-3p和miR-629-5p表达差异的样本,用qRT-PCR法进行验证。结果低密度芯片结果显示,藏族和汉族健康人群血浆中miRNA表达谱的相关系数(r)为0.592。与汉族组相比,藏族组血浆中139种miRNA的表达水平发生明显改变,其中62种miRNA表达上调,77种miRNA表达下调。qRT-PCR进一步证实miR-130a-3p和miR-629-5p在藏族组血浆中的含量明显高于汉族组[(467±27.30)×10-5vs(236±9.69)×10-5和(14.67±0.94)×10-5vs(7.58±0.52)×10-5,P均0.01]。结论藏族人群血浆miRNA的表达谱与汉族人群存在明显差异,临床检测miRNA时应考虑民族因素的影响。     

微阵列芯片分析人胶质瘤miRNA差异表达谱

目的检测人胶质瘤与非肿瘤脑组织中微小RNA（miRNA）的表达差异情况。方法选取经手术切除的胶质瘤组织标本及非肿瘤脑组织,分别提取总RNA和小分子RNA,在miRNA微阵列芯片中杂交检测,通过芯片扫描和数据聚类分析,并通过实时荧光定量RT-PCR验证,获得该病异常miRNAs表达谱。结果筛选出5个胶质瘤的相关miRNAs,其中表达上调2个,表达下调3个。其中上调的有miR-18b、miR-486;下调的有miR-237、miR-96、miR-21,差异表达情况得到定量RT-PCR的证实。结论筛选出的差异表达miRNAs可能参与胶质瘤的发生发展。     

HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清miRNA表达谱及临床预测价值

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)与慢性乙型肝炎(CHB)患者血清中微小RNA(miRNA)差异表达谱,寻找HBV-ACLF具有预测价值的miRNA标志物。方法采用miRNA芯片技术检测10例HBV-ACLF患者和5例CHB患者血清中miRNA的差异表达,筛选出差异明显的miRNA,应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)进一步评价其在HBV-ACLF中的预测价值。结果与CHB组相比,HBV-ACLF组中17种miRNA表达下调,两组之间差异有统计学意义(P0.05),9种miRNA表达上调,差异有统计学意义(P0.05)。HBV-ACLF组表达上调超过2倍的miRNA有hsa-miR-4281、hsa-miR-6126、hsa-miR-1275,表达下调超过2倍的miRNA有hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-92b-3p、hsa-miR-25-3p、hsa-miR-92a-3p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-140-3p、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-451a、hsa-miR-486-5p。ROC曲线分析结果表明,hsa-miR-4281、hsa-miR-6126、hsa-miR-16-5p、hsa-miR-25-3p等4种miRNA在ROC曲线下面积超过0.800,其中hsa-miR-4281对HBVACLF预测的灵敏度及特异度最高。结论HBV-ACLF与CHB患者血清中miRNA谱存在表达差异,hsa-miR-4281在预测HBV-ACLF严重性方面有一定价值。     

转移性宫颈癌细胞衍生的外泌体miR-21-5p促进宫颈癌侵袭及转移

目的 探讨转移性宫颈癌组织的旁分泌作用对肿瘤细胞扩散的影响。方法 选择22例转移性宫颈鳞癌患者的手术标本（癌组织和癌旁组织）和血清标本,以及22名健康体检者的血清标本,采用逆转录-实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-21-5p在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染miR-21-5p模拟物/抑制剂到宫颈癌SiHa细胞,采用RT-qPCR、细胞集落形成实验、Transwell迁移实验、噻唑蓝（MTT）比色法、蛋白免疫印迹法、双荧光素酶报告分析差异;采用高速离心法提取血清外泌体;采用纳米颗粒跟踪分析（NTA）技术、蛋白免疫印迹法、透射电子显微镜（TEM）对外泌体进行表征鉴定;采用RT-qPCR 检测宫颈鳞癌患者和健康体检者血清外泌体中miR-21-5p的表达差异;采用受试者操作特征（ROC）曲线分析血清外泌体中miR-21-5p对肿瘤转移的诊断效能。结果 miR-21-5p在转移性宫颈鳞癌组织中表达上调;miR-21-5p过表达能促进宫颈鳞癌SiHa细胞集落形成以及细胞增殖与迁移（P均< 0.01）;双荧光素酶报告显示,miR-21-5p可以靶向快速发育生长因子同源蛋白2抗体（SPRY2）,对SPYR2的表达水平进行调控;miR-21-5p模拟物转染的SiHa细胞中,磷酸化丝裂原和应激激活的蛋白激酶、磷酸化核糖体S6蛋白激酶、磷酸化原癌基因C-RAF、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激酶和磷酸化MAPK蛋白的表达均上调（P均< 0.05）。miR-21-5p在宫颈鳞癌患者的血清外泌体中上调（P < 0.05）。血清外泌体评估宫颈癌转移的ROC曲线下面积为0.9375。结论 转移性宫颈鳞癌患者组织中miR-21-5p通过外泌体传递促进肿瘤转移,其机制可能与靶向SPRY2/细胞外调节蛋白激酶/MAPK信号通路有关。     

伊马替尼耐药K562/G的microRNA表达谱分析及与FOXO3/Bcl-6信号通路关系的研究

目的:探讨CML耐药细胞株K562/G耐药相关的FOXO3/Bcl-6信号通路及相关microRNA(miRNA)机制。方法:采用MTT法检测伊马替尼对K562/G的耐药性;采用Western blot法检测耐药株和敏感株细胞中FOXO3和Bcl-6蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR检测FOXO3及Bcl-6 mRNA的表达。运用miRNA芯片技术筛查K562与K562/G细胞之间差异表达的miRNA,进一步筛选FOXO3/Bcl-6信号通路的靶向miRNA。结果:K562/G较K562细胞株的FOXO3及Bcl-6蛋白表达均明显升高(P<0.01);Bcl-6 mRNA的表达水平无明显差异,而K562/G细胞中FOXO3 mRNA表达明显升高(P<0.05)。miRNA芯片结果显示,K562/G与K562细胞之间有109条miRNA存在显著的差异,其中上调miRNA为81个,下调miRNA有28个。经生物信息学反向预测,其中miR-6718-5p、miR-5195-5p、miR-4711-3p、miR-4763-5p、miR-4664-5p和miR-3176与该信号通路相关。结论:伊马替尼耐药与FOXO3/Bcl-6信号通路相关,并且K562/G与K562细胞存在miRNA表达显著差异。     

血清外泌体miR17-5-p和miR20b-5-p在非小细胞肺癌中的表达及其诊断价值

目的 探讨血清外泌体miR-17-5p和miR-20b-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其诊断价值。方法 选取2018年1-12月该院新确诊且未经治疗的NSCLC患者179例(NSCLC组)和健康对照者144例(健康对照组)作为研究对象,提取各组鉴定血清外泌体并随机将其纳入训练集和验证集,通过qRT-PCR检测NSCLC患者和健康对照者血清外泌体中miRNA的相对表达量,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),计算曲线下面积(AUC)。将训练集中筛选出的NSCLC组血清外泌体miRNA分子,结合目前临床开展的NSCLC相关蛋白肿瘤标志物,建立NSCLC血清外泌体miRNA诊断模型,通过ROC曲线下面积评估该模型的诊断效能及与NSCLC TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的关系。结果 NSCLC组验证集血清外泌体miR-17-5p和miR-20b-5p与健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。验证集中诊断模型对NSCLC诊断的AUC为0.824(95%CI:0.768～0.871),灵敏度为72.5%,特异度为72.9%,显著高于验证集中单一分子的AUC。该诊断模型对NSCL...     

不同临床分期卵巢浆液性癌的miRNA表达谱分析及其与临床预后的关系

目的：筛选在卵巢癌演进过程中起重要作用的 microRNA（miRNA）,检测关键 miRNA 与临床病理及预后的联系,找出与卵巢浆液性癌预后相关的 miRNA。方法 miRNA 芯片技术分别检测6例Ⅰ期浆液性癌,4例Ⅲ期浆液性癌的 miRNA 表达谱差异。统计分析,从中挑选4个 miRNA,miR-510、miR-509-5p、miR-508-3p、miR-483-5p,采用实时定量PCR方法检测其在16例Ⅰ期浆液性癌、35例Ⅲ期浆液性癌中的表达,对比分析。收集验证组患者的临床病理及预后资料。将miRNA实时定量PCR结果分为高表达组和低表达组,分别统计各miRNA的表达与临床病理参数及预后的关系。结果 miRNA芯片技术分析了768个miRNA在Ⅰ期和Ⅲ期的表达谱,其中26个miRNA在两组中的表达具有显著差异（P＜0.05）,差别在两倍以上。对比Ⅰ期,Ⅲ期中6个miRNA上调,20个miRNA下调。实时定量PCR结果与miRNA芯片结果一致,显示miR-510、miR-509-5p、miR-508-3p在Ⅰ期卵巢癌标本中显著高于Ⅲ期浆液性癌,miR-483在Ⅰ期中表达显著低于Ⅲ期浆液性卵巢癌。但4个miRNA的表达与其他临床病理参数无关。生存分析发现miR-510、miR-509-5p二者与预后有关,高表达组的预后显著优于低表达组。结论 miRNA参与卵巢浆液性癌的发展,miR-510及miR-509-5p可能在卵巢癌的侵袭和转移中起作用,有望成为预测卵巢癌预后的分子标记物。     

精液中miR-34b、miR-122、miR-429联合检测对男性不育症的诊断价值

目的 探讨男性不育症患者精液中miRNA表达水平的差异,分析相关miRNA的表达水平对男性不育症的诊断价值。方法 纳入2019年4月至2021年4月该院收治的168例男性不育症患者,其中20例通过高通量测序分析其精液中miRNA表达水平,另外148例作为研究组;同时纳入168例男性健康志愿者,其中20例通过高通量测序分析其精液中miRNA表达水平,另外148例作为对照组。检测并比较两组受试者精液中miR-34b、miR-122、miR-429的相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析精液中miR-34b、miR-122、miR-429检测对男性不育症的诊断价值。结果 高通量测序发现,20例健康志愿者与20例男性不育症患者精液中多种miRNA的表达水平具有差异,其中表达上调的miRNA有58个,表达下调的miRNA有22个。选取表达差异最大的3个miRNA(miR-34b、miR-122、miR-429)进行表达水平的验证和诊断价值的分析。实时荧光定量PCR发现,两组精液中miR-34b、miR-122、miR-429的相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。R...