碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的研究

目的研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药与外排泵MexAB-OprM的相关性。方法琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对75株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),联合外排泵抑制剂MC207110进行外排泵表型的筛选;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增MexAB-OprM融合蛋白结构基因mexA以及内参基因rpoD,并测定其mRNA的表达量,用PCR扩增MexAB-OprM相对高表达菌株的外排泵调节基因mexR、nalC和nalD,对扩增产物进行DNA双向测序;结果进行BLAST比对分析。结果 75株铜绿假单胞菌中外排泵表型阳性菌株13株,其中10株细菌的MexAB-OprM相对表达量增高,此高表达MexAB-OprM菌株的调节基因mexR、nalC及nalD均阳性。其中9株菌nalC均发生第71位氨基酸突变(甘氨酸→谷氨酸)、8株菌同时还有第209位氨基酸突变(丝氨酸→精氨酸),仅发现1株菌nalD第158位氨基酸突变(苏氨酸→异亮氨酸),8株菌mexR发生突变。结论外排泵MexAB-OprM的高表达在铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药中可能起到重要作用。MexAB-OprM的高表达与其调节基因突变相关。     

铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexXY-OprM主动外排系统的耐药作用

目的探讨MexAB-OprM、MexXY-OprM主动外排系统(外排泵)在多重耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用。方法选取36株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌,采用琼脂二倍稀释法,测定环丙沙星对铜绿假单胞菌的MIC及进行泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)存在情况下的干预试验;用实时定量RT-PCR测定结构基因mexA、mexX的mRNA表达水平来判断MexAB-OprM、MexXY-OprM外排泵表达情况;用PCR法分别扩增其调控基因mexR、mexZ,并对其产物测序,用Blast软件在GenBank与已知序列比较,研究其过度表达的机制。结果在CCCP作用下,36株铜绿假单胞菌中24株菌对环丙沙星的敏感性(MIC)由20～320 mg/L提高到2.5～40 mg/L,主动外排表型阳性率为66.7%(24/36),15株菌高表达Mex-AB-OprM外排系统(41.7%),21株高表达MexXY-OprM外排系统(58.3%)。15株高表达MexAB-OprM外排系统铜绿假单胞菌同时表达MexXY-OprM外排系统;12株干预试验阴性的铜绿假单胞菌均无mexA、mexX高表达;随机选择mexA、mexX高表达的4株细菌均发生mexR、mexZ基因突变,出现氨基酸替代。结论主动外排系统MexAB-OprM、MexXY-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌中过度表达是铜绿假单胞菌多重耐药的机制之一;外排泵MexAB-OprM、MexXY-OprM高表达分别与调控基因mexR、mexZ发生变异有关。     

多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM的表达及mexR基因的突变

目的 分析MexAB-OprM主动外排系统在铜绿假单胞菌耐药性中的作用,并讨论MexAB-OprM高表达与mexR基因突变的关系.方法 L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC207,110)联合环丙沙星(CIP)筛选13株多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统表型;RT-PCR检测13株多重耐药和7株全敏感的铜绿假单胞菌结构基因mexB的mRNA相对含量,推测MexAB-OprM表达水平;对6株MexAB-OprM高表达的多重耐药铜绿假单胞菌进行mexR基因扩增、测序和比对.结果 13株多重耐药铜绿假单胞菌9株主动外排系统表型阳性,阳性率69.2%;所有检测株中均有MexAB-OprM表达,其中有6株多重耐药株高表达;6株多重耐药高表达株中有5株存在mexR基因的突变.结论 MexAB-OprM主动外排系统高表达是导致本院铜绿假单胞菌多重耐药的重要原因,而mexR基因的突变又是导致MexAB-OprM高表达的主要原因.     

MexAB—OprM主动外排系统在全耐药铜绿假单胞菌耐药中的作用及机制

目的探讨MexAB—OprM主动外排系统（外排泵）在全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用及其过度表达的机制。方法联合L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺（MC-207,110）和环丙沙星（CIP）,测定26株全耐药铜绿假单胞菌的MIC;用RT—PCR法扩增MexAB—OprM内膜转运蛋白MexB的结构基因mexB和内参照基因16SrDNA片段,根据mexB与16SrDNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB mRNA的表达水平,判断MexAB—OprM的表达情况;用PCR法扩增MexAB—OprM调控基因mexR并对其产物测序,用Blast软件在GenBank中与已知序列比对。结果联合MC-207,110后有20株（76．9％）CIP的MIC值下降4倍及以上;26株全耐药铜绿假单胞菌中有22株MexAB-OprM高表达,其中有15株mexR基因发生变异,13株发生点突变,出现氪基酸替换．2株发生插入突变,导致氨基酸插入;点突变位点是336G—A、603G—A、660G—A、584C—G、653T—A,后两者导致氨基酸替换103Ala—Gly、126Val—Glu,插入突变是在470和474核苷酸间插入碱基GGC,导致66和68氨基酸间插入Ala。结论MexAB—OprM主动外排系统的高表达对铜绿假单胞菌的耐药性起重要作用,调控基因mexR的突变是其高表达的原因之一。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药表型与外排泵表达水平的关系

目的 了解铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)临床菌株外排泵抑制剂对碳青霉烯类抗生素活性的影响;探索铜绿假单胞菌对亚胺培南(IMP)和美罗培南(MEP)的耐药性与其外排泵表达水平关系.方法 对IMP耐药的Pa采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂carbanyl cyanide m-chlorophenylhydrazone(CCCP,107株)与Pile-Arg-β-naphthylamide(PAβN,71株)的抑制试验,观察IMP和MEP的MIC变化;对32株对IMP和MEP不同耐药表型的Pa,采用实时荧光定量PCR法检测3种外排泵基因(mexA、mexD、mexF)的表达量.结果 联合外排泵抑制剂后,IMP、MEP耐药率与之前相比差异均无统计学意义,其中IMP联合CCCP、PApN前后耐药率X2值分别为0.338和0.086,P＞0.05;MEP联合CCCP、PABN前后耐药率X2值分别为1.065和1.458,P＞0.05.MIC值没有变化的菌株占50%以上;仅8株P且的MIC值降至原MIC值的1/4.在27株碳青霉烯类耐药Pa株中,24株(88.9%)存在外排泵高表达;其中3种外排泵(MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN)均高表达的菌株数量最多,13株,占54.2%.MexAB-OprM和MexCD-OprJ同时高表达以及MexAB-OprM和MexEF-OprN同时高表达菌株分别有3株,各占12.5%.仅MexEF-OprN高表达及仅MexAB-OprM高表达的菌株分别为2株,各占8.3%;未见仅MexCD-OprJ高表达者.3种外排泵基因mexA、mexD、mexF在对IMP及MEP均敏感的菌株中表达水平分别为0.48±0.48、0.48±0.53和0.30±0.41,与碳青霉烯类耐药组之间差异均有统计学意义(P＜0.05),碳青霉烯类耐药组的表达水平高于对IMP及MEP均敏感组的表达水平.MexA的表达水平在IMP、MEP均耐药组和IMP耐药、MEP敏感组间差别有统计学意义,前者高于后者.结论 当外排泵抑制剂CCCP和PAβN浓度分别为5μg/ml和20μg/ml时,对碳青霉烯类抗Pa活性影响较小,不能明显增强其对耐药菌的抗菌活性.MexAB-OprM的高表达与MEP耐药性有关,而MexCD-OprJ和MexEF-OprN的高表达与IMP耐药性有关,与MEP耐药性的关系尚有待进一步研究.     

铜绿假单胞菌外排泵及整合子与碳青霉烯类耐药中的关系

目的明确金属酶、整合子和外排泵在铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药中的作用。方法对42株泛耐药铜绿假单胞菌采用K-B法检测MIC值,双纸片扩散法测金属β-内酰胺酶(MBL),PCR扩增整合子并测序基因盒,real-time PCR检测oprM基因表达,western blot检测外膜蛋白。结果亚胺培南耐药率高达45.23%,美罗培南耐药率71.42%;检出有22株产MBL;Ⅰ类整合子检出率52.30%,携带dhfrⅫ-orfF-aadA2和aacA4-blaVIM-4两种类型的基因盒组合形式;oprM基因高表达细菌是低表达细菌的3.56倍;25株高表达MexAB-OprM外膜蛋白。结论金属酶、整合子均不是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,MexAB-OprM高表达致美罗培南耐药。各种耐药机制相互影响,并相互协同。     

IRPA对β-内酰胺酶类抗菌药物主要耐药机制研究

目的研究该院耐亚胺培南的铜绿假单胞菌β-内酰胺酶的基因分布、膜孔蛋白OprD2的缺失情况及外排泵MexAB-OprM的表达情况。方法收集该院2015年4月至2016年7月由全自动细菌鉴定仪筛选出来的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌,采用K-B法进行耐药表型确认,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因IMP、VIM、SIM、GIM、SPM,超广谱β-内酰胺酶基因TEM、VEB、SHV、PER、OXA-2、OXA-10;对扩增阳性产物进行基因测序,采用实时荧光定量PCR检测铜绿假单胞菌膜孔蛋白OprD2的缺失情况及mexA的表达水平。结果该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因均未检出;超广谱β-内酰胺酶基因TEM阳性20株(83.3%),其他型未有检出;阳性产物基因测序经比对确认为TEM-1型;膜孔蛋白OprD2缺失6株(25%),外排泵MexAB-OprM过度表达6株(25%)。结论该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类的耐药机制主要以由超广谱β-内酰胺酶基因TEM-1型介导为主,膜孔蛋白OprD2缺失以及主动外排泵MexAB-OprM过度表达为辅。     

美罗培南耐药铜绿假单胞菌多药外排泵研究

目的 研究美罗培南耐药铜绿假单胞菌的多药外排泵机制.方法 采用琼脂稀释法测定美罗培南对141株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),同时观察加入泵抑制剂MC207110后的美罗培南对141株铜绿假单胞菌MIC变化,检测多药外排泵机制.实时定量PCR检测外排泵mRNA水平的表达.PCR扩增外排泵编码基因及调控基因并测序分...     

基层医院与三级医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药表型及耐药机制研究

目的分析北京地区基层医院与三级医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药表型及其耐药机制,为临床的合理用药提供依据。方法采用K-B法检测两所医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药表型,应用PCR方法对耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关基因(金属酶基因IMP、VIM;主动外排系统基因OprM、mexA、mexB;外膜蛋白Opr D2基因)进行检测。结果两所医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦敏感性均排在前三位;检出基因IMP(11.4%、5.0%)、OprM(90.9%、97.5%)、mexA(100.0%、100.0%)、mexB(100.0%、100.0%)和OprD2(52.3%、60.0%),VIM基因均未检出。结论外排泵系统和外膜蛋白OprD2基因缺失是两个医院介导铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制,具有流行病学意义。     

外排泵在肺炎克雷伯菌对左氧氟沙星耐药中的作用

目的 探讨肺炎克雷伯菌(KP)中外排泵OqxAB、AcrAB和QepA介导的左氧氟沙星(LVX)耐药机制。方法 选择分离自南京鼓楼医院集团仪征医院2018年7月至2020年12月的门诊和住院患者的106株KP(剔除同一患者相同部位的重复分离株),采用微量肉汤稀释法检测KP对常用抗菌药物的敏感性,根据药物敏感试验结果随机选择24株对LVX耐药的KP作为试验组,27株LVX非耐药的KP作为对照组。采用羰基氰氯苯腙泵抑制法检测KP的外排泵表型,采用实时定量反转录PCR检测外排泵OqxAB、AcrAB和QepA相应表达基因OqxA、acrB和QepA的表达水平,采用常规PCR及测序检测acrR基因突变。分析两组KP外排泵基因表达水平的差异,LVX最低抑菌浓度(MIC)与外排泵基因表达水平间的关联性,以及两组KP外排泵表型的差异。结果 试验组与对照组KP外排泵表型试验结果差异无统计学意义(P>0.05)。两组KP外排泵基因OqxA、QepA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而acrB表达水平差异有统计学意义(P<0.05),且试验组acrB表达水平与LVX的log     

碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌外排泵表达研究

目的了解临床分离的碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌多药外排泵及膜孔蛋白表达情况。方法用SYBR Green I实时定量RT-PCR法检测多药外排泵MexAB-OprM，MexCD-OprJ，MexEF-OprN，MexXY-OprM及膜孔蛋白O-prD的mRNA表达水平。结果在40株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌中，13株有耐药泵基因表达异常；12株oprD表达异常。结论外排泵和膜孔蛋白的表达异常是钢绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的重要原因，探索耐药机制对新药研制及控制医院内感染的播散是十分重要的。     

小檗碱体外逆转耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药性研究

目的评估小檗碱对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)体外抗菌活性和耐药性逆转能力,为小檗碱用于治疗CRPA感染提供依据。方法收集河南省中医院临床微生物实验室2017年1-12月分离的CRPA临床分离株,采用二倍肉汤稀释法检测CRPA对小檗碱的最小抑菌浓度(MIC),评估小檗碱抑菌活性;棋盘法检测小檗碱与哌拉西林等5种抗菌药物的协同抑菌活性;K-B法检测CRPA经小檗碱逆转前后抑菌圈变化,评估小檗碱的耐药性逆转能力。结果 79株CRPA临床分离株对小檗碱的MIC为(1.67±0.55)mg/mL;经小檗碱逆转前后,CRPA对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、亚胺培南和美罗培南的抑菌环直径差异有统计学意义(P0.05),对头孢吡肟、阿米卡星、环丙沙星和多黏菌素B差异无统计学意义(P0.05)。结论小檗碱对CRPA具有较好的抑菌活性,与哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南具有协同抑菌作用,可逆转CRPA对部分抗菌药物的耐药性,但具体机制有待进一步深入研究。     

耐药结节细胞分化超家族介导鲍曼不动杆菌替加环素耐药机制研究

目的分析耐药结节细胞分化超家族(RND)外排泵介导多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)对替加环素敏感性降低的机制。方法收集20152018年哈尔滨医科大学附属第四医院替加环素不敏感的鲍曼不动杆菌21株及MDR-AB替加环素敏感株39株。以微量肉汤稀释法为标准方法,以替加环素不敏感菌株[最小抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL]为实验组,替加环素敏感菌株(MIC≤1μg/mL)为对照组。采用聚合酶链反应(PCR)检测鲍曼不动杆菌替加环素敏感性降低相关的RND基因adeB、adeG和adeJ,及其上游调控基因adeS、baeR和baeS,并对adeS扩增产物进行测序,查找插入序列。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测实验组和对照组外排泵adeABC、adeFGH、adeIJK、adeRS和baeRS的转录水平并进行比较。结果微量肉汤稀释法确证有12株MDR-AB为替加环素不敏感株,与替加环素敏感性降低相关的RND基因检出率为100%,且在2株菌株中发现了adeS的ISAbaⅠ插入序列。实验组有3株菌株adeABC表达较对照组明显升高,分别为标准菌株鲍曼不动杆菌(ATCC 19606)的3.3、3.5和2.7倍;有1株菌株adeFGH表达量升高明显;adeIJK、adeRS和baeRS表达量在部分菌株中稍有上调。结论RND外排泵介导的MDR-AB对替加环素敏感性降低与adeABC和adeFGH高表达密切相关,adeABC高表达可能与其上游调控基因adeS中存在ISAbal插入突变有关,但不排除其他替加环素耐药机制的存在。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外排泵转录水平与耐药的关系

目的调查细菌耐药性与其主动外排泵系统的作用关系,并探讨大肠埃希菌外排泵调控基因对其外排泵结构基因表达水平的影响,分析其耐药机制。方法收集大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共59株,根据头孢他啶耐药情况分为实验组（耐药）与对照组（敏感）,多重聚合酶链反应（PCR）扩增外排泵调控基因acrR并测序,实时定量逆转录（RT）-PCR检测外排泵及调控基因marA的相对转表达水平,三维试验检测AmpC酶。结果实验组大肠埃希菌46.7%（7株）acrAB基因转录水平增高,肺炎克雷伯菌中51.9%（14株）acrAkp基因转录水平增高,敏感组外排泵基因均未见增高。实验组大肠埃希菌中,3株acrR发现突变,9株marA基因转录水平增高。59株菌株中39株（66.1%）AmpC阳性。结论主动外排泵系统是细菌耐药机制之一,常与其他耐药机制共同存在。acrR突变与marA表达增高均可引起大肠埃希菌acrAB表达增加。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌外排泵转录水平与耐药的关系

目的调查细菌耐药性与其主动外排泵系统的作用关系,并探讨大肠埃希菌外排泵调控基因对其外排泵结构基因表达水平的影响,分析其耐药机制。方法收集大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共59株,根据头孢他啶耐药情况分为实验组(耐药)与对照组(敏感),多重聚合酶链反应(PCR)扩增外排泵调控基因acrR并测序,实时定量逆转录(RT)-PCR检测外排泵及调控基因marA的相对转表达水平,三维试验检测AmpC酶。结果实验组大肠埃希菌46.7%(7株)acrAB基因转录水平增高,肺炎克雷伯菌中51.9%(14株)acrAkp基因转录水平增高,敏感组外排泵基因均未见增高。实验组大肠埃希菌中,3株acrR发现突变,9株marA基因转录水平增高。59株菌株中39株(66.1%)AmpC阳性。结论主动外排泵系统是细菌耐药机制之一,常与其他耐药机制共同存在。acrR突变与marA表达增高均可引起大肠埃希菌acrAB表达增加。     

外排泵adeB基因表达与鲍曼不动杆菌泛耐药的关系

目的探讨主动外排泵adeB基因在泛耐药鲍曼不动杆菌(Pandrug Resistance Acinetobacter Baumannii PRABA)耐药性中的作用。方法M-H琼脂稀释法检测临床分离PRABA对常用抗生素的最小抑菌浓度MIC,同时测定经外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)处理前后PRABA对常用抗生素的MIC值;PCR实时荧光RT-PCR检测外排泵adeB基因及其表达水平,PCR动力学经典算法:QR=(1+E)-△△CT,对基因表达进行相对定量分析。结果10株PRABA adeB基因阳性,2株全敏感鲍曼不动杆菌(PSABA)adeB基因阴性,PRABA菌株adeB基因mRNA的表达范围为2.5E+2~2.45E+3拷贝。结论PRABA菌株主动外排泵adeB基因高表达导致对常用抗生素泛耐药,甚至全部耐药。     

多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药机制研究

目的探讨多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)对替加环素敏感性降低的机制,为院内感染控制及临床合理用药提供理论依据。方法应用微量肉汤稀释法检测30株临床分离的非重复性MDRAB对替加环素的耐药性及应用外排泵抑制剂羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)处理前后对替加环素的最低抑菌浓度(MIC);采用PCR技术扩增外排泵基因AdeABC、AdeFGH、AdeJ、AdeE、AbeM基因及外排泵调控基因AdeRS。结果 30株多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的MIC值范围为0.25~8.00μg/L。其中替加环素敏感鲍曼不动杆菌(TSAB)共27株(90%),替加环素非敏感鲍曼不动杆菌(TNAB)共3株(10%);加入20μg/ml CCCP外排泵抑制剂进行处理,发现TNAB组菌株MIC值均下降≥4倍,为外排泵阳性菌株;PCR扩增外排泵基因:不敏感组(TNAB)菌株除ade E基因外均为阳性,敏感组(TSAB)中AdeA、AdeB、AdeC、AdeR基因检出率均为90%,Ade S基因检出率93.3%,AdeF、AdeG、AdeH基因检出率83.3%。所有菌株ade J和Abe M均为阳性,未发现ade E基因。结论外排泵系统Ade ABC和Ade FGH可能在多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性下降机制中起重要作用,而外排泵系统AdeIJK和AbeM可能与多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素耐药无关。     

肺炎克雷伯菌外排泵基因与消毒剂和抗菌药物耐药相关性研究

目的 研究肺炎克雷伯菌临床分离株对常用消毒剂和抗菌药物的敏感性及外排泵基因携带情况,分析抗性基因与消毒剂抗性和抗菌药物耐药性之间的相关性。方法 从不同地区医院的临床血液标本中分离肺炎克雷伯菌,筛查外排泵基因qacE△1、qacE、cepA和emrE携带情况。通过肉汤微量稀释法评估受试菌对消毒剂和抗菌药物的敏感性,分析目标基因与细菌对消毒剂和抗菌药物耐药性之间的相关性。结果 cepA基因是分布最广的外排泵基因,其次是qacE△1、emrE。部分菌株对氧氟沙星等抗菌药物耐药,而多数菌株对美罗培南敏感,所有受试菌株均对多黏菌素B敏感。92.3%携带cepA基因的菌株对醋酸氯己定抗性明显升高,其MIC≥8 mg/L,显著高于未携带cepA的菌株;61.9%携带qacE△1菌株具有多药耐药性,显著高于qacE△1阴性分离株。结论 肺炎克雷伯菌普遍携带cepA和qacE△1基因,携带cepA基因可能与其对醋酸氯己定敏感性降低有关,携带qacE△1基因可能与受试菌多药耐药表型高度相关。     

泛耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵adeB基因表达及耐药性研究

目的：探讨细菌主动外排泵adeB基因在临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌经外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)处理前后对抗生素最小抑菌浓度(MIC)变化,以聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外排泵基因adeB及其表达水平。结果50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株加入CCCP后,MIC值小于原值的1/4或1/4以下的四环素42株(84％)、氧氟沙星45株(90％)、亚胺培南45株(90％)、头孢噻肟50株(100％)、庆大霉素50株(100％)。50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株和4株敏感菌株均检测到adeB基因,但泛耐药株表达水平明显高于敏感株(P<0.01)。结论泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵adeB基因高表达密切相关。     

碳青霉烯类抗生素诱导铜绿假单胞菌外膜蛋白及外排系统突变的机制研究

摘要：目的：探讨临床分离的因外膜蛋白突变导致的铜绿假单胞菌（Pa）碳青霉烯类耐药机制是否与药物诱导相关。 方法：在M-H平板上用亚胺培南（IPM）和美罗培南（MEM）药敏纸片分别诱导3株Pa（Pa标、Pa1和Pa2）。琼脂稀释法测定诱导前后Pa对IPM、MEM、头孢他啶和头孢吡肟4种药物的最低抑菌浓度（MIC）。改良三维试验检测诱导后产碳青霉烯酶变化。SDS-PAGE观察Pa外膜蛋白OprD的改变。PCR扩增oprD基因并进行序列分析。实时荧光定量PCR检测Pa外排系统表达情况。并对诱导耐药菌株进行稳定性分析。 结果：诱导第5天出现对IPM和MEM耐药（MIC≥8 μg/mL）,且MEM诱导株对2种药物敏感性降低速度明显快于IPM诱导株。诱导株未检出耐药酶,外膜蛋白OprD出现缺失或者减少。oprD基因测序发现Pa标(I)、Pa标(M)和Pa1（M）分别在831（TGG→TGA）、1 017（TGG→TGA）和1 014（TGG→TAG）有碱基突变产生终止密码子,Pa2（I）在1 206处有新的碱基插入导致移码突变。外排基因以MexA过度表达为主,同时伴有其他外排系统的过度表达。稳定性分析发现5株诱导株的耐药表型稳定,另1株外排系统表达量呈现持续升高,导致MIC值的右移。 结论：在碳青霉烯类药物环境中,外膜蛋白OprD表达减少和基因的突变以及外排系统的过度表达是引起诱导株对IPM和MEM耐药的主要原因。此型耐药株不仅耐药表型稳定,甚至可能由于某种机制导致脱离药物后MIC值仍持续升高。