大鼠自身免疫性葡萄膜视网膜炎辅助T细胞的类细胞因子水平表达

目的观察实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（experimental autoimmune uveoretinitis，EAU）大鼠血清以及脾细胞培养上清液中辅助T细胞1／辅助T细胞2（helper T cell 1／helper T cell2，Th1／Th2）类细胞因子水平。方法用Fmoc法合成光感受器间维生素A类结合蛋白R16多肽片段，联合免疫佐剂诱导EAU动物模型。在EAU高峰期取大鼠血清，分离脾细胞，培养后取上清液，应用酶联免疫吸附法检测血清以及脾细胞培养上清液中Th1类细胞因子（interferon-γ，IFN-γ、interleukin-2，IL-2）和Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）水平。结果EAU组大鼠血清中IFN-1和IL-2的浓度分别为（33．8±5．2）μg／L，（52．5±7．9）μg/L，显著高于空白对照组[（6．2±1．4）μg/L，（3．7±0．8）μg/L和弗氏完全佐剂对照组[（complete Freund＇s adjuvant，CFA）；（9．2±1．9）μg/L，（5．1±1．1）μg/L]（P〈0．05）；而IL-4、IL-10的浓度与空白对照组和CFA组相比差异无统计学意义。EAU组大鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2的浓度分别为（1105．3±197．5）μg/L，（45．0±16．2）μg/L，显著高于空白对照组（5．24±1．7）μg/L，（4．1±1．3）μg/L和CFA组（25．14±5．9）μg/L，（5．1±1．9）μg/L（P〈0．01），IL4、IL-10的浓度与空白对照组和CFA组相比差异无统计学意义；CFA组大鼠脾细胞培养上清液中IFN-1的浓度明显高于空白对照组（P〈0.05），IL-2、IL-4、IL-10的浓度与空白对照组相比差异无统计学意义。结论在EAU高峰期，Th1类细胞因子水平显著升高，提示EAU是Th1细胞诱导的疾病（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：280-282）     

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体治疗实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎的研究

目的 观察抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体（TNF-α MCAb）对于实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）的治疗作用。方法 合成光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）R16多肽片段，联合免疫佐剂诱导EAU动物模型。按照注射次数不同将大鼠分为2组，分别于IRBP R16免疫后的第6天和第4、6、8天自大鼠尾静脉注入TNF-α MCAb，裂隙灯显微镜观察其眼部临床表现，同时设未治疗组大鼠作为对照。于IRBP R16免疫后第13天测量迟发型超敏反应（DTH），并于第14天处死大鼠，取眼球行组织病理检查。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体注射后14 d 时大鼠血清中Th1类细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、Th2类细胞因子白细胞介素-4（IL-4）水平以及房水中IFN-γ水平。测量引流淋巴结细胞的抗原特异性淋巴细胞增生反应。结果 TNF-αMCAb治疗组大鼠的眼部炎症较未治疗组明显减轻，病理分级下降；房水和血清中IFN-γ水平降低，血清中IL-4增高；DTH反应下降；引流淋巴结细胞对IRBP R16多肽刺激的增生反应下降，差异均有统计学意义（P＜0.01）。与单次注射相比，3次注射的治疗效果更显著（P＜0.05）。结论 TNF-αMCAb能够有效减轻EAU大鼠眼部的炎症反应和特异性细胞免疫反应，改变Th1/Th2细胞因子平衡；多次应用作用更显著。     

口服耐受对自身免疫性葡萄膜视网膜炎影响的实验研究

目的 观察口服牛视网膜S抗原对人S抗原多肽-35诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)的影响.设计实验性对照研究.研究对象20只雌性纯种Lewis大鼠.方法 用人S抗原多肽-35诱发EAU,提纯牛视网膜S抗原诱导口服耐受,分高剂量组(2 mg/次)和低剂量组(0.2 mg/次),同时设实验对照组(胎牛血清蛋白).主要指标EAU发病情况和脾组织白介素-4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)的表达水平.结果 口服高剂量组的Lewis大鼠的EAU发病情况较实验对照组有显著减轻(P＜0.05),而且口服高剂量组Lewis大鼠脾组织IL-4的表达水平则高于实验对照组(F=4.214,P=0.017).结论 口服高剂量牛视网膜S抗原诱导的免疫耐受町以成功抑制人S抗原多肽-35诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎.(眼科,2008,17:250-253)     

糖皮质激素对葡萄膜炎患者外周血Th1和Th2细胞因子的影响

目的探讨糖皮质激素治疗前后葡萄膜炎患者外周血单核细胞（PBMC）培养上清液Th1/Th2细胞因子的变化。方法应用酶联免疫吸附试验检测治疗前后葡萄膜炎患者PBMC上清液干扰素（IFN-γ）、白介素（IL）-2、IL-4和IL-10水平的变化,30例健康人作为正常对照。结果急性葡萄膜炎患者PBMC上清液IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平与IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10比值明显高于恢复期患者和正常对照者（P=0.000）。糖皮质激素治疗后,IFN-γ和IL-2水平、IFN-γ/IL-4和IFN-γ/IL-10比值降低（P=0.000）,IL-10水平升高（P=0.000）。治疗前不同类型葡萄膜炎组仅IFN-γ和IL-10水平差异有统计学意义（P〈0.01）,治疗后IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ/IL-10比值差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗前后前葡萄膜炎和Vogt-小柳原田病患者除IL-4外,其余细胞因子及比值差异均有统计学意义（P〈0.05）;Behcet病患者除IL-4和IL-10外,其余细胞因子及比值差异均有统计学意义（P〈0.01）。治疗前后葡萄膜炎患者IFN-γ与IL-2水平间及IL-4与IL-10水平间呈正相关（P=0.000）。结论急性葡萄膜炎患者PBMC中Th1细胞因子显著升高并占优势,表明Th1/Th2细胞因子不平衡性与葡萄膜炎的发病有关。     

细胞因子信号抑制因子在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎外周血单个核细胞内的表达变化

目的 观察和探讨细胞因子信号抑制因子（SOCS)在实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU）外周血单个核细胞（PBMC）内的表达及意义。方法 光感受器间维生素A 类结合蛋白(IRBP)免疫100只Lewis大鼠诱导EAU动物模型，随机分为对照组和治疗组。治疗组从免疫后第1天至第28天，给予环孢霉素A（CSA）灌胃，20 mg/（kg·d）；对照组给予等量生理盐水。免疫前、免疫后7、14、21、28 d采用裂隙灯显微镜观察大鼠眼部变化并抽取其心脏血，酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清白细胞介素（IL）-4、IL-12、干扰素（IFN）-γ的含量；实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白免疫印迹法检测PBMC内SOCS mRNA和蛋白表达。结果免疫后14 d 时炎症最明显。对照组可见明显的虹膜睫状体炎，治疗组前房轻微炎性渗出，但无虹膜后粘连及前房积脓。对照组血清中 IL-12、IFN-γ免疫后14 d达到最高峰，28 d下降到基础水平，治疗组在免疫后14 d达到高峰，但是升高程度明显低于对照组，其他时间点与免疫前比较无差异；IL-4在对照组中下降不明显，治疗组在整个病程中呈上升趋势。SOCS1、SOCS5 mRNA免疫后14 d表达最高，对照组分别是免疫前的4.05和3.83倍，治疗组分别为1.15和1.16倍；两组中含SH2结构的细胞因子诱导蛋白（CIS）与SOCS3 mRNA轻度升高，对照组较治疗组略明显。对照组中SOCS1、SOCS5蛋白在免疫后7、14、21 d时显著高于免疫前，CIS、SOCS3蛋白在免疫后14、21 d显著高于免疫前；治疗组中仅SOCS1蛋白在免疫后14 d显著高于免疫前，其他时间点较免疫前无明显改变。 结论 SOCS1、SOCS5水平升高与EAU发生过程中的Th1型反应增强有关，CIS、SOCS3水平轻度升高可能是存在着Th2细胞反应的增强以对抗Th1细胞反应，实现动态免疫平衡。     

龙胆泻肝汤抑制Notch信号通路活化对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠Th1、Th2细胞分化的影响

目的　探讨龙胆泻肝汤（LXD）对Notch信号通路活化的抑制作用及其对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）大鼠Th1、Th2细胞分化的影响。方法　将30只Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组、LXD干预组大鼠均诱导EAU,LXD干预组大鼠造模后使用LXD每天灌胃处理,EAU模型组和正常对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃。干预后12 d分离三组大鼠的脾脏、淋巴结和眼组织,Q-PCR检测Rbpj基因的表达,ELISA检测Rbpj、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）蛋白的表达,流式细胞仪检测各组织中Th1、Th2细胞的表达水平,分析Th1/Th2细胞比例的变化。结果　干预后12 d,Q-PCR检测发现,与正常对照组大鼠相比, Rbpj mRNA在EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中均呈显著上调表达(均为P<0.001);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj mRNA相对表达水平均显著降低(均为P<0.01)。ELISA检测结果发现,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Rbpj和IFN-γ蛋白表达水平均明显高于正常对照组,IL-4蛋白表达水平均明显低于正常对照组（均为P＜0.05);相比于EAU模型组,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中Rbpj IFN-γ蛋白表达水平均显著降低,IL-4蛋白表达水平均显著升高（均为P＜0.05)。流式细胞仪检测发现,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠脾脏、淋巴结和眼组织中Th1细胞水平均明显升高,Th2细胞水平均明显降低,Th1/Th2细胞比例失衡（均为P＜0.05）;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中Th1细胞水平均明显下降,Th2细胞水平均明显升高,两者细胞比例逐渐恢复均衡（均为P<0.01)。结论　LXD可通过下调EAU大鼠Notch信号通路转录因子Rbpj的表达水平抑制Notch信号通路的活化,显著促进EAU大鼠中Th1/Th2细胞比例恢复平衡并改善免疫微环境,从而达到治疗葡萄膜炎的目的。     

IL-12及Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用

目的探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞(dendriticcell,DC)诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用。方法将雄性SD受体大鼠随机分为3组,每组14只,分别为对照组(术前3d尾静脉注射PBS0.1mL)、6-DC组(术前3d尾静脉注射第6天的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)及IL-10-DC组(术前3d尾静脉注射IL-10修饰的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)。以雌性Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。术后对受体大鼠角膜植片进行临床观察,记录角膜植片存活时间;移植术后第14天检测术眼角膜中细胞因子IL-12、Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-10mRNA的表达。结果对照组、6-DC组及IL-10-DC组角膜植片的存活时间分别为(10.63±2.00)d、(18.88±1.36)d及(24.50±2.07)d。6-DC组、IL-10-DC组与对照组比较,角膜植片存活时间明显延长(均为P<0.01);IL-10-DC组角膜植片存活时间显著长于6-DC组(P<0.01)。术后第14天,对照组角膜组织IL-12(0.80±0.00)及Th1细胞因子IL-2(1.03±0.06)、IFN-γ(0.97±0.03)的mRNA表达水平最高,而Th2细胞因子IL-4(0.13±0.00)、IL-10(0.34±0.02)的mRNA表达最低;IL-10-DC组IL-12(0.39±0.01)及Th1细胞因子IL-2(0.61±0.01)、IFN-γ(0.43±0.02)的mRNA表达水平最低,Th2细胞因子IL-4(0.19±0.00)、IL-10(0.88±0.01)的mRNA表达最高,三组比较差异具有统计学意义。结论 IL-10修饰的树突状细胞能诱导大鼠角膜移植免疫耐受;IL-12、Th1/Th2细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用,IL-12mRNA低表达及Th1/Th2细胞因子偏离是IL-10修饰的树突状细胞诱导角膜移植免疫耐受机制之一。     

Th1、Th17细胞对小鼠视网膜星形细胞的杀伤作用

背景 C57BL/6及B10RⅢ小鼠是实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)动物模型常用的小鼠种系,其中C57B L/6小鼠免疫后眼部炎症较轻,而B10RⅢ小鼠免疫后眼部表现为典型的后葡萄膜炎病理改变.目的 观察培养的光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)抗原特异性Th1、Th17细胞对小鼠视网膜星形细胞的杀伤作用,研究EAU中Th1及Th17细胞的致病机制. 方法 选取C57BL/6小鼠、B10RⅢ小鼠各10只,尾根部及躯干皮下注射200 μl含有200 μg IRBP1-20或IRBP161-180抗原及完全弗氏佐剂(CFA)的乳化液,共均匀注射6个点以免疫动物.流式细胞仪分析B10RⅢ小鼠模型的眼内浸润T细胞类别.分离培养C57BL/6小鼠淋巴结及脾脏IRBP特异性T细胞,分别加入白细胞介素2(IL-2)或IL-23以适于Th1、Th17细胞生长.将培养至第5天的Th1、Th17细胞分别加入到经干扰素-γ(IFN-γ)预处理的单层视网膜星形细胞中,观察细胞间的相互作用,检测肿瘤坏死因子-α( TNF-α)的质量浓度. 结果 B10RⅢ小鼠EAU模型眼球中有大量炎性细胞浸润,流式细胞仪检测证实含有IFN-γ+、IL-17+细胞和CD45+细胞,分别占9.5％、5.1％和41.4％.IRBP1-20刺激后6d,含IL-2和IL-23培养基中IFN-γ+细胞分别为44.0％、8.0％,IL17+细胞分别为1.0％、26.0％.Th1、Th17与视网膜星形细胞相互作用24 h后,可见视网膜星形细胞死亡脱落,Th17较Th1具有更强的杀伤作用.Th1、Th17细胞分别与星形细胞共培养48 h,两种培养基中TNF-α的质量浓度分别为(500±10)、(801±24) μg/L,差异有统计学意义(t=-20.36,P=0.00).结论 Th1、Th17对视网膜星形细胞均有杀伤作用,Th17细胞杀伤作用更强,在葡萄膜炎致病过程中发挥更重要的作用.杀伤过程中既有细胞直接接触作用,又有通过细胞因子介导的间接作用.     

实验性自身免疫性葡萄膜炎炎性因子表达的动态观察

背景 C57BL/6 (B6)小鼠是实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)动物模型常用的小鼠种系,以往研究证明葡萄膜炎的发病机制与辅助性T(Th)细胞分泌的炎性细胞因子相关,但各种Th细胞在EAU发病中的相互作用并不十分清楚. 目的 研究光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)诱导不同天数后EAU小鼠脾脏和血清中炎性因子的动态变化,探讨各种炎性因子在EAU病理过程中的作用. 方法 用IRBP及完全弗氏佐剂(CFA)的乳化液在小鼠的尾根部及躯干部均匀注射5个点以免疫B6小鼠44只,免疫后每周3次用间接检眼镜观察小鼠的EAU发病情况,并参照Thurau的评分标准进行炎症评分.于注射后第30天摘取20只模型小鼠眼球,于瞳孔视神经平面制备切片行组织病理学检测.分别于注射前,注射后第2、5、10、15、20、25、30天取模型小鼠脾脏,提取RNA,逆转录扩增并行凝胶电泳,检测白细胞介素-17(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)和IL-10等因子的mRNA含量,同时收集相同时间点小鼠的血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中上述因子的质量浓度. 结果 IRBP及CFA乳化液免疫B6小鼠后第12天可见轻度葡萄膜炎症,炎症评分为0.5分,炎症反应在免疫后第13～ 15天最重,评分为1.0分,至第30天炎症明显减轻,评分为0.5.组织病理学检查显示,注射后第30天模型鼠眼部反应与间接检眼镜检查结果吻合,病理评分为0.5.模型鼠血清炎性因子检测结果显示,注射后第5天,小鼠血清中IL-17的质量浓度达到峰值,为(51.85±2.42) ng/L,随着时间的延长开始降低.到第15天时降到最低,为(4.01 ±0.06)ng/L,但在第25天时再次升高至(25.00±0.94) ng/L,之后逐渐下降,第30天时,血清中IL-17的质量浓度为(6.01±0.21)ng/L,与免疫前的(0.98±0.05) ng/L相比差异有统计学意义(P=0.000).小鼠免疫前血清中IFN-γ的质量浓度为(1.02±0.09) ng/L,在注射后第5天达到(50.54±0.48)ng/L,于注射后第10天达到峰值,为(73.21±0.12) ng/L,然后逐渐降低.到第30天时,血清中IFN-γ的质量浓度为(5.15±0.18) ng/L,与免疫前相比差异仍有统计学意义(P=0.000).注射后模型鼠血清中TNF-α质量浓度升高迅速,免疫后第2天质量浓度较免疫前明显升高,第5天达到峰值,质量浓度为(134.25±0.59) ng/L,但至第15天降到最低.注射后第20天再次升高,达到(60.54±0.62)ng/L,之后又逐渐下降,第30天时和免疫前相比差异无统计学意义(P=0.660).IL-10在免疫后第5天可以被检测到,并且随着注射后时间的延长逐渐升高.到第15天时达到高峰,随后开始降低,第30天与免疫前相比差异有统计学意义(P=0.000).脾脏中IL-10、IL-17、TNF-α、IFN-γ 4种炎性因子mRNA表达变化趋势和血清中的变化一致. 结论 在B6小鼠的EAU中,Th1、Th2、Th17相关炎性因子IFN-γ、TNF-α、IL-10及IL-17具有特征性变化规律,IFN-γ可能与EAU的急性期病理过程相关;IL-17、TNF-α可能与葡萄膜炎的慢性化、复发性有关;IL-10可缓解EAU的病理过程.     

外源性IL-10转染大鼠DC细胞对角膜移植术后房水中细胞因子的影响

目的: 探讨外源性IL-10转染大鼠树突状细胞(dendriticcell,DC)对角膜移植术大鼠房水中细胞因子IL-4和IFN-γ表达的影响。方法: 制备细胞8-DC,GFP-DC及IL-10-GFP-DC。55只SD受体大鼠,随机抽取6只6眼,作为阴性对照组,其余随机分成4组:阳性对照组(术前3d受体大鼠尾静脉注射1mLPBS)、8-DC组、GFP-DC组、IL-10-GFP-DC组,分别于术前3d受体大鼠尾静脉注射1mL已制备的细胞悬液(8-DC,GFP-DC,IL-10-GFP-DC)。以Wistar大鼠为供体建立角膜移植实验模型。术后观察各组大鼠的角膜植片状态,并于术后第14d采用ELISA方法检测大鼠房水中IL-4和IFN-γ因子的表达。结果: IL-10-GFP-DC组角膜植片的存活时间显著延长。IL-10-GFP-DC组细胞因子IL-4表达较其他各组高,而IFN-γ的表达较其他各组低,差异具有统计学意义。结论: 外源性IL-10基因转染的未成熟树突状细胞能抑制角膜移植排斥反应,诱导免疫耐受的形成。其中干扰大鼠房水中细胞因子IL-4和IFN-γ的表达是诱导角膜移植免疫耐受的机制之一。     

FK506在实验性过敏性结膜炎局部免疫调控的作用

目的研究FK506对过敏性结膜炎动物模型局部Th1/Th2细胞因子平衡的免疫调控机制。方法选取SPF级Balb/c鼠100只,腹腔注射卵白蛋白磷酸缓冲液（PBS）诱导动物模型。试验动物分设4组：阳性对照组（模型组）25只、地塞米松滴眼组（DXM组）25只、FK506滴眼组（FK506组）25只和阴性对照组（正常组）25只。动物模型诱导成功后第15天开始,地塞米松组和FK506组分别给予局部0.1%地塞米松滴眼液和0.1%FK506滴眼液,每天4次。结果模型组IL-4、IL-6、IL-10I、L-2、IL-12I、FN-γ水平明显高于正常组（F=10.586,P=0.000）,而且IL-4/IFN-γ、IL-6/IFN-γ、IL-10/IFN-γ比值也明显高于正常组（F=9.374,P=0.000）。DXM组IL-4、IL-6、IL-10水平较模型组明显降低（F=15.340,P=0.000）I,L-12水平上升（F=6.213,P=0.003）I,L-2和IFN-γ水平无明显变化（F=1.549,P=0.256）。FK506组IL-4、IL-6、IL-10水平较模型组明显降低（F=12.537,P=0.000）I,L-12水平上升（F=9.834,P=0.002）I,L-2和IFN-γ水平无明显变化（F=2.672,P=0.459）。FK506组IL-4、IL-6、IL-10水平较DXM组明显降低（F=10.017,P=0.001）I,L-12水平上升（F=7.829,P=0.004）I,L-2和IFN-γ水平无明显变化（F=0.853,P=0.297）。结论 FK506可促使过敏性结膜炎小鼠局部Th1/Th2淋巴细胞失衡向Th2方向漂移,而且效果其效果强于地塞米松。     

短期高浓度葡萄糖摄入对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎发展的作用

目的 探索短期高浓度葡萄糖摄入对小鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发展的促进作用.方法 选取健康SPF级6～8周龄小鼠38只,随机分为模型对照组(EAU组)和高糖模型组(GLU组),每组19只小鼠.GLU组小鼠从造模前14 d开始给予200 g·L-1葡萄糖溶液饮水直至处死,EAU组小鼠给予正常饮水,同时保证EAU...     

ResolvinE1对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用

背景 以往防治角膜移植术后排斥反应的药物存在诱发局部或全身不良反应的风险,研究表明resolvinE1(RyE1)能够调节辅助性T细胞1(Th1)型免疫反应,但其对高危角膜移植术后的植片排斥反应有无抑制作用尚不清楚. 目的 观察高危角膜移植动物模型局部应用RvE1对植片免疫排斥反应的抑制作用.方法 以BALB/c小鼠为受体、C57BL/6小鼠为供体行角膜移植术.采用随机数字表法将90只BALB/c小鼠随机分成异体角膜移植组、异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组,每组各30只.BALB/c小鼠右眼先用缝线法刺激2周以建立高危角膜移植眼模型,然后行穿透角膜移植术.异体角膜移植组和异体角膜移植+RvE1组小鼠右眼行异体角膜移植,自体角膜移植组小鼠将右眼角膜植片旋转180°后缝合于植床上.异体角膜移植组及自体角膜移植组小鼠术后每日用生理盐水10μl结膜下注射1次,异体角膜移植+RvE1组小鼠术后同法注射终质量浓度为0.1 μg/μl的RvE1 10μl,连续7d.术后裂隙灯显微镜下观察小鼠角膜植片反应并对其排斥反应进行评分.术后21 d处死各组小鼠各20只,收集小鼠术眼角膜、眼球和术眼侧颈部淋巴结,采用苏木精-伊红染色法观察各组小鼠角膜植片的组织病理学变化;采用免疫组织化学法检测术眼角膜中CD4及γ干扰素(IFN-γ)的表达;采用流式细胞术检测术眼侧颈部淋巴结淋巴细胞中Th1细胞(CD3+ CD8a-IFN-γ+)比例;采用荧光定量PCR法检测Th1细胞相关因子白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-c)、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达水平.结果 异体角膜移植+RvE1组小鼠角膜植片存活时间为(28.5±1.7)d,明显长于异体角膜移植组的(14.0±1.6)d,差异有统计学意义(t=4.14,P＜0.001),自体角膜移植组小鼠植片在术后50 d存活率为100％.苏木精-伊红染色显示,异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组小鼠角膜植片水肿及炎性细胞浸润程度均轻于异体角膜移植组.免疫组织化学法检测显示,各组角膜全层均有CD4表达,而IFN-γ主要表达于角膜上皮层,异体角膜移植组小鼠角膜组织中CD4和IFN-γ阳性细胞数均明显多于异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组.流式细胞术检测显示,异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组小鼠淋巴细胞中Th1细胞比例分别为(1.07±0.25)％和(0.85±0.12)％,明显低于异体角膜移植组的(1.56±0.20)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).荧光定量PCR检测显示,异体角膜移植组小鼠角膜中IL-2、TNF-α、IFN-γ及T-bet mRNA的相对表达量明显高于异体角膜移植+RvE1组和自体角膜移植组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 RvE1可抑制小鼠高危角膜移植排斥反应,作用机制可能与其下调角膜植片和淋巴细胞中Th1细胞及相关细胞因子的表达有关.     

雷帕霉素对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用

背景雷帕霉素不仅具有抗菌作用,而且是一种良好的免疫抑制剂,可用于多种自身免疫性疾病的治疗．对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）的治疗作用是目前研究的热点之一。目的研究雷帕霉素对EAU的治疗作用,并观察雷帕霉素对EAU各免疫细胞群炎性因子表达的影响。方法25只Lewis大鼠采用随机数字表法分为EAU组（20只）和正常对照组（5只）。光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）R16肽段与完全氟氏佐剂充分乳化后于Lewis大鼠后足皮下注射以建立EAU模型,EAU模型鼠再按分层随机的原则分为模型对照组和雷帕霉素组,每组10只大鼠。雷帕霉素组造模后即应用O．2mg／（kg·d）雷帕霉素（0．4m1）腹腔内连续注射7d,模型对照组及正常对照组大鼠采用等体积的生理盐水进行腹腔内注射。造模后第4天开始每日裂隙灯下观察大鼠EAU的症状,造模后第14天制备大鼠视网膜切片,以苏木精-伊红染色法进行组织病理学观察,参照Caspi的标准对EAU症状及组织病理学分级进行评分。应用免疫组织化学染色法检测各组大鼠视网膜中炎性因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-17（IL-17）的表达情况。结果造模后6d模型对照组大鼠EAU炎症评分逐渐升高,12d达到高峰,然后逐渐下降。雷帕霉素组大鼠EAU炎症评分变化呈现相同的趋势,但各时间点EAU炎症评分均明显低于模型对照组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。视网膜组织病理学研究表明,模型对照组大鼠视网膜结构紊乱,大量炎性细胞浸润,组织病理学评分为3．30±0．48,而雷帕霉素组视网膜结构接近正常,组织学评分为0．90±0．45,差异有统计学意义（t=16．541,P〈0．01）。雷帕霉素组IFN-γ、IL-17在大鼠视网膜中的表达量（A值）分别为21．16±4．23和49．86±6．59,明显低于模型对照组的62．14±7．32和124．85±6．33,差异均有统计学意义（q=33．334、q=56．923,P〈0．01）。结论雷帕霉素通过抑制EAU视网膜中IFN-γ、IL-17等炎性因子的表达而对EAU发挥治疗作用,其机制可能是通过抑制Th1、Th17细胞群来实现的。     

Blockade of interleukin-6 signaling suppresses not only th17 but also interphotoreceptor retinoid binding protein-specific Th1 by promoting regulatory T cells in experimental autoimmune uveoretinitis

PURPOSE. Both Th17 and Th1 cells contribute to experimental autoimmune uveoretinitis (EAU). Interleukin-6 (IL-6) blockade inhibits Th17 differentiation in EAU and potently suppresses ocular inflammation, although its effect on Th1 cells is unknown. To clarify the mechanism of IL-6 blockade, the authors investigated T helper cells with particular focus on Th1 and regulatory T cells (Treg) in EAU of IL-6 gene knockout (KO) mice. METHODS. EAU was induced in wild-type (WT) mice and in mice lacking IL-6 (IL-6KO), IL-17 (IL-17KO), and IFN-γ (GKO) on a C57BL/6 background. Clinical scores of EAU, cytokine levels in supernatants from ocular tissue homogenates, and T helper cell differentiation in lymph nodes in each mouse were examined. To study the roles of Treg cells, EAU was induced in IL-6KO mice treated with anti-CD25 monoclonal antibody (mAb) to deplete Treg cells in vivo. RESULTS. Inflammation was comparable between WT, IL-17KO, and GKO mice but was absent in IL-6KO mice. Th17 and interphotoreceptor retinoid binding protein (IRBP)-specific Th1 cells were increased in GKO and IL-17KO mice, respectively, whereas both populations were reduced in IL-6KO mice. Th1-dominant EAU in IL-17KO mice was suppressed by anti-IL-6R mAb treatment. Treg cell depletion in vivo induced EAU in IL-6KO mice. CONCLUSIONS. After the induction of EAU, IL-6 deficiency resulted in the inhibition of the IRBP-specific Th1 response and enhanced the generation of IRBP-specific Treg cells. Furthermore, Treg was needed to inhibit Th1 responses and ocular inflammation in IL-6KO mice. Protective effects of IL-6 signaling blockade in EAU involve not only Th17 cell inhibition but also IRBP-specific Treg cell promotion.     

龙胆泻肝汤对葡萄膜炎大鼠关键炎症细胞因子表达的影响

目的 探讨龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠关键炎症细胞因子表达的影响.方法 Lewis大鼠随机分为对照组(6只)、EAU组(18只)和LXT组(18只).光感受器间维生素A结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein,IRBP)免疫EAU组和LXT组大鼠,对照组大鼠注射等量不含IRBP的乳化液.使用实时荧光定量PCR及ELISA方法检测血液、淋巴结和脾脏中IFN-γ、IL-17、TNF-α和IL-10细胞因子在EAU大鼠体内治疗前后的变化情况.结果 LXT组大鼠全血中IFN-γ mRNA表达在第8天虽然高于对照组(P=0.000),但已显著低于EAU组(P=0.000);LXT组IL-17 mRNA在第12天达峰值,显著低于EAU组(P=0.000),且均显著高于对照组(P=0.000);TNF-α mRNA仅在第12天显著高于对照组(P=0.000),但低于EAU组(p=0.000);IL-10 mRNA表达在第16天高于EAU组(P =0.042).LXT组大鼠淋巴结和脾脏中IFN-y、IL-17和TNF-α mRNA表达在第12天显著低于EAU组(均为P =0.000);LXT组淋巴结中IL-10 mRNA表达在第8天开始显著高于对照组(P=0.001),且在整个炎症期均维持在较高水平;LXT组脾脏IL-10 mRNA表达在第12天达峰值,且高于对照组和EAU组(均为P=0.000).LXT组大鼠血清中IFN-y、IL-17和TNF-α蛋白表达水平在第12天和第16天均低于EAU组(均为P＜0.05);EAU组和LXT组血清中IL-10蛋白表达在第12天均高于对照组(均为P ＜0.05),第16天达峰值,但LXT组IL-10蛋白含量更高.结论 龙胆泻肝汤通过抑制IFN-γ、IL-17和TNF-oα相关炎症因子的表达发挥其抗炎作用,促进IL-10的表达,加速自身免疫炎症的恢复.龙胆泻肝汤可通过多种途径在EAU的治疗中发挥免疫调节作用.