小窝蛋白1与脑梗死相关性研究进展

小窝蛋白1(caveolin-1,Cav-1)是小窝中的一种支架蛋白和胆固醇结合蛋白,是细胞膜穴样内陷的主要结构成分,在脂质转运、细胞生长分化、血管生成等方面有着重要的作用。Cav-1在中枢神经系统的内皮细胞、周细胞、星形胶质细胞等许多细胞中表达。现有研究表明Cav-1与多种中枢神经系统疾病之间存在密切联系,本文简要概述Cav-1与脑梗死的关系。     

小窝蛋白-1与肿瘤研究进展

1　小窝蛋白家族概要小窝 (caveolae)为一种非包被的细胞小囊 /小泡 ,有胞膜小窝、胞膜穴样内陷两种形式单独或成簇存在于多种细胞表面 ,成纤维细胞、脂肪细胞、Ⅰ型肺泡细胞、上皮细胞、平滑肌及骨骼肌细胞中丰度最高。小窝蛋白 (caveolin)为小窝的主要组分 ,属整合膜蛋白。小窝蛋白家族 (caveolinfamilyproteins)包括caveolin 1、caveolin 2和caveolin 33种。它们的功能可能是作为小窝膜内支架蛋白、组织并浓缩特异脂质 (胆固醇和鞘糖脂 )和修饰信号传导分子 (Src样激酶、H Ras、eNOS、G蛋白 )。caveolin 1由Clenney等发现 ,分子量 2 …     

小窝与心脏细胞信号转导研究概况

随着近年生物学技术的进展,人们对小窝结构及小窝蛋白的研究逐渐深入。研究发现,小窝蛋白是小窝的标志性蛋白,小窝含有丰富胆固醇的膜微区,是许多重要的信号转导的枢纽,对维持细胞功能及细胞的生物学行为起关键性的影响,进而与机体的生理病理学变化相关。在心脏细胞上,对小窝及小窝蛋白的研究有助于探索心脏疾病的发生发展。本文简述了近年来心脏细胞上信号转导与小窝关系的研究概况。     

小窝蛋白研究进展

对小窝蛋白家族的生理功能及不同亚型小窝蛋白在肿瘤发生、发展中的作用予以综述。     

乳腺癌组织小窝蛋白-1的表达

目的:探讨小窝蛋白-1在乳腺癌发生、发展及转移中的作用及其临床病理相关性.方法:采用免疫组化方法检测了120例乳腺癌组织小窝蛋白-1的表达情况,并结合临床、病理特征进行分析.结果:小窝蛋白-1阳性表达率在临床分期Ⅰ期(69.05%,29/42),Ⅱ期(66.68%,36/54)明显高于Ⅲ期(37.50%,9/24);无腋淋巴结转移组(73.47%,36/49)高于腋淋巴结转移组(53.52%,38/71);ER( )组(70.69%,41/58)高于ER(-)组(53.23%,33/62);HER-2( )组(47.06%,16/34)低于HER-2(-)组(67.44%,58/86),差异有显著性(P<0.05).PR( )组(64.71%,33/51)高于PR(-)组(59.42%,41/69);组织学分级Ⅰ级(74.29%,26/35),Ⅱ级(56.90%,33/58),Ⅲ级(55.56%,15/27)之间差异无显著性(P>0.05).结论:小窝蛋白-1表达与乳腺癌的发展、转移及HER-2表达负相关,与ER表达正相关,提示其是一个抑癌基因,表达下调可以促进乳腺癌的发展、转移;其生物学功能发挥与ER和HER-2关系密切.     

高氧肺损伤形成过程中小窝蛋白-1、TGF-β1表达关系的体内外研究

目的通过建立高氧肺损伤动物模型和体外细胞培养的方法,从体内和体外两方面来研究小窝蛋白-1(caveolin-1)和TGF-β1的表达关系,以探讨其发病机制。方法 (1)体内实验:建立早产鼠高氧肺损伤模型。于给氧后1、3、7d留取肺组织标本,在光学显微镜下观察肺组织形态学变化,免疫组织化学法检测相应时间点小窝蛋白-1、TGF-β1的表达水平。(2)体外实验:建立高氧A549细胞损伤模型。于给氧后12、24、48h收集细胞,免疫荧光双染检测相应时间点小窝蛋白-1、TGF-β1表达水平的相关性。结果 (1)体内结果:小窝蛋白-1在对照组肺组织中均有较高水平表达。与对照组比较,高氧组肺组织caveolin-1的表达水平出现降低,在3、7d明显降低(P<0.05);TGF-β1在对照组肺组织中均有较低水平表达。与对照组比较,高氧组肺组织TGF-β1的表达水平升高,在3、7d明显升高(P<0.05)。(2)体外结果:对照组,小窝蛋白-1的高表达伴随着TGF-β1的低表达;高氧组,随着通氧时间的延长,小窝蛋白-1表达逐渐减弱,TGF-β1表达逐渐增强。结论在高氧肺损伤的发生、发展过程中,Caveolin-1表达显著性减少,TGF-β1表达持续性增多,二者呈拮抗关系,提示Caveolin-1可能通过下调TGF-β1的产生而具有抗纤维化能力。     

小窝蛋白-1在CTD-ILD肺组织中的表达及TGF-β1对其表达调控的体外研究

目的:了解小窝蛋白-1(Caveolin-1)在结缔组织病相关肺间质病变(CTD-ILD)患者肺组织中的表达,及转化生长因子-β1(TGF-β1)对小窝蛋白-1在人肺成纤维细胞(HLF)中表达的影响。方法:CTD-ILD患者及正常对照肺组织冰冻切片行小窝蛋白-1免疫荧光染色;原代人肺成纤维细胞培养、鉴定,选用11～20代HLF,以终浓度分别为0、1、3、5、10、15μg/L的TGF-β1诱导24h以及浓度为10μg/L TGF-β1分别诱导0、6、12、24、48h,用定量PCR及Western Blot方法检测小窝蛋白-1mRNA及蛋白表达变化,实验重复3次。并且于HLF中加入10μg/L TGF-β1诱导24h,观察诱导前后小窝蛋白-1的荧光表达变化。结果:小窝蛋白-1在CTD-ILD患者肺间质中的表达与对照组相比减弱;小窝蛋白-1主要表达于人肺成纤维细胞的胞膜上,经TGF-β1诱导可使其表达减弱,且呈现一定的浓度和时间依赖趋势。与TGF-β1 0μg/L(对照组)相比,小窝蛋白-1mRNA表达在5、10、15μg/L TGF-β1组均下降,差异均有统计学意义(P<0.01);而小窝蛋白-1的蛋白表达仅在10、15μg/LTGF-β1组有减少,差异有统计学意义(P<0.01)。以TGF-β1作用0h组为对照,小窝蛋白-1mRNA表达在TGF-β1作用6h、12h、24h、48h组均有下降,差异均有统计学意义(P<0.01);而小窝蛋白-1蛋白表达则在TGF-β1作用24h、48h组下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:小窝蛋白-1在CTD-ILD患者肺组织中的表达减少,TGF-β1可诱导小窝蛋白-1表达下降,小窝蛋白-1的下调可能参与了CTD-ILD的发生和发展。     

低强度脉冲超声对兔桡骨骨折愈合及小窝蛋白-1基因表达的影响

 目的 探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound, LIPUS)对长管状骨骨折愈合的作用,测定LIPUS作用下兔桡骨骨折部位小窝蛋白-1(caveolin-1)局部表达情况。方法 在24只新西兰白兔双侧桡骨中下1/3处制作宽为3 mm的骨缺损模型,按随机数字表法平均分为4组(n=6)。右侧桡骨骨折处给予强度为30 mW /cm2的LIPUS刺激,每天1次,每次20 min,左侧桡骨骨折处给予切断电源的假刺激。各组实验动物分别于术后第7、14、21、28天,采用X 线片、HE染色评价骨折愈合情况,免疫组化染色检测小窝蛋白-1水平与定位,实时荧光定量PCR检测小窝蛋白-1、软骨和骨特异基因Col2a1、Col10a1及骨钙蛋白(osteocalcin)的mRNA水平。结果 自第14天起,实验侧X线评分和矿化骨痂面积均显著大于对照侧,二者随治疗时间的延长而逐渐增高;HE染色提示实验侧软骨细胞分化、凋亡,形成原始骨小梁和骨小梁的融合等过程均早于对照侧。免疫组化染色显示术后第7、14天,随着软骨细胞的增殖、分化,小窝蛋白-1水平逐渐增加,实验侧显著大于对照侧;第21、28天,迁移至软骨基质表面的间充质细胞开始向成骨细胞分化,小窝蛋白-1水平降低,实验侧显著低于对照侧。实时荧光定量PCR结果显示:实验侧小窝蛋白-1mRNA水平在第7天显著高于对照侧,在第21天却显著低于对照侧;实验侧Col2a1,Col10a1及骨钙蛋白mRNA水平在第7、14天显著高于对照侧,在第21天却显著低于对照侧,在第28天实验侧Col2a1和骨钙蛋白mRNA水平显著低于对照侧。结论 LIPUS可通过促进软骨内成骨加速长管状骨骨折愈合,推测可能与先上调软骨细胞,随后下调间充质细胞小窝蛋白-1的表达有关。     

肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与肝再生研究进展

肝脏具有极强的调节自身生长发育和体积大小的能力,当受到损害或部分切除后,“静止”的肝细胞进入细胞增殖周期,开始再生。其中肿瘤坏死因子-α（Tumornecrosisfactor-α,TNF-α）在肝细胞的这种既进行细胞分裂又行使细胞功能的完美结合过程中既发挥着信号启动的关键作用,又在多种肝损伤中,发挥着细胞毒性作用。现将TNF-α与肝再生的相关研究进展综述如下。     

塞来昔布联合洛伐他汀下调前列腺癌细胞小窝蛋白-1的表达及下游信号分子的激活

目的探讨塞来昔布和洛伐他汀对前列腺癌细胞小窝蛋白-1表达及下游信号分子的影响。方法体外培养前列腺癌细胞PC-3,Mrrr检测塞来昔布和洛伐他汀对其增殖的影响。用IC50浓度的塞来昔布和洛伐他汀与PC-3孵育,Westernblot检测小窝蛋白-1的表达以及Akt、ERKI／2和STAT3的磷酸化水平。结果PC-3细胞经洛伐他汀和塞来昔布处理24h后,IC50值分别为25μM和50μM;塞来昔布或洛伐他汀单独处理PC-3细胞24h,能轻微下调小窝蛋白-1的表达,当两者联合使用时,能使小窝蛋白-1水平进一步降低;洛伐他汀、塞来昔布能抑制EGF诱导的Akt、ERK1／2和STAT3磷酸化,当两者共同处理PC-3细胞时,能进一步抑制其磷酸化水平。结论塞来昔布能协同洛伐他汀下调前列腺癌细胞小窝蛋白-1的表达,从而可能影响下游信号分子的激活。     

A Second Protein Marker of Caveolae：Caveolin-2

Caveolin-2,a protein about 20 kD,is a major component of the inner surface of caveolae,small invaginations of the plasma membrane.Similar with caveolin-1 and caveolin-3,it serves as a protein marker of caveolae.Caveolin-1 and-2 are located next to each other at 7q31.1 on human chromosome,the proteins encoded are co-localized and form a stable hetero-oligomeric complex,distributing similarly in tissue and cultured cells.Caveolin-3 is located on different chromosomes but confirmed to interact with caveolin-2.Caveolin-2 is similar to caveolin-1 in many respects but differs from the latter in functional domains,especially in G-protein binding domain and caveolin scaffolding domain.The mRNAs of both caveolin-1 and caveolin-2 are most abundantly expressed in white adipose tissue and are induced during differentiation of 3T3-L1 cells to adipocytes.Caveolin-2-deficinet mice demonstrate clear pulmonary defects,with little or no change in caveolin-1 expression and caveolae formation,suggesting that caveolin-2 plays a selective role in lung functions.Caveolin-2 is also involved in lipid metabolism and human cancers.     

Caveolin-1在慢性肝炎、肝硬化和肝癌组织中的表达

目的:Caveolin-1作为候选抑癌基因,在多种肿瘤均有异常表达,本研究探讨Caveolin-1在乙型肝炎、肝硬化和肝癌组织的表达特点。方法:采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色,在完全相同的实验条件下检测22例乙型肝炎、16例肝硬化和11例肝癌组织中Caveolin-1的表达状况。结果:免疫组化结果显示Caveolin-1在乙型肝炎、肝硬化和肝癌组织的阳性率分别为77.3%、68.8%和27.3%;肝癌与其它两组间(慢性肝炎、肝硬化)的阳性率有显著性差异(x2=-2.868,P=0.007;x2=-2.296,P=0.03)。肝硬化较肝炎的Caveolin-1阳性率低,但无统计学意义(x2=-0.512,P=0.612)。结论:Caveolin-1在肝细胞中的表达水平随着肝癌的发生呈进行性下调乃至缺失。     

Caveolin-1蛋白对肝细胞癌ERK信号转导通路的影响

目的:研究小窝蛋白-1(Caveolin-1)和细胞外信号调节激酶-1(ERK-1)蛋白在肝细胞癌中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测30例肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织及10例正常肝组织中Caveolin-1蛋白和ERK-1蛋白的表达。结果:①Caveolin-1蛋白在正常肝组织、癌旁肝组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为90%、13.33%、10%。ERK-1蛋白在正常肝组织、癌旁肝组织、肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为30%、56.67%、83.33%。Caveolin-1蛋白和ERK-1蛋白在不同组织间差异均有统计学意义(P<0.05);②Caveolin-1蛋白与ERK-1蛋白的表达在肝细胞癌中呈负相关(r=-0.447,P<0.05)。结论:①Caveolin-1蛋白可能在肝细胞癌的形成过程中起抑制作用。②Caveolin-1蛋白表达下调从而可能激活ERK-1蛋白,使ERK细胞信号转导通路失去正常的协调平衡可能是导致肿瘤发生的重要因素。     

Caveolin-1结合Cyclophilin A改善大鼠血管平滑肌细胞胆固醇蓄积

观察caveolin-1和cyclophilin A在血管平滑肌细胞荷脂过程中的表达变化及其对细胞内胆固醇蓄积的影响。实验采用Western-blot、免疫荧光法分别定量,定位检测caveolin-1和cyclophilin A蛋白的表达;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况;高效液相检测细胞内外总胆固醇含量;免疫共沉淀检测caveolin-1和cyclophilin A相互作用。结果显示,随着荷脂时间延长,caveolin-1和cyclophilin A的蛋白表达逐渐减弱;细胞内脂滴形成逐渐增多,细胞内总胆固醇含量不断增加;caveolin-1和cyclophilin A在大鼠血管平滑肌细胞中相互结合,并且cyclophilin A活性抑制后,与caveolin-1结合能力减低,而细胞内胆固醇含量增加。这提示,caveolin-1和cyclophilin A在血管平滑肌细胞内可相互结合,并参与改善细胞内胆固醇蓄积。     

外周血单个核细胞caveolin-1的表达在新诊断2型糖尿病患者中的变化及其与胰岛素抵抗的关系

【目的】 探讨窖蛋白-1(caveolin-1)在新诊断2型糖尿病患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平,并分析其与胰岛素抵抗的关系。【方法】 检测47例新诊断2型糖尿病患者和41例正常血糖对照者PBMC中caveolin-1 mRNA和蛋白的表达,分析caveolin-1 mRNA表达与体质指数(BMI)、腰围、臀围、腰臀比、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模型的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和血脂的相关性。【结果】 新诊断2型糖尿病患者PBMC中caveolin-1 mRNA和蛋白水平均明显低于对照组(P < 0.05),且其caveolin-1 mRNA水平与FPG?HbA1C?HOMA-IR及甘油三酯(TG)呈负相关(r分别为-0.376?-0.294?-0.309?-0.397,P均 < 0.05),以caveolin-1 mRNA为因变量,年龄、性别、BMI、臀围、FPG、logFINS、logHOMA-IR、HbA1C、TG为自变量,进行多重线性逐步回归分析,结果显示HbA1C是caveolin-1 mRNA 的独立影响因素. 【结论】 Caveolin-1在新诊断2型糖尿病患者PBMC中表达较正常血糖人群下降,其低表达与新诊断2型糖尿病高血糖及胰岛素抵抗相关.     

大肠癌组织中小窝蛋白1的表达及意义

目的探讨小窝蛋白1(Caveolin-1)在正常结直肠粘膜、结直肠癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化S-P法,检测82例结直肠癌组织、40例正常结直肠粘膜组织中Caveolin-1的表达水平。结果在结直肠正常粘膜和癌组织中Caveolin-1的表达存在显著差异(P=0.001),癌组织中Caveolin-1表达阳性率(42.68%)明显低于正常粘膜组织(75.00%)。在结直肠癌组织中,Caveolin-1蛋白表达阳性率与结直肠癌的浸润深度呈负相关(P=0.028),且伴发淋巴结转移的结直肠癌组织比未发生转移的结直肠癌组织Caveolin-1表达阳性率明显减弱(31.11%vs.56.76%),差异有统计学意义(P=0.019)。结论Caveolin-1的低表达与结直肠癌的发生、浸润和转移密切相关。     

Caveolin-1在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤分期和分级的关系

目的探讨Caveolin-1在正常结肠黏膜上皮、慢性结肠炎、结肠腺瘤和结肠癌组织中的表达特点及其与结肠癌分期、分级之间的关系。方法采用免疫组化方法检测20例正常结肠黏膜上皮、17例慢性结肠炎、11例结肠腺瘤和55例结肠癌组织中Caveolin-1的表达;RT-PCR方法检测不同结肠癌组织中Caveolin-1的表达;比较结肠癌中Caveolin-1表达结果和肿瘤分期、分级之间的关系。结果免疫组化结果显示Caveolin-1在结肠癌组织中表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和免疫组化结果都显示结肠癌Dukes分期与其Cave-olin-1表达与否无相关性(P>0.05);而其病理分级与Caveolin-1表达与否相关(P<0.05),肿瘤分级越高,分化越差,Caveolin-1表达越低。结论Caveolin-1在结肠癌上皮细胞中的表达水平呈特异性降低,这与肿瘤分期无关,随肿瘤分级上升而降低。     

小窝蛋白-1的表达与胶质瘤细胞增殖的相关性研究

目的 研究小窝蛋白-1(caveolin-1)在人胶质瘤中的表达,探讨其在胶质瘤的发生、发展及细胞增殖中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测80例胶质瘤和9例正常脑组织中caveolin-1与增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果 caveolin-1在正常脑组织中全部阳性表达.80例胶质瘤中39例caveolin-1呈阳性表达,其在低级别胶质瘤中的阳性表达率高于高级别胶质瘤(P＜0.05);PCNA在正常脑组织中未见表达,80例胶质瘤中55例呈阳性表达,其在高级别胶质瘤中的阳性表达率高于低级别胶质瘤(P＜0.05).caveolin-1与PCNA在胶质瘤中的表达呈负相关性(r=-0.368,P＜0.01).结论 caveolin-1在胶质瘤中的表达对肿瘤细胞增殖起抑制作用,为胶质瘤的基因治疗提供了一个新的靶点.PCNA可作为反映胶质瘤细胞增殖、恶性程度及预后的指标之一.     

不同分子区域的Caveolin-1真核表达载体构建及其对Caveolin-1基因敲除小鼠系膜细胞周期的影响

目的:构建含不同分子区域的caveolin-1真核表达质粒,转染caveolin-1基因敲除小鼠(Cav-1-/-)的肾小球系膜细胞,观察能否逆转系膜细胞周期阻滞。方法:首先从pLHCX-N-FLAG2/caveolin-1全长质粒中扩增cave-olin-1 N末端(第1-82位氨基酸)、N末端+脚手架区(第1-101位氨基酸)的cDNA片段,同时在引物两端加上限制性酶切位点HindⅢ及XhoⅠ,再与复制缺陷型逆转录病毒表达载体pLHCX-N-FLAG3连接。完成酶切和测序鉴定后将pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLHCX-N-FLAG3/cav-1-101分别转染HEK293T细胞,包装产生有感染力的病毒颗粒,再分别感染Cav-1-/-系膜细胞,流式细胞分析观察能否逆转细胞周期阻滞。结果:成功构建含caveolin-1 N末端、N末端+脚手架区片段的重组真核表达载体,流式细胞分析发现pLHCX-N-FLAG3/cav-1-82和pLH-CX-N-FLAG3/cav-1-101基因导入Cav-1-/-系膜细胞,可逆转G0/G1细胞周期阻滞。Vcaveolin-1可能主要通过N末端第1-82位氨基酸区域参与细胞周期进程,具体机制还需进一步研究。     

Caveolin-1在子宫颈癌及上皮内瘤中的表达及其与VEGF的关系

研究小凹蛋白-1(Caveolin-1)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常宫颈、慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和浸润性宫颈癌组织中的表达,以及与宫颈癌临床病理特征的关系,同时探讨Caveolin-1和VEGF的相关性。方法以正常子宫颈组织30例为对照,应用免疫组织化学SP法检测慢性宫颈炎40例、CINⅠ-Ⅱ级30例、CINⅢ级20例、浸润性宫颈癌40例(TNM分期Ⅰ期21例和Ⅱ期19例)的Caveolin-1、VEGF的表达水平。结果Caveolin-1蛋白在正常宫颈、慢性宫颈炎、CINⅠ-Ⅱ级、CINⅢ级及浸润性宫颈癌组织中的阳性表达率分别为100.00%(30/30)、95.00%(38/40)、83.33%(25/30)、75.00%(15/20)和72.50%(29/40),呈渐进性降低(P<0.05);而VEGF蛋白在正常宫颈、慢性宫颈炎、CINⅠ-Ⅱ级、CINⅢ级及浸润性宫颈癌组织中的阳性表达率分别为10.00%(3/30)、15.00%(6/40)、26.67%(8/30)、45.00%(9/20)和90.00%(36/40),呈渐进性增高(P<0.05)。Caveolin-1、VEGF蛋白在宫颈癌中的表达与年龄、TNM分期无关(P>0.05),与病理分级、浸润深度、区域淋巴结转移有明显关系(P<0.05);Caveolin-1蛋白的表达与肿瘤大小有关系(P<0.05),而VEGF蛋白的表达与肿瘤大小无关(P>0.05)。浸润性宫颈癌及CINⅢ级中Caveolin-1蛋白与VEGF蛋白的表达呈负相关性(列联系数C分别为0.498、0.538,均P<0.05)。结论 Caveolin-1、VEGF是宫颈癌发生中的早期事件,两者可能通过相反的作用机制参与宫颈癌的发生、发展及血管生成过程。