自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究

目的:探讨兔自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的效果.方法:结扎左前降支建立兔心梗模型.抽取骨髓进行干细胞分离和培养.培养基对照组的心肌瘢痕区注入培养基;间充质干细胞组注入骨髓间充质干细胞,单个核细胞组注入骨髓单个核细胞,移植4周后观察各组心功能、病理变化及细胞的存活情况.结果:间充质干细胞组和单个核细胞组移植4周后,超声检查左室射血分数、短轴缩短率均较对照组改善(P＜0.05);间充质干细胞组梗死区有细胞存活.结论:自体骨髓干细胞移植治疗急性心梗可改善心功能;骨髓间充质干细胞可在心肌内存活.     

骨髓动员与骨髓细胞移植对急性心肌梗死治疗作用的比较研究

目的:比较骨髓间充质干细胞移植和骨髓动员对急性心肌梗死再通模型心功能作用,及两者的心肌及血管再生作用.方法:将小型猪模型分为3组,对照组(5头),骨髓动员组(6头),细胞移植组(8头).心肌梗死再通模型制作后,骨髓动员组予人重组粒细胞集落刺激因子静脉注射1天,皮下注射连续5天,细胞移植组予骨髓间充质干细胞(4～8)×106经梗死相关冠脉注入.3周后观察以下指标:(1)超声心动图检测左室射血分数.(2)免疫组织化学染色,行不同区域血管计数,并观察增殖期内皮细胞和心肌细胞或再生心肌细胞.结果:(1)骨髓动员组和细胞移植组心功能明显改善.(2)细胞移植组在心肌梗死周围区可见分散分布的BrdU标记并分化为心肌细胞的移植细胞,骨髓动员组中亦观察到处于增殖期的心肌细胞;细胞移植组和骨髓动员组均可见大量新生血管,但二者分布区域不同.结论:骨髓动员及骨髓间充质干细胞移植均可明显改善心肌梗死后心功能,二者可促进心肌细胞再生,二者对不同区域的血管再生作用不同.     

阿托伐他汀联合间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的观察骨髓间充质干细胞与阿托伐他汀联合应用对大鼠急性心肌梗死心功能的疗效,并与单纯骨髓间充质干细胞移植作比较。方法①骨髓间充质干细胞的提取、培养、标记:提取鼠骨髓液,经离心后贴壁法培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,传代后,5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记备用。②建立急性心肌梗死模型。将建模成功的40只大鼠分成4组。③细胞移植:在梗死区边缘4个不同部位注射植入标记后的骨髓间充质干细胞。④药物喂养:采用灌胃的方法,喂养阿托伐他汀5 mg/(kg.d)。⑤术后4周,测定大鼠左室收缩压、舒张末压、压力变化最大上升与最大下降速率,检测细胞移植情况及新生血管密度。结果①细胞培养:刚提取的干细胞呈圆形,培养24 h后,细胞贴壁明显,培养液中含有杂质,换液传代后,细胞形态一致,呈梭形。②细胞表面抗原鉴定:传代后的骨髓间充质干细胞CD31、CD45表达阴性;而CD44、CD54表达阳性。③大鼠血流动力学检测:与对照组、阿托伐他汀组相比,间充质干细胞移植组与联合组左室收缩压、压力变化最大上升与最大下降速率均明显升高,舒张末压明显降低,联合组改善程度更明显;④大鼠心脏组织学检测:间充质干细胞移植组、联合组大鼠梗死心肌内可见5-溴脱...     

心复康联合骨髓间充质干细胞移植对濒死心肌的保护作用

[目的]探讨中药心复康联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植在大鼠急性心肌梗死后对濒死心肌的保护作用及其机制。[方法]经密度梯度离心联合贴壁筛选法培养并纯化BMSCs,采用冠状动脉结扎法建立大鼠急性心肌梗死模型,移植前以5-溴脱氧尿核苷(Brdu)对移植细胞进行标记,术后采用中药心复康灌胃联合干细胞移植治疗。治疗后2周处死动物,免疫组织化学方法检测心肌损伤区Brdu阳性移植细胞数、CD34⁺新生血管数和细胞增殖核抗原(PCNA)阳性心肌细胞数量。[结果]心复康联合干细胞移植治疗组移植细胞存活率增加(与细胞移植组比较P<0.05),梗死边缘区新生血管数量及PCNA阳性心肌细胞数量均有所增加(与细胞移植组比较P<0.05)。[结论]中药心复康联合干细胞移植对大鼠急性心肌梗死后濒死心肌细胞有明显的保护作用,其机制可能与心复康联合干细胞移植能更有效的促进损伤区血管新生有关。     

内皮祖细胞移植治疗糖尿病大鼠下肢动脉缺血的动脉造影改变

目的 对比观察内皮祖细胞(EPCs)和骨髓单个核细胞移植治疗糖尿病大鼠下肢动脉缺血的动脉变化.方法 将雄性Wistar大鼠30只诱导成糖尿病模型,其中25只成模,成模鼠结扎左下肢股动脉制造下肢缺血模型,此后随机分成3组,分别给于生理盐水(A组,n=7),内皮祖细胞(B组,n=9),骨髓单个核细胞(C组,n=9),沿股动脉走向、多点肌肉注射.继续喂养28 d后行下肢动脉造影检测下肢血流.结果 动脉造影结果显示EPCs移植治疗组缺血侧下肢动脉显影血管数多于对照组(P<0.05); EPCs移植治疗组血管数多于骨髓间充质干细胞移植治疗组,但无统计学差异.结论 EPCs移植治疗对糖尿病大鼠下肢缺血效果明确.     

骨髓间充质干细胞对肥大心肌细胞脂肪酸代谢影响的体外研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞对肥大心肌细胞脂肪酸代谢的影响及其机制.方法:体外培养的Wistar新生大鼠心肌细胞随机分为3组:正常对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用组、骨髓间充质干细胞干预组,采用免疫荧光显微镜测定心肌细胞核因子NF-кB和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)PPARγ、PPARα的活性,紫外分光光度法检测心肌细胞内游离脂肪酸(FFA)含量.结果:AngⅡ刺激乳鼠心肌细胞NF-кB活性增强,抑制PPARα和PPARγ活性减弱,增加心肌细胞内FFA蓄积(P<0.01);MSCs干预组心肌细胞NF-кB活性及心肌细胞内FFA含量较AngⅡ作用组显著降低(P<0.01和P<0.01)而PPARα和PPARγ活性增强(P<0.05和P<0.01).结论:骨髓间充质干细胞可改善肥大心肌细胞的脂肪酸代谢,这可能是骨髓间充质干细胞移植改善心功能作用机制之一,NF-кB及PPARs可能是其作用的信号通路之一.     

骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及向心肌样细胞转化的条件及可行性。方法：取Wistar大鼠胫骨、股骨干骨髓,采用贴壁法进行间充质干细胞的培养、传代,观察经5 氮胞苷(5 azacytidine,5 Aza)诱导后骨髓间充质干细胞的生长和分化,并检测其α 肌动蛋白（α actin）和肌钙蛋白I（cTnI）的表达。结果：大鼠骨髓干细胞贴壁呈集落生长,5 Aza诱导后的骨髓干细胞形态类似心肌细胞,α actin和cTnI表达阳性。结论：骨髓干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,为心肌细胞移植提供了一种良好的细胞来源。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠实验性心肌梗死的治疗作用

目的：探讨粒细胞集落刺激因子（G0CSF）动员的自体骨髓来源的干细胞对大鼠急性心肌梗死动物模型的治疗作用。方法：用异丙肾上腺素（ISO）复制大鼠急性心肌梗死动物模型，用骨髓干细胞动员剂G－CSF动员自体骨髓干细胞释放和迁移至心肌梗死部位，于用ISO后24，48h和2周后杀死大鼠，取出心脏，用免疫组化和HE染色方法检测动物模型心梗区的CD34^ 单个核细胞浸润以及心肌细胞和血管的再生情况。结果：用ISO后24h,G-CSF处理组大鼠心梗区可见大量CD34^ 单个核细胞浸润，并用CD34^ 的新生心肌细胞生长，2周后瘢痕组织较少，毛细血管浸密度明显高于对照组，而用ISO后24h，对照组心梗坏死区有大量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润，无CD34^ 细胞浸润及新生心肌细胞生长，2周后出现较大量的瘢痕组织。结论：G－CSF能促进心肌梗死后心肌细胞和血管的再生，减小心肌梗死的范围，用G－CSF动员自体骨髓干细胞来修复坏死心肌组织的“干细胞自身移植”疗法，可用于急性心肌梗死的治疗。     

整合素连接激酶修饰的骨髓间充质干细胞改善大鼠梗死后心脏心功能

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)对心肌梗死后心脏心功能的影响。方法:取大鼠骨髓体外分离扩增培养MSCs,分别用ILK、ILK-siRNA及对照GFP腺病毒转染MSCs。结扎大鼠心脏左前降支1h后,分别将GFP-MSCs、ILK-MSCs、ILK-siRNA-MSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,对照组注射等量PBS。结果:细胞移植4d后与GFP-MSCs移植组相比,ILK-MSCs组存活细胞数目明显增多,而ILKsiRNA-MSCs移植组存活细胞明显减少(P<0.05)。细胞移植3周后与GFP-MSCs移植组相比,ILK-MSCs组新生血管数目明显增多,且胶原蛋白沉积减少,梗死面积明显缩小,心功能各项指标明显改善(P<0.05);而ILK-siRNA-MSCs移植组新生血管数目明显减少,胶原蛋白沉积增多,梗死面积明显增加,心功能各项指标明显恶化(P<0.05)。结论:ILK增加MSCs存活率、促进梗死后心脏血管新生,从而抑制心室重构,改善心功能。     

人脐带间充质干细胞向心肌细胞诱导分化并体内移植的研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(MSCs)经5-氮杂胞苷(5aza)诱导后能否向心肌样细胞分化及诱导后细胞移植到心肌梗死大鼠心脏后能否存活,为心肌细胞的移植探索新的细胞来源。方法从人脐带华尔通氏胶培养出MSCs,检测人脐带来源的MSCs的细胞表面标记。经5aza诱导,采用免疫组化方法及RT-PCR方法检测诱导后细胞能否表达心肌细胞标记物,诱导后细胞经5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记后移植到梗死心肌,观察移植后细胞能否存活。结果人脐带间充质干细胞经5aza诱导后能表达心肌细胞标记物,诱导后细胞移植到心肌梗死模型大鼠心肌后细胞能存活。结论人脐带间充质干细胞经5aza诱导能向心肌样细胞分化,诱导后细胞移植至体内能存活,人脐带间充质干细胞可以作为心肌细胞移植的来源。     

骨髓干细胞动员与移植治疗心肌梗死的比较

目的比较骨髓干细胞动员与骨髓单个核细胞移植对兔心肌梗塞的治疗作用,探讨更有效、更适用的干细胞治疗心肌梗塞的方法.方法将30支新西兰白兔采用结扎前降支的方法制作心肌梗塞模型,随机分为动员组、移植组和对照组,动员组(n=10)心梗后3h开始皮下注射粒细胞集落刺激因子(G-CSF)30μg/(kg·d),连续使用5 d,第5天抽取静脉血约10mL,分离单个核细胞(mononudear cells,MNCs)用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,Brdu)标记后,经静脉注入动物体内.移植组(n=10)心梗后7～10 d,抽取骨髓3～5mL,分离MNCs用Brdu标记,然后开胸将细胞移植至梗死区,对照组(n=10)不采取任何治疗措施.心梗后1周及5周采用超声心动图(UCG)检查了解心脏功能变化,5周时作血液动力学测定,取心脏作免疫组织化学鉴定.结果心梗后5周,动员组左室射血分数(EF)与1周时相比明显增加,移植组无变化,对照组显著下降.5周时动员组及移植组左室舒张末压(LVEDP)、+dp/dtmax和-dp/dtmax与对照组相比均有显著变化.动员组及移植组在心肌梗死区均发现有Brdu标记的阳性细胞,两组梗死区血管密度明显高于对照组,但均未发现有新生的平滑肌细胞及心肌细胞.结论骨髓干细胞动员治疗心肌梗死,能通过促进梗死区血管新生,明显改善心脏功能,骨髓单个核细胞移植可避免心功能的恶化,但在改善心功能方面的作用有限,骨髓干细胞动员可能为心肌梗塞的治疗提供一种更适用的无创性的手段.     

基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠急性心肌梗死的疗效观察

目的：探究基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠模型急性心肌梗死的治疗作用。方法：选取15 d龄SD乳鼠20只,平均分为观察组（血管内皮生长因子组）和对照组（DMEM组）两组,每组各10只大鼠,制备急性心急梗死模型后,观察组大鼠行基因修饰的骨髓间充质干细胞移植,对照组大鼠注射无血清DMEM,移植1个月后,观察两组大鼠的心脏功能情况。结果：观察组与对照组大鼠LVEF分别为（73.45±9.17）%、（43.26±6.33）%,观察组明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）;两组大鼠镜下均见左室瘢痕组织形成,有新生血管生成,并出现左室重塑特征,观察组大鼠心脏改变较对照组明显;观察组大鼠与对照组大鼠血管密度分别为（45.69±4.28）、（17.41±3.67）,观察组明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：血管内皮生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对急性心肌缺血大鼠具有良好的治疗作用。     

阿托伐他汀联合骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的 观察阿托伐他汀对骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的协同作用,并与单纯间充质干细胞移植作比较.方法 ① 间充质干细胞的提取、培养、标记.②建立急性心肌梗死模型.将大鼠分成4组,对照组:在梗死部位分4个点注射L-DMEM培养液,50 μl/点.阿托伐他汀组:梗死部位分4个点注射L-DMEM培养液,50 μl/点,阿托伐他汀5 mg/(kg*d) 溶入生理盐水2 ml, 灌喂4周.间充质干细胞组: 梗死部位分4点注射已标记的间充质干细胞,每点(50 μl) 2×106个.联合组:已标记的间充质干细胞注入梗死部位4个点, 每点(50 μl) 2×106个,阿托伐他汀5 mg/(kg*d),溶入生理盐水2 ml,灌喂4周.③术后4周, 测定大鼠左室收缩压、舒张末压、压力变化最大上升与最大下降速率, 检测细胞移植情况及新生血管密度.结果 ① 大鼠血流动力学检测: 与对照组、阿托伐他汀组相比, 间充质干细胞移植组与联合组左室收缩压、压力变化最大上升与最大下降速率均明显升高, 舒张末压明显降低, 联合组改善程度更明显.②大鼠心脏组织学检测:间充质干细胞移植组、联合组大鼠梗死心肌内可见5-溴脱氧尿嘧啶标记阳性细胞.③ 血管密度:联合组大鼠梗死心肌内血管密度高于其它组.结论阿托伐他汀联合应用骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性心肌梗死有协同作用, 其机制可能为阿托伐他汀通过促进血管新生提高间充质干细胞移植的存活率.     

同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠心脏的迁移及分化

目的探讨同种异体骨髓间充质干细胞(MSC)在大鼠心脏定居存活情况、同种异体移植是否可行。正常心脏微环境与梗死心脏微环境对骨髓间充质干细胞(MSC)迁移、分化的影响。方法雌性Wistar大鼠35只,①正常心脏MSC移植组(10只);②急性心肌梗死对照组(AMI,10只);③心肌梗死MSC移植组(10只);④单个核细胞治疗组(5只)。结扎左冠状动脉前降支造成心肌梗死模型。分离纯化来自雄性Wistar大鼠的骨髓MSC,于冠脉结扎后1～3h植入到雌性正常大鼠和心肌梗死大鼠心脏组织,模拟同种异体细胞移植治疗。于细胞移植后10周取心脏检测各种指标。结果(1)经纯化的大鼠MSC在同种异体大鼠心脏可定居、生存,而未经纯化的单个核细胞移植在同种异体大鼠心脏未见存活;(2)在正常心脏微环境中,带蓝色荧光的供体MSC细胞核呈小岛屿状分布,与宿主心肌纤维排列无关;而在心肌梗死模型大鼠心脏微环境中,蓝色细胞核分布广泛,呈椭圆形,似心肌细胞核,其排列方向与宿主心肌纤维排列方向一致,免疫组化检测胞浆心肌特异蛋白染色阳性。结论纯化的MSC具有免疫耐受特性,无需加用免疫抑制剂,可进行同种异体移植;同种异体MSC在正常心脏微环境中不发生迁移、分化;而在急性梗死大鼠心脏中具有向缺血梗死区迁移并分化为心肌样细胞的特点。     

通过miR-126修饰的骨髓间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能的实验研究

目的观察过表达miR-126的骨髓间充质干细胞心肌内注射对急性心肌梗死后大鼠心脏功能的改善情况。方法制备过表达miR-126的骨髓间充质干细胞(MSCmiR-126),通过冠脉结扎的方法制作大鼠急性心肌梗死模型,制备成功的模型随机分为三组:MSCmiR-126组(n=25)、骨髓间充质干细胞(MSC)组(n=25)及磷酸缓冲盐(PBS)对照组(n=25),各组动物分别于心肌梗死区注射相应细胞或试剂,6周后行超声心动图检查观察各组动物心脏功能情况,而后处死动物取出心脏,通过组织学方法观察各组动物心室重构的差异。结果 MSCmiR-126组超声心动图及组织学指标均优于MSC组,这两组又都优于PBS组,差异均具有统计学意义。结论移植经miR-126修饰的骨髓间充质干细胞能够明显改善大鼠心肌梗死后的心功能,效果优于普通骨髓间充质干细胞移植。     

骨髓单个核细胞移植对急性心梗大鼠血流动力学的影响

目的:评价局部移植骨髓单个核细胞对急性心梗大鼠缺血心肌血管生成作用及血流动力学的影响.方法:将26只Lweis大鼠随机分为移植组(n=14)及对照组(n=12),结扎大鼠左冠状动脉,建立急性心肌梗死模型.将新分离的骨髓单个核细胞注射到大鼠的缺血心肌中(对照组大鼠注射等量无菌PBS),术后4周观察心肌血管数目,结合心脏血流动力学参数评价心功能的改善情况.结果:4周后移植组与对照组相比左心室舒张末期压力明显降低(P＜0.01),压力变化率最大值(dp/dt)明显升高(P＜0.01,P＜0.05).移植组心肌梗死区有明显血管增生,移植组和对照组心肌血管密度分别为(23.1±1.5)和(10.5±1.8)个/HPF,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:局部移植骨髓单个核细胞能明显促进缺血心肌新生血管生成,增加缺血区灌注,并可在一定程度上改善其血流动力学指标.     

骨髓间充质干细胞诱导为神经样细胞后对大鼠脑缺血模型修复的研究

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导为神经样细胞后对大鼠脑损伤模型修复的情况。方法:取大鼠骨髓作骨髓间充质干细胞的分离和传代培养,贴壁法分离MSCs,并诱导其分化,将经诱导的细胞直接注射移植到大鼠脑缺血模型大鼠的脑组织,检测分化的神经细胞样细胞在神经系统微环境中存活及病理变化。结果:细胞移植组病理变化与脑损伤模型组相比,神经细胞变性、坏死数量明显变少,间质水肿较轻。结论:骨髓间充质干细胞诱导为神经样细胞后移植能改善脑损伤大鼠的功能。     

骨髓问充质干细胞体外培养表达平滑肌肌动蛋白的实验研究

目的观察骨髓间充质干细胞在无诱导因素干预下,自身表达平滑肌肌动蛋白（smooth muscle alpha-actin,α-actinSM）情况。方法采用直接贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代培养至第4代时,对间充质干细胞进行鉴定。利用抗α-actin SM荧光抗体,检测间充质干细胞胞质内α-actin SM表达,计算其阳性率。结果骨髓间充质干细胞在无诱导因素干预下,其自身即可表达平滑肌早期特异性标志α-actin SM,阳性率高达44.1%。结论骨髓间充质干细胞体外培养时,无需诱导因素干预,能够自发向平滑肌细胞方向分化。     

骨髓间充质干细胞诱导为血管内皮样细胞的实验研究

目的 探讨犬骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向血管内皮样细胞分化的机制.方法 骨髓穿刺获取犬骨髓,提取单个核细胞,取第2～4代细胞用含VEGF的培养液诱导,对细胞进行形态学观察和相关抗原的免疫荧光鉴定.结果 BMMSCs在含VEGF的培养液中诱导,2周后外观呈现鹅卵石样,免疫表型显示vWF阳性表达,透射电镜可见细胞具有血管内皮细胞的特点.结论 骨髓间充质干细胞可在体外分化为具有血管内皮细胞特性的细胞.     

大鼠胰岛细胞和骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病小鼠的研究

目的观察骨髓间充质干细胞诱导异种胰岛细胞移植的免疫耐受作用。方法4周龄SD大鼠作为供体,密度梯度离心法分离间充质干细胞,胶原酶消化法分离胰岛细胞,链脲佐菌素制备糖尿病模型BALB/C小鼠25只。将成模小鼠分为:A组(胰岛细胞联合骨髓间充质干细胞移植组)10只,B组(单纯胰岛细胞移植组)10只,均经门静脉注射途径注入肝脏,C组(对照组)5只,仅经门静脉注入等量生理盐水,比较各组血糖改善情况。结果两实验组均较对照组有显著差异,其中胰岛细胞联合间充质干细胞移植组效果优于单纯胰岛细胞移植组。结论骨髓间充质干细胞可以诱导小鼠对大鼠胰岛细胞的免疫耐受,延长胰岛细胞移植物的存活时间。