氮卓斯汀对哮喘豚鼠炎症细胞粘附功能的影响

目的研究组胺H1 受体拮抗剂氮卓斯汀(Azelastine ,AZT)对哮喘豚鼠炎症细胞粘附功能的影响,探讨氮卓斯汀拮抗哮喘气道炎症的可能机制。方法以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。采用密度梯度离心法分离并计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)和淋巴细胞(LC)的数量;采用ELISA法检测血浆和BALF中可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)和可溶性P选择素(sP S)的含量。通过荧光酶标记法在pharmaciaCAPSystem中测定血清和BALF中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)的水平。结果氮卓斯汀能显著降低哮喘豚鼠BALF中Eos和LC的数量;在氮卓斯汀治疗组,哮喘豚鼠血浆和BALF中sICAM 1和sP S的含量均显著降低,血清和BALF中ECP的含量也显著降低,与模型组相比均有显著性差异。结论氮卓斯汀能降低哮喘豚鼠sICAM 1、sP S和ECP的水平,抑制Eos和LC的粘附,减少其在气道的浸润。这可能是组胺H1 受体拮抗剂氮卓斯汀拮抗哮喘气道炎症的重要机制之一。     

支气管肺泡灌洗术在哮喘小鼠模型中的应用

目的 探讨哮喘小鼠模型支气管肺泡灌洗术标准化操作方法.方法 构建哮喘小鼠模型,使用24 G静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术,共3次,每次0.8 mL,反复抽注3次.支气管肺泡灌洗液(BALF)离心后取细胞沉淀进行涂片HE染色检查.结果 每只小鼠可顺利回收1.8～2.1 mL BALF,回收率75%～87.5%;哮喘小鼠BALF涂片可见大量嗜酸性粒细胞.结论 采用该方法可成功收集哮喘小鼠模型BALF,可推广应用于其他疾病小鼠模型.     

中药对哮喘豚鼠嗜酸粒细胞凋亡与自由基的影响

目的：探讨中药对哮喘豚鼠嗜酸粒细胞（EOS）凋亡与自由基在气道炎症中的作用。方法：采用卵蛋白致敏激发豚鼠哮喘,观察中药对哮喘豚鼠血浆丙二醛（MDA）、全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px)及红细胞超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响,计算支气管肺泡灌洗液（BALF）中不同密度嗜酸性粒细胞凋亡百分比。结果：中药能提高哮喘豚鼠全血GSH－Px和红细胞SOD的含量,降低MDA的含量,促进EOS凋亡。结论：中药能够有效地清除自由基,促进EOS凋亡,减轻气道炎症引起的气道高反应。     

氨茶碱对肥胖哮喘大鼠脂联素表达及气道炎症的干预作用

目的:观察肥胖哮喘大鼠体内脂联素表达水平的变化及氨茶碱对脂联素表达及气道炎症的影响.方法:将大鼠随机分为正常体重对照组(A组)、哮喘组(B组)、茶碱干预组(C组)和肥胖对照组(D组)、哮喘组(E组)、茶碱干预组(F组),建立肥胖、哮喘模型.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数,图像分析软件测定气道壁厚度,ELISA测定血清、BALF脂联素浓度,RT-PCR测定脂肪组织脂联素mRNA的表达.结果:(1)BALF细胞总数和支气管壁厚度,E组较B组均有所升高,C、F组分别较B、E组明显降低.(2)脂肪组织脂联素mRNA表达及血清、BALF脂联素浓度,E组较B组明显降低,C、F组分别较B、E组明显升高.结论:脂联素表达显著降低是肥胖哮喘大鼠气道炎症更为明显的重要原因.氨茶碱能抑制气道炎症并部分恢复哮喘大鼠脂联素表达.     

咪喹莫特治疗支气管哮喘的动物实验研究

目的 :研究咪喹莫特治疗支气管哮喘的疗效及可能的机制。方法 :建立豚鼠哮喘模型 ,随机分为 :①对照组 (哮喘组 ) ;②咪喹莫特吸入组 ;③咪喹莫特灌胃组 ;④咪喹莫特外用组 ;⑤安慰剂组。治疗 2周后 ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)及肺组织 ,分别测定外周血IgE ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞计数、分类 ,计数肺组织切片 0 1～ 0 3mm范围的支气管壁嗜酸性粒细胞 (EOS)、淋巴细胞 (L)数。结果 :咪喹莫特治疗组外周血IgE值 ,BALF细胞计数、EOS分类及 0 1～ 0 3mm支气管周围EOS计数、L计数与对照组间或安慰剂组间有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而BALFL分类百分比 ,治疗组与对照组间或安慰剂组间无统计学意义。咪喹莫特治疗组间IgE值、BALF计数、EOS分类、支气管旁EOS计数、L计数方差分析均有统计学意义。 结论 :咪喹莫特能显著减轻支气管肺周围的炎性细胞的浸润 (主要表现为下调EOS与L数、EOS百分率和IgE)。咪喹莫特吸入可能是治疗支气管哮喘的一种新方法。     

哮喘大鼠8-异前列腺素F2α水平变化的实验研究

【目的】探讨泵雾化方式复制哮喘模型的优势及哮喘大鼠体液中8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平变化,初探其作为评估哮喘病情及疗效生化指标的可行性。【方法】卵清蛋白(OVA)溶液致敏和泵雾化激发复制哮喘大鼠模型,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数量,应用ELISA方法测定大鼠BALF和血浆中8-iso-PG F2α含量。【结果】模型组BALF中细胞总数及嗜酸性和淋巴细胞百分比高于对照组,差异有显著意义(P<0.05);模型组血浆及BALF中8-iso-PGF2α含量较对照组均有显著增加(P<0.05);模型组血浆和BALF中8-iso-PGF2α含量呈正相关趋势(P<0.05)。【结论】OVA泵雾化激发成功复制哮喘大鼠模型;致敏激发哮喘发作时,血浆及BALF中8-iso-PGF2α含量均明显增加。     

支气管肺泡灌洗在治疗重症哮喘患者中的效果观察及护理

目的 探讨支气管肺泡灌洗在治疗重症哮喘患者中的治疗效果及护理经验.方法 对24例重症哮喘患者在机械通气的基础上采用纤支镜支气管肺泡灌洗治疗,观察和比较支气管肺泡灌洗前后患者动脉血气及气道阻力变化情况和观察灌洗过程中不良反应及并发症发生情况.结果 支气管肺泡灌洗后患者动脉氧分压( PaO2)、血氧饱和度(SaO2)较灌洗前升高,气道峰压(PIP)较灌洗前降低,灌洗前后比较,均P＜0.01,差异具有统计学意义;在灌洗过程中患者未出现严重的并发症.结论 在机械通气的基础上采用纤支镜下支气管肺泡灌洗是治疗重症哮喘有效手段.做好灌洗前后的护理是保证治疗成功的关键.     

班布特罗对哮喘豚鼠T淋巴细胞凋亡的影响及作用机制

目的　观察 β2 受体激动剂班布特罗 (bambuterol)对哮喘豚鼠T淋巴细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法　卵白蛋白 (OA)建立豚鼠哮喘模型 ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)分离T淋巴细胞 ,采用原位末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡 ,免疫组化染色方法观察T淋巴细胞核因子 κB(NF κB)蛋白表达。结果　班布特罗大剂量组和中剂量组可明显降低哮喘豚鼠BALF中淋巴细胞数及T淋巴细胞NF κB表达 ,增加T淋巴细胞凋亡 ,而β 受体阻断剂普奈洛尔可拮抗这一作用。Pear son相关分析显示 ,T淋巴细胞NF κB表达与细胞凋亡之间呈明显的负相关关系。结论　大、中剂量班布特罗可能通过cAMP PKA途径来抑制NF κB活化 ,从而进一步促进T淋巴细胞的凋亡。     

哮喘小鼠气道炎症与活化T细胞核因子c1的相关性及尼卡地平对其的干预作用

目的:探讨活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)与气道炎症的相关性,观察尼卡地平对哮喘小鼠气道炎症以及NFATc1蛋白表达的影响.方法:建立哮喘小鼠模型并收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),ELISA法测定BALF中细胞因子IL-4、IL-5和IFN-γ的水平,免疫组化法测定气道周围淋巴细胞中NFATc1蛋白的表达.结果:IL-4、IL-5的水平与NFATc1阳性率有线性正相关(P<0.05).哮喘小鼠IL-4、IL-5水平以及NFATc1蛋白表达较正常组升高,差异有统计学意义(P<0.05):尼卡地平干预组IL-4、IL-5水平和NFATc1表达较哮喘组降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:NFATc1的激活可上调IL-4和IL-5的表达,促进哮喘的气道炎症;尼卡地平可抑制NFATc1的表达,降低细胞因子IL-4、IL-5的水平,减轻哮喘气道炎症.     

哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞神经趋化及气管平滑肌毒蕈碱受体、主要碱性蛋白的异常表达

目的:研究哮喘豚鼠气管平滑肌毒蕈碱受体(MR)mRNA及嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白(major basic protein,MBP)mRNA的表达及嗜酸性粒细胞(Eos)向迷走神经的趋化作用。方法:20只健康豚鼠随机分为正常组和哮喘组。哮喘组制作成哮喘豚鼠模型,再激发用药。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞总数及细胞分类,观察肺组织的病理改变,乙酰胆碱酯酶及HE染色观察Eos神经趋化情况,进行气管平滑肌的M2R mRNA、M3RmRNA、MBP mRNART-PCR半定量分析。结果:两组BALF的Eos计数,哮喘组[(29.2±7.3)%]与正常组[(2.8±3.0)%]比较差异有显著性(P<0.01)。哮喘组肺组织充血水肿明显,Eos肺组织浸润较正常组明显,Eos具有明显的神经趋化现象。气管平滑肌的MR mRNA、MBP mRNART-PCR半定量分析显示,M2RmRNA,哮喘组(1.26±0.24)与正常组(0.50±0.16)比较差异有显著性(P<0.01);M3R mRNA,哮喘组(0.12±0.055)与正常组(0.42±0.062)比较差异有显著性(P<0.01);MBP mRNA,哮喘组(1.46±0.208)与正常组(0.25±0.089)比较差异有显著性(P<0.01)。结论:哮喘豚鼠Eos具有迷走神经趋化现象,M2R表达增加,M3R表达减少,MBP表达增加。     

地氯雷他定对过敏性哮喘豚鼠模型肺泡灌洗液IL-4和IL-13水平的影响

目的 研究地氯雷他定对过敏性哮喘豚鼠模型肺泡灌洗液IL-4和IL-13水平的影响。方法 用卵蛋白造成过敏性哮喘豚鼠模型,观察地氯雷他定对过敏性哮喘豚鼠哮喘潜伏期、肺泡灌洗液IL-4和IL-13水平的影响。结果 地氯雷他定能显著延长过敏性哮喘豚鼠哮喘潜伏期,明显降低肺泡灌洗液IL-4和IL-13水平。结论 地氯雷他定能通过降低细胞因子IL-4和IL-13水平来延缓哮喘的发作,为其临床治疗哮喘提供实验依据。     

支气管哮喘发作期一氧化氮及内皮素含量的研究

目的:探讨一氧化氮(NO)及内皮素(ET)在支气管哮喘发病中的作用。方法:采用分光光度法和放射免疫分析法测定36例支气管哮喘发作患者和32例正常对照者血清NO及ET含量。结果:轻、中度支气管哮喘组血清NO及ET含量明显高于对照组(P<0.05),重度支气管哮喘组血清NO及ET含量亦明显高于对照组(P<0.01)。结论:支气管哮喘发作期血清NO及ET升高,说明二者参与了哮喘的病理生理过程,故血清NO及ET含量可作为判定支气管哮喘病情的重要指标。     

神经生长因子与哮喘气道重塑的关系

目的:探讨支气管哮喘患者气道中神经生长因子(NGF)与气道重塑相关指标的关系,以明确NGF在哮喘气道重塑中的作用,进而为哮喘的防治提供新的途径.方法:对12例支气管哮喘患者及10例正常志愿者行纤支镜支气管黏膜活栓及肺泡灌洗(BAL);光镜下测量支气管基底膜厚度及计数黏膜下成纤维细胞的数目,碱水解法检测肺泡灌洗液(BALF)中羟脯氨酸的含量并以此计算胶原蛋白的含量,ELISA法检测BALF中纤维连接蛋白(FN)、NGF的蛋白含量;RT-PCR检测支气管黏膜活检组织NGF mRNA的表达.结果:(1)哮喘组患者存在着气道重塑:光镜下见哮喘组支气管基底膜增厚,黏膜下成纤维细胞数目增多,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);哮喘组BALF中胶原蛋白、FN含量增加,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);(2)哮喘组支气管NGF基因表达及蛋白分泌增加,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);(3)哮喘组BALF中NGF含量与气道重塑指标:基底膜厚度、黏膜下成纤维细胞数目、BALF中胶原蛋白、FN含量成正相关(基底膜厚度r=0.827,黏膜成纤维细胞数目r=0.768,胶原蛋白r=0.880,FN r=0.854),相关性差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论:支气管哮喘患者气道组织中NGF的基因表达及蛋白分泌显著增加,并与支气管哮喘发病机制中的气道重塑有一定的关系.     

雾化吸入BCG对哮喘小鼠气道炎性作用的影响

目的探讨卡介苗（BCG）雾化吸入对变应性哮喘的治疗作用及其与支气管肺泡灌洗液（BALF）中γ-干扰素（IFN-γ）的关系。方法昆明小鼠32只，随机分成三组，正常对照组，哮喘模型组及治疗组。治疗组又分为BCG治疗组和地塞米松治疗组。治疗组与哮喘模型组一起制作哮喘模型。观察小鼠气道壁炎症变化，并收集支气管肺泡灌洗液（BALF），测定BALF中细胞总数，嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数，用酶联免疫法测定BALF中IFN-γ的含量。结果哮喘模型组BALF中细胞总数和嗜酸细胞数显著高于正常对照组（P〈0．01），BALF中IFN-γ水平显著低于正常组（P〈0．01）；BCG治疗组、地塞米松治疗组BALF中细胞数、EOS细胞数显著低于哮喘组，而IFN-γ水平显著高于哮喘组（P〈0．01）。BCG治疗组各项指标与地塞米松治疗组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论雾化吸入BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎性反应，吸入BCG对哮喘小鼠有治疗作用。     

肺泡表面张力与肿瘤坏死因子在急性低氧油酸性肺损伤时的变化

目的:探讨急性低氧油酸肺损伤中肺泡表面活性物质(PS)系统改变的机制.方法:采用急性低氧肺损伤大鼠模型,分别观察血浆和支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量变化;采用人工智能的方法测定BALF中表面张力的变化;用高效液相色谱测定BALF中磷脂组分的改变.结果:静脉注入油酸后肺部很快出现中性粒细胞(PMN)的聚集,1小时即可达峰值(80.32%);TNF-α在血浆和BALF中显著增加,以BALF中含量增加较显著,并随病程的延长而升高[(4 773.0±405.1)ng/L];静脉注入油酸后磷脂酰胆碱(PC)含量显著降低,而磷脂酰乙醇胺(PE)含量显著升高;BALF的最小表面张力(STmin)迅速上升达到峰值,滞后环面积和稳定指数(SI)则进行性下降,并维持在一个较低水平(0.39±0.08).己酮可可碱(PTX)可减轻油酸肺损伤肺部炎细胞浸润,减少TNF-α在血浆和BALF中的含量.结论:急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或急性肺损伤时确有PC和PE及表面张力参数的改变;TNF-α不但参与了ARDS的发病机制,而且损害了肺部PS系统;PTX可明显改善动脉血氧分压,减轻肺水肿,尚可显著降低血浆和BALF中TNF-α的含量,对急性低氧油酸肺损伤有一定的治疗作用.     

糖皮质激素对哮喘小鼠肺部炎症和支气管肺泡灌洗液中白介素-25、干扰素-γ的影响

目的:通过观察各实验组小鼠肺部炎症情况和检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-25(IL-25或IL-17E)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平,探讨糖皮质激素对小鼠支气管哮喘的治疗作用机制.方法:清洁级BALB/c小鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组和布地奈德组.以卵清蛋白致敏激发法建立哮喘小鼠模型.显微镜下观察肺组织病理切片;收集BALF,计算嗜酸性粒细胞(EOS)绝对计数百分比;用ELISA法测定BALF中IL-25和IFN-γ的水平,并做相关性分析.结果:哮喘组小鼠BALF中白细胞总数、EOS数目和百分比分别与正常组、地塞米松组和布地奈德组相比均明显增加(P<0.01).在正常组、地塞米松组和布地奈德组之间对这3个指标进行两两比较差异均无显著性(P>0.05).哮喘组小鼠BALF中IL-25和IFN-γ水平分别与正常组、地塞米松组和布地奈德组相比均减低(P<0.05),在正常组、地塞米松组和布地奈德组之间对这两个指标进行两两比较差异均无显著性(P>0.05).各组小鼠BALF中IL-25和IFN-γ水平都呈正相关关系.结论:糖皮质激素可减轻肺部炎症,促进IL-25和IFN-γ的表达,抑制哮喘症状.     

易喘平胶囊对哮喘模型小鼠气道高反应性的抑制作用及机制

目的:观察补肾活血法中药易喘平胶囊对哮喘气道高反应性的抑制作用及其机制.方法:将50只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组(0.4 mg·kg-1·d-1)以及易喘平胶囊高剂量(20 mg·kg-1·d-1)和低剂量组(5 mg·kg-1·d-1).用卵白蛋白致敏法制备哮喘模型,检测各组小鼠不同乙酰甲胆碱(mACh)浓度时气道压力峰值-时间指数(APTI)的差异,并比较各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的含量.结果:哮喘模型小鼠不同mACh浓度时的平均APTI值和BALF中ET-1和NO含量均明显高于正常对照组(P均＜0.05).与哮喘模型组比较,高剂量、低剂量易喘平胶囊组和地塞米松组的APTI值以及BALF中ET-1和NO含量均明显下降(P均＜0.05);高剂量易喘平胶囊组表现出比低剂量组更强的抑制作用,呈现剂量依赖特性;高剂量易喘平胶囊组与地塞米松组的APTI值以及BALF中ET-1和NO含量比较差异无显著性(P均＞0.05).结论:易喘平胶囊对哮喘气道高反应性具有一定的抑制作用,降低气道上皮细胞分泌ET-1和NO是这种作用发挥的机制之一.     

中性粒细胞弹性蛋白酶在重度脑损伤继发性肺损伤中的作用研究

目的 探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)在重度脑损伤继发性肺损伤中的作用.方法 SD雄性大鼠50只,随机分为对照组(n=10)和损伤组(n=40),损伤组又分为2 h、6 h、24 h和48 h组,每组10只.分别测定各组大鼠脑组织含水量,血浆及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中NE含量;BALF中白蛋白浓度;光学及电子显微镜观察肺组织病理改变.结果 6 h、24 h和48 h三组大鼠的脑组织含水量均明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);在肉眼、光学、电子显微镜下,损伤组部分大鼠肺组织可见不同程度的充血水肿、中性粒细胞浸润、线粒体肿胀及绒毛消失等;脑损伤2 h血浆及灌洗液中NE含量开始升高,灌洗液中NE升高水平较血浆中NE明显;支气管肺泡灌洗液中白蛋白在伤后6 h 开始升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);NE变化水平与白蛋白、脑组织含水量均呈正相关(P<0.05).结论 重度脑损伤可导致不同程度的肺组织损伤,NE是脑损伤继发肺损伤的重要原因之一,早期监测血中NE含量可间接衡量肺损伤情况.     

千佛菌对哮喘模型大鼠BALF中IL-5和IFN-γ的调节作用

目的观察千佛菌对支气管哮喘模型大鼠细胞因子功能紊乱的影响。方法清洁级雄性SD大鼠40只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘模型组、千佛菌大剂量组和千佛菌小剂量组。采用卵蛋白致敏法建立哮喘大鼠模型。用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠肺泡灌洗液中细胞因子IL5、IFN-γ水平。结果哮喘模型组肺泡灌洗液中IL-5水平上升(P0.05),IFN-γ水平明显下降(P0.05);千佛菌大剂量组肺泡灌洗液中IFN-γ的值上升(P0.05)以及肺泡灌洗液IL-5值下降(P0.05)。结论千佛菌可以改善哮喘体内细胞因子水平,调节细胞因子失衡从而达到治疗目的。     

胎粪吸入综合征患儿一氧化氮和内皮素-1水平变化及意义

目的探讨胎粪吸入综合征(MAS)患儿支气管肺泡灌洗液及血中一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)水平变化规律,为临床治疗提供依据。方法采用硝酸盐还原法和放射免疫法分别测定29例重度MAS患儿血及肺泡灌洗液中NO和ET-1浓度、31例轻度MAS患儿和32名正常新生儿血中NO和ET-1浓度。结果与健康新生儿相比,MAS患儿病程初期血中NO浓度降低而ET-1浓度升高(P<0.05),轻度MAS患儿随病情好转NO和ET-1浓度逐渐恢复正常,但重度MAS患儿随病程出现NO的异常增高而ET-1降低(P<0.05),然后又逐渐恢复正常,支气管肺泡灌洗液中NO浓度呈现先低后渐升高趋势(P<0.05),而ET-1浓度呈现先高后渐降低趋势(P<0.05),与血中变化趋势一致。结论NO和ET-1参与了MAS早期肺部病理生理变化,使肺血管过度收缩导致肺动脉高压,恢复期NO异常升高可能与持续的肺部炎症及损伤有关,病程的不同时期应采用适宜的治疗手段。