落新妇甙诱导混合细胞培养中活化的T细胞凋亡及其机制

目的探讨落新妇甙对混合细胞培养中活化的T细胞产生细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)表达的影响。方法分离BALB/c小鼠心肌细胞(2×10~5/ml)和C57BL/6小鼠脾细胞(1×10~6/ml),前者作为刺激细胞,后者作为反应细胞,进行混合细胞培养。实验分为3组：(1)对照组,混合细胞培养采用RPMI-1640培养液；(2)落新妇甙组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml；(3)落新妇甙+CTLA-4单克隆抗体组,在RPMI-1640培养液中加入落新妇甙15μg/ml和CTLA-4单克隆抗体9Hi0 30μg/ml。原位末端标记(TUNEL)法检测混合细胞培养中T淋巴细胞凋亡情况；逆转录一聚合酶链(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)法检测T细胞CTLA-4表达情况。结果落新妇甙组的T细胞凋亡指数明显高于对照组(73．4%±12．5% vs 35．1%±9．2%,P＜0．01),T细胞CTLA-4的表达亦显著高于对照组(P＜0．01)。落新妇甙加CTLA-4单克隆抗体组的T细胞凋亡指数和CTLA-4表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0．05)。结论落新妇甙诱导心肌细胞排斥反应中活化的T细胞凋亡可能与其增强T细胞中CTLA-4的表达有关。     

落新妇甙对肺移植术后急性排斥反应的作用

目的探讨落新妇甙对大鼠肺移植后机体急性排斥反应的影响和机制，以明确落新妇甙对大鼠肺移植急性排斥反应的作用。方法建立大鼠原位肺移植模型，术后将60只受体大鼠随机分为两组，对照组：术后用生理盐水1ml／d灌胃，实验组：术后用落新妇甙1ml／kg·d灌胃。观察肺移植后大鼠的存活时间、大鼠脾细胞T淋巴细胞转化率、脾淋巴细胞白细胞介素2（IL-2）的活性以及外周血中活化T淋巴细胞凋亡情况。在电子显微镜下观察肺血管超微结构变化。结果实验组大鼠肺移植后存活时间较对照组明显延长（25．4±2．1d vs．13．4±1．2d；t=2．042，P〈0．05）。实验组脾细胞T淋巴细胞转化率较对照组明显降低（23465．8±8783．4 cpm vs．74567．3±12874．6cpm；t=2．284，P〈0．05）；实验组移植大鼠脾淋巴细胞IL-2活性较对照组明显降低（4．25±2．65U／ml vs．23．46±1．82 U／ml；t=3．165，P〈0．01）。实验组能有效地诱导急性排斥反应中活化T淋巴细胞凋亡。实验组肺组织超微结构损伤较对照组减轻。结论落新妇甙通过下调IL-2产生，诱导活化T淋巴细胞凋亡，抑制T淋巴细胞增殖分化，广泛抑制了以T淋巴细胞为主的肺移植术后急性排斥反廊，从而延长肺移槽大鼠的存活时间．     

应用羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂探讨新型免疫抑制剂J2作用机制

目的探讨基于CIM立体构型设计的新型免疫抑制剂（J2）在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记的C57BL／6（H-2b）小鼠的淋巴细胞4×10^6～6×10^6经尾静脉注入经印钴照射（900拉德）后的DBA／2（H-2d）小鼠体内构建模型。将DBA／2小鼠随机分为5组，每组5只，模型建立后即刻腹腔注射J2，每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10mg／kg体重）；实验组J2A组（1mg／kg体重）、J2B组（4mg／kg体重）、J2C组（8mg／kg体重）。给药3d后分组处死DBA／2小鼠取脾制备淋巴细胞，用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞，FACS流式细胞仪检测CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况，并检测CD4^＋T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99％。对照组分裂的CD4^＋T细胞（75．34±1．58）％、分裂的CD8^＋T细胞（83．48±1．25）％明显多于CsA组和实验组（P〈0．01）。J2B组和J2C组分裂的细胞数分别与CsA组比较差异无统计学意义（P〉0．05），但J2A组多于CsA组（P〈0．05）。对照组CD4^＋T细胞早期凋亡的比例（41．1±3．4）％明显高于其他各组（P〈0．01）。J2A组（35．6±4．1）％、J2B组（24．0±3．7）％和J2C组（13．6±2．3）％CD4^＋T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组（7．4±1．9）％（P〈0．05）。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4^＋T细胞的活化，从而进一步抑制CD8^＋T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。     

落新妇甙诱导小鼠心脏移植体外排斥反应中活化T细胞凋亡

众多研究结果显示,T淋巴细胞在器官移植急性排斥反应中起核心作用。T淋巴细胞必须在其达到活化状态后才能发挥免疫效应,因此目前许多免疫抑制剂都是通过阻止T淋巴细胞活化而发挥抗急性排斥效应的。最近有文献报道,中药落新妇甙能使经植物血凝素激活的T淋巴细胞发生凋亡[1] ,并且能使肝炎动物肝脏周围浸润的活化T细胞发生凋亡,从而保护肝脏免受损害[2 ] 。落新妇甙是否对移植排斥反应中活化T淋巴细胞也有此作用?能否抑制移植排斥反应?本研究旨在通过小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型[3 ] ,探讨落新妇甙对小鼠心脏移植体外排斥反应的影响…     

全反式维甲酸和三氧化二砷协同诱导胰腺癌细胞凋亡

目的研究与三氧化二砷（As2O2）具有协同效应治疗胰腺癌的药物。方法以胰腺癌细胞系SWl990为研究对象，观察5-氟尿嘧啶（5-Fu）、健择（Gemcitabine）和全反式维甲酸（AT—RA）与As2O3共同作用对细胞的影响。通过台盼蓝拒染法检测细胞生长和细胞活力，流式细胞仪检测AnnexinV或PI阳性细胞的含量，评价以上药物对细胞增殖和凋亡的作用。结果5-Fu和Gemcitabine与As2O3无协同效应。单独应用As2O3或ATRA均抑制SWl990细胞生长，不诱导细胞凋亡。其中，对照组活细胞密度为（8．5±0．3）×10^5个／ml，As2O3组为（4．4±0．1）×10^5个／ml，ATRA组为（6．7±0．2）×10^5个／ml。但是，As203和ATRA共同处理SWl990细胞后，细胞生长明显抑制，并诱导细胞凋亡。对照组活细胞密度为（8．5±0．3）×10^5个／ml，As2O3＋ATRA组为（3．3±0．1）×10^5个／ml；对照组细胞活力为（92，0±1．2）％，As2O3组为（90．0±1．3）％，ATRA组为（93．0±1．4）％，As2O3＋ATRA组为（65．0±2．1）％；对照组Annexin V和PI阳性细胞的含量为（6．0±1．2）％，As2O3组为（11．0±3．3）％，ATRA组为（5．0±1．4）％，As2O3＋ATRA组为（37．0±5．3）％。结论As2O3和ATRA可协同诱导胰腺癌细胞凋亡，两者联合应用可能作为胰腺癌辅助治疗的另一选择。     

自体骨髓细胞经门静脉移植治疗肝硬化与肝功能不全的临床研究

目的观察自体骨髓细胞经门静脉移植对肝硬化和肝功能不全的治疗效果。方法2005年2月至2006年6月在我科接受手术治疗的40例肝硬化门静脉高压症患者（脾切除、断流术或内镜食道曲张静脉套扎术）,被随机分为治疗组和对照组,每组20例。两组患者于术中埋置“门静脉导管-皮下药盒”,术后3-4周,治疗组经移植通道输注自体骨髓细胞,而对照组只输注生理盐水。在第1次输注后每隔1个月再重复进行输注,共输注3次。第3次输注后1个月进行疗效评价。结果（1）两组恢复均顺利,未发现与移植操作有关的不良反应或并发症。（2）丙氨酸转氨酶、总胆红素、白蛋白和凝血酶原时间：治疗组分别由（60±52）μmol／L、（26±15）μmol／L、（33±5）μmol／L和（18±2）s变为（26±15）μmol／L、（14±8）μmol／L、（41±3）μmol／L和（12±2）s（P〈0．01）;对照组分别由（47±37）μmol／L、（22±23）μmol／L、（35±4）μmol／L和（18±4）s变为（65±51）μmol／L、（19±42）μmol／L、（35±4）μmol／L和（18±4）s（P〉0．05）;治疗组优于对照组（P〈0．01）。（3）血清透明质酸和前胶原Ⅲ肽：治疗组分别由（188±160）ng／ml和（13±18）ng／ml变为（104±80）ng／ml和（8±9） ng／ml（P〈0．05）;对照组分别由（79±193）ng／ml和（10±16）ng／ml变为（136±187）ng／ml和（9±17）ng／ml（P〉0．05）;治疗组亦优于对照组（P〈0．01）。结论自体骨髓细胞经门静脉移植可改善肝功能和肝纤维化血清学指标。     

红细胞生成素对马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨红细胞生成素（EPO）抑制马兜铃酸（AA）所诱导的肾小管上皮细胞（LLC—PK1）凋亡的作用机制。方法以不同浓度AA（5、10、20mg／L）刺激LLC—PK1细胞株，同时培养体系中加入不同浓度的EPO（5、10、20U／m1），另设对照组。各组细胞培养24h后，TUNEL法原位检测细胞凋亡情况；流式细胞仪检测凋亡细胞的比例；Western印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶（caspase）3、bcl—xL的蛋白表达。结果（1）与对照组（6．09±1．84）％相比，AA5mg／L组TUNEL阳性细胞比例增加【（9．79±2．58）％】；AA10、20mg／L阳性细胞比例显著增加[（37．67±8．23）％、（62．95±8．29）％】，与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。AA10mg／L组细胞经EPO10、20U／ml干预后，阳性细胞比例显著下降f（22．41±3．47）％、（14．63±2．66）％，P〈0．051；AA20mg／L组细胞经不同浓度EPO干预后，阳性细胞比例无显著变化。（2）与对照组相比，AA5mg／L组细胞caspase-3的活性表达有少量增加；AA10mg／L组细胞caspase-3显著增加；而AA20mg／L组caspase-3表达降低。与AA10mg／L组相比，EPO10U／ml和EPO20U/ml干预后，细胞caspase-3的表达显著降低。（3）与对照组相比，AA5mg／L组细胞bcl—xL的表达明显增加；AA10mg／L组细胞bcl-xL表达减少；AA20mg／L组细胞bcl—xL表达显著减少。与AA10mg／L组相比，EPO5U/ml干预后，细胞bcl-xL有所增加；EPO10U／ml和EPO20U／ml干预后，细胞bcl—xL的表达显著增加。结论EPO可能通过促进抗凋亡蛋白bcl-xL的表达、抑制凋亡蛋白酶caspase-3的过高表达，从而抑制了AA诱导的肾小管上皮细胞的凋亡。     

缺血后适应对兔短期缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的探讨缺血后适应对兔局部短期缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法18只新西兰白兔随机分成3组，每组6只；假手术对照组（S组）、缺血，再灌注对照组（IR组）、缺血后适应组（Post组）。除S组外，其余两组均接受左冠脉前降支15min阻断和30min再灌注，Post组在15min缺血后接受连续3次每次再灌注30s，缺血30s的后适应。以DNA电泳和TUNEL分析检测兔短期缺血再灌注心肌组织的细胞凋亡情况，免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果兔IR组缺血区心肌DNA电泳呈现DNA梯形，而Post组和s组未见梯形。Post组心肌细胞凋亡指数显著低于IR组[（28．06±2．92）％，（55．70±13．96）％，P〈0．01]。Bcl-2基因的蛋白表达量Post组高于IR组（10．00±0．89，7．83±1．47，P〈0．05）；Bax基因的蛋白表达量Post组低于IR组（7．50±0．84，9．83±0．98，P〈0．05）。结论缺血后适应显著减少了兔短期缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡程度与上调Bcl-2基因的蛋白表达，下调Bax基因的蛋白表达有关。     

尿激酶及其受体对膀胱癌细胞系侵袭转移影响的体外研究

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及其受体（uPAR）与膀胱癌侵袭转移的关系。方法：对BIU-87、T24及EJ细胞系进行体外培养，夹心抗体ELISA法测定细胞培养上清及细胞溶解产物uPA含量，对培养细胞团块行uPAR免疫组化测定，并进行体外人工基底膜侵袭检测。结果：BIU-87、T24和EJ细胞培养上清uPA检测结果分别为（11．77±3．65）ng／ml、（8．70±2．45）ng／ml、（105．9±8．60）ng／ml，EJ细胞培养上清uPA明显高于BIU87和T24细胞系（P〈0．001）。细胞溶解产物uPA结果分别为（1．15±0．40）ng／ml、（0．78±0．34）ng／ml、（1．92±0．56）ng／ml，EJ细胞溶解产物uPA含量明显高于BIU-87、T24细胞溶解产物（P〈0．02，P〈0．01）。EJ细胞uPAR蛋白主要弥散于细胞质，着色强度与数量明显多于T24细胞（P〈0．01），而BIU-87细胞基本无着色。EJ细胞具有浸润Matrigel的能力，BIU-87、T24无浸润Matrigel能力。结论：肿瘤细胞有uPA的分泌或来源并同时表达uPAR在体外即具备浸润能力，uPA系统在膀胱肿瘤的浸润转移过程中起重要作用。     

冠状动脉旁路移植手术方式对甲状腺激素代谢的影响

目的观察体外循环（on-pump）心脏停跳下和非体外循环（off-pump）心脏不停跳冠状动脉旁路移植手术围术期甲状腺激素的变化规律。方法冠脉旁路手术病人40例，分为Off-pump组和Onpump组，每组20例，分别测定围术期甲状腺功能指标。结果术前两组病例甲状腺功能指标均在正常值范围内。Off-pump组T3和FT3术后显著下降，术后第1d降至最低[（T3：（39．7±6．2）ng，dl对（78．6±12．1）mg/dl，P〈0．01；FT3（1．6±0．5）pg/ml对（2．4±0．6）pg/ml，P〈0．05]；T4在正常值范围内变化，术后第1d降至最低[（5．3±0．8）μg/dl对（7．2±0．7）μg/dl，P〈0．05]；FT4在正常值范围内波动，各阶段检测值与术前差异无统计学意义（P〉0．05）；rT3术后逐渐升高，术后第3d达高峰[（82．1±26．8）ng/dl对（42．3±15．6）ng/dl，P〈0．01]；TSH术中逐渐下降，术后第1d降至最低[（0．4±0．2）tdU／ml对（1．3±0．6）μIU／ml，P〈0．01]，术后第7d恢复术前水平。围术期两组病例甲状腺功能指标变化趋势相似，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论On-pump与Off-pump下冠状动脉旁路移植手术均影响甲状腺激素代谢，两组病人术后均存在低B综合征。     

pcDNA3-hBMP2转染对成纤维细胞 生物学性状的影响

目的 探讨人BMP2基因转染对成纤维细胞NIH3T3生物学性状的影响。方法 构建重组真核表达载体pcDNA3-hBMP2,并在脂质体介导下,将其导入NIH3T3成纤维细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用细胞原位杂交和免疫组织化学方法检测hBMP2基因在NIH3T3成纤维细胞内的表达情况;MTT法和FCM检测pcDNA3-hBMP2转染pcDNA3-hBMP2后成纤维细胞超微结构的改变,碱性磷酸酶的检测观察转染pcDNA3-hBMP2后成纤维细胞向成骨细胞分化情况。结果 转染pcvDNA3-hBMP2后的NIH3T3细胞内有大量hBMP2mRNA的转录及其蛋白的表达;转染pcDNA3-hBMP2对成纤维细胞增殖和细胞周期无影响;转染pcDNA3-hBMP2后的成纤维细胞超微结构可见粗面内质网丰富,囊腔扩张明显其内充满中等电子密度的蛋白分泌物;碱性磷酸酶活性显著上升。结论 pcDNA3-hBMP2转染对成纤维细胞NIH3T3增殖和细胞周期无影响。转染后的成纤维细胞不仅可形成BMP2,而且具有向成骨细胞系分化的特性。     

Choledochal cysts: Part 3 of 3: Management

Much about the etiology, pathophysiology, natural course and optimal treatment of cystic disease of the biliary tree remains under debate. Gastroenterologists, surgeons and radiologists alike still strive to optimize their roles in the management of choledochal cysts. To that end, much has been written about this disease entity, and the purpose of this 3-part review is to organize the available literature and present the various theories currently argued by the experts. In part 3, we discuss the management of choledochal cysts, thus completing our comprehensive review.     

H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的影响

目的 通过比较不同细胞类型之间胰腺十二指肠同源盒1(Pdx-1)、配对盒基因4(Pax4)、MafA(mast cell function associated antigen)和Nkx6.1等胰岛组织特异性基因其转录起始区的H3K4m3和H3K9m3修饰的差异,探讨H3K4m3和H3K9m3修饰对胰岛组织特异性基因表达的作用.方法 采用染色质免疫共沉淀一实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测小鼠胚胎干细胞(mES,1×10~7)、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞(1×10~7)和小鼠β细胞株NIT-1细胞(1×10~7)三者中的胰岛组织特异性基因、Oct4基因和MLH1基因转录起始区H3K4m3和H3K9m3修饰的状况.同时采用实时定量逆转录(RT)-PCR检测上述3种细胞各基因mRNA表达水平.分析H3K4m3和H3K9m3修饰改变与基因表达之间的关系.结果 NIT-1细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K4m的修饰水平分别为:(4.84±0.05)%、(9.91±1.33)%、(10.64±0.87)%、(0.23±0.03)%,与mES细胞比较明显增高(P<0.05),基因表达;NIH3T3细胞中Pdx-1、Pax4、MafA、Nkx6.1等胰岛组织特异性基因转录起始区的H3K9m3的修饰水平分别为:(0.64±0.21)%、(7.04±1.29)%、(0.39±0.10)%、(2.35±0.81)%,与mES细胞比较明显增高(P<0.05),基因不表达.结论 H3K4m3与H3K9m3修饰能相互协调,共同调控胰岛组织特异性基因的表达.     

Identification of the insulin-regulated interaction of phosphodiesterase 3B with 14-3-3 beta protein

Phosphodiesterase (PDE)-3B, a major PDE isoform in adipocytes, plays a pivotal role in the antilipolytic action of insulin. Insulin-induced phosphorylation and activation of PDE3B is phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-K) and Akt dependent, but the precise mechanism of PDE3B activation is not fully understood. We have identified 14-3-3 beta, a critical scaffolding molecule in signal transduction, as a protein that interacts with PDE3B using the yeast two-hybrid system. The interaction between PDE3B and 14-3-3 beta was then confirmed in vitro. The glutathione S-transferase (GST)-tagged 14-3-3 beta interacts with endogenous PDE3B of rat adipocytes, and this interaction is enhanced when adipocytes are treated with insulin. Coimmunoprecipitation experiments reveal that endogenous PDE3B also associates with endogenous 14-3-3 beta in rat adipocytes, and this interaction is enhanced by insulin. Two different PI3-K inhibitors, wortmannin and Ly294002, block this induction, suggesting that PI3-K is required. Synthetic 15 amino acid peptides of rat PDE3B containing phosphorylated Ser-279 or -302 inhibit this interaction, indicating that the insulin-regulated phosphorylation of these serine residues is involved. Because insulin receptor substrate-1 also associates with 14-3-3, the dimeric 14-3-3 beta could function as a scaffolding protein in the activation of PDE3B by insulin.     

Overexpression of EIF3S3 promotes cancer cell growth

BACKGROUND: Amplification and overexpression of EIF3S3 gene has been demonstrated in breast and prostate cancer. Here, our goal was to study the effect of EIF3S3 on cell growth. METHODS: The effect of EIF3S3 on growth of NIH 3T3 murine fibroblasts as well as breast (SK-Br-3 and ZR-75-1) and prostate (PC-3 and LNCaP) cancer cell lines was examined by using transfection with inducible pTet-Off system and siRNAs. RESULTS: NIH 3T3 cells with overexpression of EIF3S3 grew significantly faster than cells transfected with empty vector and survived longer when grown in soft agar. The EIF3S3 overexpression was associated with increased fraction of cells in S-phase and with phosphorylation of retinoblastoma (Rb) protein. siRNA treatment inhibited significantly (P = 0.0022) the growth of all breast and prostate cancer cell lines studied. CONCLUSIONS: The results suggest that EIF3S3 regulates cell growth and viability, and that overexpression of the gene may provide growth advantage to the cancer cells.     

Effects of carboxy-terminal modifications of proteinase 3 (PR3) on the recognition by PR3-ANCA

BACKGROUND: Autoantibodies directed against neutrophil proteinase 3 (PR3-ANCA) from patients with Wegener's granulomatosis and microscopic polyangiitis recognize conformational epitopes of PR3. During maturation of neutrophils, PR3 undergoes amino-terminal and carboxy-terminal processing. In contrast to amino-terminal processing, the effects of carboxy-terminal processing on recognition of PR3 by PR3-ANCA remain unknown. Carboxy-terminally modified or tagged recombinant PR3 (rPR3) molecules may be useful for the refinement of diagnostic assays and for the study of biological processes. METHODS: This study was designed to determine whether 293 cells can be used to express specifically designed carboxy-terminal variants of rPR3, and to evaluate the effects of different carboxy-terminal modifications on the recognition by PR3-ANCA in the capture ELISA. RESULTS: The rPR3-variants secreted into the media supernatants of transfected 293 cells escaped proteolytic processing. Furthermore, in contrast to the effects of amino-terminal pro-peptide deletion on PR3-ANCA binding, carboxy-terminal modifications (deletion and additions) did not significantly affect recognition by PR3-ANCA. CONCLUSIONS: This expression system is ideally suited for the expression of custom-designed carboxy-terminal rPR3 variants, and major conformational effects of carboxy-terminal modifications seem unlikely.     

Expression of p63 and 14-3-3σ in normal and hyperdifferentiated mucosa of the upper aerodigestive tract

Objective: Our goal was to analyze p63 and 14-3-3σ expression in normal and hyperdifferentiated head and neck mucosa. Study Design: Compare the in vivo expression of p63 and 14-3-3σ by immunohistochemistry in normal mucosa and oral lichen planus, a benign mucosal lesion marked by hyperdifferentiation and apoptosis. Results and Conclusion: p63 is underexpressed and 14-3-3σ is overexpressed in lichen planus on immunohistochemical analysis. Significance: The findings support the hypothesis that p63 plays an antidifferentiation role, whereas 14-3-3σ plays a prodifferentiation role in the upper aerodigestive tract epithelium. Lichen planus is a valuable model for the study of p63, 14-3-3σ, and mucosal differentiation. p63 and 14-3-3σ may be molecular markers for oral lichen planus. (Otolaryngol Head Neck Surg 2002;126:598-601.)     

3H-thymidine, 3H-uridine and 3H-leucine uptake in erythroblasts of patients with chronic renal failure

The in vitro incorporation of 3H-thymidine, 3H-uridine and 3H-leucine, reflecting the synthetic capacity for DNA, RNA and protein, respectively, was detected by radioautography in the erythroid precursors of 10 patients with chronic renal failure. The results were compared with the uptake of the isotopes in the erythroid precursors of healthy subjects. The pattern of incorporation for all three isotopes in the patients' cells was similar to that of control cells, but significantly lower. The possible causes of this difference are discussed.