三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的：观察三种Tyrphostins AG1109、AG555和AG1394对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用。方法：利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ－^32P]ATP或[γ-^32P]GTP的[^32P]放射活度来检测。结果：重组人CK2是一种Ca^2 、cAMP和cGMP二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG1109对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为9．7μmol／L,抑制作用稍大于已知CK2抑制剂DRB和A3。AG555对重组人CK2全酶具有一定的抑制作用,而AG1394则对人CK2全酶基本无影响。AG1109对重组人CK2的动力学研究表明：它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论：AG1109不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的激酶CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

1,8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的观察1, 8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,以寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度1, 8-二羟蒽醌对CK2活性的影响。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ32P]ATP的[32P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。1, 8-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,半数抑制浓度(IC50 )为23. 90μmol·L-1; 与ATP呈竞争性抑制CK2的活性, 抑制常数Ki值为16. 08μmol·L-1。结论1, 8 -二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。     

5-氯苯并三唑对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响

目的:观察5-氯苯并三唑对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:在体外等物质的量混合CK2 α' 和β亚基构成重组CK2全酶.以重组人CK2全酶为分子靶点,通过测定转移到CK2底物上的γ-32P ATP的32P放射活度来检测不同浓度5-氯苯并三唑对CK2活性的影响,并进行动力学分析.结果:0、1、3、9、27、81及243 μmol/L的5-氯苯并三唑对重组人CK2全酶均具有抑制作用,且该作用随浓度的增加而增强(F=165.552,P＜0.001),IC50为20.10μmoL/L;它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数K1为18.63 μmol/L;与酪蛋白呈非竞争性抑制CK2的活性,抑制常数K1为22.58 μmol/L.结论:5-氯苯并三唑是重组人蛋白激酶CK2的抑制剂.     

藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

目的:观察体外藤黄菌素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型. 方法:利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基,并在体外等摩尔混合构成CK2全酶. 通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测藤黄菌素对酶的抑制作用及采用Line-weaver-Burk作图法分析其动力学. 结果:藤黄菌素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=0.86 μmol/L). 酶动力学分析表明,藤黄菌素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19 μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11 μmol/L). 结论:藤黄菌素是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂.     

1,4-二羟蒽醌是一种有效的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂

目的观察1,4-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的作用。方法在体外等物质的量混合CK2α与＇α亚基构成重组CK2全酶。以重组人CK2全酶为分子靶点,通过测定转移到CK2底物ATP的32P放射活度,来检测不同浓度5-氯苯并三唑对CK2活性的影响,并进行动力学分析。结果 1,4-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有抑制作用,且该作用随浓度的增加而增强,其IC50为63.15μmol/L;它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki为40.49μmol/L;与酪蛋白呈非竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki为44.72μmol/L。结论 1,4-二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的有效抑制剂。     

C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响

目的观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α’及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是27.95μmol/L和2.38μmol/L,作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。结构效应分析表明:C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用。结论染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂。     

七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系

目的:观察7种黄酮类化合物时重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析.方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2 α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值.结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63 umol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB.结构效应关系分析表明,C6,C3'和C4'上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个.OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2'和C5'上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用.结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置.     

槲皮素-7，4′-二硫酸酯二钠对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基活性的影响

目的观察槲皮素-7,4′-二硫酸酯二钠(SQDS)对重组人肌醇磷脂3-激酶(PI3-K)p110β催化亚基的直接作用。方法通过基因工程技术的方法获得PI3-Kp110β催化亚基,用PtdIns(4,5)P2和[γ-32P]ATP与重组PI3-Kp110β催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提,加闪烁液于液闪计数仪计数。结果SQDS对重组人PI3-Kp110β催化亚基有抑制作用,IC50为14.88μmol/L。结论SQDS是PI3-K的抑制剂。重组人PI3-Kp110β催化亚基可作为一种较为简便地筛选和开发有效的PI3-K抑制剂的分子靶点。     

黄酮类化合物对抑制重组人蛋白激酶CK2全酶的二维定量构效关系

目的研究黄酮类化合物对抑制重组人蛋白激酶CK2全酶的二维定量构效关系作用.方法采用密度泛函理论、分子力学和统计学相组合的方法,对一系列对重组人蛋白激酶CK2全酶具有抑制作用的黄酮类化合物进行二维的定量构效关系（2D-QSAR）的相关性进行分析.结果所建立的2D-QSAR方程具有较好的回归性（R2达到0.829）.结论黄酮类化合物分子的最高占据轨道的能量（EHOM）O对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制活性起着关键的作用,同时,黄酮类化合物分子的体积大小也对CK2的抑制活性起着重要的作用.     

木犀草素对人白血病HL-60细胞内蛋白激酶C的抑制作用

目的　观察木犀草素对HL- 60细胞内蛋白激酶C活性的影响。方法　采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率。PKC活性通过测定转移到CK2 底物上的[γ 32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果　木犀草素能够显著地抑制HL- 60细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2.38μmol/L,作用效果强于阳性对照槲皮素(IC50=2.54μmol/L)。结论　木犀草素作为一种细胞内的PKC抑制剂具有潜在的抗肿瘤临床应用价值。