姜属植物Zingiber aromaticum中的倍半萜与黄酮醇苷及其对CYP3A4和CYP2D6的抑制活性[英]／Usia T…∥J Nat Prod．

姜属植物Z．aromaticum Vahl是印度尼西亚广泛使用的传统药用植物之一。作者发现该植物乙酸乙酯部位对CYP3A4介导的代谢具强抑制活性。对该提取物进一步分离，得到3个新的倍半萜(1～3)和2个新的黄酮醇苷(4和5)，以及13个已知化合物。     

CYP3 A4和CYP2 D6基因多态性对阿片类药物术后镇痛效应影响的研究进展

阿片类药物作为术后镇痛常用药物,其缓解术后疼痛的效果呈现较大的个体差异。国内外多个研究发现,基因多态性是影响阿片类药物术后镇痛效果的重要因素之一。研究表明,细胞色素P450(CYP)是体内参与药物生物转化的主要酶系,其家族中CYP3A4和CYP2D6基因对多种镇痛药的代谢均有关键性作用,CYP3A4和CYP2D6基因多态性通过影响阿片类镇痛药物的代谢速率和活性药物的血药浓度而影响其镇痛效果甚至毒性不良反应作用,因此,本文就CYP3A4和CYP2D6基因多态性对常用镇痛药物的药代动力学和药物效应动力学影响进行总结和介绍,为进一步探索基因多态性对术后镇痛用药的指导意义提供一定的研究方向。     

紫杉醇对食蟹猴和人CYP1A2、CYP3A4及CYP2A6酶代谢的影响

目的探讨紫杉醇对食蟹猴和人肝微粒体CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4酶活性的影响。方法采用食蟹猴和人肝脏微粒体,分别以非那西汀、睾丸酮和香豆素分别作为CYP1A2、CYP2A6、CYP3A4的底物,建立CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4体外代谢体系。采用不同浓度的紫杉醇分别与上述3种底物共同孵育于肝微粒体代谢体系中。用HPLC法分别测定各底物的代谢产物扑热息痛、6β-羟基睾丸酮、7-羟基香豆素的产生量,计算IC50值,以评估紫杉醇对CYP1A2、CYP2A6和CYP3A4代谢的影响。结果紫杉醇对食蟹猴肝微粒体3种酶的IC50值分别为570±5.9μmol/L、140±2.9μmol/L和无影响;紫杉醇对人肝微粒体3种酶的IC50值分别为193±6.6μmol/L、253±3.6μmol/L和24±1.6μmol/L。结论紫杉醇对食蟹猴肝微粒体CYP1A2和CYP3A4活性具有一定的抑制作用,但对CYP2A6酶的活性几乎没有影响。紫杉醇对人肝微粒体CYP1A2和CYP3A4活性的抑制作用较弱,但对CYP2A6酶的活性抑制作用较强,提示临床上紫杉醇与作为上述酶底物的药物联合用药时应慎重,以避免因中西药物相互作用所导致的不良反应发生。     

中国汉族人群CYP2D6、CYP3A4 SNP位点基因多态性分析

目的：通过对药物代谢酶CYP2D6和CYP3A4的相关单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）筛选检测,获得其在中国汉族人群中遗传多态性分布的相关数据。方法：筛选11个关于CYP2D6、CYP3A4基因的SNP位点,取192份中国汉族无关个体健康自愿者的血液样本获得基因组DNA,根据单碱基延伸技术通过 GenomeLabTM SNPstreamR 基因分型系统进行SNP分型。结果：本次检测的11个SNP位点在研究人群中全部具有多态性（最小等位基因频率>0.01）,其中7个SNP（RS28624811、RS28670611、RS9623531、RS5758589、RS3735451、RS2246709、RS2404955、RS4646440）位点的等位基因频率在此人群与白种人相比差异具有统计学意义（P<0.01）。结论：汉族人群可能有继承特定的遗传信息,导致与其他人群具有不同药物代谢率。     

银杏叶及其化学成分对CYP3A4和CYP2C9影响的研究进展

银杏叶是临床上使用广泛的中草药之一,主要化学成分包括黄酮类和萜类内酯两大类。近年来,国内外大量的研究表明银杏叶及其化学成分能够影响细胞色素P450酶的表达,并通过细胞色素P450酶影响其他药物的代谢。现从银杏叶及其化学成分对CYP3A4和CYP2C9的影响,及其通过CYP3A4、CYP2C9影响其他药物代谢等方面进行综述。     

黄芩苷对Chang Liver细胞CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响

目的 在Chang Liver细胞中观察黄芩苷处理对CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达的影响.方法 在Chang Liver细胞中分别加入DMSO 0.1% (v/v) (溶剂对照) 和不同浓度的黄芩苷 (0.01、0.1和1 μM) 24、36和48h后,用半定量RT-PCR的方法分别检测CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19表达量的改变.结果 用不同浓度黄芩苷分别处理Chang Liver细胞24和36 h,CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达均呈现出增强的趋势;但是黄芩苷处理48 h后各浓度对CYP3A4和CYP2C9的表达产生显著的抑制效应 (P<0.01) . 结论黄芩苷对细胞中CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19的表达具有影响作用,这种影响作用随药物处理时间不同而表现出双向效应.     

急进高原对大鼠肝功能及CYP1A2、CYP3A4活性的影响

目的探讨急进高原后影响大鼠药物代谢的肝功能及CYP1A2、CYP3A4活性的变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机
分为急进高原组与平原组,眼眶后静脉丛采血后,离心取上清液进行肝功能检测;大鼠麻醉后开腹取大鼠肝脏,进行HE染色观
察病理改变;差速离心法提取大鼠肝微粒体,采用P450-GloTM试剂盒,检测肝脏CYP1A2、3A4的活性。结果急进高原组与平
原组比较,AST、ALT、ALP分别升高了48.50%、47.90%、103.02%,TP下降了17.80%,差异具有统计学意义（P<0.05）;肝组织可
见小叶中央静脉水肿,细胞核固缩;急进高原后大鼠CYP1A2、CYP3A4活性分别下降了96.56%和43.53%,差异具有统计学意
义（P<0.05）。结论急进高原后大鼠肝脏发生较大损伤,肝微粒体酶的活性显著降低,将在较大程度上影响药物在肝脏的代谢,
导致血药浓度升高,半衰期延长,药物的清除率降低。
     

附子配伍干姜对CYP1A2和CYP3A4酶活性影响

目的:探索附子配伍干姜对附子主要成分乌头类生物碱的代谢酶亚型CYP1A2和CYP3A4酶活性的影响。方法:通过采用Cocktail探针药物法,利用特异性探针底物咖啡因和咪达唑仑,建立同时测定两种探针药物血药浓度的高效液相色谱方法,并计算其药动学参数,评价两种代谢酶活性。结果:干姜组与对照组比较,咖啡因的主要药动学参数t1/2β、AUC、CL和K10均没有显著性差异(P0.05),表明干姜组对CYP1A2酶活性无影响;咪达唑仑的主要药动学参数t1/2β和AUC增大,CL和K10降低,且都具有显著性差异(P0.05),表明干姜组能够抑制CYP3A4酶活性。附子干姜组与对照组比较,咖啡因和咪达唑仑的主要药动学参数t1/2β、AUC、CL和K10均无统计学差异(P0.05)。结论:干姜组对CYP3A4酶具有抑制作用,能够减慢附子中主要药效成分乌头类生物碱在体内的代谢,因此,从代谢酶的角度可以阐明姜附配伍,能够增强附子的药效。     

CYP3A4和CYP2B6药物诱导剂体外筛选体系的建立

目的构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台。方法利用双荧光素酶报告基因系统,将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和2B6启动子序列插入报告基因上游,将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞,用含有利福平或DMSO培养基培养48h后裂解进行双荧光素酶活性检测。结果经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著。结论本研究构建的CYP3A4和2B6体外筛选平台,可以有效地用于体外诱导剂的筛选。     

注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响。方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50 mg/(kg·d),连续给药7 d,每天2次。HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化。分析柱Diamonsil C₁₈ (150 mm×4.6 mm,5 μm),流速1.0 mL/min。CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1%甲酸)(A)-水(0.1%甲酸)(B),0~5 min: 18%A,5~10 min: 18%~60%A,10~15 min: 60%A,检测波长为247 nm;CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02%甲酸)(B),0~11 min: 40%~60%A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0~10 min: 37%~75%A,检测波长为287 nm。结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD<6％(n=5),提取回收率83.2%～97.5%。SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),可能存在诱导作用;CYP1A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用。提示经CYP3A4 代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用。     

CYP3A4内含子10对CYP3A4基因表达的增强子作用

目的 探讨CYP3A4内含子10及其内SNP CYP3A4*1G对CYP3A4基因表达的调控作用.方法构建CYP3A4启动子启动转录的CYP3A4真核表达质粒, 将CYP3A4内含子10 (CYP3A4*1G野生型/突变型) 正向或反向插入该质粒的启动子上游, 从而构建出不同基因型、不同方向的CYP3A4内含子10调控的CYP3A4真核表达质粒.将构建好的各质粒分别转染入Hep G2细胞, 应用实时荧光定量PCR方法检测CYP3A4 m RNA表达水平.结果 构建的重组质粒经酶切验证与测序鉴定, 插入片段的序列和方向与预期完全一致.无论CYP3A4*1G野生型还是突变型, 反向组CYP3A4 m RNA表达水平均高于正向组 (P<0.01) ;而CYP3A4内含子10无论是正向还是反向, CYP3A4*1G野生型组CYP3A4 m RNA表达水平均高于突变型组 (P<0.01) .此外, 正向突变组CYP3A4 m RNA表达水平低于阳性对照组, 不但没有增强CYP3A4启动子的转录作用反而有所减弱.结论CYP3A4内含子10有类似于增强子的功能, 能够影响CYP3A4启动子对CYP3A4基因的转录, 且具有方向性和CYP3A4*1G等位基因依赖性.     

RNAi抑制CYP3A4基因表达的实验研究

目的 探讨质粒表达型短发夹RNA(shRNA)对CHL-3A4转基因细胞的细胞色素P450 3A4(CYP3A4)基因表达的影响.方法 构建3条shRNA真核表达载体(CYP3A4 Ⅰ、CYP3A4 Ⅱ、CYP3A4 Ⅲ),脂质体转染CHL-3A4转基因细胞.转染48h后,RT-PCR和Western blotting分别观察3条shRNA对CYP3A4mRNA和蛋白表达的影响;噻唑蓝观察shRNA抑制环磷酰胺对CHL-3A4转基因细胞毒性作用.结果 CYP3A4 Ⅲ表达载体的shRNA分别能抑制CHL-3A4细胞的CYP3A4mRNA表达(75%)及蛋白表达(80%),抑制环磷酰胺对CHL-3A4细胞(75%)细胞毒作用.结论 RNA干扰能显著抑制CYP3A4基因的表达,RNA干扰技术为肝细胞色素P450的研究提供了新的实验室方法 .     

隐丹参酮对细胞色素P450酶CYP3A4和CYP2C9的影响

目的 研究丹参中脂溶性成分隐丹参酮对Chang肝脏细胞细胞色素P450酶（CYP450）CYP3A4、CYP2C9表达的影响,明确丹参主要成分对CYP450酶的作用,以阐明基于CYP450酶隐丹参酮与其他药物间相互作用的分子基础,为临床合理使用含隐丹参酮的丹参制剂提供依据。方法 采用CCK-8法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞活力的影响,以确定药物的给药剂量范围;通过Western bloting法考察隐丹参酮在给药后1、3和7 d对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9蛋白表达的影响;通过定量RT-PCR法考察隐丹参酮对Chang肝脏细胞中CYP3A4和CYP2C9 mRNA表达的影响。结果 给药1 d,隐丹参酮对CYP3A4蛋白及mRNA表达无显著影响。但随时间延长,给药3 d和7 d,隐丹参酮可抑制CYP3A4蛋白及mRNA的表达（P <0.05）。给药1、3和7 d,隐丹参酮对CYP2C9蛋白及mRNA的表达均无显著影响。结论 连续给予隐丹参酮可抑制CYP3A4 mRNA和蛋白的表达。提示临床在连续使用含隐丹参酮时,需要关注其与CYP3A4底物药物之间可能的相互作用。     

环孢素A及其联合用药对人和大鼠肝CYP3A活性的影响

目的：探讨环孢素A(CsA)及其与甲基强的松龙(MP)、氟康唑(Flu)合用时对大鼠和我国正常成人肝脏CYP3A活性的影响。方法：制备大鼠和人肝微粒体，用不同浓度的CsA作用、加或不加MP、Flu，以红霉素为底物，经过NADPH系统孵育后，利用分光光度法测定人和大鼠肝微粒体的红霉素N-脱甲基酶(ERD)活性。结果：CsA单独作用时，在人肝微粒体中，CsA40、20、40μmol／L剂量组与对照组相比具有显著性差异；在大鼠肝微粒体中，CsA除低剂量组外，各组与对照组相比亦具有显著性差异，总体上，随着CsA浓度增加，CYP3A活性下降。此外，在大鼠肝微粒体中，MP、Flu与CsA联合作用较CsA单独作用相比，CYP3A的活性有显著性降低；但在人肝微粒体中，只在Flu与CsA联合作用时，CYP3A的活性有显著性降低。结论：CsA是CYP3A的一种活性抑制剂；Flu与CsA合用时加强了CsA对CYP3A活性的抑制作用。     

宁夏回族人群CYP3A4*6等位基因多态性的研究

目的 了解宁夏回族人CYP3A4第9外显子的分布特点,为宁夏回族患者使用CYP3M底物药物提供参考依据.方法 收集到180例回族人群血样,应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增人CYP3A4第9外显子基因序列,对其进行测序;同时扩增产物用限制性内切酶HinfⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.结果 运用PCR-RHLP法分析了150例正常回族人、30例高脂血症回族志愿者基因的突变情况,发现有2例第17776位点有A插入引起移码突变,使2例杂合子CYP3A4基因第9外显子提前出现终止密码子.其中野生型纯合子频率为98.9%,杂合子频率为1.1%,突变型纯合子频率为0,突变等位基因频率为0.005.结论 本研究得到了CYP3A4第9外显子基因多态性在宁夏回族人群中的分布情况,为研究CYP3A4第9外显子基因多态性与临床药物效应的相互关系奠定了基础.     

环孢素A与甲基强的松龙联用时对CYP3A活性的影响

目的 探讨甲基强的松龙（MP）与环孢素A（CsA）合用时对肝脏CYP3A活性的影响。方法 在人肝微粒体中单独使用CsA和联用甲基强的松龙，以红霉素为底物，经过NADPH系统孵育后，分别测定肝微粒体的红霉素N-脱甲基酶（ERD）活性。5例肝移植术后患者服用环孢素A抗排斥的同时联用甲基强的松龙，收集其环孢素A血药浓度、肝功能（ALT、AST、GGT）和肾功能（UN、Cr）变化的资料。结果 CsA单独作用时，随着CsA浓度增加，CYP3A活性下降；CsA联合MP后CYP3A的活性显著性降低。临床上，患者联用甲基强的松龙时，环孢素A的血药浓度显著性升高，肝肾功能指标中除ALT、AST外其余指标在联用前后都无显著性变化。结论 CsA是CYP3A的活性抑制剂；MP与CsA联用加强了CsA对人肝微粒体CYP3A活性的抑制作用，在临床上联用MP可升高CsA的血药浓度，MP有提高CsA生物利用度的作用。     

用回归分割法预测4味中药对CYP2D6代谢的抑制作用

细胞色素P450 2D6(CYP2D6)是人体中重要的药物代谢酶,参与临床近百种药物的代谢,包括多种抗心律失常药、β受体阻滞剂、抗高血压药、抗抑郁药以及抗肿瘤药等.某些毒性或致癌物也可被CYP2D6代谢解毒或激活[1].除影响外源性化学物质的代谢外,CYP2D6还与某些疾病呈相关性[2].     

黄花夹竹桃叶中的黄烷酮和黄酮醇苷及其抑制HIV-1逆转录酶和整合酶活性

作者发现黄花夹竹桃 Thevetia peru-viana Schum.乙醇提取物有强的抗 HIV-1活性(IC_(100)为1.56μg/mL)和强的抑制 HIV-1整合酶(IN)的活性(IC_(50)为12.0μg/mL),因此从该提取物中分离并鉴定了14个化合物,研究了它们抑制 HIV-1IN 和 HIV-1逆转录酶(RT)的活性。该植物叶的乙醇提取物用己烷、氯仿和     

CYP3A4和CYP286药物诱导剂体外筛选体系的建立

目的构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台。方法利用双荧光素酶报告基因系统，将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和286启动子序列插入报告基因上游，将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞，用含有利福平或DMSO培养基培养48h后裂解进行双荧光素酶活性检测。结果经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著。结论本研究构建的CYP3A4和286体外筛选平台，可以有效地用于体外诱导剂的筛选。