血清HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的意义

目的探讨血清HCVRNA检测在慢性丙型肝炎临床诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量PCR（FQ-PCR）检测146例慢性丙型肝炎患者抗-HCV和HCVRNA。结果抗-HCV及HCV RNA检出率分别为73．9％（108／146）和52．1％（76／146）；抗-HCV（＋）组和抗-HCV（-）组HCVRNA的检出率分别为75．9％（82／108）和10．5％（4／38）。结论血清HCVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据，且可以弥补抗-HCV对丙型肝炎的漏诊等不足。     

血清HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的意义

目的探讨血清HCVRNA检测在慢性丙型肝炎临床诊断中的意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQPCR)检测146例慢性丙型肝炎患者抗HCV和HCVRNA。结果抗HCV及HCVRNA检出率分别为73.9%(108/146)和52.1%(76/146);抗HCV(+)组和抗HCV(-)组HCVRNA的检出率分别为75.9%(82/108)和10.5%(4/38)。结论血清HCVRNA荧光定量是临床诊断丙型肝炎的直接证据,且可以弥补抗HCV对丙型肝炎的漏诊等不足。     

逆转录PCR检测丙型肝炎病毒RNA

逆转录ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ王捷，杨太成，江悦华，王晓怀（广州军区总医院医学实验科，５１００１０）丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，流行病学研究表明，大约９０％的输血后肝炎均由ＨＣＶ引起，原发性肝癌的发生也与ＨＣＶ感染相关［１］。目前...     

甘肃省陇南地区不同基因型 HCV 分布特征研究

目的：了解甘肃省陇南地区不同基因型丙型肝炎病毒（HCV ）的分布特征。方法选择2013年7月至2014年2月于本院就诊的HCV感染确诊患者53例。采用酶联免疫吸附法进行 HCV抗体检测,以重组免疫印迹法进行结果确认。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测血清病毒载量。采用多重 PCR对病毒载量大于103 copy/μL的标本进行 HCV基因分型检测。结果共检出1b基因型40例,占75．5％,检出2a基因型9例,占17．0％,检出3a基因型4例,占7．5％,各基因型检出率比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论甘肃省陇南地区HCV感染患者以1b型HCV感染为主,其次为2a、3a型。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞(PBMC)中HCV RNA存在情况及其临床意义。方法 应用套式PCR检测46例急性丙型肝炎(丙型肝炎以下简称丙肝)和42例慢性丙肝患者血清和PBMC中HCV RNA.结果 慢性丙肝患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙肝患者(P<0.001);急、慢性丙肝患者血清和慢性丙肝患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于ALT正常的抗-HCV阳性者(P<0.001);2例患者血清中HCV RNA阴性,PBMC中可测及,12例患者血清抗-HCV阴性,而血清HCV RNA阳性。结论 血清HCV RNA检测有助于抗-HCV阴性丙肝的诊断和早期诊断;丙肝的肝损害可能与HCV RNA血症有关;PBMC中HCV感染在丙肝的慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用,PBMC中可贮存HCV RNA。     

甘肃地区藏族丙型肝炎患者的HCV基因分型研究

目的 了解甘肃地区藏族丙型肝炎患者的HCV基因分型特征.方法 对HCV感染的患者样本用实时荧光定量PCR进行病毒载量的确定.对病毒载量大于103 copy/mL的样本用多重PCR进行HCV基因分型.结果 通过对甘肃地区藏族HCV感染者的样本进行基因分型,发现该民族HCV感染以1b型(56.6%)为主,HCV感染2a型(23.3%)次之,再次为2c型(10.0%)和1c型(3.3%),未检测到3a型.结论 甘肃藏族HCV感染以1b型为主,该研究为临床针对不同基因型HCV感染者的治疗提供了依据.     

二重RT—PCR同时检测HGV与HCV RNA

庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）具有相近的传播途径与类似的检测方法，本文建立了二重ＲＴ－ＰＣＲ法，用于同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ病毒核酸，其扩增产物分别为６０９ｂｐ与２５７ｂｐ在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上的均能安全分离，ＨＧＶ产物经测序显示与报道的核酸序列同源性为８９．２％～９２．６％，该法具较好的批间重复性，二重ＰＣＲ法减轻了实验人员的操作强度，可降低测定费用近５０％，７６例样本检测显示     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，建立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式「ＨＣＶ非编码区（５ＮＣＲ）与ＮＳ５联合」技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献赠及３７例输血后丙型肝炎患 血清ＨＣＸＶＲＮＡ。结果 １０例抗ＨＣＶ阳性一献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ     

丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA拷贝数与甲胎蛋白含量的相关性分析

目的 分析丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清HCV RNA拷贝数及甲胎蛋白(AFP)的含量,探讨HCV RNA拷贝数与AFP含量之间的相关性.方法 收集临床已确诊的HCV感染者36例,其中男17例,女19例.通过实时荧光定量PCR法测定HCV感染者的HCV RNA拷贝数,采用化学发光免疫分析法测定血清AFP的含量.结果 HCV感染者血清AFP含量均值为(5.7±5.1) ng/ml,明显高于正常人的AFP均值(3.5 ±2.3) ng/ml(P＜0.05),且HCV感染者的血清HCV RNA拷贝数与AFP含量呈正相关,相关系数为0.50(P＜0.01).结论 HCV感染者的血清AFP含量较正常人高,应定期随访和复查,以便早期发现肝细胞癌.     

阜阳市慢性乙型肝炎病毒感染者HBV基因型调查

目的了解阜阳市慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布状况。方法选择165例HBVDNA阳性的慢性HBV感染者,采用型特异性聚合酶链反应(PCR)检测HBV基因型。结果 165例慢性HBV感染者中HBV基因型B型46例(27.9%)、B/C混合型29例(17.6%)、C型90例(54.5%),未发现其他基因型。结论阜阳市慢性HBV感染者基因型为B、B/C和C型,其中基因C型是主要流行株。     

国产HCV核酸扩增荧光定量试剂盒的溯源与单位统一的研究

目的确定中国SFDA批准上市销售的国产HCV RNA扩增荧光定量试剂的量值X(copies/ml,lg)与标准物质的参考值Y(IU/ml,lg)之间的换算公式.方法用人AB型血清将WHO第二代HCV RNA国际标准品(编号:96/798)配制成不同浓度的样本7份,7份标准品的浓度分别为100 000、50 000、25 000、10 000、5 000、2 500、1 000 IU/ml.采用国内3种HCV RNA荧光定量试剂的2个不同的批次检测这7份不同浓度范围的标准品,每个批次重复测定4次.检测方法采用实时荧光定量PCR.结果 HCV RNA荧光定量试剂盒的量值X与标准品参考值Y之间的关系,试剂A:Y=0.902 0 X+0.284 9,R2=0.953 3,P＜0.01,n=56;试剂B:Y=0.875 7 X+0.562 4,R2=0.956 5,P＜0.01,n=56;试剂C:Y=0.843 8 X+0.560 5,R2=0.945 8,P＜0.01,n=56.结论 3种试剂的量值与标准品参考值之间的换算公式不同,提示3种试剂的量值应进行更严格的溯源.3种试剂的换算公式能将其量值初步标准化,使不同试剂的量值之间具有可比性,为HCV感染的临床诊断和治疗监测初步提供统一的HCV RNA载量检测标准.     

丙型肝炎患者精液中丙型肝炎病毒检出报告

目的通过研究慢性丙型肝炎患者精液中丙型肝炎病毒感染,探讨丙型肝炎病毒是否经夫妻性生活途径传播。方法用酶联免疫吸附法和荧光定量PCR法,检测56例男性慢性丙型肝炎患者血清、精液及其54例配偶血清抗-HCV、HCVRNA,健康对照组为23对体检健康者夫妇。结果男性慢性丙型肝炎患者血清中抗-HCV、HCVRNA的阳性率分别为91.07%(51/56)、85.71%(48/56),精液中抗-HCV、HCVRNA的阳性率分别为39.28%(22/56)、62.50%(35/56),结果与健康对照组比较均有统计学意义,P<0.05;男性慢性丙型肝炎患者配偶的血清抗-HCV及HCVRNA的阳性率为22.22%(12/54)、24.07%(13/54),与健康对照组相比较,经χ2检验有统计学意义,P<0.05。结论慢性丙型肝炎患者精液可感染HCV;HCV可经夫妻性生活途径传播。     

甘肃地区HCV血清分型与基因分型及干扰素抗体关系研究

目的(1)对甘肃地区198例慢性丙型肝炎(丙肝)患者进行血清分型和基因分型,并加以比较分析。(1)对36例应用哌罗欣治疗的慢性丙肝患者进行血清学分型和干扰素抗体的测定。方法血清学分型和干扰素抗体检测采用ELISA法;基因分型采用型特异性PCR法。结果(1)血清学分型率为53.03%(105/198),其中血清1型占48.57%(51/105),血清2型占36.19%(38/105),混合型血清(1 2)型占15.23%(16/105)。基因分型率46.46%(92/198),其中基因Ⅱ型占46.74%(43/92),基因Ⅲ型占36.96%(34/92),混合型基因(Ⅱ Ⅱ)型占16.30%(15/92)。(2)22例接受哌罗欣治疗的慢性丙肝患者中,血清1型15例,占68.18%,血清2型3例,占13.64%,混合型血清(1 2),占18.18%。22例患者中有12例产生了干扰素抗体,占54.55%,其中血清1型7例(58.33%),血清2型3例(25.00%),混合型血清(1 2)2例(16.67%)。结论(1)甘肃地区丙型肝炎为血清1型,即基因Ⅱ型为主,其次为血清2型即基因型Ⅲ和血清(1 2)型即基因(Ⅱ Ⅲ)型。(2)丙型肝炎血清学分型和基因分型具有良好的符合性,可以用于临床丙型肝炎分型。(3)丙型肝炎患者干扰素抗体的产生率为58.33%,对临床应用干扰素进行治疗的效果影响并不大。     

新型二聚体突变荧光引物定量PCR方法的建立及其在检测HCV中的应用

目的 开发新型二聚体突变荧光引物技术,建立一种能广泛应用于临床检测HCv的实时PCR方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-HCV 5′NCR作为标准品,设计二聚体突变荧光引物,优化定量PCR体系,并进行方法学评价.将本法应用于临床确诊的30份HCV阳性患者、30份其他病毒性肝炎患者和30份健康志愿者血清标本的检测,定量结果与商品化TaqMan HCv定量试剂盒的定量结果进行比较.结果 建立了利用二聚体突变荧光引物的实时PCR方法,检测的线性范围为20～109IU/ml;批内CV在1.37%～4.59%之间,批间CV在1.58%～4.81%之间;对所有其他病毒性肝炎患者和健康志愿者血清HCV的检测结果均阴性,检测特异性为100%(60/60);对临床确诊的HCV感染患者血清标本全部检出HCV阳性,定量结果与商品化TaqMan HCV定量试剂盒的定量结果具有很好的相关性,相关系数R2=0.9501.结论 建立的以二聚体突变荧光引物为平台的HCV实时PCR检测方法,具有快速、价廉、准确、结果可靠等特点,可为HCV感染的诊断、治疗监测和流行病学调查提供较好的技术支持.     

115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者HEV RNA检测与基因分型研究

目的对戊型肝炎暴发人群中115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者进行病毒RNA检测和基因分型研究,探讨其临床意义。方法对收集的暴发人群中115例抗-HEV E2-IgM、IgG均阳性人员血清和23例戊型肝炎患者粪便标本,采用通用引物进行逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)扩增戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅳ型基因片段,并进行测序和同源进化分析。结果从被检血清中扩增出8例戊型肝炎病毒阳性RNA基因片段,阳性毒株之间核苷酸同源性在97.3%~100%之间,进化树分析提示阳性毒株与戊型肝炎病毒基因Ⅳ型距离最近,与日本株和中国原型株的同源性分别为93.3%~95.3%和86.7%~87.3%;粪便标本中未能检测到戊型肝炎病毒RNA。结论本次急性戊型肝炎暴发流行由戊型肝炎病毒基因型Ⅳ型导致,暴发毒株与日本株有更近的亲缘关系;高灵敏度引物和取样时机是提高戊型肝炎病毒RNA检出率的前提。     

慢性丙型肝炎患者的血清HCV基因型和RNA含量与ALT和AST水平不相关

目的研究HCV基因型、RNA含量与肝损伤指标的相关性。方法对来自14家医院的208例慢性丙型肝炎患者的血清进行ALT、AST检测，采用罗氏公司的Cobas Amplicor HCV Monitor Test version2．0（v2．0）试剂进行HCV RNA定量和Simmons酶切分型方法进行HCV基因分型检测，分析HCV基因型、HCV RNA含量与ALT、AST水平及AST／ALT比值的相关性。结果本研究的208例慢性丙型肝炎患者中，基础HCV RNA含量与ALT、AST水平及AST／ALT比值没有相关性（r值分别为0．093、0．092、0．009，均P〉0．05），高病毒含量组（≥8．5×10^5IU／ml）与低病毒含量组（〈8．5×10^5IU／ml）比较ALT、AST水平及AST／ALT比值的差异无统计学意义（P=0．101、0．052、0．746）；HCV基因1型与非基因1型之间ALT、AST、AST／ALT的差异无统计学意义（P=0．406、0．461、0．528），HCV基因1型与非基因1型之间RNA含量差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗结束时病毒应答组和非应答组比较的ALT、AST水平及AST／ALT比值的差异无统计学意义（P=0．443、0．641、0．942），随访结束时，病毒应答组和非应答组的ALT、AST水平及AST／ALT比值的差异无统计学意义（P=0．201、0．411、0．76）。结论慢性丙型肝炎患者的HCV基因型和RNA病毒含量与肝损伤指标没有相关性。     

两种定量测定丙型肝炎病毒核酸的聚合酶链反应方法比较

目的：观察荧光定量聚合酶链反应（PCR）PE5700测定丙型肝炎病毒RNA的准确性。方法：所用临床评价血清盘由36份血清组成,其中包括1个5倍倍比稀释系列（7份）、9份阴性血清和20份阳性血清。使用临床评价血清盘比较2种测定方法的重复性、线性和临床样本符合情况。结果：实时荧光定量方法和全自动PCR－ELISA内标法检测系统的线性回归系数分别为0．9732和0．9995。全自动PCR酶联免疫附（ELISA）内标法检测系统不同含量的样本批内变异系数（log10)均比实时荧光定量方法低。临床样本的检测实时荧光定量方法与全自动PCR－ELISA内标法检测系统的相关系数为0．845,结论：实时荧光定量方法具有良好的线性和重复性,同时与全自动PCR－ELISA内标法检测系统有良好的相关性。     

云南省德宏州人民医院276例丙型肝炎病毒患者基因型分布

目的：了解云南省德宏地区丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV ) 基因型的分布特征。方法：选取2014年1月至2017年3月在云南省德宏州人民医院诊治的 HCV RNA阳性患者276例,采集其血清样本,采用PCR反向点杂交法分析HCV基因型（1a、1b、2a、3a、3b和6型）;对不能确定型别的样本采用非结构蛋白5B（nonstructural protein 5B,NS5B）测序法进行分型。结果：276例患者的HCV基因型中,主要为6型120例（43.48%）、3b型80例（28.99%）,其次是1b型33例（11.96%）、3a型30例（10.87%）、1a型9例(3.26%)、2a型4例（1.45%）。其中德宏地区的患者有151例,主要为6型61例（40.40%）、3b型53例(35.10%),其次是1b型15例(9.93%)、3a型14例(9.27%)、1a型4例（2.65%）、2a型4例（2.65%）。将德宏地区151例基因分型分布结果与国内其他地区进行比较,结果提示差异有统计学意义,云南省德宏州地区的HCV 6型及3型（包括6n、6u、6a、6m、6型混合）所占百分比明显高于其他地区,而1a和2a型检出百分比较低（P<0.05）。结论：云南省德宏州地区的HCV基因亚型共检出9种,主要以3b型和6型为主,其次是1b型及3a型,与国内其他地区比较有显著差异,提示本地区HCV亚型有其独特性。     

某地区丙型病毒性肝炎患者HCV基因分型研究

目的 了解该地区丙型病毒性肝炎(以下简称丙型肝炎)患者丙型肝炎病毒(HCV)基因分型情况.方法 分别以ELISA和重组免疫印迹试进行血清标本抗HCV抗体筛查和确认,对抗HCV抗体阳性标本用实时荧光定量PCR进行病毒载量检测.对病毒载量大于103 copy/mL的标本用多重PCR进行HCV基因分型.结果 125例抗HCV抗体阳性标本中,HCV基因型主要为1b、2a、3a、1c、2c的检出率分别为58.4%、21.6%、3.2%、4.0%和8.0%.结论 该地区HCV感染主要以1b型为主,其次是2a和3a型,检出其他地区少见的1c和2c型,说明该地区丙型肝炎流行的基因型呈多样性.