活性维生素D3联合LY294002体外抑制大鼠肝星状细胞增殖作用研究

目的探究维生素D的活性形式—1,25-(OH)2D3联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的特异抑制剂LY294002对体外培养大鼠肝星状细胞的抑制作用。方法将HSC-T6细胞分为正常对照、DMSO组、1,25-(OH)2D3、LY294002组和1,25-(OH)2D3+LY294002联合组,采用MTT法检测细胞增殖;在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡;采用Western blotting法检测Phospho-Akt(Ser473)、AKT(PAN)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白表达。结果体外干预肝星状细胞48 h后,两药联合干预组细胞抑制率为87.5%,显著高于1,25-(OH)2D3组的50.3%或LY294002组的40.3%(P0.05);联合组细胞凋亡率为92.12%,显著高于1,25-(OH)2D3组的71.0%或LY294002组的34.0%(P0.05);在显微镜下观察,两药处理组细胞形状由星形变为不规则形,凋亡数量增多,表现为正常活细胞数目明显减少,胞间隙增宽,细胞体积缩小,胞浆浓缩,胞核固缩,可见空泡及细胞碎片,有的细胞出现数量不等的凋亡小体;与单药干预组比,联合组细胞Bax/Bcl-2比值上升明显(P0.05),活化的凋亡蛋白caspase-3表达显著增加(P0.05)。结论 1,25-(OH)2D3可协同LY294002共同诱导HSC-T6细胞凋亡,增强其抗肝纤维化的效果。     

PI3K/Akt/mTOR/p70~(S6K)信号通路在肝纤维化发生发展中的作用

PI3K/Akt/m TOR/p70S6K是细胞生命活动的重要信号通路,在促进细胞生长、增殖、侵袭、抗凋亡及促进血管生成中具有重要作用。简述了PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路作用于肝星状细胞(HSC)而对肝纤维化发生发展产生的作用,分析表明阻断该信号通路中任一靶点均能抑制HSC活化、增殖,促进HSC凋亡,抑制HSC分泌细胞外基质和延缓肝纤维化进程,阻断该通路有望成为肝纤维化的治疗策略。     

活性维生素D3联合LY294002体外抑制大鼠肝星状细胞增殖作用研究*

目的探究维生素D的活性形式—1,25-(OH）2D3联合磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt）信号通路的特异抑制剂LY294002对体外培养大鼠肝星状细胞的抑制作用。方法将HSC-T6细胞分为正常对照、 DMSO组、1,25-(OH）2D3、LY294002组和1,25-(OH）2D3+ LY294002 联合组,采用MTT法检测细胞增殖;在倒置显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡;采用Western blotting法检测Phospho-Akt（Ser473）、AKT（PAN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3蛋白表达。结果体外干预肝星状细胞48 h后,两药联合干预组细胞抑制率为87.5%,显著高于1,25-（OH）2D3组的50.3%或LY294002组的40.3%（P<0.05）;联合组细胞凋亡率为92.12%,显著高于1,25-(OH）2D3组的71.0%或LY294002组的34.0%（P<0.05）;在显微镜下观察,两药处理组细胞形状由星形变为不规则形,凋亡数量增多,表现为正常活细胞数目明显减少,胞间隙增宽,细胞体积缩小,胞浆浓缩,胞核固缩,可见空泡及细胞碎片,有的细胞出现数量不等的凋亡小体;与单药干预组比,联合组细胞Bax/Bcl-2比值上升明显（P<0.05）,活化的凋亡蛋白caspase-3表达显著增加（P<0.05）。结论1,25-（OH）2D3可协同LY294002 共同诱导 HSC-T6 细胞凋亡,增强其抗肝纤维化的效果。     

H_2S对外源性LY294002预处理人结肠癌细胞凋亡的影响

目的研究H_2S对体外培养人结肠癌细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞,随机分为正常对照组、NaHS(100μmol/L)组、LY294002(2μg/ml)组、NaHS(100μmol/L)+LY294002(2μg/ml)组,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞凋亡的影响,Western印迹检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞中磷酸化Akt、非磷酸化GSK-3β蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,NaHS组人结肠癌细胞凋亡显著降低,p-Akt蛋白表达显著增加,而GSK-3β蛋白表达显著降低(均P<0.01)。LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达均显著增加(均P<0.01)。而与NaHS组比较,NaHS+LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达显著增加(均P<0.01)。结论 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能介导参与了H_2S对人结肠癌细胞凋亡的抑制作用。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路对大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控作用探讨

目的:探讨磷脂酰肌醇-3(PI3K)/蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路对大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖的调控作用。方法:体外培养大鼠MC,随机分为正常对照组、表皮生长因子(EGF)(10ng/m L)组、PI3K抑制剂LY294002组(2μg/m L)、EGF联合LY294002组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测4组MC的增殖,流式细胞术检测MC周期,免疫荧光法检测系膜细胞m TOR的表达。结果:与正常对照组相比,EGF组能显著促进大鼠MC增殖,G0/G1期细胞减少,S期及G2/M期细胞增加,且m TOR表达增加;LY294002组大鼠MC增殖受抑制,G0/G1期细胞增加,S期及G2/M期细胞减少,且m TOR表达降低;与EGF组比较,EGF联合LY294002干预组MC增殖受抑制,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少,且m TOR表达降低。结论:m TOR信号通路参与了大鼠肾小球MC增殖的调控,抑制该信号通路的活化可显著抑制MC的增殖和MC周期的进程。     

PI3K/Akt/FoxO1信号通路对人源肺动脉平滑肌细胞及肺动脉高压大鼠细胞凋亡的影响

目的 探究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路对人源肺动脉平滑肌细胞(hPASMC)及肺动脉高压大鼠细胞凋亡的影响。方法 细胞实验部分,将hPASMC分为4组：(1)空白对照组;(2)血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)组;(3)PDGF-BB+LY294002组;(4)PDGF-BB+紫杉醇(paclitaxel)组。采用TUNEL检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测Bcl-2、裂解的胱天蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。动物实验部分,将12只SD大鼠随机分为4组：(1)空白对照组;(2)野百合碱(MCT)组;(3)MCT+LY294002组;(4)MCT+paclitaxel组。采用Western blot检测Bcl-2、cleaved caspase-3和PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关蛋白表达水平。结果 细胞实验部分：相比于PDGF-BB组,PDGF-BB+LY294002组与PDGF-BB+paclitaxel组的Bcl-2表达水平下降(P&...     

非小细胞肺癌中PI3K/Akt信号通路通过Cdh1调控Skp2表达的机制研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中Cdc20同源蛋白1（Cdh1）参与磷脂酰肌醇三羟基激酶（PI3K）/Akt信号通路对S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达调控的机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549、LK2和H460,LY294002特异性阻断PI3K/Akt信号通路后,Western blot检测Skp2、Cdh1及p-Akt蛋白表达的变化,免疫荧光（IF）检测Cdh1在NSCLC中的定位变化。结果 LY294002处理后,与对照组相比3种细胞中Skp2蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低（P〈0.01）,Cdh1在3种细胞的核内表达均增多。结论 NSCLC中PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002使Skp2蛋白表达下调与Cdh1由细胞质向细胞核转位有关。     

白藜芦醇对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响及其作用机制的研究

目的探讨白黎芦醇(Res)对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响是否与PI3K/Akt信号通路有关。方法高糖体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并应用Res和PI3K通路特异性抑制剂LY294002进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,免疫组织化学法检测MMP-2、MMP-9表达,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测p-Akt、Akt蛋白表达。结果不同浓度Res(25、50、100μmol/L)和LY294002(10、20、30μmol/L)均可抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖(P0.05),且均呈剂量依赖性,还可抑制高糖诱导的MMP-2、MMP-9表达和活性(P0.05)。NC、HG、HG+LY294002(10、20、30μmol/L)组总Akt表达无明显改变,HG+Res(25、50、100μmol/L)组总Akt表达较HG组下降,但无剂量依赖性;而不同浓度的Res和LY294002可抑制高糖诱导的p-Akt表达(P0.05),且均呈剂量依赖性。结论 (1)高糖上调VSMCs MMP-2、MMP-9表达,加重VSMCs增殖;(2)Res可能通过抑制高糖激活的PI3K/Akt信号通路,下调VSMCs MMP-2、MMP-9表达并降低其活性,减轻高糖引起的VSMCs增殖。     

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。     

PI3K/Akt抑制剂LY294002对胃癌细胞化疗增敏作用的探讨

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物5-Fu及奥沙利铂联合使用对3种胃癌细胞系(MGC803、BGC823和SGC7901)化疗效果的影响.方法 将PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002联合化疗药物5-Fu及奥沙利铂作用于3种胃癌细胞系,MTT法检测单独使用5-Fu、奥沙利铂及联合LY294002对体外培养的3种胃癌细胞系的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 联合LY294002作用后,5-Fu、奥沙利铂对3种胃癌细胞系的增殖抑制作用明显增强(P<0.05),且凋亡率显著提高(P<0.05).结论结果 LY294002能有效提高化疗药物5-Fu、奥沙利铂体外对胃癌细胞的增殖抑制作用,抑制PI3K/Akt信号转导通路可显著提高胃癌的化疗疗效.     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

葛根素通过PI3K/Akt途径对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的抑制

目的 观察葛根素预处理对缺血再灌注(I/R)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt信号通路的关系.方法 30只SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、葛根素预处理组(PU组)、葛根素预处理+LY294002组(PU+ LY组)及缺血再灌注+LY294002组(I/R+ LY组).除假手术组外,其他各组大鼠均行结扎冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min,监测血流动力学,Western印迹法检测心肌组织p-Akt信号蛋白的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果 与I/R组比较,PU组能够明显改善心功能,抑制心肌细胞凋亡,并增加Akt的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01).结论 葛根素预处理能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡,其作用机制与PI3K/Akt信号通路活化有关.     

联合抑制Notch和PI3K/Akt通路对胃癌细胞增殖的影响

目的初步探讨Notch和PI3K/Akt信号通路在胃癌细胞SGC-7901中是否存在交叉作用。方法应用Notch信号通路的抑制剂GSI和PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002分别单独和联合处理体外培养的胃癌SGC-7901细胞,以无药物处理的细胞作为对照组。MTT法检测癌细胞的增殖抑制率,Western blotting法检测磷酸化Akt(p-Akt)和Notch-1蛋白的表达水平。结果 GSI能抑制癌细胞的增殖(53.56±2.04)%,并降低蛋白Notch-1的表达水平,而p-Akt的表达水平则较对照组增加。LY294002能抑制癌细胞的增殖(42.93±1.64)%,并降低p-Akt的表达水平,Notch-1水平则无明显变化,两种信号通路的抑制剂联合应用后能明显降低癌细胞的增殖率[(86.01±2.02)%,P=0.00],p-Akt和Notch-1蛋白的表达水平均降低。结论在抑制Notch信号通路的基础上,抑制PI3K/Akt通路可进一步增强抑制Notch通路的抗肿瘤增殖效果,并提示PI3K/Akt和Notch两条信号通路在胃癌SGC-7901细胞中存在交叉作用。     

体外心脏震波治疗通过PI3K/Akt信号传导通路对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究体外心脏震波治疗(ESWT)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞分成3组,即对照组、ESWT组和ESWT+LY294002组。CCK8比色法检测细胞增殖情况,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹方法(Westen blot)检测Bax、Bcl-2、p-Akt和Akt蛋白的表达水平。结果:ESWT能明显提高HUVECs的增殖能力(P0.001),抑制凋亡率(P0.001),减少HUVECs内Bax蛋白表达水平,增加Bcl-2和p-Akt蛋白表达水平(均P0.01),但这些作用可被PI3K特异性抑制剂LY294002削弱。结论:磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝/苏氨酸激酶(Akt)及其下游信号通路介导了ESWT促进HUVECs增殖及抑制凋亡作用。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过PI3K/Akt途径减轻过氧化氢诱导心肌细胞损伤

目的 研究骨髓间充质干细胞(BMMSC)来源外泌体通过PI3K/Akt途径减轻过氧化氢(H2 O2)诱导心肌细胞损伤.方法 培养心肌H9c2细胞,采用0.5 mmol/L H2 O2诱导心肌细胞损伤,给予BMMSC来源外泌体、对照溶剂二甲基亚砜或PI3K抑制剂LY294002干预,检测细胞存活率、凋亡率及Bcl-2、B...     

内脂素在人脐静脉内皮细胞增殖凋亡中的作用及机制

目的研究内脂素在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖凋亡中的作用及机制。方法选取产科提供的健康剖腹产的孕妇脐带进行原代培养HUVEC。使用MTT法检测内皮细胞增殖,流式细胞仪法检测细胞凋亡情况,通过Western blot检测内皮细胞中磷酸化热休克蛋白27(p-HSP27)的蛋白表达量。内脂素(10nmol/L)分别加入10μmol/L的丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK),磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)或细胞外信号调节激酶(ERK)1/2选择性抑制剂(分别为SB202190,LY294002和U0126)预处理的内皮细胞后,检测内皮细胞增殖、凋亡及蛋白表达情况改变。结果 10nmol/L的内脂素能促进HUVEC的增殖、抑制高糖诱导的凋亡(均P0.05)。预先给予LY294002或U0126能够有效地减少内脂素诱导的HSP27磷酸化的表达,分别使磷酸化峰值减少77.8%和51.7%(均P0.01),并且LY294002或U0126可以阻断内脂素诱导的HUVEC的增殖促进及凋亡保护作用。结论内脂素通过ERK1/2和PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路激活HSP27磷酸化,从而促进HUVEC增殖并抑制高糖诱导凋亡的重要过程。     

NOX介导的MAPK、PI3K/Akt信号通路与肝纤维化的研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)是肝纤维化的主要细胞,是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的重要来源.烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH oxidase,NOX)产生活性氧(reactive oxygen species,ROS),调控HSCs内信号转导,在肝纤维化发病中起关键作用.NOX产生的ROS可介导丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(phosphatidylin-ositol-3 kinase/Akt,PI3K/Akt)信号通路激活,促进HSC增殖、抑制其凋亡,导致肝纤维化形成.抑制NOX产生ROS,阻断相应的信号通路可诱导HSC凋亡.因此,探索出以NOX为作用靶点的抗纤维化药物意义重大.     

蛋白激酶B信号通路的干预在慢性脑低灌注大鼠中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的探讨蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(Akt/GSK3β)信号通路是否参与慢性脑低灌注(CCH)大鼠海马细胞凋亡过程。方法选择SD大鼠60只,随机分为假手术组、CCH组、LY294002组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)组,每组15只,后3组制作大鼠CCH模型,LY294002组和IGF-1组分别以抑制剂LY294002及激动剂IGF-1进行干预。采用TUNEL检测海马细胞凋亡;Western blot法检测Akt、GSK3β、磷酸化Akt(P-Akt)和磷酸化GSK3β(P-GSK3β)表达。结果与假手术组比较,CCH组、LY294002组及IGF-1组细胞凋亡水平均升高(P<0.05);与CCH组比较,LY294002组细胞凋亡数明显增高(20.33±1.52 vs 15.00±1.00,P<0.05),而IGF-1组细胞凋亡数降低(12.00±1.73 vs 15.00±1.00,P<0.05)。与假手术比较,CCH组和IGF-1组P-Akt,P-GSK3β均明显增高(P<0.05),而LY294002组无明显变化(P>0.05);与CCH组比较,IGF-1组P-Akt,P-GSK3β表达量均升高(P<0.05);LY294002组均降低(P<0.05)。结论 Akt/GSK3β信号通路参与CCH大鼠海马细胞凋亡过程,上调该通路Akt与GSK3β这2种蛋白的磷酸化表达水平,可能是拮抗这种细胞凋亡方式之一。     

PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞系HepG2中SP细胞的影响

[目的]探讨PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞系HepG2中肿瘤干细胞比例及干细胞特性的影响.[方法]使用PI3K/Akt通路抑制剂处理HepG2细胞后,使用流式技术分析HepG2细胞系中的侧群（SP）细胞的变化.软琼脂克隆形成实验检测PI3K/Akt抑制剂对HepG2细胞中SP细胞和非SP细胞成克隆能力的影响.[结果]HepG2细胞中存在SP细胞,经过LY294002处理后,SP细胞比例下降.LY294002可以显著降低SP细胞的软琼脂成克隆能力,对非SP细胞的软琼脂成克隆能力影响不明显.[结论]HepG2细胞中的SP细胞具有干细胞特性,PI3K/Akt信号通路对HepG2细胞中SP细胞的维持起重要作用,抑制PI3K/Akt信号通路后HepG2细胞中的SP细胞比例明显减低,并能显著抑制SP细胞的增殖速度、软琼脂成克隆能力,增加SP细胞对化疗药物的敏感性,为更加深入地了解肝癌干细胞的特性以及探索针对肿瘤干细胞的治疗提供理论依据.     

DIDS通过PI3-K/Akt途径减弱缺血/再灌注损伤诱导心肌细胞凋亡

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路在DIDS(4,4′-diisothiocyanostilbene-2,2′-disulfonic acid)减弱缺血/再灌注损伤（I/RI）诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法 以I/RI诱导心肌细胞凋亡,然后用PI3-K特异性的抑制剂LY294002［22(42吗啉基)282苯基24氢212苯并吡喃242酮］进行干预。实验分为正常对照组、I/RI组、I/RI+DIDS组和I/RI+DIDS+LY294002组。通过噻唑蓝(MTT)比色法、Hoechest-33258染色和半胱天冬蛋白酶（Apo-ONETM Homogeneous Caspase）-3试剂盒以及Western blot分别检测:心肌细胞的存活率（%）、细胞核的形态变化和caspase-3活性、Akt的磷酸化。结果 ①DIDS能够显著抑制I/RI诱导的细胞存活率的下降,抑制凋亡小体的出现,抑制caspase-3的活性的增加(P<0.01)。②用LY294002预处理后,DIDS保护I/RI心肌细胞存活的作用减弱、凋亡小体增加和caspase-3活性明显升高(P<0.01)。③I/RI组与正常对照组Akt磷酸化无明显差异,DIDS能够显著增加I/RI组中Akt蛋白的磷酸化(P<0.01)。用LY294002预处理后,DIDS对I/RI组Akt蛋白磷酸化的影响明显减弱(P<0.01)。结论 DIDS可通过激活PI3-K/Akt信号通路减弱I/RI 诱导的心肌细胞的凋亡。