荧光原位杂交技术在胎儿染色体数目异常诊断中的应用

目的探讨荧光原位杂交（FISH）技术在未培养羊水细胞染色体数目异常诊断中的应用价值。方法选择30例孕16－27周、有产前诊断指征的孕妇,采用21、13染色体位点特异性探针和18、X、Y染色体着丝粒探针,用FISH技对孕妇未培养羊水间期细胞进行检测;同时对所有受检者的羊水标本进行细胞培养,然后行常规染色体核型分析。结果30例标本均获得诊断结果,发现染色体异常1例（为标准型21号染色体三体）,且FISH检测结果与常规核型分析结果完全一致。结论FISH技术用于产前诊断胎儿染色体数目异常简便、快速、准确。     

羊水细胞高通量测序与染色体核型分析在产前诊断中的应用研究

目的通过高通量测序技术(即下一代测序技术,next generation sequencing,NGS)检测孕妇羊水细胞DNA,与染色体核型分析进行对比,探索NGS在羊水细胞产前诊断中的应用价值。方法选取孕龄在18~24周之间的高龄妊娠、唐氏综合征生化筛查高风险和(或)彩超显示胎儿异常并同意产前诊断的孕妇101例,抽取孕妇羊水,提取羊水细胞DNA,制备测序文库,应用Ion Proton测序仪检测,所得的DNA序列与人类DNA参考数据库比对并作统计分析,并与同一样本染色体核型分析进行对照分析。结果 101例羊水样本处理后经NGS技术检测判定2例染色体数目异常,37例染色体片段缺失/重复;羊水细胞培养检出2例染色体数目异常,2例9号染色体臂间倒位,2例多态性。结论利用高通量测序技术检测孕妇羊水中DNA诊断胎儿染色体数目异常,其特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性,并可检测出缺失/重复。染色体核型分析技术与高通量测序技术相结合在检测出生缺陷上具有较好的临床实际应用价值,并可进一步展开对疾病候选基因的研究。     

392例孕妇羊水产前诊断及其妊娠结局分析

应用羊膜腔穿刺及羊水细胞培养染色体分析技术对397例孕中期孕妇进行胎儿染色体核型分析并随访妊娠结局。结果穿刺失败2例，羊水细胞培养失败3例。胎儿染色体异常检出率为2.55％（10／392），随访成功率为91.07％（357／392），不良妊娠结局（胎膜早破／早产、妊娠期高血压病、妊娠期糖尿病、妊娠期肝内胆汁淤积症、胎儿生长受限、前置胎盘、羊水过少、死胎、畸胎等）发生率为31.37％（112／357）。认为染色体异常检出率的高低与产前诊断指征有关。B超异常、高龄及母血清筛查高风险者不良妊娠结局发生率明显增加。     

697例羊水细胞α-地中海贫血的基因检测

目的探讨羊水细胞原位培养法在α-地中海贫血产前诊断中的应用价值。方法通过羊膜腔穿刺获得羊水,对羊水细胞进行原位培养,应用培养后细胞采用聚合酶链反应结合反向点杂交技术等检测α-地中海贫血基因。结果 697例羊水细胞培养成功,共检出α-地中海贫血524例,其中Hb Bart’s水肿胎113例,血红蛋白H病（HbH病）68例,α-地中海贫血-2纯合子10例,α-地中海贫血-2双重杂合子1例,α-地中海贫血杂合子332例。胎儿合并β-地中海贫血杂合子33例,纯合子1例,双重杂合子7例。结论采用羊水细胞原位培养后行α-地中海贫血基因诊断可避免因母体血污染而导致的误诊,有利于准确检出Hb Bart’s水肿胎以及各类α-地中海贫血基因型。     

基因组测序技术应用于产前诊断胎儿染色体异常的研究

目的探讨基因组测序技术在产前诊断胎儿染色体异常中的价值。方法选取2013-12~2014-05在广西壮族自治区人民医院就诊,孕龄在18~24周的高龄妊娠、唐氏综合征生化筛查高风险和(或)彩超显示胎儿异常并同意产前诊断的孕妇60例,抽取孕妇羊水,提取羊水DNA,制备测序文库,应用Ion Proton测序仪检测,所得的基因序列与人类的参考基因组比对并作统计分析。并与同一样本经细胞培养后进行染色体核型分析进行对照分析。结果 60例羊水样本处理后经大规模平行基因组测序技术检测判定3例为染色体拷贝数异常,57例无明显异常;以羊水细胞染色体核型分析为对照,检出6例异常结果。结论利用大规模平行基因组测序技术检测孕妇羊水中DNA诊断胎儿染色体异常,其特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性。该技术具有高准确性、高通量、高灵敏度和低成本等优点,具有临床实际应用价值。     

FISH在产前羊水细胞染色体数目异常诊断中的应用观察

目的观察应用荧光原位杂交（FISH）技术产前诊断羊水细胞染色体数目异常的效果。方法唐氏综合征筛查高危或高龄（≥35岁）孕妇1 121例,经腹部穿刺抽取羊水,应用FISH技术进行羊水细胞染色体数目检测,并将其结果与羊水细胞常规G显带核型分析结果作比较。结果均获得诊断结果,发现16例异常胎儿,其中7例为21三体,4例为18三体,5例为其他异常。FISH检测与核型分析结果一致。结论用FISH产前诊断羊水细胞染色体数目异常效果满意。     

刚地弓形虫细胞培养的研究Ⅳ.临床标本培养检测技术的改进

本文以血清抗弓形虫抗体阳性的孕妇羊水进行细胞培养检测，实验组以ＴＨＰ－１细胞系培养并加入经离心过滤的ＲＨ株速殖子细胞培养上清作为培养佐剂，在第４－６ｄ，第７－１０ｄ，第１１－１４ｄ进行３次对照组以ＭＲＣ５细胞培养，在第４ｄ、第８ｄ进行２次常规检测。     

沈阳地区962例孕妇羊水细胞染色体异常产前诊断的分析

目的分析在羊水中染色体异常核型与产前诊断指征的关系。方法回顾性分析该院产前诊断中心2012-01~2012-12共962例孕妇的羊水穿刺产前诊断指征和染色体异常结果资料。结果羊水染色体培养成功率99.7%。发现异常核型45例(4.6%),其中常染色体三体(13-三体、18-三体、21-三体等)11例(1.1%);性染色体5例(0.5%),结构异常20例(2.1%),嵌合体9例(0.1%),正常染色体核型中发现染色体多态性改变56例(5.8%)。结论沈阳地区羊水染色体异常核型检出率较高,具有产前诊断指征的孕妇行胎儿羊水染色体诊断对防止先天缺陷有实用性价值。     

刚地弓形虫细胞培养的研究Ⅳ．临床标本培养检测技术的改进

本文以血清抗弓形虫抗体阳性的孕妇羊水进行细胞培养检测，实验组以ＴＨＰ一１细胞系培养并加入经离心过滤的ＲＨ株速殖子细胞培养上清（ＳＲＣ）作为培养佐剂，在第４～６ｄ，第７～１０ｄ，第１１～１４ｄ进行３次检验；对照组以ＭＲＣ５细胞系培养，在第４ｄ、第８ｄ进行２次常规检测。结果２６例羊水在ＭＲＣ５组全部阴性，而ＴＨＰ一１组分离出３株野生株，并在其后经同时接种小鼠的血清特异性ＩｇＭ抗体和脑包囊检测或脐血特异性ＩｇＭ检测所证实。提示加用ＳＲＣ并延长培养检测时间对提高弓形虫病以细胞培养作病原诊断的敏感性有显著意义。     

改良人原生殖细胞培养基培养日本血吸虫生殖类细胞的初步研究

目的探讨改良人原生殖细胞（human primordial germ cells,HPGC）培养基培养日本血吸虫（Schistosoma ja-ponicum,Sj）生殖类细胞的可行性。方法用HPGC培养基和改良HPGC培养基,分别对日本血吸虫36d成虫全细胞进行选择性培养,比较观察培养细胞的生长特性和一般形态,对2种培养基培养4-6周的细胞进行超微结构和AKP染色鉴定,对改良HPGC培养基培养细胞用BrdU掺入法检测细胞增殖与染色体核型分析。结果HPGC培养基培养2周后出现形态和大小较均匀的细胞,6周时多数细胞死亡或崩解;培养4周的细胞超微结构显示异常形态,APK染色呈阳性反应。改良HPGC培养基培养细胞呈半悬浮集落状态,4周内生长较快,形态差异悬殊,随着培养期延长,细胞呈相似的圆形,核和核仁清晰;培养6周后,细胞生长速度减慢,细胞核逐渐消失,至第10周左右死亡;培养8周内均可见细胞分裂相。BrdU掺入法检测培养4周细胞可见细胞核酸合成;培养5周的细胞超微结构显示正常形态,具生殖类细胞特征（胞质中可见大小不等的囊泡）,细胞染色体核型表现血吸虫单倍体和双倍体特征;培养6周的细胞AKP染色呈强阳性反应。结论用HPGC改良培养基能使日本血吸虫成虫的某些类别的细胞增殖,该类细胞具有生殖类细胞的部分特征。     

MNNG诱导日本血吸虫成虫培养细胞的扫描电镜观察

目的 观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对不同培养时间日本血吸虫成虫培养细胞作用的变化，确定培养细胞发生转化进而增殖的最佳诱导时间。方法 将23～28d虫龄的日本血吸虫成虫制成细胞悬液，接种于小盖玻片上，培养于含20％小牛血清及常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中。将接种培养第4、5、6、7、8d的细胞分别设为5个实验组及其相应的对照组。实验组用含终浓度为3μg／ml MNNG的常规培养基处理48h，对照组用不含MNNG的常规培养基处理相同时间，嗣后换用常规培养基培养4周，再改用含5％小牛血清的培养基继续培养。MNNG诱导后每周取各组培养细胞固定、制样，每组随机取3张小盖玻片进行电镜扫描观察，连续取样11周。结果 经MNNG诱导的日本血吸虫成虫培养细胞表面出现形态各异的结构，既有与对照组类似的表面较光滑和有乳突的培养细胞，也有表面光滑如玻璃珠状的细胞，还有具长纤突、微嵴、皱褶、微绒毛、蜂窝和仙人球状等形态的细胞；实验1组培养至第5周即出现大量分裂细胞。结论 MNNG诱导培养第4d的日本血吸虫成虫细胞培养至第5周可发生转化而出现分裂、增殖。     

改良人原生殖细胞培养基培养日本血吸虫生殖类细胞的初步研究

目的 探讨改良人原生殖细胞(human primordial germ cells,HPGC)培养基培养日本血吸虫(Schistosoma japonicum, Sj)生殖类细胞的可行性.方法 用HPGC培养基和改良HPGC培养基,分别对日本血吸虫36d成虫全细胞进行选择性培养,比较观察培养细胞的生长特性和一般形态,对2种培养基培养4～6周的细胞进行超微结构和AKP染色鉴定,对改良HPGC培养基培养细胞用BrdU掺入法检测细胞增殖与染色体核型分析.结果 HPGC培养基培养2周后出现形态和大小较均匀的细胞,6周时多数细胞死亡或崩解;培养4周的细胞超微结构显示异常形态,APK染色呈阳性反应.改良HPGC培养基培养细胞呈半悬浮集落状态,4周内生长较快,形态差异悬殊,随着培养期延长,细胞呈相似的圆形,核和核仁清晰;培养6周后,细胞生长速度减慢,细胞核逐渐消失,至第10周左右死亡;培养8周内均可见细胞分裂相.BrdU掺入法检测培养4周细胞可见细胞核酸合成;培养5周的细胞超微结构显示正常形态,具生殖类细胞特征(胞质中可见大小不等的囊泡),细胞染色体核型表现血吸虫单倍体和双倍体特征;培养6周的细胞AKP染色呈强阳性反应.结论 用HPGC改良培养基能使日本血吸虫成虫的某些类别的细胞增殖,该类细胞具有生殖类细胞的部分特征.     

妊娠晚期羊水过少对围产儿影响的探讨

目的 探讨妊娠晚期羊水过少对围产儿的影响.方法 回顾性分析我院56例妊娠晚期羊水过少产妇的临床资料.结果 羊水过少多发生在孕40周后,与胎儿宫内发育迟缓(IUGR)和延期、过期妊娠有关,羊水过少出现围产儿不良预后明显高于羊水正常者(P＜0.05).结论 羊水过少是胎儿宫内慢性缺氧的标志,一经确诊,宜剖宫产结束分娩.     

孕早期产前筛查在染色体异常胎儿诊断中的应用

目的 评价孕早期产前筛查在降低染色体异常胎儿出生率中的应用价值.方法 采用时间分辨荧光免疫技术对2 806例单胎孕妇外周血妊娠相关蛋白-A (PAPP-A)和游离人绒毛膜促性腺激素β亚基(β-HCG)含量进行检测,综合超声测量胎儿颈项透明膜厚度(NT)及孕妇年龄、体质量和孕周,用LifeCycle3.0软件计算出胎儿患21-三体和18-三体的风险率,高风险孕妇经绒毛或羊水细胞染色体核型分析确诊.结果 在2 806例孕妇中共筛查出高风险孕妇115例,阳性率为4.1％,其中83例高风险孕妇经绒毛或羊水细胞染色体核型分析发现异常核型14例,异常发生率为16.9％,其中包括6例21-三体,1例21-三体嵌合体,3例18-三体,2例Turner综合征,1例三倍体和1例染色体结构异常核型.结论 孕早期产前筛查可以有效筛查出染色体异常胎儿.     

人羊水来源c-kit+与c-kit-间充质干细胞生物学特征及体外心肌诱导分化能力的比较

目的比较人羊水来源c-kit＋与c-kit-间充质干细胞的生物学特征及体外心肌分化能力。方法通过常规产前诊断或自愿引产,以羊膜腔穿刺术获取14份孕中期羊水（15～31周）,通过流式细胞仪分选c-kit＋间充质干细胞,比较c—kit＋干细胞与c-kit-干细胞的细胞形态及生长曲线。流式细胞仪及免疫细胞化学分析对两种细胞进行表型鉴定,比较其体外向成骨、成脂及心肌样细胞诱导分化能力。RT-PCR和Westonblot检测相关基因及蛋白的表达。结果14份羊水标本中,有5份标本可以分选到c—kit＋羊水干细胞,分布在孕16-22周,分选的细胞数量占贴壁细胞的（3．30±1．24）％。羊水干细胞以成纤维状为主,可以稳定传代,体外培养可增殖到50代以上。经过c—kit分选后,细胞呈均匀一致的长纤维状,排列规律。C-kit＋及c-kit-羊水干细胞具有相似的生长曲线。两种细胞均具有间充质干细胞特征,表达间充质干细胞标记（CD29,CD44,CD73,CD90,CDl05）,不表达造血细胞系标记（CD34,CD45）,表达I类人类组织相容性抗原（HLA—ABC）,不表达II类人类组织相容性抗原（HLA—DR）。Oct-4及SSEA-4胚胎干细胞标记在c-kit＋干细胞的表达比率明显高于c．kit-干细胞。两种细胞在体外均可以向成脂细胞、成骨细胞分化。成脂细胞诱导后,可以看到细胞内脂滴聚集,油红0染色阳性。成骨细胞诱导后,可以看到钙盐沉积,VonKossa染色阳性。两种细胞分别与新生乳鼠心肌共培养,体外向心肌细胞诱导,c—kit＋羊水干细胞可以检测到GATA-4,α-actin,Cx43和cTnT基因及蛋白的表达。而c-kit-干细胞在诱导后只表达GATA-4的基因及蛋白。结论羊水来源c—kit＋及c—kit-干细胞均表达间充质干细胞表型特征,体外可以向成脂、成骨细胞分化。然而,c—kit＋干细胞的心肌样细胞分化能力明显强于c—kit-干细胞,可能与c—kit＋干细胞具有某些胚胎干细胞特征有关。     

体外高氧对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨高氧对体外培养的人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖、凋亡的影响。方法将生长良好的HELF传代后,用无血清培养基培养24 h,分别置于空气及90%高氧的细胞培养箱中,培养5 d,绘制细胞生长曲线,免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与空气相比,高氧抑制HELF的增殖,诱导HELF凋亡（P〈0.05或〈0.01）,且随高氧暴露时间延长,呈现明显的时间依赖关系。结论体外高氧对HELF具有明显的抑制细胞增殖和促进细胞凋亡作用。     

日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究

本文报道日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究.结果表明:日本血吸虫的成虫细胞,在合成培养基RPMI-1640和5%的小牛血清、台成培养基TC-199和10%或20%的小牛血清培养液中,在附加常量抗菌素、pH值为7.2—7.4、培养温度为36℃一37℃条件下,其存活时间均可超过150d.另外,成虫细胞在未加抗菌素或附加一定量(常量或两倍于常量)抗菌素的培养液中的存活天数,没有明显差别.     

乳鼠窦房结细胞的原代培养与鉴定

目的 :建立一套可靠的窦房结细胞培养与鉴定技术。方法 :取Wistar乳鼠的窦房结组织 ,用差速贴壁技术及BrdU处理法进行原代细胞培养 ;对培养细胞进行形态学观察 ,用电生理技术记录细胞的动作电位。结果 :在培养的窦房结细胞中观察到有 3种不同形态的细胞 ,即梭形细胞、三角形细胞与不规则形细胞 ,其中梭形细胞最多 ,且形态结构与电生理特征符合窦房结起搏细胞的特点。三角形细胞与心房肌三角形细胞特征相似。结论 :①用差速贴壁技术及BrdU处理法进行乳鼠的窦房结细胞培养 ,是一种可靠的窦房结细胞培养技术。②培养乳鼠窦房结细胞中的梭形细胞即为窦房结的起搏细胞     

483例孕妇羊水指数监测结果分析

羊水是反映胎儿宫内状态及预后的重要指标之一。为进一步探讨羊水指数与胎儿预后的关系，我们采用B超对483例≥37孕周的孕妇进行了羊水指数测定，现对结果进行分析。     

彩超引导下羊膜腔穿刺术及脐带穿刺术在产前诊断中的应用

目的探讨彩超引导下羊膜腔穿刺术(AC)及脐带穿刺术(FBS)在产前诊断中的应用价值。方法对1008例具有产前诊断指征的孕妇按孕周大小分为两组,孕17～21周943例为AC组,孕22～36周65例为FBS组,分别抽取羊水标本和脐带血标本进行细胞培养,行染色体核型及珠蛋白基因检查。结果 AC组一针成功率100%,未发生孕妇及胎儿并发症,标本母血污染率0.1%;FBS组一针成功率61.5%(40/65);发现胎儿染色体异常36例,重型地中海贫血16例。结论彩超引导下羊膜腔穿刺术和脐带穿刺术安全可靠,有较高的成功率,可用于产前诊断。