胃癌p16基因缺失与突变的研究

目的：探讨ｐ１６抑癌基因外显子２缺失、突变与胃癌发生发展及组织学类型的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚合酶链反应一单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析分别检测胃癌中ｐ１６基因外显子２的缺失及突变。结果：５５例胃癌样本中ＰＣＲ扩增,８例无扩增产物,２例产物明显减少,１０例均可能为ｐ１６基因缺失,缺失率为１８．１８％（１０／５５）,其余４５例胃癌、癌旁及正常胃组织均有ＰＣＲ扩增产物出现;但所有胃癌标本ＳＳＣＰ分析均未见异常泳动带,无ｐ１６基因突变。结论：ｐ１６基因外显子２缺失可能与胃癌发生发展有关;而ｐ１６基因突变可能与胃癌发生无关。     

胃癌中p16基因缺失的研究

目的　调查胃癌患者ｐ１６基因的改变。方法采用ＰＣＲ方法,对２３例胃癌患者肿瘤组织标本进行ｐｌ６基因外显子３的缺失研究。结果发现２例弥漫型胃癌有 ｐ１６基因的纯合缺失,缺失频率为８．７０％。结论证明ｐ１６基因的改变与胃癌的发生和发展有一定的联系。     

p16基因的表达和突变与卵巢恶性肿瘤的发展

分别应用免疫组织化学和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测１４例卵巢恶性肿瘤中ｐ１６蛋白的表达及ｐ１６基因外显子１和外显子２基因突变,其中５例还同时检测转移灶癌组织。结果示７例卵巢恶性肿瘤组织为ｐ１６蛋白表达阴性;无一例有ｐ１６基因外显子１突谱;４例有ｐ１６基因外显子２突变,基中２例无ｐ１６蛋白表达;５例转移灶癌组织的基因突变和蛋蛋白质表达与原发灶一致。提示部分卵巢恶性肿瘤的发生和发展与ｐ１６基因的失活有关,     

非小细胞肺癌组织p16基因缺失及突变的临床意义

目的 探讨人类非小细胞肺癌组织中ｐ＾１６基因缺失及突变情况及其与临床病理的关系。方法 应用控制模板ＤＮＡ量的银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测４０例非小细胞肺癌手术切除标本中ｐ＾１６基因第２外显子。结果 ４０例中有１３例发生纯合缺失,３例发生突变,缺失及突变率为４０％,其缺失及突变率与肺癌的临床病理分期有密切关系（Ｐ〈０．０５）。结论 ｐ＾１６基因的缺失及突变可能在非小细胞肺癌的发生、发展及转移中起重要     

白血病p16基因纯合子缺失的研究

为探讨白血病ｐ１６基因缺失的发生率及其与疾病预后的关系。对４８例初发的白血病患者用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法扩增ｐ１６基因外显子１及外显子２，进行ｐ１６基因缺失研究。４８例患者中有ｐ１６基因缺失者４例，分别为：Ｍ２２例，非何杰金淋巴瘤（ＮＨＬ）并发急性Ｂ淋巴细胞白血病（Ｂ ＡＬＬ）、慢性髓性白血病（ＣＭＬ）急淋变各１例。有ｐ１６缺失的４例患者均病情进展迅速，治疗效果差，患者在短期内死亡。提示：ｐ１６基因缺失在部分白血病的发生、发展中起重要作用；有ｐ１６基因缺失者预后较差     

食管鳞癌组织中抑癌基因p16突变的检测

应用ＰＣＲＳＳＣＰ银染技术检测了４０例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中ｐ１６基因的突变情况。结果：１１例（２７．５％）癌组织中有ｐ１６基因突变，其中９例发生在第２外显子，突变率随癌分化程度减低及浆膜浸润和淋巴转移有增高趋势。癌旁粘膜中未发现ｐ１６基因突变。提示：食管鳞癌中存在ｐ１６基因突变，是食管癌发生中的晚期事件，并可能与食管癌的进展与转移有关。     

胃癌组织中多种癌基因变异的观察

目的 探索胃癌癌变过程中多种癌基因和抑癌基因变异的规律。方法用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ和ＤＮＡ测序技术，检测３３例胃癌手术标本中原癌基因ｃ－ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＡＫＴ-２的扩增和重排，以及抑癌基因ｐ５３、ｐ１６、ｎｍ２３－Ｈ１的突变和缺失。结果大多数胃癌组织（７０％）存在１个或１个以上的基因改变。不同个体基因异常的种类和方式不同。其中ｃ－ｍｅｔ基因重排２／３３例（６％），扩增８／３３例（２４％）。ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增１／３３（３％），ＡＫＴ－２扩增２／１８例（１１％）。抑癌基因ｐ１６的纯合性缺失６／３３例（１８％），ｎｍ２３－Ｈ１和ｐ５３的杂合性缺失分别是５／１７例（２９％）和２／１３例（１６％）。ｐ５３第５～８外显子点突变的检出率为２０／３３例（６１％）。癌基因的扩增和重排多发生于胃癌进展期，而ｐ５３基因的点突变可发生于癌变各期。结论胃癌癌变是多基因异常累积所引起的渐进性过程，基因改变的数目、种类及方式与肿瘤的恶性表型密切相关。     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎性组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌中存在状态进行研究。结果表明，在１３例鼻咽癌组织中有１１例鼻咽癌组织有Ｒｂ基因的缺失或明显减弱，提示ｐ５３基因突变及Ｒｂ基因的缺失而导致的基因失活与鼻咽癌的发生有密切关系。     

喉鳞癌中p53基因的检测及其意义

为了探讨喉鳞癌中ｐ５３基因与肿瘤临床分期、病理分化程度及淋巴结转移的关系,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染系统检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第７外显子的突变情况。结果：ｐ５３基因第７外显子突变２５例,突变率为４１．７％。临床Ⅰ～Ⅱ期突变率为２６．９％（７／２６）,Ⅲ～Ⅳ期突变率为５２．９％（１８／３４）;高、中、低分程度分布为２３．５％（４／１７）、３７．５（９／２４）、６３．２％（１２／１９）;无淋巴结转移者为２８．１％（９／３２）,有淋巴结转移者为５７．１％（１６／２８）;差异均有显著意义（Ｐ〈０．０５）。结论：提示ｐ５３基因第７外显子突变与喉磷癌临床分期、病理分化程度及肿瘤颈淋巴结转移密切相关。     

慢性淋巴细胞白血病p53,p16基因的研究

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对１８例慢性淋巴细胞白血病（ＣＬＬ）ｐ５３、ｐ１６基因点突变进行研究,共检出ｐ５３基因及ｐ１６基因点突变各１例,ｐ５３基因突变位于第５外显子突变热点区,ｐ１６基因突变位于第２外显子。结果表明ＣＬＬ存在多种癌基因与抑癌基因改变。     

胃癌组织中PTEN蛋白表达与微血管密度的相关性

目的 :研究胃癌组织中抑癌基因PTEN蛋白的表达及与肿瘤微血管密度 (MVD)之间的相关性。方法 :应用免疫组织化学S P法检测 2 0例正常胃粘膜及 80例胃癌组织中MVD和PTEN的表达。结果 :肿瘤组织MVD明显高于正常胃粘膜组织。 2 0例正常胃粘膜组织PTEN全部阳性表达。肿瘤组织PTEN阳性率为 5 2 .5 % (4 2 80 ) ,阴性率为4 7.5 % (38 80 ) ,PTEN的表达与淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 ) ,PTEN蛋白的表达与肿瘤中MVD呈负相关 (P <0 .0 1)。结论 :PTEN基因突变和 或缺失可能在胃癌恶性进展和血管形成过程中发挥重要作用。     

DELETIONS AND POINT MUTATIONS OF p16,p15 GENE IN PRIMARY TUMORS AND TUMOR CELL LINES

Aberrations of chromosome 9 p21-22 are involved in the genesis of many forms of cancer. The gene p16 and p15 kave been assigned to this region. Both p l 6 and p 15 axe an inhibitor of cyclin D-cdk4,cyclin D-odk6 compiex and have been implicated in a wide variety of cancer types,including the germllne of patients with familial melanoma. In order to investigate and compare the status of p16,p15 gene in primary tumors and cell lines,we examined 357 primary tumors and 29 call lines derived from diverse tumor types. In addi-tion to analysis of these primary tumors and cell llnes,blood specimens from 91 patients either with sporadic mulriple cancers or from cancer-prone families were also analyzed. The data showed the foilowing:1)Ho-mozygous deletions of p16,p15 were comparatively rare and far less common than previously reported,al-though hemizygnus deietions were observed in a significant fraction of many tumor types;2)the incidence of p16,p15 deleticms(either homozygous deletions or heterozygous deietions)varied significantly among differ-ent tumor types;3)most delefions involved in both p16 and p15 genes;4)sequence variations in the coding sequence of p16,p15 were comparativeiy rare among these tumor types,though mutations and poiymor-phisrrm were identified; 5)sntne tumors which showed LOll at 9p,contaioing p16 and p15 gene,did not show deletions or point mutations in the p16,p15 gene. 6)In a subset of retinoblastoma and osteosarcoma where no Rb gene mutations were present a significant fraction was found to contain p16,p15 gene dele-tions.     

食管鳞状细胞癌p16基因变异及其与肿瘤病理的关系

目的 探讨p16基因与原发性食管鳞状细胞癌发生、发展的关系。方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态分析方法检测53例食管鳞状细胞癌组织中p16基因的缺失和突变，分析p16基因变异与食管鳞状细胞癌的临床病理关系。结果 53例食管癌患者中，14例为p16基因纯合性缺失，12例存在突变。p16基因变异在淋巴结转移、远处转移及临床分期方面差异有显著性(P＜0．05)；在性别、年龄、肿瘤长度及肿瘤浸润深度方面差异无显著性(P＞0．05)。结论 p16基因的缺失与突变可能是食管鳞状细胞癌的晚期事件，它在食管癌的发生、发展中起重要作用。p16基因缺失与突变的检测可作为判断食管鳞状细胞癌恶性程度、发展及预后的一个重要指标。     

胃癌组织中p16基因mRNA和p16蛋白的表达及临床病理意义

目的 探讨ｐ１６基因在胃癌发生发展及预后判断上的意义。方法 应用原位杂交和免疫组化方法检测６１例胃癌组织和４９例癌旁正常胃粘膜的ｐ１６ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白的表达。结果 （１）胃癌组织中ｐ１６ ｍＲＮＡ和ｐ１６蛋白的阳性率分别为５０．８％（３１／６１）,７０．５％（４３／６１）,而癌旁正常胃粘原阳性率均为１００％（４９／４９）,１０例早期胃癌均有ｐ１６ ｍＲＮＡ的蛋白,而分化较差、浸润深层的癌细胞则     

胃癌中E-cadherin基因甲基化状况及其表达的研究

目的:检测胃癌组织中E-cadherin基因启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法对胃黏膜中E-cadherin基因启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学方法相应检测了E-cadherin蛋白表达。结果:胃癌中E-cadherin基因甲基化率为3 4.6% (2 8/81 ) ,显著高于正常胃黏膜该基因甲基化率(P =0 .0 2 8)。E-cadherin蛋白表达阳性率为64.2 % (5 2 /81 )。E-cadherin基因甲基化与其蛋白表达无相关性(P >0 .0 5 ) ,与肿瘤组织学类型、淋巴结转移及性别均无相关性,但与年龄有关,随着年龄增加病人甲基化率呈增高趋势。结论:E-cadherin基因甲基化与年龄有关,E-cadherin基因异常甲基化是常见的一种基因异常改变,可能参与了胃癌的发生发展过程。     

Telomerase activity and homozygous deletions of the p16 gene in liver metastases of colorectal carcinoma

目的　研究人大肠癌肝转移肿瘤中端粒酶活性和p16基因异常及其相互关系 ,并探讨其临床意义。方法　采用TRAP银染方法和半定量多重PCR分别检测了 2 4例大肠癌肝转移肿瘤组织包括其中 5例原发大肠癌组织端粒酶活性及p16基因的纯合缺失情况 ,并结合临床病理参数 ,进行统计学分析。结果　本组 2 4例大肠癌肿转移肿瘤组织中检测到 19例端粒酶阳性 ,阳性率为 79 2 %。 5例原发大肠癌均检测到端粒酶活性 ,其中 3例在相应的肝转移组织中也检测到端粒酶活性。端粒酶活性与转移瘤大小、肝内转移灶数目、HBsAg是否伴有肝纤维化无关。在 2 4例转移瘤组织中有 9例标本中检测到p16基因纯合缺失 ,缺失率为37 5 %。 5例原发大肠癌有 2例检测p16基因的纯合性缺失 ,其中 1例患者在原发肿瘤和转移瘤均检测到p16基因的纯合性缺失。p16基因的纯合缺失与端粒酶活性相关。结论　大肠癌肝转移肿瘤中端粒酶活性和p16基因异常对阐明大肠癌转移的生物学行为可能有重要的意义。端粒酶的异常激活和p16基因异常在大肠癌肝转移过程中可能不是早期事件。     

胃癌中p16INK4a和RB基因甲基化状况及其表达

目的:研究胃癌组织中p16INK4a和视网膜母细胞瘤易感基因(RB)启动子区域的甲基化状况,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系.方法:采用甲基化特异性PCR方法对81例胃癌和10例正常胃黏膜中p16INK4a和RB启动子区域甲基化状况进行检测,并采用免疫组织化学方法对p16INK4a和视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)表达情况进行相应检测.结果:胃癌中p16INK4a和RB基因的甲基化率分别为37%(30/81)和42%(34/81);胃癌p16INK4a蛋白和pRb表达阳性率分别为54%(44/81)和90%(73/81).10例正常胃黏膜中均未检测到p16INK4a和RB异常甲基化,而且其相应蛋白表达均为阳性.p16INK4a甲基化状况与其蛋白表达有相关性,但p16INK4a甲基化状态与肿瘤分化程度、淋巴结转移、性别及年龄均不相关.RB甲基化状态与pRb表达、肿瘤分化程度、性别及年龄无相关性,但与淋巴结转移相关.结论:p16INK4a和RB异常甲基化是胃癌细胞常见的分子事件,可能参与了胃癌的发生发展过程.RB异常甲基化与胃癌淋巴结转移相关,提示RB甲基化检测对于分析胃癌淋巴结转移情况可能有一定参考价值.p16INK4a基因启动子区域高甲基化是其蛋白表达抑制的重要机制.     

大肠癌相关肿瘤转移抑制基因的研究进展

肿瘤转移抑制基因能抑制肿瘤细胞的转移,由于肿瘤转移抑制基因的突变或缺失,从而导致肿瘤的浸润和转移。与大肠癌有关的肿瘤转移抑制基因有nm23、KAI1、E-钙黏素基因、p16、Tip30/CC3、DPC4/SMAD4等。它们在大肠癌中的低表达可能会导致癌组织发生浸润和转移,提示患者预后不良。因此,它们可能成为判断大肠癌的生物学行为及预后的重要指标。     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

作者分别采用多重PCR、SSCP以及以PCR为基础的甲基化分析法,对２５例原发性HCC标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中p16基因的缺失、点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化SLAB法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性HCC肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中P16蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性HCC肿瘤标本中,３例有p16基因缺失,无p16基因缺失的２２例肿瘤标本中均未发现有p16基因点突变存在。肿瘤标本中基因的甲基化发生率为24%（6/25）,而全部非肿瘤组织均未出现p16基因甲基化。在３５例HCC肿瘤标本中共发现P16蛋白表达缺失16例(45.7%),而全部非瘤组织P16蛋白均表达阳性。由此提示,p16基因的失活与P16蛋白表达的丧失与原发性肝细胞性肝癌的发生及发展有关。     

p16蛋白和CD44V6在胃癌中的表达及临床意义的研究

目的　探讨 p16蛋白 ,CD44V6在胃癌的发生发展及转移中的临床意义。 方法　应用免疫组织化学方法对 46例胃癌及癌旁组织中 p16和CD44V6表达进行检测。 结果　胃癌组织中 p16蛋白阳性率 (8/ 46 ,2 1.0 5 % )明显低于癌旁组织中表达率 (2 7/ 46 ,5 8.70 % )。而CD44V6在胃癌中的表达率为 (71.74% ,33/ 46 ) ,癌旁组织中未见CD44V6表达。两者的表达与年龄、性别、肿癌大小无相关性 ,而与有无淋巴结转移显著相关。p16与分化程度有显著差异 ,而CD44 6则与之无关。在TNM分期中 ,CD44V6在Ⅲ、Ⅳ期中的表达显著高于Ⅰ期中 ,而p16在Ⅰ期中的表达率明显高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中的表达率。p16与CD44V6两者在胃癌中的表达无相关性。但有淋巴结转移组(2 7例 )中 ,p16阳性表达率 3 .70 %明显低于CD44V6阳性表达率 88.89% ,且有显著差别 (P <0 .0 5 )。 结论　p16蛋白、CD44V6是胃癌发生发展的重要因素 ,特别是CD44V6可作为胃癌淋巴结转移的重要指标 ,p16蛋白、CD44V6可为临床诊断胃癌、判断预后、指导手术提供重要依据